Name: cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu
Uploaded: 2018-10-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

Мы благодарны E. coli фондовый центр для MG1693; Wormbase; Центр генетики Caenorhabditis , который финансируется за счет национальных институтов из здравоохранения управление исследовательской инфраструктуры программы (P40OD010440) для штаммов; Zach Pincus статистические консультации; Айпин Фэн реагентов; Люк Шнайдер, Андреа шарф, Sandeep Кумар и Джон Brenner для обучения, консультаций, поддержки и полезной дискуссии; и Корнфельд и Schedl лаборатории для обратной связи на этой рукописи. Эта работа частично поддержали национальные институты здравоохранения [R01 AG02656106A1 к KK, R01 GM100756 к TS] и Национальный научный фонд лектор стипендий [DGE-1143954 и DGE-1745038 с ЗК]. Национальные институты здравоохранения ни Национальный научный фонд имел какую-либо роль в конструкции изучения, сбора, анализа и интерпретации данных, ни в письменной форме рукописи.

1. Подготовка EdU меченых бактерий
<ol><li>
Растут стартовые культуры MG1693. Кишечная палочка MG1693 (E. coli) несет мутации в thyA.
	<ol>
<li>Полоса, E. coli MG1693 из замороженных глицерин запаса на 120 мм lysogeny бульон (LB) агар Петри. Культура при 37 ° C в одночасье.</li>
		<li>Прививок от двух отдель...

