Name: cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu
Uploaded: 2018-10-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

Vi är tacksamma till E. coli lager center för MG1693; Wormbase; Stadens Caenorhabditis genetik som finansieras av nationella institut för hälsa Office av infrastruktur forskningsprogram (P40OD010440) för stammar. Zach Pincus för statistisk rådgivning; Aiping Feng för reagenser. Luke Schneider, Andrea Scharf, Sandeep Kumar och John Brenner för utbildning, rådgivning, stöd och bra diskussion; och de Kornfeld och Schedl labs för feedback på detta manuskript. Detta arbete stöds delvis av National Institutes of Health [R01 AG02656106A1 till KK, R01 GM100756 till TS] och en National Science Foundation pre gemenskap [DGE-1143954 och DGE-1745038 till ZK]. National Institutes of Health varken National Science Foundation hade någon roll i utformningen av studien, insamling, analys och tolkning av data, eller skriftligen manuskriptet.

1. beredning av EdU-märkt bakterier
<ol><li>
Växer en förrätt kultur av MG1693. Escherichia coli (E. coli) MG1693 bär en mutation i thyA.
	<ol>
<li>Strimma ut E. coli MG1693 från en fryst glycerol lager på en 120 mm lysogeny buljong (LB) agar petriskål. Kultur vid 37 ° C under natten.</li>
		<li>Inokulera från två enskilda E. coli MG1693 kolonier i två duplicera 4 mL tuber av flytande LB. kultur vid 37 ° C för ~ 16 h. Obs: MG1693 växer bra i LB utan...

