Name: cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu
Uploaded: 2018-10-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

MG1693 için E. coli stok merkezi için minnettarız; Wormbase; Ulusal kurumları, sağlık Office of araştırma altyapı programlar tarafından (P40OD010440) suşlar için finanse Caenorhabditis genetik Merkezi; Zach Pincus istatistiksel tavsiye için; Aiping Feng reaktifler için; Luke Schneider, Andrea Scharf, Sandeep Kumar ve John Brenner eğitim, danışmanlık, destek ve yardımcı tartışma; ve bu el yazması geri bildirimler Kornfeld ve Schedl labs. Bu eser kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen [R01 AG02656106A1 KK, R01 GM100756 TS için] ve bir Ulusal Bilim Vakfı HGUGM dostluk [DGE-1143954 ve DGE-1745038 ZK için]. Ne Ulusal Sağlık Enstitüleri ne de Ulusal Bilim Vakfı çalışma, toplanması, Analizi ve yorumu veri tasarım, ne de el yazması yazılı herhangi bir rolü vardı.

1. EdU etiketli bakteri hazırlanması
<ol><li>
MG1693 starter kültürü büyümek. Escherichia coli (E. coli) MG1693 thyA içinde bir mutasyon taşır.
	<ol>
<li>120 mm lysogeny suyu (LB) agar Petri kabına üzerine donmuş gliserol stoktan çizgi E. coli MG1693 dışarı. Kültür gecede 37 ° C'de.</li>
		<li>İki bireysel E. coli aşılamak MG1693 kolonileri iki yinelenen 4 mL tüpler 37 ° c ~ 16 h için sıvı LB. kültürünün. Not: MG1693 LB içinde iyi ...