<ol>
	<li>Fox, P. M., Vought, V. E., Hanazawa, M., Lee, M. -. H., Maine, E. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+E+and+CDK-2+regulate+proliferative+cell+fate+and+cell+cycle+progression+in+the+C.+elegans+germline.">Cyclin E and CDK-2 regulate proliferative cell fate and cell cycle progression in the C. elegans germline.</a> Development. 138 (11), 2223-2234 (2011).</li><li>Crittenden, S. L., Leonhard, K. A., Byrd, D. T., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+analyses+of+the+mitotic+region+in+the+Caenorhabditis+elegans+adult+germ+line.">Cellular analyses of the mitotic region in the Caenorhabditis elegans adult germ line.</a> Molecular biology of the cell. 17 (7), 3051-3061 (2006).</li><li>Seidel, H. S., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle+quiescence+maintains+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cells+independent+of+GLP-1/Notch.">Cell-cycle quiescence maintains Caenorhabditis elegans germline stem cells independent of GLP-1/Notch.</a> eLife. 4, (2015).</li><li>Fox, P. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Germline+Stem+Cell+Differentiation+Following+Loss+of+GLP-1+Notch+Activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Analysis of Germline Stem Cell Differentiation Following Loss of GLP-1 Notch Activity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (9), 167-184 (2015).</li><li>Kocsisova, Z., Kornfeld, K., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+accumulation+of+the+proliferating+cell+nuclear+antigen+PCN-1+transitions+from+continuous+in+the+adult+germline+to+intermittent+in+the+early+embryo+of+C.+elegans.">Cell cycle accumulation of the proliferating cell nuclear antigen PCN-1 transitions from continuous in the adult germline to intermittent in the early embryo of C. elegans.</a> BMC Developmental Biology. 18 (1), (2018).</li><li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo.">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li><li>vanden Heuvel, S., Kipreos, E. T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+Cell+Cycle+Analysis.">elegans Cell Cycle Analysis.</a> Methods in Cell Biology. , 265-294 (2012).</li><li>ThermoFisher. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Click-iT EdU Imaging Kits. , (2011).</li><li>Pazdernik, N., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Germ Cell Development in C. elegans. , 1-16 (2013).</li><li>Hirsh, D., Oppenheim, D., Klass, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+reproductive+system+of+Caenorhabditis+elegans.">Development of the reproductive system of Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 49 (1), 200-219 (1976).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Hansen, D., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+proliferation+versus+meiotic+fate+decision+in+Caenorhabditis+elegans.">Stem cell proliferation versus meiotic fate decision in Caenorhabditis elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 757, 71-99 (2013).</li><li>Jaramillo-Lambert, A., Ellefson, M., Villeneuve, A. M., Engebrecht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+timing+of+S+phases,+X+chromosome+replication,+and+meiotic+prophase+in+the+C.+elegans+germ+line.">Differential timing of S phases, X chromosome replication, and meiotic prophase in the C. elegans germ line.</a> Developmental Biology. 308 (1), 206-221 (2007).</li><li>Agarwal, I., Farnow, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOP-1+presenilin+deficiency+causes+a+late-onset+notch+signaling+phenotype+that+affects+adult+germline+function+in+Caenorhabditis+elegans.">HOP-1 presenilin deficiency causes a late-onset notch signaling phenotype that affects adult germline function in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 208 (2), 745-762 (2018).</li><li>Gumienny, T. L., Lambie, E., Hartwieg, E., Horvitz, H. R., Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+programmed+cell+death+in+the+Caenorhabditis+elegans+hermaphrodite+germline.">Genetic control of programmed cell death in the Caenorhabditis elegans hermaphrodite germline.</a> Development. 126 (5), 1011-1022 (1999).</li><li>Hendzel, M. J., Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis-specific+phosphorylation+of+histone+H3+initiates+primarily+within+pericentromeric+heterochromatin+during+G2+and+spreads+in+an+ordered+fashion+coincident+with+mitotic+chromosome+condensation.">Mitosis-specific phosphorylation of histone H3 initiates primarily within pericentromeric heterochromatin during G2 and spreads in an ordered fashion coincident with mitotic chromosome condensation.</a> Chromosoma. 106 (6), 348-360 (1997).</li><li>Zetka, M. C., Kawasaki, I., Strome, S., M&#252; Ller, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapsis+and+chiasma+formation+in+Caenorhabditis+elegans+require+HIM-3,+a+meiotic+chromosome+core+component+that+functions+in+chromosome+segregation.">Synapsis and chiasma formation in Caenorhabditis elegans require HIM-3, a meiotic chromosome core component that functions in chromosome segregation.</a> Genes &amp; development. 13 (17), 2258-2270 (1999).</li><li>Hansen, D., Hubbard, E. J. A., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-pathway+control+of+the+proliferation+versus+meiotic+development+decision+in+the+Caenorhabditis+elegans+germline.">Multi-pathway control of the proliferation versus meiotic development decision in the Caenorhabditis elegans germline.</a> Developmental Biology. 268 (2), 342-357 (2004).</li><li>Crawley, O., Barroso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohesin-interacting+protein+WAPL-1+regulates+meiotic+chromosome+structure+and+cohesion+by+antagonizing+specific+cohesin+complexes.">Cohesin-interacting protein WAPL-1 regulates meiotic chromosome structure and cohesion by antagonizing specific cohesin complexes.</a> eLife. 5 (2), 1-26 (2016).</li><li>Zhao, H., Halicka, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+signaling,+impairment+of+cell+cycle+progression,+and+apoptosis+triggered+by+5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine+incorporated+into+DNA.">DNA damage signaling, impairment of cell cycle progression, and apoptosis triggered by 5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine incorporated into DNA.</a> Cytometry Part A. 83 (11), 979-988 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Gervaise, A. L., Arur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+Temporal+Analysis+of+Active+ERK.">Spatial and Temporal Analysis of Active ERK.</a> in the C. elegans Germline. Journal of Visualized Experiments. 117 (117), e54901-e54901 (2016).</li><li>Vos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> De Cell Counter Plugin. , (2015).</li><li>Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (2016).</li><li>Michaelson, D., Korta, D. Z., Capua, Y., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+promotes+germline+proliferation+in+C.+elegans.">Insulin signaling promotes germline proliferation in C. elegans.</a> Development. 137 (4), 671-680 (2010).</li><li>Qin, Z., Jane, E., Hubbard, A., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-autonomous+DAF-16/FOXO+activity+antagonizes+age-related+loss+of+C.+elegans+germline+stem/progenitor+cells.">Non-autonomous DAF-16/FOXO activity antagonizes age-related loss of C. elegans germline stem/progenitor cells.</a> Nature communications. 6 (5), 7107 (2015).</li><li>Luo, S., Kleemann, G. A., Ashraf, J. M., Shaw, W. M., Murphy, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGFB+and+Insulin+Signaling+Regulate+Reproductive+Aging+via+Oocyte+and+Germline+Quality+Maintenance.">TGFB and Insulin Signaling Regulate Reproductive Aging via Oocyte and Germline Quality Maintenance.</a> Cell. 143 (2), 299-312 (2010).</li><li>Narbonne, P., Maddox, P. S., Labbe, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-18/PTEN+locally+antagonizes+insulin+signalling+to+couple+germline+stem+cell+proliferation+to+oocyte+needs+in+C.+elegans.">daf-18/PTEN locally antagonizes insulin signalling to couple germline stem cell proliferation to oocyte needs in C. elegans.</a> Development. , 4230-4241 (2015).</li><li>Cinquin, A., Chiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+Stem+Cell+Cycling+Balances+Self-Renewal+and.">Intermittent Stem Cell Cycling Balances Self-Renewal and.</a> Senescence of the C. elegans Germ Line. PLoS Genetics. 12 (4), 1005985 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Invitrogen EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine). , 1-7 (2010).</li><li>Tuttle, A. H., Rankin, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunofluorescent+Detection+of+Two+Thymidine+Analogues+(CldU+and+IdU)+in+Primary+Tissue.">Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. 46 (46), e2166-e2166 (2010).</li></ol>