<ol>
	<li>Fox, P. M., Vought, V. E., Hanazawa, M., Lee, M. -. H., Maine, E. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+E+and+CDK-2+regulate+proliferative+cell+fate+and+cell+cycle+progression+in+the+C.+elegans+germline.">Cyclin E and CDK-2 regulate proliferative cell fate and cell cycle progression in the C. elegans germline.</a> Development. 138 (11), 2223-2234 (2011).</li><li>Crittenden, S. L., Leonhard, K. A., Byrd, D. T., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+analyses+of+the+mitotic+region+in+the+Caenorhabditis+elegans+adult+germ+line.">Cellular analyses of the mitotic region in the Caenorhabditis elegans adult germ line.</a> Molecular biology of the cell. 17 (7), 3051-3061 (2006).</li><li>Seidel, H. S., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle+quiescence+maintains+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cells+independent+of+GLP-1/Notch.">Cell-cycle quiescence maintains Caenorhabditis elegans germline stem cells independent of GLP-1/Notch.</a> eLife. 4, (2015).</li><li>Fox, P. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Germline+Stem+Cell+Differentiation+Following+Loss+of+GLP-1+Notch+Activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Analysis of Germline Stem Cell Differentiation Following Loss of GLP-1 Notch Activity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (9), 167-184 (2015).</li><li>Kocsisova, Z., Kornfeld, K., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+accumulation+of+the+proliferating+cell+nuclear+antigen+PCN-1+transitions+from+continuous+in+the+adult+germline+to+intermittent+in+the+early+embryo+of+C.+elegans.">Cell cycle accumulation of the proliferating cell nuclear antigen PCN-1 transitions from continuous in the adult germline to intermittent in the early embryo of C. elegans.</a> BMC Developmental Biology. 18 (1), (2018).</li><li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo.">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li><li>vanden Heuvel, S., Kipreos, E. T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+Cell+Cycle+Analysis.">elegans Cell Cycle Analysis.</a> Methods in Cell Biology. , 265-294 (2012).</li><li>ThermoFisher. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Click-iT EdU Imaging Kits. , (2011).</li><li>Pazdernik, N., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Germ Cell Development in C. elegans. , 1-16 (2013).</li><li>Hirsh, D., Oppenheim, D., Klass, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+reproductive+system+of+Caenorhabditis+elegans.">Development of the reproductive system of Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 49 (1), 200-219 (1976).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Hansen, D., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+proliferation+versus+meiotic+fate+decision+in+Caenorhabditis+elegans.">Stem cell proliferation versus meiotic fate decision in Caenorhabditis elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 757, 71-99 (2013).</li><li>Jaramillo-Lambert, A., Ellefson, M., Villeneuve, A. M., Engebrecht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+timing+of+S+phases,+X+chromosome+replication,+and+meiotic+prophase+in+the+C.+elegans+germ+line.">Differential timing of S phases, X chromosome replication, and meiotic prophase in the C. elegans germ line.</a> Developmental Biology. 308 (1), 206-221 (2007).</li><li>Agarwal, I., Farnow, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOP-1+presenilin+deficiency+causes+a+late-onset+notch+signaling+phenotype+that+affects+adult+germline+function+in+Caenorhabditis+elegans.">HOP-1 presenilin deficiency causes a late-onset notch signaling phenotype that affects adult germline function in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 208 (2), 745-762 (2018).</li><li>Gumienny, T. L., Lambie, E., Hartwieg, E., Horvitz, H. R., Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+programmed+cell+death+in+the+Caenorhabditis+elegans+hermaphrodite+germline.">Genetic control of programmed cell death in the Caenorhabditis elegans hermaphrodite germline.</a> Development. 126 (5), 1011-1022 (1999).</li><li>Hendzel, M. J., Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis-specific+phosphorylation+of+histone+H3+initiates+primarily+within+pericentromeric+heterochromatin+during+G2+and+spreads+in+an+ordered+fashion+coincident+with+mitotic+chromosome+condensation.">Mitosis-specific phosphorylation of histone H3 initiates primarily within pericentromeric heterochromatin during G2 and spreads in an ordered fashion coincident with mitotic chromosome condensation.