Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

המחברים תודה סאטו ט, מ Kanbayashi ו- Kouyama ס' לסיוע טכני שלהם. עבודה זו נתמכה על- ידי JSPS KAKENHI גרנט מספרים JP15K14322, JP16H06143, קרן המדע טקדה, קרן ההנצחה Uehara ו את שיתופי מחקר פרויקט של נייגאטה אוניברסיטת המוח מחקר מכון 2017-2923 (H.M.) KAKENHI JP16K14559, JP15H01454, ו JP15H04263, במענק מחקר מדעי בתחומים חדשנות "דינמי ויסות תפקוד המוח על ידי גרוטאות & לבנות מערכת" (JP16H06459) מ- MEXT (רכב מורשה).

ניסויים צריכה להתבצע בהתאם להנחיות רווחת שקבע המוסד של הנסיין.
1. הכנת הגורים עבור הדמיה
הערה: הגורים עם נוירונים בקליפת המוח בדלילות שכותרתו ניתן להשיג על ידי אלקטרופורציה בתוך הרחם (הצמיגים) של סופרנובה-וקטורים-5,-6. מערכת ?...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

שלבים קריטיים בפרוטוקול לפתרון בעיות:
השלב הקריטי ביותר של הפרוטוקול הינו של הגולגולת (פרוטוקול שלב 3.2). בשעת ההוספה, גילוח לאנאפוליס לעיתים קרובות השכבה הקשה של המוח, גורם לדימום. קרום נזק למוח. זה ניתן למנוע על-ידי הוספת טיפה של קליפת מאגר על הגולגולת והסרה הגולגולת במאגר בקל...

החיווט מדויק של מעגלים עצביים בקליפת חיוני עבור תפקודי המוח כולל תפיסה, קוגניציה, למידה וזיכרון. מעגלים בקליפת המוח הם מעודן באופן דינמי במהלך הפיתוח כמחנכת. מחקרים חקרו את תהליך השימוש היווצרות מעגל קורטיקלית היסטולוגית וניתוחים in vitro לקשרי תרבות. עם זאת, הדינמיקה של היווצרות מעגל ביונקים החיים נשאר בעיקר נחקרו.
מיקרוסקופ שני הפוטונים כבר בשימוש נרחב עבור הניתוחים ויוו של מעגלים עצביים העכבר למבוגרים המוח1,2. עם זאת, בשל האתגרים הטכניים, רק מספר מצומצם של מחקרים עסקו מעגלים עצביים היווצרות בעכברים היילוד. לדוגמה, קאריו. ואח לביצוע ההדמיה בצילום מואץ של טיפוס סיבי המוח הקטן של שבוע לאחר הלידה השניה3. . Portera-Cailliau et al. דיווח על ההדמיה של אקסונים בשכבת קורטיקלית 1 שבוע לאחר הלידה הראשונה4. במחקר הנוכחי, אנו מסכמים את פרוטוקול להשגחה של נוירונים בקליפת המוח של שכבה 4, שלהם דנדריטים בעכברים היילוד. התוצאות המתקבלות על-ידי החלת פרוטוקול זה, הכולל שתי מתודולוגיות, מדווחים הפרסום האחרונה שלנו5. ראשית, אנו משתמשים5,6 מערכת וקטור סופרנובה עבור תיוג נוירונים בודדים במוח neonatal. במערכת סופרנובה, החלבונים פלורסנט משמש תיוג עצביים גנים ספציפיים תא להחלפה ומתויגים הינם ניתוחים עריכה/נוק-אאוט הינם אפשריים. שנית, אנו מתארים הליך כירורגי להכנה חלון הגולגולת בעכברים neonatal שביר. יחד, מתודולוגיות אלה מאפשרים התצפית ויוו של נוירונים בודדים במוח neonatal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

שני הפוטונים הדמיה הוא כלי רב עוצמה לניתוח ויוו של מעגלים עצביים במוח של יונקים. עם זאת, מספר מוגבל של ויוו בשיטות הדמיה קיימים לבחינת על רקמת המוח של יונקים היילוד בשידור חי. בזאת אנו מסכמים את פרוטוקול הדמיה נוירונים בודדים בקליפת המוח בעכברים neonatal חי. פרוטוקול זה כולל את מתודולוגיות שני הבאים: (1) מערכת סופרנובה דלילים ובהירים תיוג של נוירונים בקליפת המוח המוח המתפתח, (2) הליך כירורגי על הגולגולת neonatal שביר. פרוטוקול זה מאפשר התבוננות שינויים הטמפורלי של הפרט neurites קורטיקלית בשלבים neonatal עם יחס אות לרעש גבוה. גם ניתן להשיג על ידי שילוב של הסופרנובה עם הפרעה RNA ו CRISPR/Cas9 ג'ין עריכה מערכות שכותרתו תא ספציפי ג'ין להחרשת, נוק אאוט. פרוטוקול זה, לכן, ניתן להשתמש לניתוח הדינמיקות התפתחותית של נוירונים בקליפת המוח, המנגנונים המולקולריים השולטים על דינמיקה עצביים, וכן שינויים עצביים dynamics במודלים של המחלה.