Подготовка EdU меченых бактерий (шаг 1) имеет решающее значение для настоящего Протокола и первой точкой для устранения неполадок. Молодых взрослых гермафродитки одичал тип метки очень надежно в 4 h EdU пульс, что делает этот элемент полезным для каждого нового пакета EdU меченых бактерий. Кр...

В развития животных сотни, тысячи, миллионы, миллиарды или даже триллионы клеток подразделений обязаны сформировать взрослого организма. Клеточный цикл, набор событий, клеточном составе G1 (ГАП), S (синтез), G2 (ГАП), и M (митоз) определить ряд событий, которые выполняются каждое деление клеток. Клеточный цикл является динамичной и лучше всего ценится в режиме реального времени, которое может быть технически сложным. Методы, представленные в настоящем Протоколе позволяют сделать измерения этапов и сроков клеточного цикла из неподвижных изображений.
Маркировка с Нуклеозидные аналоги, такие как 5-ethynyl-2'-дезоксиуридина (EdU) или 5-бром-2'-дезоксиуридина (BrdU) является золотым стандартом для определения S-фазы в исследованиях динамики клеточного цикла в взрослого Caenorhabditis elegans (C. elegans) Гермафродит микрофлорой1,2,3,4,5. Эду и BrdU может использоваться в почти любой генетический фон, как они не полагаются на любом генетические конструкции. Визуализация BrdU требует суровых химической обработки подвергать антигена антитела анти BrdU окрашивание, которое часто является несовместимым с оценки других клеточных маркеров визуализированы пятнать совместно с дополнительные антитела. Напротив визуализации EdU происходит по химии нажмите мягкая условиях и таким образом совместим с антителом, совместно пятнать6,7.
Специфика метки ясно, поскольку ядер только учесть аналогов (5-ethynyl-2'-дезоксиуридина) тимидина ДНК в S-фазе. Визуализация занимает место в фиксированных тканей. EdU метка невидимым сама по себе вплоть до азид содержащих красителя или Флюорофор ковалентно реагирует с алкины в EdU медь катализируемого нажмите химия8. EdU маркировки может обеспечить немедленное информацию, на которой ядра находятся в S-фазе, с помощью короткого импульса маркировки. EdU может также обеспечить динамическую информацию, с помощью импульса Чейз или непрерывной маркировки; например в эксперименте пульс Чейз, метка разбавляется на каждое деление клеток или распространяются как nondividing клетки прогресс через развитие.
Гермафродит микрофлорой C. elegans является мощной модели системы для исследования сигнальные пути, стволовые клетки, мейоз и клеточного цикла. Взрослый микрофлорой является поляризованной конвейера с помощью стволовых клеток найдены на дистальном конце следуют вход и прогрессии через meiotic профаза, координироваться с этапами гаметогенеза более проксимально (рис. 1). В проксимальном конце ооциты Зрелые, являются овуляция и оплодотворенной и начать эмбриогенеза в матку9,10,11. ~ 20 клеток диаметр длинные районе дистального наконечника ячейка, которая включает в себя mitotically Велоспорт стволовых микрофлорой, клетки-предшественники и meiotic клетки в S-фазе, но не для ячейки в meiotic профаза, называют прародителем зоны2,4 , 9 , 12. клеточные мембраны обеспечивают неполного разделения между ядрами в дистальной микрофлорой, но прародитель зоны клетки претерпевают митотическая клеток, Велоспорт в основном самостоятельно. Средний митотический клеточный цикл продолжительность микрофлорой клетки-предшественники зоны в молодых взрослых гермафродитки составляет ~6.5 ч; G1 фазе краткие или отсутствует, и покоя не наблюдается1,2,13. Микрофлорой дифференцировки стволовых клеток происходит через по существу прямым дифференциации и таким образом не хватает транзит усилительных дивизий4. Во время дифференциации в стадии pachytene примерно 4 из 5 ядер не образуют яйцеклеток, но вместо этого проходят apoptosis, действуя как медсестра клетки, жертвуя их цитоплазматических содержимое для развивающихся ооцитов12,14 , 15.
В дополнение к маркировке клетки в S-фазе с аналогами нуклеозидов можно определить клетки митоз и мейоз, используя Пятнать антитела. Ядер в митозе иммунореактивных к анти фосфо гистонов H3 (Ser10) антитела (так называемый pH3)7,16. Ядра в мейоз иммунореактивных антитела анти его-3 (белок оси meiotic хромосома)17. Ядер в зоне прародитель может быть идентифицирован отсутствие HIM-3, наличие nucleoplasmic REC-818или наличие WAPL-119. Интенсивность WAPL-1 является высоким в соматической гонад, высокий в зоне прародителю и низкой во время ранних meiotic prophases19. Несколько клеточного цикла измерения возможны несколько вариантов в протоколе: я) определить ядер в S-фазе и измерения индекс S-фазе; II) M-фаза идентификации ядер и измерения индекс М-фаза; III) определяет, были ли ядер митотическая или meiotic S-фазе; IV) измерить продолжительность G2; V) измерить течении G2 + M + G1 фаз; VI) измерить скорость meiotic въезда; VII) оцените meiotic прогрессии.
Можно сделать несколько клеточного цикла измерений от лишь нескольких видов мокрой лабораторных экспериментов. Протокол ниже описывает 30 мин пульс маркировки кормления C. elegans взрослых гермафродитки с EdU помечены бактерии и совместной маркировки M-фаза клетки путем пятнать с анти pH3 антитела и прогениторных клеток зоны путем пятнать антитела анти WAPL-1. Анализы (шаг 8.3) требуются для дополнительных измерений, и только изменения в продолжительности EdU корма (шаг 2.5), тип антител занятых (шаг 5).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1019px;" width="1020">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td >E. coli MG1693</td>
			<td style="width:255px;">Coli Genetic Stock Center</td>
			<td style="width:255px;">6411</td>
			<td style="width:255px;">grows fine in standard unsupplemented LB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">E. coli OP50</td>
			<td style="width:255px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:255px;">OP50</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">C10337</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5-Ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">900584-50MG</td>
			<td style="width:255px;">or use EdU provided in kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glucose</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">D9434-500G</td>
			<td style="width:255px;">D-(+)-Dextrose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thiamine (Vitamin B1)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T4625-5G</td>
			<td style="width:255px;">Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thymidine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T1895-1G</td>
			<td style="width:255px;">BioReagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">M1880-1KG</td>
			<td style="width:255px;">MgSO4, Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous</td>
