Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

Forfatterne takker T. Sato, M. Kanbayashi og S. Kouyama for deres tekniske bistand. Dette arbejde blev støttet af JSP'ER KAKENHI Grant numre JP15K14322 og JP16H06143, Takeda Science Foundation, Uehara Memorial Foundation, og den kollaborative forskning projekt af Niigata Universitet Brain Research Institute 2017-2923 (H.M.) og KAKENHI JP16K14559, JP15H01454, og JP15H04263 og Grant-i videnskabelig forskning på Innovation områder "Dynamisk regulering af hjernefunktion af skrot & Build System" (JP16H06459) fra MEXT (ti).

Forsøgene skal udføres i overensstemmelse med retningslinjerne dyrevelfærd ordineret af den eksperimentatoren institution.
1. forberedelse af hvalpe til billedbehandling
Bemærk: Hvalpe med tyndt mærket kortikale neuroner kan opnås ved i utero elektroporation (IUE) af Supernova vektorer5,6. Supernova system består af de følgende to vektorer: TRE-Cre og CAG-loxP-STOP-loxP-gen X-ires-tTA-WPRE. I ...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

Kritiske trin i protokollen og fejlfinding:
Den mest kritiske trin i protokollen er fjernelse af kraniet (protokol trin 3.2). Ved indsættelse klæber barberblad ofte til dura, forårsager dural blødninger og skader på hjernen. Dette kan undgås ved at tilføje en drop på cortex buffer på kraniet og fjerner kraniet i cortex buffer.
Blødning fra dura og huden efter kranie vindue forberedelse fører til okklusion af vinduet. At undgå dette, vævet klæbende og dent...

Den præcise ledninger af neuronal kredsløb i hjernebarken er afgørende for højere hjernefunktioner herunder perception, kognition, og indlæring og hukommelse. Kortikale kredsløb er dynamisk raffineret under postnatal udvikling. Studier har undersøgt processen af kortikale kredsløb dannelse ved hjælp af histologiske og in vitro- kultur analyser. Men dynamikken i kredsløb dannelse i levende pattedyr er forblevet det meste uudforsket.
To-foton mikroskopi har været meget anvendt i vivo -analyser af neuronal kredsløb i voksen mus hjernen1,2. Men på grund af tekniske udfordringer, kun et begrænset antal studier har behandlet neuronal kredsløb dannelse i nyfødte mus. For eksempel udførte Carrillo et al. den time-lapse billeddannelse af klatring fibre i lillehjernen i den anden postnatal uge3. Portera-Cailliau et al. rapporteret billeddannelse af axoner i kortikale lag 1 i den første postnatal uge4. I den foreliggende undersøgelse opsummere vi en protokol til iagttagelse af lag 4 kortikale neuroner og deres dendritter i nyfødte mus. Resultater, der opnås ved anvendelse af denne protokol, som omfatter to metoder, der rapporteres i vores seneste publikation5. Først bruger vi Supernova vektor system5,6 for mærkning individuelle neuroner i hjernen, neonatal. I ordningen for Supernova fluorescerende proteiner bruges til neuronal mærkning er udskiftelige og mærket celle-specifikke gen knockdown og redigering/knockout analyser er også muligt. For det andet, vi beskrive en kirurgisk procedure for kraniel vindue forberedelse i skrøbelige neonatal mus. Sammen, tillade disse metodologier i vivo observation af individuelle neuroner i neonatal hjerner.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

To-foton imaging er et kraftfuldt værktøj i vivo analyse af neuronal kredsløb i hjernen, pattedyr. Dog findes et begrænset antal i vivo billeddannelse metoder for behandlingen af hjernevæv af levende nyfødte pattedyr. Heri opsummere vi en protokol for imaging individuelle kortikale neuroner i levende neonatal mus. Denne protokol omfatter de følgende to metoder: (1) Supernova system for sparsom og lyse mærkning af kortikale neuroner i udviklingslandene hjernen, og (2) en kirurgisk procedure for skrøbelige neonatal kraniet. Denne protokol giver mulighed for observation af tidsmæssige ændringer af individuelle kortikale neurites neonatal etaper med en høj signal-støj-forhold. Mærket celle-specifik genhæmning og knockout kan også opnås ved at kombinere Supernova med RNA-interferens og CRISPR/Cas9 gen redigering systemer. Denne protokol kan således bruges til at analysere den udviklingsmæssige dynamics af kortikale neuroner, molekylære mekanismer, der styrer neuronal dynamics, og ændringer i neuronal dynamics i sygdomsmodeller.

Tal 2D - 2F Vis repræsentative resultater af to-foton time-lapse billeddannelse af lag 4 kortikale neuroner ved hjælp af denne protokol. Med henblik på analyse, skal du vælge neuroner med klare dendritiske morfologi i hele de billeddiagnostiske perioder. Vi analyserede afbildet neuroner ved hjælp af morfologisk analyse software dendritiske morfologi. Repræsentative dendritiske morfologi genopbygning er vist i figur 2F. ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Vi præsenterer en i vivo to-foton imaging protokol for imaging hjernebarken af neonatal mus. Denne metode er egnet til at analysere den udviklingsmæssige dynamics af kortikale neuroner, de molekylære mekanismer, der styrer neuronal dynamik og ændringer i neuronal dynamics i sygdomsmodeller.