דמויות 2D - 2F הצג תוצאות נציג שני הפוטונים הדמיה בצילום מואץ של שכבה 4 נוירונים בקליפת המוח משתמש בפרוטוקול הנוכחי. לצורך ניתוח, בחר נוירונים עם מורפולוגיה דנדריטים ברור לאורך כל התקופות הדמיה. ניתחנו את המורפולוגיה דנדריטים של נוירונים הדמיה באמצעות תו?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

נציג של ויוו שני הפוטונים הדמיה פרוטוקול הדמיה ההכרויות neonatal עכברים. שיטה זו מתאימה לניתוח הדינמיקות התפתחותית של נוירונים בקליפת המוח, המנגנונים המולקולריים הדינמיקות עצביים ועל שינויים עצביים dynamics במודלים של המחלה.

אין ויוו שני הפוטונים הדמיה של נוירונים בקליפת המוח בעכברים Neonatal

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח, במיוחד אלה הקשורים היווצרות שקע נוירון. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שחוקרים יכולים לנתח את השינויים המורפולוגיים של נוירונים בודדים בעכברים יילודים חיים. התחל עם יום הרדמה לאחר הלידה חמישה גור ולהמשיך רק בהיעדר תגובה למבחן צביטה הזנב.ראשית, לעקר את הקרקפת על ידי ניגוב אותו עם 70% אתנול. לאחר מכן, השתמש מספריים מעוכל עם 70% אתנול כדי להסיר כ 20 מילימטרים רבועים של העור מכסה את הגולגולת. לאחר מכן, השתמש מטליות סטריליות ספוג כותנה נקייה ספוגה חיץ קליפת המוח, כדי להסיר את fascia של הגולגולת.השתמש בקצה טעינה כדי להחיל דבק רקמות על משטח העור חתוך כדי לעצור את הדימום תוך הימנעות האזור להיות בתמונה. מניחים את הגור על משטח חימום אחר, מוגדר 37 מעלות צלזיוס, ולאפשר לו להתאושש הרדמה. המתן כ -30 דקות עד דבק הרקמה התייבש והתמצה.לאחר דבק הרקמה התייבש, להתחיל את הכנת חלון הגולגולת על העכבר הרדמה מחדש. החל טיפה אחת של חיץ קליפת המוח על הגולגולת, ולאחר מכן להשתמש בסכין גילוח סטרילי כדי לפתוח בזהירות אזור בקוטר מילימטר אחד של הגולגולת, משאיר את דורה שלם. החל חיץ קליפת המוח כדי לשמור על פני השטח של המוח לחים.השתמש חתיכה קטנה של ספוג ג'לטין ספוג חיץ קליפת המוח כדי לעצור כל דימום. השתמש חתיכה טרייה כדי לדחוס צד אחד של craniotomy ולנקז כל חיץ ודם מפני השטח dural מבלי לגעת דורה. זהו השלב הקריטי ביותר להכנת חלון נקי.יש לא ניזוק את הדורא ויש להסיר את המברשת מהדורה החשופה. לאחר מכן, השתמשו בקצה פיפטה כדי להחיל שכבה דקה של אגרוז נמס נמוך באחוז אחד, המומס במאגר קליפת המוח. החל עגול, שלושה מילימטר זכוכית לכסות להחליק על שכבת ג'ל אגרוז.הסר את כל הבועות בין החלקת הכיסוי לבין שכבת הג'ל אגרוז על ידי שפיכת עודף של ג'ל אגרוז ביניהם. השתמש פינצטה כדי להסיר את הג'ל עודף, בולט מתחת לתנוחת הכיסוי. מערבבים אבקת מלט ונוזל הבטון.השתמש קצה פיפטה כדי להחיל את התערובת על הגולגולת לפני שהוא הופך להיות מוצק. לאחר מכן, לצרף בר טיטניום בהתאמה אישית לעצם הגולגולת באמצעות מלט שיניים. יישר את סרגל הטיטניום, ואת החלקת המכסה במקביל כדי ללכוד בקלות תמונות.כסו את הגולגולת החשופה במלט דנטלי. לאחר מכן, תת עורית להזריק משכך כאבים. מניחים את הגור בכלוב התאוששות על כרית חום של 37 מעלות צלזיוס במשך שעה עד שהמלט הדנטלי מתמצג.כדי להתחיל בהדמיה, הגדר תחילה את אורך הגל של לייזר שני פוטון. עבור ביסוס RFP, השתמש באורך גל של 1000 ננומטר. לנגב את פני השטח של החלקת המכסה עם 70% אתנול.