</a> Chromosoma. 106 (6), 348-360 (1997).</li><li>Zetka, M. C., Kawasaki, I., Strome, S., M&#252; Ller, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapsis+and+chiasma+formation+in+Caenorhabditis+elegans+require+HIM-3,+a+meiotic+chromosome+core+component+that+functions+in+chromosome+segregation.">Synapsis and chiasma formation in Caenorhabditis elegans require HIM-3, a meiotic chromosome core component that functions in chromosome segregation.</a> Genes &amp; development. 13 (17), 2258-2270 (1999).</li><li>Hansen, D., Hubbard, E. J. A., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-pathway+control+of+the+proliferation+versus+meiotic+development+decision+in+the+Caenorhabditis+elegans+germline.">Multi-pathway control of the proliferation versus meiotic development decision in the Caenorhabditis elegans germline.</a> Developmental Biology. 268 (2), 342-357 (2004).</li><li>Crawley, O., Barroso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohesin-interacting+protein+WAPL-1+regulates+meiotic+chromosome+structure+and+cohesion+by+antagonizing+specific+cohesin+complexes.">Cohesin-interacting protein WAPL-1 regulates meiotic chromosome structure and cohesion by antagonizing specific cohesin complexes.</a> eLife. 5 (2), 1-26 (2016).</li><li>Zhao, H., Halicka, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+signaling,+impairment+of+cell+cycle+progression,+and+apoptosis+triggered+by+5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine+incorporated+into+DNA.">DNA damage signaling, impairment of cell cycle progression, and apoptosis triggered by 5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine incorporated into DNA.</a> Cytometry Part A. 83 (11), 979-988 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Gervaise, A. L., Arur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+Temporal+Analysis+of+Active+ERK.">Spatial and Temporal Analysis of Active ERK.</a> in the C. elegans Germline. Journal of Visualized Experiments. 117 (117), e54901-e54901 (2016).</li><li>Vos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> De Cell Counter Plugin. , (2015).</li><li>Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (2016).</li><li>Michaelson, D., Korta, D. Z., Capua, Y., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+promotes+germline+proliferation+in+C.+elegans.">Insulin signaling promotes germline proliferation in C. elegans.</a> Development. 137 (4), 671-680 (2010).</li><li>Qin, Z., Jane, E., Hubbard, A., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-autonomous+DAF-16/FOXO+activity+antagonizes+age-related+loss+of+C.+elegans+germline+stem/progenitor+cells.">Non-autonomous DAF-16/FOXO activity antagonizes age-related loss of C. elegans germline stem/progenitor cells.</a> Nature communications. 6 (5), 7107 (2015).</li><li>Luo, S., Kleemann, G. A., Ashraf, J. M., Shaw, W. M., Murphy, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGFB+and+Insulin+Signaling+Regulate+Reproductive+Aging+via+Oocyte+and+Germline+Quality+Maintenance.">TGFB and Insulin Signaling Regulate Reproductive Aging via Oocyte and Germline Quality Maintenance.</a> Cell. 143 (2), 299-312 (2010).</li><li>Narbonne, P., Maddox, P. S., Labbe, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-18/PTEN+locally+antagonizes+insulin+signalling+to+couple+germline+stem+cell+proliferation+to+oocyte+needs+in+C.+elegans.">daf-18/PTEN locally antagonizes insulin signalling to couple germline stem cell proliferation to oocyte needs in C. elegans.</a> Development. , 4230-4241 (2015).</li><li>Cinquin, A., Chiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+Stem+Cell+Cycling+Balances+Self-Renewal+and.">Intermittent Stem Cell Cycling Balances Self-Renewal and.</a> Senescence of the C. elegans Germ Line. PLoS Genetics. 12 (4), 1005985 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Invitrogen EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine). , 1-7 (2010).</li><li>Tuttle, A. H., Rankin, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunofluorescent+Detection+of+Two+Thymidine+Analogues+(CldU+and+IdU)+in+Primary+Tissue.">Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. 46 (46), e2166-e2166 (2010).</li></ol>