<ol>
	<li>Fox, P. M., Vought, V. E., Hanazawa, M., Lee, M. -. H., Maine, E. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+E+and+CDK-2+regulate+proliferative+cell+fate+and+cell+cycle+progression+in+the+C.+elegans+germline.">Cyclin E and CDK-2 regulate proliferative cell fate and cell cycle progression in the C. elegans germline.</a> Development. 138 (11), 2223-2234 (2011).</li><li>Crittenden, S. L., Leonhard, K. A., Byrd, D. T., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+analyses+of+the+mitotic+region+in+the+Caenorhabditis+elegans+adult+germ+line.">Cellular analyses of the mitotic region in the Caenorhabditis elegans adult germ line.</a> Molecular biology of the cell. 17 (7), 3051-3061 (2006).</li><li>Seidel, H. S., Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle+quiescence+maintains+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cells+independent+of+GLP-1/Notch.">Cell-cycle quiescence maintains Caenorhabditis elegans germline stem cells independent of GLP-1/Notch.</a> eLife. 4, (2015).</li><li>Fox, P. M., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Germline+Stem+Cell+Differentiation+Following+Loss+of+GLP-1+Notch+Activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Analysis of Germline Stem Cell Differentiation Following Loss of GLP-1 Notch Activity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (9), 167-184 (2015).</li><li>Kocsisova, Z., Kornfeld, K., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+accumulation+of+the+proliferating+cell+nuclear+antigen+PCN-1+transitions+from+continuous+in+the+adult+germline+to+intermittent+in+the+early+embryo+of+C.+elegans.">Cell cycle accumulation of the proliferating cell nuclear antigen PCN-1 transitions from continuous in the adult germline to intermittent in the early embryo of C. elegans.</a> BMC Developmental Biology. 18 (1), (2018).</li><li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo.">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li><li>vanden Heuvel, S., Kipreos, E. T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+Cell+Cycle+Analysis.">elegans Cell Cycle Analysis.</a> Methods in Cell Biology. , 265-294 (2012).</li><li>ThermoFisher. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Click-iT EdU Imaging Kits. , (2011).</li><li>Pazdernik, N., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Germ Cell Development in C. elegans. , 1-16 (2013).</li><li>Hirsh, D., Oppenheim, D., Klass, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+reproductive+system+of+Caenorhabditis+elegans.">Development of the reproductive system of Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 49 (1), 200-219 (1976).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Hansen, D., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+proliferation+versus+meiotic+fate+decision+in+Caenorhabditis+elegans.">Stem cell proliferation versus meiotic fate decision in Caenorhabditis elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 757, 71-99 (2013).</li><li>Jaramillo-Lambert, A., Ellefson, M., Villeneuve, A. M., Engebrecht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+timing+of+S+phases,+X+chromosome+replication,+and+meiotic+prophase+in+the+C.+elegans+germ+line.">Differential timing of S phases, X chromosome replication, and meiotic prophase in the C. elegans germ line.</a> Developmental Biology. 308 (1), 206-221 (2007).</li><li>Agarwal, I., Farnow, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOP-1+presenilin+deficiency+causes+a+late-onset+notch+signaling+phenotype+that+affects+adult+germline+function+in+Caenorhabditis+elegans.">HOP-1 presenilin deficiency causes a late-onset notch signaling phenotype that affects adult germline function in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 208 (2), 745-762 (2018).</li><li>Gumienny, T. L., Lambie, E., Hartwieg, E., Horvitz, H. R., Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+programmed+cell+death+in+the+Caenorhabditis+elegans+hermaphrodite+germline.">Genetic control of programmed cell death in the Caenorhabditis elegans hermaphrodite germline.</a> Development. 126 (5), 1011-1022 (1999).</li><li>Hendzel, M. J., Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis-specific+phosphorylation+of+histone+H3+initiates+primarily+within+pericentromeric+heterochromatin+during+G2+and+spreads+in+an+ordered+fashion+coincident+with+mitotic+chromosome+condensation.">Mitosis-specific phosphorylation of histone H3 initiates primarily within pericentromeric heterochromatin during G2 and spreads in an ordered fashion coincident with mitotic chromosome condensation.