Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
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著者は、佐藤、昌上林や s. 神山をその技術支援ありがちましょう。この作品は日本学術振興会科研費助成番号 JP15K14322 と JP16H06143、武田科学財団、上原記念財団の共同研究プロジェクトの新潟大学脳研究所 2017年-2923 (陛下) とサポートされています。科研費 JP16K14559、JP15H01454 と JP15H04263、イノベーション分野「スクラップ & ビルド システムによる脳機能の動的制御」研究助成金で (JP16H06459) (ti) は、文部科学省から。

実験は、実験者の機関が定める動物福祉指針に従って行わなければなりません。
1. 子犬のイメージングのための準備
注: まばらラベル皮質ニューロンと子犬は子宮に電気穿孔法 (IUE) による超新星ベクトル5,6の取得できます。次の 2 つのベクトルから成っている超新星システム: トレ Cre と CAG-loxP-停止-...

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	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

プロトコルで重要な手順とトラブルシューティングします。
プロトコルの最も重要なステップは、頭蓋骨 (プロトコル手順 3.2) の除去です。挿入、時にかみそりの刃は、しばしば硬膜、硬膜出血と脳に損傷を引き起こすに準拠します。これは、頭蓋骨に皮質バッファーのドロップを追加および皮質バッファーで頭蓋骨を削除して回避できます。
頭蓋ウ?...

大脳皮質の神経回路網の正確な配線は、知覚、認知、学習、記憶など、脳の高次機能に不可欠です。生後発達期大脳皮質回路が動的に洗練されました。研究は、組織による皮質回路形成のプロセスと文化の in vitro解析を検討しました。しかし、生きている哺乳類の回路形成のダイナミクスが未踏主が残った。
2 光子顕微鏡は、成体マウス脳1,2の神経回路網の体内の分析に広く使用されています。ただし、技術的な課題により研究の限られた数だけは新生仔マウスにおける神経回路形成を対処しています。たとえば、carrillo さんらは、登上線維第 2 生後週3で小脳のタイムラプス イメージングを実行されます。・ ポルテラ Cailliauらは、最初の生後週4の皮質層 1 の軸索のイメージングを報告しました。本研究では大脳皮質ニューロンの層 4 と新生マウスの樹状突起の観察のためのプロトコルをまとめたものです。2 つの方法が含まれています、このプロトコルを適用した結果は、私たちの最近の文書5で報告されます。まず、新生児の脳の個々 のニューロンを分類のため超新星ベクトル システム5,6を使用します。超新星における神経ラベルに使われる蛍光タンパク質が交換とラベル付きセル固有遺伝子ノックダウンと編集/ノックアウト解析も可能です。第二に、我々 は壊れやすい新生児マウス頭蓋ウィンドウ準備のため手術をについて説明します。一緒に、これらの方法論は、新生児脳で個々 のニューロンの生体内観察を許可します。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

2 光子イメージングは、哺乳類の脳の神経回路網の生体内解析のための強力なツールです。ただし、ライブの新生児の哺乳類の脳組織を調べるため生体内イメージング方法の限られた数が存在します。ここ生きている新生児マウスで個々 の皮質ニューロンをイメージングするためのプロトコルをまとめたものです。このプロトコルには、次の 2 つの方法が含まれています: (1) 疎と明るい脳の発達と (2) 壊れやすい新生児頭蓋手術で大脳皮質ニューロンの分類のための超新星システム。このプロトコルは、高い信号対雑音比と新生児の段階で個々 の皮質神経突起の経年変化の観察をできます。ラベル付きセル固有遺伝子サイレンシングとノックアウトは、RNA 干渉と編集システム CRISPR/Cas9 遺伝子と超新星を組み合わせることで実現できます。皮質ニューロン、神経ダイナミクスと疾患モデルのダイナミクスの変化を制御する分子メカニズムの発達のダイナミクスを分析するため、このプロトコルを使用したがって、ことができます。

図 2 D - 現在のプロトコルを使用してレイヤー 4 皮質ニューロンの 2 光子タイムラプス イメージングの2 階ショー代表の結果。、分析目的イメージングの期間を通して明確な樹枝状の形態を持つニューロンを選択します。形態素解析ソフトウェアを使用してイメージのニューロンの樹状突起の形態を分析しました。代表的な樹状突起の形態再?...

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In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

体内の 2 光子イメージング新生児マウスの大脳皮質をイメージングするためのプロトコルを提案します。このメソッドは、皮質ニューロン、神経ダイナミクスと疾患モデルのダイナミクスの変化を制御する分子メカニズムの発達のダイナミクスの分析に適しています。