			<td style="width:255px;">Fisher</td>
			<td style="width:255px;">BP332-500G</td>
			<td style="width:255px;">Na2HPO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Potassium Phosphate, monobasic</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P5379-500G</td>
			<td style="width:255px;">KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">A4514-500G</td>
			<td style="width:255px;">NH4Cl, Reagent Plus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Bacteriological Agar</td>
			<td style="width:255px;">US Biological</td>
			<td style="width:255px;">C13071058</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">C3881-500G</td>
			<td style="width:255px;">CaCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">LB Broth (Miller)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L3522-1KG</td>
			<td style="width:255px;">Used at 25g/L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Levamisole</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L9756-5G</td>
			<td style="width:255px;">0.241g/10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:255px;">Calbiochem Omnipur</td>
			<td style="width:255px;">6506</td>
			<td style="width:255px;">homemade PBS works just as well</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tween-20</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P1379-500ML</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">16% Paraformaldehyde, EM-grade ampules</td>
			<td style="width:255px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:255px;">15710</td>
			<td style="width:255px;">10ml ampules</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">100% methanol</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">A454-1L</td>
			<td style="width:255px;">Gold-label methanol is critical for proper morphology with certain antibodies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:255px;">Gibco</td>
			<td style="width:255px;">16210-072</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1671330</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">rabbit-anti-WAPL-1</td>
			<td style="width:255px;">Novus biologicals</td>
			<td style="width:255px;">49300002</td>
			<td style="width:255px;">Lot G3048-179A02, used at 1:2000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">mouse-anti-pH3 clone 3H10</td>
			<td style="width:255px;">Millipore</td>
			<td style="width:255px;">05-806</td>
			<td style="width:255px;">Lot#2680533, used at 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-rabbit IgG-conjugated Alexa Fluor 594</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A11012</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1256147, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-mouse IgG-conjugated Alexa Fluor 647</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A21236</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1511347, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">Vectashield antifade mounting medium containing 4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole Dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td style="width:255px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:255px;">H-1200</td>
			<td style="width:255px;">mounting medium without DAPI can be used instead, following a separate DAPI incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">nail polish</td>
			<td style="width:255px;">Wet n Wild</td>
			<td style="width:255px;">DTC450B</td>
			<td style="width:255px;">any clear nail polish should work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">S-medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">M9 buffer</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">M9 agar</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">same recipe as M9 buffer, but add 1.7% agar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Nematode Growth Medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">dissecting watch glass</td>
			<td style="width:255px;">Carolina Biological</td>
			<td style="width:255px;">42300</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Parafilm laboratory film</td>
			<td style="width:255px;">Pechiney Plastic Packaging</td>
			<td style="width:255px;">PM-996</td>
			<td style="width:255px;">4 inch wide laboratory film</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">petri dishes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">60 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Long glass Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:255px;">MidSci Avant</td>
			<td style="width:255px;">2926</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tips</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Serological pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">500 mL Erlenmyer flask</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Aluminum foil</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">25G 5/8&#8221; needles</td>
			<td style="width:255px;">BD PrecisionGlide&#160;</td>
			<td style="width:255px;">305122</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5ml glass centrifuge tube</td>
			<td style="width:255px;">Pyrex&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Borosilicate glass tubes 1ml</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">glass slides</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">no 1 coverslips 22 x 40 mm</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">no 1.5 may work, also</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">37 &#176;C Shaker incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tabletop Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Clinical Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;">IEC</td>
			<td style="width:255px;">428</td>
			<td style="width:255px;">with 6 swinging bucket rotor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Mini Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">20 &#176;C incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:255px;">4 &#176;C refrigerator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">-20 &#176;C freezer</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Observer Z1 microscope</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Plan Apo 63X 1.4 oil-immersion objective lens</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:255px;">Ultraview Vox spinning disc confocal system</td>
			<td style="width:255px;">PerkinElmer&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">Nikon spinning disc confocal system works very well, also, as described here: http://wucci.wustl.edu/Facilities/Light-Microscopy&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu

Анализ клеточного цикла в эукариот часто использует хромосома морфологии, выражения и/или локализации продуктов генов, необходимых для различных стадиях клеточного цикла, или включение Нуклеозидные аналоги. В S-фазе полимераз включают тимидина аналогов как EdU или BrdU в хромосомную ДНК, маркировка клетки для анализа. C. elegansнуклеозидов аналоговые EdU подается к червей в ходе регулярных культуры и совместим с immunofluorescent методами. Микрофлорой C. elegans является мощной модели системы для исследования сигнализацию путей, стволовые клетки, мейоз и клеточного цикла, потому что это прозрачная, генетически снисходительный, и meiotic профаза и клеточной дифференциации/гаметогенеза происходят в Ассамблея как линейно. Эти особенности делают EdU большой инструмент для изучения динамических аспектов mitotically Велоспорт клеток и развития микрофлорой. Этот протокол описывает успешно подготовить EdU бактерий, кормить их к одичал тип C. elegans гермафродитки, вскрыть гонад Гермафродит, краситель для включения EdU в ДНК, пятно с антител для обнаружения различных клеточного цикла и развития маркеров, изображение гонад и проанализировать результаты. Протокол описывает изменения в метод и анализа для измерения S-фазе индекс, M-фаза индекс, G2 продолжительность, продолжительность цикла клетки, скорость meiotic вступления и скорость прогрессирования meiotic профаза. Этот метод может быть адаптирована для изучения цикла клетки или клетки истории в других тканях, этапы, генетических стола и физиологических условиях.