</a> Chromosoma. 106 (6), 348-360 (1997).</li><li>Zetka, M. C., Kawasaki, I., Strome, S., M&#252; Ller, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapsis+and+chiasma+formation+in+Caenorhabditis+elegans+require+HIM-3,+a+meiotic+chromosome+core+component+that+functions+in+chromosome+segregation.">Synapsis and chiasma formation in Caenorhabditis elegans require HIM-3, a meiotic chromosome core component that functions in chromosome segregation.</a> Genes &amp; development. 13 (17), 2258-2270 (1999).</li><li>Hansen, D., Hubbard, E. J. A., Schedl, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-pathway+control+of+the+proliferation+versus+meiotic+development+decision+in+the+Caenorhabditis+elegans+germline.">Multi-pathway control of the proliferation versus meiotic development decision in the Caenorhabditis elegans germline.</a> Developmental Biology. 268 (2), 342-357 (2004).</li><li>Crawley, O., Barroso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohesin-interacting+protein+WAPL-1+regulates+meiotic+chromosome+structure+and+cohesion+by+antagonizing+specific+cohesin+complexes.">Cohesin-interacting protein WAPL-1 regulates meiotic chromosome structure and cohesion by antagonizing specific cohesin complexes.</a> eLife. 5 (2), 1-26 (2016).</li><li>Zhao, H., Halicka, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+signaling,+impairment+of+cell+cycle+progression,+and+apoptosis+triggered+by+5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine+incorporated+into+DNA.">DNA damage signaling, impairment of cell cycle progression, and apoptosis triggered by 5-ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine incorporated into DNA.</a> Cytometry Part A. 83 (11), 979-988 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Gervaise, A. L., Arur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+Temporal+Analysis+of+Active+ERK.">Spatial and Temporal Analysis of Active ERK.</a> in the C. elegans Germline. Journal of Visualized Experiments. 117 (117), e54901-e54901 (2016).</li><li>Vos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> De Cell Counter Plugin. , (2015).</li><li>Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (2016).</li><li>Michaelson, D., Korta, D. Z., Capua, Y., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+promotes+germline+proliferation+in+C.+elegans.">Insulin signaling promotes germline proliferation in C. elegans.</a> Development. 137 (4), 671-680 (2010).</li><li>Qin, Z., Jane, E., Hubbard, A., Hubbard, E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-autonomous+DAF-16/FOXO+activity+antagonizes+age-related+loss+of+C.+elegans+germline+stem/progenitor+cells.">Non-autonomous DAF-16/FOXO activity antagonizes age-related loss of C. elegans germline stem/progenitor cells.</a> Nature communications. 6 (5), 7107 (2015).</li><li>Luo, S., Kleemann, G. A., Ashraf, J. M., Shaw, W. M., Murphy, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGFB+and+Insulin+Signaling+Regulate+Reproductive+Aging+via+Oocyte+and+Germline+Quality+Maintenance.">TGFB and Insulin Signaling Regulate Reproductive Aging via Oocyte and Germline Quality Maintenance.</a> Cell. 143 (2), 299-312 (2010).</li><li>Narbonne, P., Maddox, P. S., Labbe, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-18/PTEN+locally+antagonizes+insulin+signalling+to+couple+germline+stem+cell+proliferation+to+oocyte+needs+in+C.+elegans.">daf-18/PTEN locally antagonizes insulin signalling to couple germline stem cell proliferation to oocyte needs in C. elegans.</a> Development. , 4230-4241 (2015).</li><li>Cinquin, A., Chiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+Stem+Cell+Cycling+Balances+Self-Renewal+and.">Intermittent Stem Cell Cycling Balances Self-Renewal and.</a> Senescence of the C. elegans Germ Line. PLoS Genetics. 12 (4), 1005985 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Invitrogen EdU (5-ethynyl-2’-deoxyuridine). , 1-7 (2010).</li><li>Tuttle, A. H., Rankin, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunofluorescent+Detection+of+Two+Thymidine+Analogues+(CldU+and+IdU)+in+Primary+Tissue.">Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. 46 (46), e2166-e2166 (2010).</li></ol>