Beredning av EdU-märkt bakterier (steg 1) är avgörande för detta protokoll, och den första punkten för felsökning. Vildtyp unga vuxna hermafroditer etikett mycket pålitligt i en 4 h EdU-puls, vilket gör detta till en användbar kontroll för varje ny omgång EdU-märkt bakterier. Dessutom kommer intakt EdU-märkt bakterier som anger tarmen (i äldre djur eller vissa svalget/grinder defekta mutanter) etikett med klick-kemi och visas som ljusa avlånga puncta i tarmen. En alternativ teknik för märkning hermafrod...

I djurens utveckling måste hundratals, tusentals, miljoner, miljarder, eller ens biljontals celldelningar bilda den vuxna organismen. Cellcykeln, uppsättningen cellulära händelser sammansatt av G1 (gap), S (syntes), G2 (gap), och M (Mitos) definiera serien av händelser som avrättas varje celldelning. Cellcykeln är dynamisk och bäst uppskattat i realtid, vilket kan vara tekniskt svårt. De tekniker som presenteras i detta protokoll tillåter en att göra mätningar av faser och timing av cellcykeln från stillbilder.
Märkning med nukleosid analoger såsom 5-ethynyl-2'-deoxiuridin (EdU) eller 5-brom-2'-deoxiuridin (BrdU) är den gyllene standarden att identifiera S-fas i studierna av cellcykeln dynamik i den Caenorhabditis elegans (C. elegans) vuxen hermafrodit könsceller1,2,3,4,5. Både EdU och BrdU kan användas i nästan alla genetiska bakgrund, som de inte lita på någon genetisk konstruktion. Visualisera BrdU kräver hård kemisk behandling att exponera antigenet för anti-BrdU-antikropp som färgning, och som ofta är oförenligt med bedömningen av andra cellulära markörer visualiseras genom samtidig färgning med ytterligare antikroppar. Däremot visualisera EdU sker genom att klicka på kemi under milda förhållanden och således är kompatibel med antikropp Co färgning6,7.
Noggrannheten av etiketten är tydlig, eftersom atomkärnor endast införliva de tymidin (5-ethynyl-2'-deoxiuridin) analoger DNA under S-fasen. Visualisering sker i fasta vävnad. EdU etiketten är osynliga i sig fram till en som innehåller natriumazid färgämne eller fluorophore reagerar kovalent med alkynen i EdU av koppar-katalyseras Klicka kemi8. EdU märkning kan ge omedelbar information som kärnorna är i S-fas, med en kort puls av märkning. EdU kan också ge dynamisk information, med puls-chase eller kontinuerlig märkning; till exempel i en puls-chase experiment, etiketten späds vid varje celldelning eller sprids som nondividing celler framsteg genom utveckling.
I C. elegans hermafrodit könsceller är en kraftfull modellsystem för studier av signalering vägar, stamceller, meios och cellcykeln. Den vuxna könsceller är en polariserad montering-line med stamceller som finns på den distala änden följt av intrade och progression genom meiotisk profas, samordnas med stadier av könscellsbildning mer proximalt (figur 1). På den proximala änden, oocyter mogen, är ägglossning och befruktas och påbörja embryogenes i livmodern9,10,11. ~ 20 cell-diameter lång regionen nära cellen distala spets, som omfattar mitotiskt cykling könsceller stammen, stamceller och meiotiska S-fas celler men inte cellerna i meiotiska profas, kallas stamceller zon2,4 , 9 , 12. cellmembranen ge ofullständig separation mellan atomkärnor i den distala könsceller, men de zon stamceller genomgå mitotiska cell cykling till stor del självständigt. Könsceller stamceller zon i unga vuxna hermafroditer varar median mitotiska cellcykelns ~6.5 h; G1-fasen är kort eller frånvarande, och rofylld inte iakttas1,2,13. Könsceller stamcellers differentiering sker genom i huvudsak direkt differentiering och därmed saknar transit-förstärkande divisioner4. Under differentiering i pachytene scenen, cirka 4 av 5 kärnor bildar inte oocyter men istället genomgå apoptos, agerar som sjuksköterska celler genom att donera sina cytoplasmiska innehållet till utveckla äggcellen12,14 , 15.
Förutom märkning celler i S-fas med nukleosid analoger, kan man identifiera cellerna i Mitos och meios använder antikropp färgning. Kärnorna i Mitos är immunreaktiva till anti-phospho-Histon H3 (Ser10) antikropp (kallas pH3)7,16. Kärnorna i meios är immunreaktiva till anti-honom-3 antikropp (meiotisk kromosomanalys axis protein)17. Kärnor i zonen stamceller kan identifieras genom avsaknad av HIM-3, förekomsten av nucleoplasmic REC-818eller förekomsten av WAPL-119. WAPL-1 intensitet är störst i den somatiska gonad, hög i den perifera zonen, och låg under tidig meiotiska prophases19. Flera cellcykeln mätningar är möjliga med några variationer i protokollet: jag) identifiera kärnor i S-fas och mäta S-fas index; (II) identifiera kärnor i M-fas och mäta indexet M-fas; (III) avgöra om kärnor var i mitotiskt eller meiotiska S-fas; IV) mäta längden på G2; V) åtgärd duartion G2 + M + G1 faser; VI) mäta graden av meiotiska inresa. VII) uppskatta graden av meiotiska progression.
Man kan göra flera cellcykeln mätningar från endast ett fåtal typer av våt-lab experiment. Protokollet nedan beskriver en 30 min puls märkning av utfodring C. elegans vuxen hermafroditer med EdU märkt bakterier och samtidig märkning M-fas celler genom färgning med anti-pH3 antikropp och perifera zonen celler genom färgning med anti-WAPL-1 antikroppar. Endast förändring varaktigheten av EdU foder (steg 2,5), typ av antikroppar sysselsatt (steg 5), och analyser (steg 8,3) krävs för ytterligare mätningar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1019px;" width="1020">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td >E. coli MG1693</td>
			<td style="width:255px;">Coli Genetic Stock Center</td>
			<td style="width:255px;">6411</td>
			<td style="width:255px;">grows fine in standard unsupplemented LB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">E. coli OP50</td>
			<td style="width:255px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:255px;">OP50</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">C10337</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5-Ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">900584-50MG</td>
			<td style="width:255px;">or use EdU provided in kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glucose</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">D9434-500G</td>
			<td style="width:255px;">D-(+)-Dextrose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thiamine (Vitamin B1)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T4625-5G</td>
			<td style="width:255px;">Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thymidine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T1895-1G</td>
			<td style="width:255px;">BioReagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">M1880-1KG</td>
			<td style="width:255px;">MgSO4, Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous</td>