In Vivo To-foton billeddannelse af kortikale neuroner i Neonatal mus

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Denne metode kan bidrage til at besvare centrale spørgsmål i neurovidenskab, især dem, der er relateret til neuron socket dannelse. Den største fordel ved denne teknik er, at forskere kan analysere de morfologiske ændringer af individuelle neuroner i levende neonatal mus. Begynd med en bedøvet postnatal dag fem hvalp og fortsætte kun i mangel af en reaktion på halen knivspids test.Først sterilisere hovedbunden ved at tørre det med 70% ethanol. Brug derefter saks steriliseret med 70% ethanol til at fjerne ca 20 kvadrat millimeter af huden, der dækker kraniet. Dernæst skal du bruge sterile kraftgrene og en ren vatpind dyppet i cortex buffer, for at fjerne fascia af kraniet.Brug en læssetip til at påføre vævsklæbemidlet på den indsævrede hudoverflade for at stoppe blødningen og samtidig undgå det område, der skal afbildes. Placer hvalpen på en anden varmepude, sat til 37 grader Celsius, og lad den komme sig efter anæstesi. Vent ca. 30 minutter, indtil vævslimnen er tørret og størknet.Når vævslimnen er tørret, skal du begynde kranievinduets forberedelse på den re-bedøvede mus. Påfør en dråbe cortex buffer på kraniet, derefter bruge en steril barberblad til omhyggeligt at åbne en en millimeter diameter område af kraniet, forlader dura intakt. Påfør cortex buffer for at holde hjernens overflade fugtig.Brug et lille stykke gelatine svamp dyppet i cortex buffer til at stoppe enhver blødning. Brug et frisk stykke til at komprimere den ene side af kraniotomien og dræne enhver buffer og blod fra duraloverfladen uden at røre duraen. Dette er det mest kritiske skridt til at forberede et klart vindue.Duraen skal være ubeskadiget, og børsten skal fjernes fra den eksponerede dura. Dernæst skal du bruge en pipette spids til at anvende et tyndt lag af en procent lav smeltende agarose, opløst i cortex buffer. Påfør en rund, tre millimeter glasdæksel slip på agarose gel lag.Fjern alle bobler mellem dækslet slip og agarose gel lag ved at hælde over agarose gel mellem dem. Brug en pincet til at fjerne den overskydende gel, stikker ud fra under dækslet slip. Bland cementpulver og cementvæsken.Brug en pipettespids til at påføre blandingen på kraniet, før det bliver størknet. Derefter vedhæfte en skræddersyet titanium bar til kranieknoglen ved hjælp af dental cement. Juster titanium bar, og dækslet slip parallelt for nemt at tage billeder.Dæk det udsatte kranium med tandcement. Derefter subkutanely injicere en smertestillende. Placer hvalpen i et genvindingsbur på en 37 grader celsius varmepude i en time, indtil tandcementet er størknet.For at begynde billeddannelse, først indstille to-foton laser bølgelængde. Til RFP-excitation skal du bruge en bølgelængde på 1000 nanometer. Tør overfladen af dækslet slip med 70% ethanol.Fastgør bedøvet hvalp til titanium plade på billeddannelse fase, ved hjælp af titanium bar. Brug goniometer fase, at justere hovedet, således at dækslet er parallelt med den objektive linse. Opretholde kropstemperaturen af hvalpen under billeddannelse ved hjælp af en varmepude indstillet til 37 grader Celsius og reducere isofluran koncentration til 0,7% til 1%Placer billeddannelse fase under 20x objektivet linse af de to foton mikroskop.Påfør en dråbe vand på dækslet slip. Indstil softwaren til at erhverve Z-stack billeder med 1,4 mikron intervaller. For lag fire neuron billeddannelse, indstille Z bredde til mellem 150 og 300 mikron til at billedet hele dendritiske morfologi.Brug langsom scanning og gennemsnit for at få klare billeder, der viser neuronal morfologi. Det tager normalt mere end 20 minutter at erhverve hele dendritiske morfologi. Dette billede viser en repræsentativ Z-stack billede af laget fire kortikale neuroner af P5 hvalp.Pilen angiver den neuron, der skal analyseres. Neuroner med sløret dendritter bør fjernes fra analysen. Dette billede viser en højere forstørrelse billede af den angivne neuron i det foregående billede.Blå pilespidser angiver dendritiske spidser, der trækkes tilbage næste gang, og de små hvide pilespidser angiver axonen for en tilstødende celle. Efter 4,5 timer trækkes de dendritiske spidser med blå pilespidser tilbage, og de dendritiske spidser med gule pilespidser er aflange. En repræsentativ dendritisk morfologi rekonstruktion er vist her, neuroner viser afbrudt dendritter som ses her, bør udelukkes fra analyser.Mens du forsøger denne procedure, er det vigtigt at holde dura intakt, under processen. Ved hjælp af denne procedure, andre metoder som i fremdrivning imaging kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål i forbindelse med neuron aktivitetsmønster i neonatal hjerne.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo imaging af Mouse Spinal Cord ved hjælp af to-foton mikroskopi

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In vivo to-foton billedbehandling af oplevelsesbaseret afhængige molekylære ændringer i kortikal neuroner

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo to-foton mikroskopi af Single nerveender i hud

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

To-foton<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging af dendritiske spidser i Mouse Cortex Ved hjælp af en tyndere-kranium Forberedelse

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

To-foton Imaging for Cellulær Dynamics i Mouse Spinal Cord

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Samtidig To-foton<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging af synaptisk indgange og Postsynaptiske Mål i Mouse retrospenialis Cortex

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

Kvantificering af Filamentøs actin (F-actin) puncta i Rat kortikale neuroner

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

To-foton Calcium Imaging i Neuronal dendritter i hjernen skiver

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualisering af proteinkinase en aktivitet i hoved-fast opfører mus ved hjælp in vivo to-foton fluorescens levetid Imaging mikroskopi

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...