Bu iletişim kuralı ve sorun giderme için ilk nokta EdU etiketli bakteri (adım 1) hazırlanması önemlidir. Vahşi tipli Genç Yetişkin Hünsa etiketinde çok güvenilir 4 h EdU-darbe, bu EdU etiketli bakteri yeni her toplu iş için kullanışlı bir denetimi yapma. Ayrıca, bağırsak (büyük hayvanlar veya belirli yutak/taşlama arızalı mutantlar) girin sağlam EdU etiketli bakteri tıklayın kimya ile etiket ve parlak dikdörtgen puncta gut olarak görünür. Hünsa etiketleme için alternatif bir teknik bir ...

Hayvan gelişmede, yüzlerce, binlerce, milyonlarca, milyarlarca veya hatta trilyonlarca hücre bölünmeler yetişkin organizma oluşturmak için gereklidir. Hücre döngüsü, G1 hücresel olaylar kümesi oluşur (gap), S (sentez), G2 (gap) ve M (mitoz) tanımlayan bir dizi olaylar yürütülen her hücre bölünmesi. Hücre döngüsü dinamik ve teknik olarak zor olabilir gerçek zamanlı olarak en iyi takdir. Bu protokol için sunulan teknikleri aşamaları ölçümleri ve hareketsiz görüntüler üzerinden hücre döngüsünün zamanlama yapmak izin.
5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) veya 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) gibi nükleozit analogları ile etiketleme S-faz hücre döngüsü dynamics Caenorhabditis elegans (C. elegans) Yetişkin çalışmalarda tanımlamak için altın standart olduğunu hermafrodit germline1,2,3,4,5. Onlar herhangi bir genetik yapı üzerinde güvenmeyin gibi EdU ve BrdU neredeyse herhangi bir genetik arka planda kullanılabilir. BrdU görüntülenmesi için sık sık işbirliği ile ek antikor boyama tarafından görüntülenmiştir diğer hücresel işaretleri değerlendirilmesi ile uyumsuz olan anti-BrdU antikor boyama, antijen ortaya çıkarmak için sert kimyasal tedavi gerektirir. Buna karşılık, EdU görselleştirme hafif koşullar altında tıklayın Kimya tarafından oluşur ve böylece ortak6,7boyama antikor ile uyumludur.
Çekirdek sadece timidin (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) analogları DNA'ya S-aşamasında dahil beri etiket özgüllük açıktır. Görselleştirme sabit dokusunda yer alır. EdU etiket başına bir azid içeren boya kadar görünmez veya fluorophore kovalent bakır katalize tıklayın Kimya8tarafından EdU, alkin ile tepki verir. EdU etiketleme çekirdeği maddelerinin etiketlenmesi kısa bir darbe kullanarak S-aşamasında olduğunuz hemen bilgi sağlayabilir. EdU da nabız-chase veya sürekli etiketleme kullanarak dinamik bilgi sağlayabilir; Örneğin, bir darbe-chase deneyinde etiket her hücre bölünmesi seyreltilmiş veya olarak nondividing hücreleri ilerleme geliştirilmesi yoluyla yayılır.
C. elegans hermafrodit germline sinyal yolları, kök hücre, mayoz ve hücre döngüsü, bir güçlü modeli için çalışmalar sistemidir. Yetişkin germline ardından giriş ve ilerleme daha proksimale gametogenesis aşamaları ile koordine segregasyonun profaz, (Şekil 1) aracılığıyla distal uçta bulunan kök hücreleriyle polarize bir montaj hattı var. Proksimal sonunda yumurta Olgun, ovulated ve döllenmiş ve embriyo rahim9,10,11' deki yönergeleri başlayabilirsiniz. ~ 20 cep-çapı uzun bölge mitotically Bisiklete binme germline kök, progenitor hücreler ve segregasyonun S fazlı hücreleri ama hücreleri segregasyonun profaz içerir, distal ucu hücre yakınındaki progenitör bölge2,4 denir , 9 , 12. hücre zarlarında distal germline çekirdekler arasında eksik ayrılık sağlar, ancak yaratıcı bölgesi hücreleri Mitotik hücre büyük ölçüde bağımsız olarak Bisiklete binme tabi. Medyan Mitotik hücre döngüsü süresinin Genç Yetişkin Hünsa germline progenitör bölge hücrelerinin ~6.5 h olduğunu; G1 aşamasıdır kısa ya da yok, ve sendika değil1,2,13görülmektedir. Germline kök hücre farklılaşması ile aslında doğrudan farklılaşma oluşur ve böylece transit yükseltecek bölümler4yoksun. Sırasında farklılaşma pachytene aşamasında, yaklaşık 4 5 çekirdeği yumurta oluşturacak değil ama bunun yerine geçmesi apoptosis, sitoplazmik içeriklerini gelişmekte olan oosit12,14 bağışlayarak hemşire hücreler olarak hareket , 15.
Nükleozit analogları ile S-aşamasında etiketleme hücreleri ek olarak bir hücre mitoz ve mayoz antikor boyama kullanarak tanımlayabilirsiniz. Mitoz çekirdeği anti-Fosfo-histon H3 immunoreactive (Ser10) (pH3 denir) antikor7,16. Mayoz çekirdeği anti-onu-3 antikor (segregasyonun kromozom eksen protein)17' ye immunoreactive. Çekirdeklerin progenitör bölgedeki hım-3, nucleoplasmic REC-818varlığı veya WAPL-119varlığı yokluğunda tarafından tespit edilebilir. WAPL-1 yoğunluğu en yüksek somatik erbezi progenitör bölge'de, yüksek ve düşük sırasında erken segregasyonun prophases19yaşında. Protokol, bazı farklılıklar nedeniyle birkaç hücre döngüsü ölçümleri mümkündür: Ben) çekirdeği S-aşamasında tanımlamak ve ölçmek S fazlı Dizin; II) tanımlamak çekirdeği M-aşamasında ve M-faz Dizin ölçmek; III) çekirdeği mitotik veya segregasyonun S-aşamada edildi olup olmadığını belirlemek; IV) G2 süresi ölçün; V) ölçümü duartion G2 + M + G1 aşamaları; VI) ölçümü segregasyonun giriş oranı; VII) segregasyonun ilerleme hızını tahmin ediyoruz.
Bir ıslak-laboratuvar deneyleri sadece birkaç tür birden çok hücre döngüsü ölçümleri yapabilirsiniz. Bakteri ve ortak etiketleme M fazlı hücreleri ile anti-WAPL-1 antikor boyama tarafından bölge hücreleri boyama anti-pH3 antikor ve yaratıcı tarafından etiketli EdU ile C. elegans yetişkin Hünsa besleyerek etiketleme bir 30 dk darbe aşağıdaki protokolünü açıklar. Tek yem EdU (adım 2.5), tipi antikorların süresi değişimler (adım 5) istihdam ve analizleri (adım 8.3) ek ölçümler için gereklidir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1019px;" width="1020">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td >E. coli MG1693</td>
			<td style="width:255px;">Coli Genetic Stock Center</td>
			<td style="width:255px;">6411</td>
			<td style="width:255px;">grows fine in standard unsupplemented LB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">E. coli OP50</td>
			<td style="width:255px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:255px;">OP50</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Click-iT EdU Alexa Fluor 488 Imaging Kit</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">C10337</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5-Ethynyl-2&#8242;-deoxyuridine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">900584-50MG</td>
			<td style="width:255px;">or use EdU provided in kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glucose</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">D9434-500G</td>
			<td style="width:255px;">D-(+)-Dextrose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thiamine (Vitamin B1)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T4625-5G</td>
			<td style="width:255px;">Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Thymidine</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">T1895-1G</td>
			<td style="width:255px;">BioReagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">M1880-1KG</td>
			<td style="width:255px;">MgSO4, Reagent Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous</td>
			<td style="width:255px;">Fisher</td>