			<td style="width:255px;">Fisher</td>
			<td style="width:255px;">BP332-500G</td>
			<td style="width:255px;">Na2HPO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Potassium Phosphate, monobasic</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P5379-500G</td>
			<td style="width:255px;">KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">A4514-500G</td>
			<td style="width:255px;">NH4Cl, Reagent Plus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Bacteriological Agar</td>
			<td style="width:255px;">US Biological</td>
			<td style="width:255px;">C13071058</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">C3881-500G</td>
			<td style="width:255px;">CaCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">LB Broth (Miller)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L3522-1KG</td>
			<td style="width:255px;">Used at 25g/L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Levamisole</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L9756-5G</td>
			<td style="width:255px;">0.241g/10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:255px;">Calbiochem Omnipur</td>
			<td style="width:255px;">6506</td>
			<td style="width:255px;">homemade PBS works just as well</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tween-20</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P1379-500ML</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">16% Paraformaldehyde, EM-grade ampules</td>
			<td style="width:255px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:255px;">15710</td>
			<td style="width:255px;">10ml ampules</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">100% methanol</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">A454-1L</td>
			<td style="width:255px;">Gold-label methanol is critical for proper morphology with certain antibodies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:255px;">Gibco</td>
			<td style="width:255px;">16210-072</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1671330</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">rabbit-anti-WAPL-1</td>
			<td style="width:255px;">Novus biologicals</td>
			<td style="width:255px;">49300002</td>
			<td style="width:255px;">Lot G3048-179A02, used at 1:2000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">mouse-anti-pH3 clone 3H10</td>
			<td style="width:255px;">Millipore</td>
			<td style="width:255px;">05-806</td>
			<td style="width:255px;">Lot#2680533, used at 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-rabbit IgG-conjugated Alexa Fluor 594</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A11012</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1256147, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-mouse IgG-conjugated Alexa Fluor 647</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A21236</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1511347, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">Vectashield antifade mounting medium containing 4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole Dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td style="width:255px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:255px;">H-1200</td>
			<td style="width:255px;">mounting medium without DAPI can be used instead, following a separate DAPI incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">nail polish</td>
			<td style="width:255px;">Wet n Wild</td>
			<td style="width:255px;">DTC450B</td>
			<td style="width:255px;">any clear nail polish should work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">S-medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">M9 buffer</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">M9 agar</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">same recipe as M9 buffer, but add 1.7% agar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Nematode Growth Medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">dissecting watch glass</td>
			<td style="width:255px;">Carolina Biological</td>
			<td style="width:255px;">42300</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Parafilm laboratory film</td>
			<td style="width:255px;">Pechiney Plastic Packaging</td>
			<td style="width:255px;">PM-996</td>
			<td style="width:255px;">4 inch wide laboratory film</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">petri dishes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">60 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Long glass Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:255px;">MidSci Avant</td>
			<td style="width:255px;">2926</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tips</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Serological pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">500 mL Erlenmyer flask</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Aluminum foil</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">25G 5/8&#8221; needles</td>
			<td style="width:255px;">BD PrecisionGlide&#160;</td>
			<td style="width:255px;">305122</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5ml glass centrifuge tube</td>
			<td style="width:255px;">Pyrex&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Borosilicate glass tubes 1ml</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">glass slides</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">no 1 coverslips 22 x 40 mm</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">no 1.5 may work, also</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">37 &#176;C Shaker incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tabletop Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Clinical Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;">IEC</td>
			<td style="width:255px;">428</td>
			<td style="width:255px;">with 6 swinging bucket rotor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Mini Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">20 &#176;C incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:255px;">4 &#176;C refrigerator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">-20 &#176;C freezer</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Observer Z1 microscope</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Plan Apo 63X 1.4 oil-immersion objective lens</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:255px;">Ultraview Vox spinning disc confocal system</td>
			<td style="width:255px;">PerkinElmer&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">Nikon spinning disc confocal system works very well, also, as described here: http://wucci.wustl.edu/Facilities/Light-Microscopy&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu

Cellcykeln analys i eukaryota organismer använder ofta tredjeparts kromosom morfologi, uttryck och/eller lokalisering av genprodukter som krävs för olika faser av cellcykeln eller införlivandet av nukleosid analoger. Under S-fasen, DNA-polymerases införliva tymidin analoger såsom EdU eller BrdU kromosomala DNA, märkning cellerna för analys. För C. elegans, nucleoside analog EdU matas till maskar under regelbunden kultur och är kompatibel med Immunofluorescerande tekniker. Könsceller av C. elegans är en kraftfull modellsystem för studier av signalering vägar, stamceller, meios och cellen cyklar eftersom det är transparent, genetiskt lättköpt och meiotiska profas och cellulär differentiering/könscellsbildning förekommer i en montering-liknande linjärt. Dessa funktioner gör EdU ett bra verktyg att studera dynamiska aspekter av mitotiskt cykling celler och könsceller utveckling. Det här protokollet beskriver hur man framgångsrikt förbereda EdU bakterier, mata dem till vildtyp C. elegans hermafroditer, dissekera den hermafrodit gonad, fläckar för EdU iblandning i DNA, fläcken med antikroppar att upptäcka olika cellcykeln och utvecklingsmässiga markörer, bild gonad och analysera resultaten. Protokollet beskrivs variationerna i metod och analys för mätning av S-fas index, M-fas index, G2 varaktighet, cellcykelns längd, andelen meiotiska inträde och meiotiska profas progressionshastigheten. Denna metod kan anpassas för att studera cellcykeln eller cell historia i andra vävnader, stadier, genetiska bakgrunder och fysiologiska förhållanden.