生体内で新生仔マウスの大脳皮質ニューロンの 2 光子イメージング

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

この方法は、神経科学、特にニューロンソケット形成に関連する重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、研究者が生きている新生児マウスの個々のニューロンの形態学的変化を分析できることです。麻酔を受けた出生後5日目の子犬から始まり、尾のピンチテストに対する反応がない場合にのみ進みます。まず、頭皮を70%エタノールで拭いて滅菌します。その後、70%エタノールで殺菌したハサミを使用して、頭蓋骨を覆う皮膚の約20平方ミリメートルを除去する。次に、皮質緩衝液に浸した無菌鉗子と清潔な綿棒を使用して、頭蓋骨の筋膜を取り除く。画像化する領域を避けながら、切開された皮膚表面に組織接着剤を塗布し、出血を止めるために負荷チップを使用してください。別の加熱パッドに子犬を置き、摂氏37度に設定し、麻酔から回復させます。組織接着剤が乾燥し固まるまで約30分待ちます。組織接着剤が乾燥したら、再麻酔マウス上で頭蓋窓の調製を開始します。頭蓋骨に皮質バッファーの1滴を適用し、その後、慎重に頭蓋骨の直径1ミリメートルの領域を開くために滅菌カミソリブレードを使用して、デュラをそのまま残します。脳表面を湿らせた保つために皮質バッファーを適用します。.皮質バッファーに浸したゼラチンスポンジの小片を使用して、出血を止めます。新鮮な部分を使用して頭蓋骨切除術の片側を圧縮し、硬膜に触れることなく硬膜表面から任意のバッファーと血液を排出します。これは、ウィンドウをクリアする最も重要な手順です。硬膜は損傷を受けていない必要があり、ブラシは露出した硬膜から取り除く必要があります。次に、ピペットチップを使用して、皮質緩衝液に溶解した1%低融解アガロースの薄層を適用する。円形の3ミリメートルのガラスカバースリップをアガロースゲル層に塗布します。カバースリップとアガロースゲル層の間にアガロースゲルを過剰に注ぎ込んで、すべての気泡を取り除きます。ピンセットを使用して余分なゲルを取り除き、カバースリップの下から突き出します。セメントパウダーとセメント液を混ぜます。ピペットチップを使用して、固まる前に頭蓋骨に混合物を適用します。次に、歯科用セメントを使用して頭蓋骨にカスタムメイドのチタンバーを取り付けます。チタンバーを合わせ、カバースリップを平行にして画像を簡単にキャプチャします。露出した頭蓋骨を歯科用セメントで覆います。次いで、皮下鎮痛を注射する。歯セメントが固まるまで1時間、摂氏37度のヒートパッドの回復ケージに子犬を置きます。イメージングを開始するには、まず2光子レーザー波長を設定します。RFP励起には、1000ナノメートルの波長を使用してください。カバースリップの表面を70%エタノールで拭きます。麻酔付きの子犬を、チタンバーを使用して、イメージングステージのチタンプレートに取り付けます。ゴニオメータステージを使用して、カバースリップが対物レンズに平行になるようにヘッドを調整します。37°Cに設定した加熱パッドを使用してイメージング中に子犬の体温を維持し、イソフルラン濃度を0.7%から1%に下げ、2つの光子顕微鏡の20倍の対物レンズの下にイメージング段階を置きます。カバースリップに1滴の水を塗ります。Zスタックイメージを1.4ミクロン間隔で取得するようにソフトウェアを設定します。レイヤ 4 ニューロン イメージングの場合、Z 幅を 150 ~ 300 ミクロンに設定して樹状モルフォロジー全体をイメージします。低速スキャンと平均を使用して、神経形態を示す鮮明な画像を取得します。樹状形態全体を取得するのに通常20分以上かかります。この画像は、P5 pupの層4皮質ニューロンの代表的なZスタック画像を示しています。矢印は、分析するニューロンを示します。デデンドライトがぼやけたニューロンは、分析から削除する必要があります。この画像は、前の画像で示されたニューロンのより高い拡大画像を示しています。青い矢印は、次の時間ポイントで引き込まれる樹状の先端を示し、小さな白い矢印は隣接するセルの軸索を示します。4.5時間後、青い矢印を持つ樹状の先端が引き込まれ、黄色の矢印を持つ樹状の先端が細長くします。代表的な樹状形態再構成がここに示され、ここで見られる切断された樹状突起を示すニューロンは、分析から除外されるべきである。この手順を試みる間は、プロセス中に硬膜をそのままにしておくことが重要です。この手順を用いて、推進画像化のような他の方法は、新生児脳におけるニューロン活動パターンに関連する追加の質問に答えるために行うことができる。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

慢性二光子用薄型頭蓋骨のウィンドウテクニック in vivoで</em神経炎症のモデルのマウスミクログリアの>イメージング

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

二光子顕微鏡を用いたマウス脊髄の in vivoイメージングで

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

皮質ニューロンにおける経験依存性分子の変化の in vivo二光子イメージングにおける

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

皮膚における単一神経終末のin vivo二光子顕微鏡で

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

二光子<em&gt; in vivoで</em&gt;間引き頭蓋骨の準備を使用して、マウス皮質における樹状突起棘のイメージング

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

マウス脊髄における細胞ダイナミクスの二光子イメージング

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

同時2光子<em&gt;インビボ</emマウス脳梁膨大後部皮質におけるシナプス入力とシナプス後ターゲットの&gt;イメージング

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

ラット皮質ニューロンにおける繊維状アクチン（F-アクチン）涙点の定量化

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

脳スライスにおける神経樹状突起における 2 光子カルシウム イメージング

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

生体内での2光子蛍光寿命イメージング顕微鏡を用いて頭固定振る舞いマウスにおけるタンパク質キナーゼの活動を可視化する

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...