			<td style="width:255px;">BP332-500G</td>
			<td style="width:255px;">Na2HPO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Potassium Phosphate, monobasic</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P5379-500G</td>
			<td style="width:255px;">KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">A4514-500G</td>
			<td style="width:255px;">NH4Cl, Reagent Plus</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Bacteriological Agar</td>
			<td style="width:255px;">US Biological</td>
			<td style="width:255px;">C13071058</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">C3881-500G</td>
			<td style="width:255px;">CaCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">LB Broth (Miller)</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L3522-1KG</td>
			<td style="width:255px;">Used at 25g/L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Levamisole</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">L9756-5G</td>
			<td style="width:255px;">0.241g/10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:255px;">Calbiochem Omnipur</td>
			<td style="width:255px;">6506</td>
			<td style="width:255px;">homemade PBS works just as well</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tween-20</td>
			<td style="width:255px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">P1379-500ML</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">16% Paraformaldehyde, EM-grade ampules</td>
			<td style="width:255px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:255px;">15710</td>
			<td style="width:255px;">10ml ampules</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">100% methanol</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">A454-1L</td>
			<td style="width:255px;">Gold-label methanol is critical for proper morphology with certain antibodies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Goat Serum</td>
			<td style="width:255px;">Gibco</td>
			<td style="width:255px;">16210-072</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1671330</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">rabbit-anti-WAPL-1</td>
			<td style="width:255px;">Novus biologicals</td>
			<td style="width:255px;">49300002</td>
			<td style="width:255px;">Lot G3048-179A02, used at 1:2000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">mouse-anti-pH3 clone 3H10</td>
			<td style="width:255px;">Millipore</td>
			<td style="width:255px;">05-806</td>
			<td style="width:255px;">Lot#2680533, used at 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-rabbit IgG-conjugated Alexa Fluor 594</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A11012</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1256147, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">goat-anti-mouse IgG-conjugated Alexa Fluor 647</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A21236</td>
			<td style="width:255px;">Lot 1511347, used at 1:400</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:255px;">Vectashield antifade mounting medium containing 4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole Dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td style="width:255px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:255px;">H-1200</td>
			<td style="width:255px;">mounting medium without DAPI can be used instead, following a separate DAPI incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">nail polish</td>
			<td style="width:255px;">Wet n Wild</td>
			<td style="width:255px;">DTC450B</td>
			<td style="width:255px;">any clear nail polish should work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">S-medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">M9 buffer</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">M9 agar</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">same recipe as M9 buffer, but add 1.7% agar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Nematode Growth Medium</td>
			<td style="width:255px;">various</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">see wormbook.org for protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">dissecting watch glass</td>
			<td style="width:255px;">Carolina Biological</td>
			<td style="width:255px;">42300</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Parafilm laboratory film</td>
			<td style="width:255px;">Pechiney Plastic Packaging</td>
			<td style="width:255px;">PM-996</td>
			<td style="width:255px;">4 inch wide laboratory film</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">petri dishes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">60 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Long glass Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:255px;">MidSci Avant</td>
			<td style="width:255px;">2926</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tips</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Serological pipettes</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">500 mL Erlenmyer flask</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Aluminum foil</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">25G 5/8&#8221; needles</td>
			<td style="width:255px;">BD PrecisionGlide&#160;</td>
			<td style="width:255px;">305122</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">5ml glass centrifuge tube</td>
			<td style="width:255px;">Pyrex&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Borosilicate glass tubes 1ml</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">glass slides</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">no 1 coverslips 22 x 40 mm</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">no 1.5 may work, also</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">37 &#176;C Shaker incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tabletop Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Clinical Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;">IEC</td>
			<td style="width:255px;">428</td>
			<td style="width:255px;">with 6 swinging bucket rotor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Mini Centrifuge</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">20 &#176;C incubator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:255px;">4 &#176;C refrigerator</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">-20 &#176;C freezer</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:255px;">Observer Z1 microscope</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Plan Apo 63X 1.4 oil-immersion objective lens</td>
			<td style="width:255px;">Zeiss</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:255px;">Ultraview Vox spinning disc confocal system</td>
			<td style="width:255px;">PerkinElmer&#160;</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:255px;">Nikon spinning disc confocal system works very well, also, as described here: http://wucci.wustl.edu/Facilities/Light-Microscopy&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell cycle analysis in the c. elegans germline with the thymidine analog edu