Поскольку для включения EdU требуется синтез ДНК, можно сделать вывод что EdU меченых ядер претерпевает S-фазы во время окна времени EdU маркировки. Один может интерпретировать ядер что ярлык в 30 мин кормления с EdU, обозначаемый ядер в S-фазе бактерий во время вскрытия. Ядер, ?...

Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Описан метод на основе изображений, может использоваться для определения S-фазе и анализировать динамику клеточного цикла в C. elegans Гермафродит микрофлорой, используя тимидина аналоговые EdU. Этот метод требует не трансгенов и совместим с immunofluorescent окрашивание.

Анализ клеточного цикла в C. elegans микрофлорой с EdU аналог тимидина

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о клеточном цикле и динамике популяции зародышевой линии стволовых клеток в C.elegans. Основные преимущества этой техники в том, что она не требует трансгенов, она совместима с иммунофлуоресцентным окрашиванием, и она может быть изменена для изучения клеток при самых разных условиях. Я был очень взволнован, когда я впервые увидел этот метод используется в лаборатории Scheda.Хотя этот метод может дать представление о клеточном цикле C.elegans, он также может быть применен к более широким вопросам о старении, питании или измененных генотипах. Вообще лаборатории новые к этому методу могут бороться с первоначально idiodisprepation или C.elegans гематоксилин окрашивание. Начните с использования стерильной техники, чтобы добавить 200 микролитров 10 миллимолейных EdU в 100 миллилитров буфера M9 и соответствующие добавки к четырем миллилитрам свежеростой ночной культуры MG 1693 E.coli.Создание идиотизм требует деликатного баланса между Эду и тимидин добавок. Как количество тимидин должно быть достаточно для кишечной палочки расти хорошо, в то время как количество EdU должно быть достаточно для надежного щита от выравнивания. После не более чем 24 часов при 37 градусах по Цельсию и 200 об/мин, используйте стерильную технику, чтобы разделить культуру между двумя-четырьмя стерильными 50 миллилитровыми коническими трубками для центрифугации.Resuspend пеллатин четыре миллилитров свежего буфера M9 и использовать тот же пипетку, чтобы применить около 8 капель EdU помечены E Coli MG1693 решение в центре индивидуальной комнатной температуры 60 миллилитров M9 охранник Петри блюда. Чтобы накормить бактерии EdU помечены нематод, использовать свежие PBS мыть C.Elegans из нематод роста среднего блюда в 1,5 миллилитровую трубку и позволяют животным поселиться кратко тяжести. Вымойте животных один-два раза с одним миллилитров PBS и использовать стеклянный пастер пипетку для передачи нематод на центр лужайки EdU в крошечной капле PBS.Подождите несколько минут, пока жидкость будет поглощена и инкубировать культуру, по крайней мере 30 минут при 20 градусах по Цельсию в соответствии с экспериментальным протоколом. В конце инкубации используйте два миллилитров PBS, чтобы смыть червей из пластины культуры EdU в стеклянное рассекаемое блюдо. После вскрытия и фиксации нематод гонады, как описано ранее, промыть небольшой один миллилитр borosilicate стеклянная трубка и длинный стеклянный пастер пипетку с PBS дополнены 0,1%tween 20 и использовать пипетку для передачи фиксированных гонад в трубку в небольшом количестве PBS tween.Соберите гонады центрифугации и использовать длинный, вытянутый стеклянный пипетка пастбища, чтобы удалить как можно больше супернатентов, как это возможно, не нарушая гранулы гонады. Для обнаружения EdU добавьте 100 микролитров коктейля EdU в гонады и накройте трубку лабораторной пленкой для инкубации от 30 до 60 минут при комнатной температуре. В конце инкубации, мыть гонаду один раз с 100 microLiters реакции промыть буфер, и четыре раза с одним миллилитром PBS tween.После последней стирки добавьте в образец 25 микролитров антиутухающей монтажной среды, дополненной DAPI. В то время как среда оседают над гонадами, поместите большую 2,5%agarose площадку на стандартный стеклянный микроскоп слайд. Затем сгладить со вторым слайдом.Затем используйте длинный стеклянный пастер пипетку и храните всю жидкость и гонады в узком кончике пипетки, чтобы свести к минимуму потерю образца при передаче гонад на площадку. Используя ресницы, приклеенные к зубочистке, распределите гонады по агарозной площадке и удалите частицы пыли. Затем медленно опустите прямоугольную стеклянную крышку скольжения на гонады, заботясь, чтобы избежать пузырьков воздуха, и удаление любого избыточного раствора с лабораторной ткани.Подсчет ячеек в трех измерениях надежно требует некоторой практики. Использование плагина счетчика ячеек Фиджи и скрипта, как метки ячеек, чтобы удалить любые дубликаты помогает сделать счета воспроизводиться. После того, как крышка скольжения урегулировать на ночь, использовать ячейку счетчик плагина и Фиджи вручную рассчитывать каждое ядро, маркировка каждого отдельного ядра в зависимости от наличия или отсутствия фосфохистон три EdU или прегенетор зоны маркировки клеток.Сигнал EdU ко локализуется с сигналом DAPI. В некоторых ядрах сигнал EdU охватывает все хромосомы, в то время как в других ядрах сигнал EdU локализуется до одного-двух ярких панкт, вероятно, на Х-хромосоме, которая размножается в конце S-фазы. Сигнал EdU от успешной 30-минутной маркировки локализуется примерно до половины ядер в предродовой зоне.В то время как техника работает последовательно в диком типе молодых взрослых животных, значительная часть спариваых 5-дневных гермафродитов не может обозначить в 30-минутный пульс ЭдУ. Продолжительность G2 можно оценить, проанализировав процент ядер в M-фазе, которые являются EdU положительными в течение всего периода времени, что позволяет вычислить медиану и максимальную продолжительность G2. Продолжительность G2 и G1 можно оценить по проценту всех ядер предгенеторной зоны, которые являются положительными, что позволяет вычислить максимальную продолжительность комбинированных фаз. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы использовать ту же партию блюд EdU, чтобы свести к минимуму межиммиакументабельную изменчивость.После этой процедуры, другие методы, такие как окрашивание дополнительными антителами могут быть выполнены или ответить на дополнительные вопросы о клеточном цикле, клеточной судьбы, или сигнализации путей. Не забывайте, что работа с нуклеицидными аналогами и парафермельдагидом может быть опасной, и что меры предосторожности, такие как ношение азотных перчаток, всегда должны приниматься при выполнении этой процедуры.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Комплексная оценка зародышевой линии химической токсичности Использование нематоды<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