חבר את הגור הרדמה לצלחת טיטניום על שלב ההדמיה, באמצעות בר טיטניום. השתמש בשלב goniometer, כדי להתאים את הראש, כך להחליק את הכיסוי מקביל לעדשה האובייקטיבית. שמור על טמפרטורת הגוף של הגור במהלך ההדמיה באמצעות כרית חימום להגדיר 37 מעלות צלזיוס ולהפחית את ריכוז האיזופלורן ל 0.7%-1% מקום שלב ההדמיה תחת עדשת המטרה 20x של שני מיקרוסקופ פוטון.יש למרוח טיפת מים אחת על פתק הכיסוי. הגדר את התוכנה כדי לרכוש תמונות מחסנית Z במרווחי זמן של 1.4 מיקרון. להדמיית נוירון שכבה 4, הגדר את רוחב Z בין 150 ל-300 מיקרון כדי לדמיין את כל המורפולוגיה הדנדריטית.השתמש בסריקה איטית וב ממוצע כדי לקבל תמונות ברורות המציגות את המורפולוגיה העצבית. בדרך כלל לוקח יותר מ -20 דקות לרכוש את כל המורפולוגיה דנדריטי. תמונה זו מציגה תמונה מייצגת של מחסנית Z של השכבה ארבעה נוירונים קליפת המוח של P5 גור.החץ מציין את הנוירון שיש לנתח. נוירונים עם דנדריטים מטושטשים יש להסיר מהניתוח. תמונה זו מציגה תמונת הגדלה גבוהה יותר של הנוירון שצוין בתמונה הקודמת.ראשי חץ כחולים מציינים עצות דנדריטיות שיסוגו בנקודת הזמן הבאה, וראשי החץ הלבנים הקטנים מציינים את האקסון של תא שכן. לאחר 4.5 שעות, הטיפים דנדריטי עם ראשי חץ כחולים נסוגים, ואת הטיפים דנדריטי עם ראשי חץ צהובים מוארכים. שחזור מורפולוגיה דנדריטי מייצג מוצג כאן, נוירונים המראים דנדריטים מנותקים כפי שניתן לראות כאן, יש להוציא מניתוחים.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לשמור על דורה שלם, במהלך התהליך. באמצעות הליך זה, שיטות אחרות כמו הדמיה הנעה יכול להתבצע כדי לענות על שאלות נוספות הקשורות דפוס פעילות נוירון במוח יילודים.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

הגולגולת דק חלון טכניקה כרונית דו פוטון ב-vivo הדמיה של microglia Murine של מודלים של Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

בתחום ההדמיה vivo של חוט השדרה בעזרת עכבר דו פוטון מיקרוסקופית

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In vivo שני פוטוני הדמיה של שינויים מולקולריים ניסיון תלוי בנוירונים בקליפת מוח

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

בVivo שני פוטונים מיקרוסקופית של קצות עצבים בודדים בעור

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

שני פוטונים<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של קוצים הדנדריטים בCortex העכבר באמצעות דלילה, גולגולת הכנה

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

הדמיה שני פוטונים של Dynamics הסלולרי בחוט השדרה העכבר

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

שני פוטונים סימולטני<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של תשומות Synaptic ויעדי Postsynaptic בקליפת עכבר Retrosplenial

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

כימות פילמנטיות אקטין (F- אקטין) puncta ב עכברוש נוירונים קליפתיים

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

שני הפוטונים סידן הדמיה של דנדריטים עצביים במוח פרוסות

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

ויזואליזציה של חלבון קינאז פעילות בראש-קבוע עכברים התנהגות באמצעות Vivo Two-פוטון מיקרוסקופ החיים הדמיה מיקרונטית

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...