Ökaryotlarda hücre döngüsü analizi sık kromozom morfolojisi, ifade ve/veya hücre döngüsünün çeşitli aşamalarında veya nükleozit analogları ve eklenmesi için gereken gene ürünlerin yerelleştirme kullanır. S-aşamasında DNA polimerazlar timidin analogları EdU veya BrdU gibi kromozom DNA analizi için hücreleri işaretleme, dahil. C. elegans, nükleozit analog EdU için solucanlar sırasında düzenli kültür besleniyor ve immünfloresan teknikleri ile uyumludur. C. elegans germline, şeffaf, genetik olarak facile, çünkü bu ve segregasyonun profaz ve hücresel farklılaşma/gametogenesis ortaya çıkan yollar, kök hücre, mayoz ve hücre döngüsü sinyal bir güçlü modeli etütler sistemdir bir Doğrusal derleme gibi moda. Bu özellikler EdU mitotically Bisiklete binme hücreleri ve germline geliştirme dinamik özellikleri çalışma için harika bir araç olun. Bu iletişim kuralı başarıyla EdU bakteri hazırlamak, onları vahşi-türü için yem açıklar C. elegans Hünsa, hermafrodit erbezi incelemek, EdU birleşme için içine DNA, leke leke çeşitli hücre döngüsü algılamak için antikorlar ile ve gelişimsel işaretleri, erbezi görüntü ve sonuçları çözümleyebilirsiniz. Protokol yöntemi ve S-faz Dizin, M-faz Dizin, G2 süresi, hücre döngüsü süresi, segregasyonun giriş oranı ve segregasyonun profaz progresyon oranı ölçümü için analysis değişimler açıklar. Bu yöntem hücre döngüsü veya hücre tarihinin diğer dokulara, aşamaları, genetik arka planlar ve fizyolojik şartlarda çalışmaya adapte edilebilir.