Визуализация хондроцитов интеркаляции и направленного распространения через Zebrabow клонального анализа клеточной хряща в эмбриональном Меккеля

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Анализ данио рерио Личинки скелетных мышц целостности с синий краситель Эванса

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Пространственный и временной анализ активного ERK в<em&gt; C. Элеганс</em&gt; Половые

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analy

C. elegans кишечника как модель для межклеточных люмен морфогенеза и In Vivo поляризованной мембраны биогенеза на уровне одной ячейки: маркировка Пятнать антитела, RNAi потери функции анализа и обработки изображений

Multicellular tubes, fundamental units of all internal organs, are composed of polarized epithelial or endothelial cells, with apical membranes lining the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Применение РНК-интерференции и тепло шок индуцированной выражение фактор транскрипции для перепрограммирования клетки семенозачатка нейронов в C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Сотовый агрегации анализов для оценки привязки дрозофилы паз с транс-лигандов и его ингибирование СНГ-лигандами

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Трехмерные визуализации и анализа полученных, пояснил человеческого плацентарного ворсинчатых сосудистой сети

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Вычислительный анализ микрофлорой Caenorhabditis elegans для изучения распределения ядер, белки и Цитоскелет

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

Изоляция и окрашивание мыши кожи кератиноцитов для клеточного цикла Специфический анализ выражения клеточного белка массой цитометрии

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...