Eftersom DNA-syntes är skyldig att införliva EdU, kan man konstatera att EdU-märkt atomkärnor genomgick S-fas under fönstret EdU-märkning tid. Man kan tolka atomkärnor att etikett i en 30 min utfodring med EdU märkt bakterier som kärnorna i S-fas vid tidpunkten för dissektion. Atomkärnor som etikett i en längre kontinuerlig EdU utfodring experiment kan ha märkt tidigt i tidsfönstret och sedan vänster S-fas, eller kanske har märkt i den sena delen av fönstret EdU tid. EdU ...

Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

En imaging-baserade metoden beskrivs som kan användas för att identifiera S-fas och analysera cellcykeln dynamik i den C. elegans hermafrodit könsceller med hjälp av tymidin analoga EdU. Denna metod kräver ingen transgener och är kompatibel med Immunofluorescerande färgning.

Cellcykeln analys i den C. elegans könsceller med tymidin Analog EdU

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases ...

Denna metod kan hjälpa till att svara på viktiga frågor om cellcykeln och könsceller stamcellspopulationen dynamik i C.elegans. De viktigaste fördelarna med denna teknik är att det kräver inga transgener, det är kompatibelt med immunofluorescerande färgning, och det kan modifieras för att studera celler under många olika förhållanden. Jag var mycket upphetsad när jag först såg denna metod som används i Scheda labbet.Även om denna metod kan ge insikt i C.elegans cellcykeln, det kan också tillämpas på bredare frågor om åldrande, näring, eller förändrade genotyper. Generellt laboratorier nya till denna metod kan kämpa med den inledande idiodisprepation eller C.elegans hematoxylin färgning. Börja med att använda steril teknik för att lägga till 200 mikroliter av 10 millimolar EdU i 100 milliliter M9 buffert och lämpliga kosttillskott till fyra milliliter av nyodlade över natten MG 1693 E.coli kultur.Att göra idiodiscious kräver en känslig balans mellan EdU och tymidin tillskott. Eftersom mängden tymidin måste vara tillräcklig för att E coli ska kunna växa bra, medan mängden EdU måste vara tillräcklig för den robusta skölden mot utjämning. Efter inte mer än 24 timmar vid 37 grader Celsius och 200 RPM, använd steril teknik för att dela kulturen mellan två till fyra sterila 50 milliliter koniska rör för centrifugeringen.Resuspend den pellatin fyra milliliter av färsk M9 buffert och använda samma pipett att tillämpa ca 8 droppar EdU märkt E Coli MG1693 lösning till centrum för enskilda rumstemperatur 60 milliliter M9 A vakt petriskålar. För att mata EdU-märkta bakterier till nematoderna, använd färska PBS för att tvätta C.Elegans från en nematodtillväxtmedell till ett 1,5 milliliterrör och låt djuren bosätta sig kort av gravitationen. Tvätta djuren en till två gånger med en milliliter PBS och använd en glas pasteur pipett för att överföra nematoder på mitten av EdU gräsmattan i en liten droppe PBS.Vänta några minuter tills vätskan absorberas och inkubera kulturen i minst 30 minuter vid 20 grader Celsius enligt experimentprotokollet. I slutet av inkubationen, använd två milliliter PBS för att spola maskarna från EdU-odlingsplattan i en glassektskål. Efter dissektion och fixering av de nematod gonads som tidigare beskrivits, skölj en liten en milliliter borosilikat glasrör och en lång glas pasteur pipett med PBS kompletteras med 0,1%tween 20 och använda pipetten för att överföra de fasta gonader till röret i en liten mängd PBS-tween.Samla gonaderna genom centrifugeringen och använd en lång, utdragen glasfängspipett för att avlägsna så mycket supernatent som möjligt utan att störa gonadpellet. För EdU-detektion, tillsätt 100 mikroLiters av klicka EdU cocktail till gonads och täcka röret med laboratoriefilm för en 30 till 60 minuters inkubation vid rumstemperatur. Vid slutet av inkubationen, tvätta gonaderna en gång med 100 mikroLiter reaktion skölj buffert, och fyra gånger med en milliliter PBS-interpolering.Efter den sista tvätten, tillsätt 25 microLiters av anti-fade monteringsmedium kompletterat med DAPI till provet. Medan mediet lägger sig över gonads, placera en stor 2,5%agaros pad på en vanlig glasmikroskop bild. Sedan platta med en andra bild.Använd därefter en lång glas pasteurpipett och hålla all vätska och gonader i den smala spetsen av pipetten för att minimera provförlust när du överför gonaderna till dynan. Med hjälp av en ögonfrans limmad på en tandpetare, fördela gonader över agarospaden och ta bort eventuella dammpartiklar. Sedan långsamt sänka en rektangulär glaslock glida på gonads, var noga med att undvika luftbubblor, och ta bort eventuella överskott lösning med ett labb vävnad.Att räkna celler i tre dimensioner tar tillförlitligt lite övning. Använda Fijis cellräknare plug-in och ett skript som markerar cellerna för att ta bort eventuella dubbletter hjälper till att göra räknas reproducerbara. Efter att täcka slip att bosätta sig över natten, använda cellen motverka plug-in och Fiji för att manuellt räkna varje kärna, märkning varje enskild kärna enligt förekomsten eller frånvaron av phosphohistone tre EdU eller pregenetor zon cellmärkning.EdU-signalen samlokaliserar med DAPI-signal. I vissa kärnor, EdU signalen täcker alla kromosomer, medan i andra kärnor, EdU signalen lokaliserar till en till två ljusa punkta, sannolikt på X-kromosomen, som replikerar sent i S-fasen. EdU signal från en lyckad 30 minuters märkning lokaliserar till ungefär hälften av kärnorna i pregenetor zonen.Medan tekniken fungerar konsekvent i vilda typ unga vuxna djur, en betydande del av parade 5 dag gamla hermafroditer misslyckas med att märka i en 30 minuters EdU puls. Varaktigheten av G2 kan uppskattas genom att analysera andelen kärnor i M-fasen som är EdU positiva över tiden kursen, vilket möjliggör beräkning av median och maximal varaktighet av G2. Varaktigheten av G2 och G1 kan uppskattas från den procentuella andelen av alla pregenetor zonkärnor som är EdU positiva, vilket möjliggör beräkning av den maximala varaktigheten av de kombinerade faserna. Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att använda samma parti EdU rätter för att minimera inter-experimentella variationer.Efter denna procedur, andra metoder som färgning med ytterligare antikroppar kan utföras eller svara på ytterligare frågor om cellcykeln, cell öde, eller signalering vägar. Glöm inte att arbeta med nukleicid analoger och parafermeldahyde kan vara farligt, och att försiktighetsåtgärder, såsom bär nitrol handskar, bör alltid vidtas när du utför detta förfarande.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Omfattande Bedömning av nedärvda Kemisk toxicitet Använda Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

Visualisering av kondrocyttransplantation interkalering och riktnings spridning via Zebrabow Kloncellanalys i embryonala Meckels Brosk

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Rumsliga och tidsmässiga analys av aktiva ERK i<em&gt; C. elegans</em&gt; arvslinje

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analy

C. elegans tarmen som en modell för intercellulära Lumen morfogenes och In Vivo polariserade membran biogenes på Single-cell nivå: märkning av antikropp färgning, RNAi förlust-av-funktion analys och Imaging

Multicellular tubes, fundamental units of all internal organs, are composed of polarized epithelial or endothelial cells, with apical membranes lining the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Tillämpningen av RNAi och värme-chock-inducerad transkription faktorn uttryck att omprogrammera könsceller att nervceller i C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation analyser att utvärdera bindningen av Drosophila skåran med Trans-ligander och dess hämning av Cis-ligander

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Tredimensionell Rendering och analys av Immunolabeled, klargöras mänskliga placenta villösa vaskulär nätverk

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational analys av den Caenorhabditis elegans könsceller att studera fördelningen av atomkärnor, proteiner och cytoskelettet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

Isolering och färgning av mus hud keratinocyter för cell Cycle specifik analys av cellulära protein uttryck av Masscytometry

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...