DNA sentezi EdU dahil etmek için gerekli olduğundan, bir EdU etiketli çekirdeği S fazlı EdU-etiketleme zaman penceresi sırasında yapıldı sonucuna varabiliriz. Bir bakteri çekirdeği S-faz olarak etiketlenmiş diseksiyon anda EdU ile bir 30 dk beslenme içinde bu etiketle çekirdeklerin yorumlayabilir. Deney besleme bir artık sürekli EdU içinde etiket çekirdeği erken zaman penceresinde ve sol S fazlı beri etiketli veya EdU zaman penceresi geç parçası olarak etiketlenmiş...

Watch this Scientific Journal Video about Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU at JoVE.com

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Bir görüntüleme tabanlı yöntemi anlatılan S fazlı tanımlamak ve timidin kullanarak C. elegans hermafrodit germline hücre döngüsü dinamiklerini analiz etmek için kullanılabilir analog EdU. Bu yöntem yok transgenes gerektirir ve immünfloresan boyama ile uyumludur.

C. elegans Germline timidin Analog EdU ile hücre döngüsü analizi

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases ...

Bu yöntem C.elegans hücre döngüsü ve germ hattı kök hücre popülasyon dinamikleri hakkında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları transgen gerektirmeyen, immünoresan boyama ile uyumlu olması ve birçok farklı koşulda hücreleri incelemek üzere modifiye edilebilmektedir. Bu yöntemin Scheda laboratuvarında kullanıldığını ilk gördüğümde çok heyecanlandım.Bu yöntem C.elegans hücre döngüsüne ışık sağlasa da, yaşlanma, beslenme veya değiştirilmiş genotipler hakkında daha geniş sorulara da uygulanabilir. Genellikle bu yönteme yeni laboratuvarlar ilk deyim veya C.elegans hematoksilin boyama ile mücadele edebilir. M9 tampon 100 mililitre 100 mililitre ve taze yetiştirilen mg 1693 E.coli kültürü dört mililitre uygun takviyeleri 10 milimolar EdU 200 mikrolitre eklemek için steril tekniği kullanarak başlayın.İdyodiscious yapma EdU ve timidin takviyesi arasında hassas bir denge gerektirir. Timidin miktarı E coli'nin iyi büyümesi için yeterli olduğu için, EdU miktarı tesviyeye karşı sağlam kalkan için yeterli olmalıdır. 37 santigrat derece ve 200 RPM en fazla 24 saat sonra, santrifüj için iki ila dört steril 50 mililitre konik tüpler arasında kültür bölmek için steril tekniği kullanın.Pellatin dört mililitre taze M9 tamponu yeniden askıya alın ve aynı pipeti kullanarak e Coli MG1693 solüsyonunu tek tek oda sıcaklığının merkezine 60 mililitre M9 A koruma petri kaplarına doğru etiketlenmiş Yaklaşık 8 damla EdU uygulayın. EdU etiketli bakterileri nematodlara beslemek için, C.Elegans'ı nematod büyüme ortamı ndan 1,5 mililitrelik bir tüpe yıkamak için taze PBS kullanın ve hayvanların yerçekimine göre kısa bir süre yerleşmelerine izin verin. Hayvanları bir mililitre PBS ile bir ila iki kez yıkayın ve nematodları Küçük bir PBS damlasında EdU çimlerinin merkezine aktarmak için cam pasteur pipetkullanın.Sıvının emilmesi için birkaç dakika bekleyin ve deneysel protokole göre 20 santigrat derecede en az 30 dakika kültür kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, EdU kültür plakasından solucanları cam bir kesme kabına atmak için iki mililitre PBS kullanın. Diseksiyon ve daha önce açıklandığı gibi nematod gondadların fiksasyonu sonra, pbs ile küçük bir mililitre borosilikat cam tüp ve uzun bir cam pastör pipet durulayın 0.1% ara 20 ve PBS tween küçük bir miktar tüp sabit gonadlar aktarmak için pipet kullanın.Santrifüj ile gonaads toplamak ve gonad pelet rahatsız etmeden mümkün olduğunca supernatent kaldırmak için uzun, çizilmiş cam mera pipet kullanın. EdU algılama için, kinlere 100 mikroLitre edu kokteyl ekleyin ve oda sıcaklığında 30 ila 60 dakikalık bir kuluçka için laboratuvar filmi ile tüp kapağı. Kuluçka sonunda, 100 mikroLitre reaksiyon durulama tamponu ve dört kez pbs arabelleğe bir mililitre ile gondanları bir kez yıkayın.Son yıkamadan sonra, numuneye DAPI ile takviye edilmiş 25 mikroLitre anti-fade montaj ortamı ekleyin. Orta gonadlar üzerinde yerleşme iken, standart bir cam mikroskop slayt üzerine büyük bir% 2.5 agarose ped yerleştirin. Sonra ikinci bir slayt ile düzleştirmek.Daha sonra, uzun bir cam pastör pipet kullanın ve parçaya gonadlar aktarırken örnek kaybını en aza indirmek için pipet dar ucunda sıvı ve gonads tüm tutun. Bir kürdan yapıştırılmış bir kirpik kullanarak, agarose ped üzerinde gonaddağıtmak ve herhangi bir toz parçacıkları kaldırın. Sonra yavaş yavaş gonadlar üzerine dikdörtgen cam kapak kayma indirin, hava kabarcıkları önlemek için özen, ve bir laboratuvar dokusu ile herhangi bir fazla çözelti kaldırarak.Hücreleri üç boyutta saymak güvenilir bir şekilde pratik gerektirir. Fiji'nin hücre sayacı eklentisi ve kopyaları kaldırmak için hücreleri işaretler gibi bir komut dosyası nın kullanılması, sayımların tekrarlanabilir hale alınmasına yardımcı olur. Kapak fişinin bir gecede yerleşmesine izin verdikten sonra, her çekirdeği elle saymak için hücre sayacı eklentisini ve Fiji'yi kullanın, her çekirdeği fosfohistonin varlığına veya yokluğuna göre etiketleyerek üç EdU veya pregenetor bölgesi hücre etiketlemesi.EdU sinyali DAPI sinyali ile eş-lokalize. Bazı çekirdeklerde EdU sinyali tüm kromozomları kapsarken, diğer çekirdeklerde EdU sinyali, s-fazın geç saatlerinde çoğalan X kromozomu üzerinde bir ila iki parlak punkta yada yerelleşir. Başarılı bir 30 dakikalık etiketlemeden EdU sinyali pregenetor bölgesindeki çekirdeklerin yaklaşık yarısına lokalize olur.Teknik yabani tip genç yetişkin hayvanlarda sürekli çalışır iken, 5 günlük hermafroditlerin önemli bir kısmı 30 dakikalık EdU darbe etiketlemek için başarısız olur. G2'nin süresi, M fazında edu pozitif olan çekirdek yüzdesi analiz edilerek, ortanca ve maksimum G2 süresinin hesaplanmasına olanak sağlar. G2 ve G1'in süresi, edu pozitif olan pregenetor bölge çekirdeklerinin yüzdesi ile tahmin edilebilir ve bu da birleştirilmiş fazların maksimum süresinin hesaplanmasına olanak sağlar. Bu yordamı denerken, deneysel değişkenliği en aza indirmek için aynı edu yemeklerini kullanmayı unutmamak önemlidir.Bu prosedürü takiben, ek antikorlar ile boyama gibi diğer yöntemler yapılabilir veya hücre döngüsü, hücre kaderi veya sinyal yolları hakkında ek sorulara cevap. Nükleiciit analogları ve parafermeldahit ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve nitrol eldiven takmak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Nematod kullanma Germline Kimyasal zehirlilik Kapsamlı Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

Embriyonik Meckel Kıkırdak içinde Zebrabow klonal Hücre Analizi aracılığıyla Kondrosit interkalasyonu ve Yön Yayılması Görselleştirme

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Evans Blue Dye ile Zebra balığı Larva İskelet Kası Bütünlüğü Analizi

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Aktif ERK Mekansal ve Zamansal Analizi<em&gt; C. elegans</em&gt; Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analy

C. elegans bağırsak olarak bir Model hücreler arası Lumen morfogenez ve In Vivo polarize membran Biyogenez tek hücre düzeyinde için: etiketleme antikor boyama, işlev RNAi kaybı çözümleme ve görüntüleme

Multicellular tubes, fundamental units of all internal organs, are composed of polarized epithelial or endothelial cells, with apical membranes lining the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Uygulama için yeniden programlamak Germ hücreleri için C. elegans nöronlarda RNAi ve transkripsiyon faktörü ifade ısı şok bağlı

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Hücre toplama Trans Drosophila çentikle bağlama değerlendirmek için deneyleri-ligandlar ve onun inhibisyon CIStarafından-ligandlar

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Çekirdeklerin dağıtım, proteinler ve sitoiskeleti çalışmaya Caenorhabditis elegans Germline sayısal analizi

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

Kütle sitometrisi ile hücresel protein Ifadesinin hücre döngüsü spesifik analizi için Mouse cilt keratinositlerin yalıtım ve boyama

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...