Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
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저자는 그들의 기술 지원에 대 한 T. 사토, M. Kanbayashi, S. Kouyama을 감사합니다. 이 작품 JSP KAKENHI 보조금 번호 JP15K14322 및 JP16H06143, 다케다 과학 재단, 우에하라 기념 재단, 그리고는 공동 연구 프로젝트의 니이가타 대학 뇌 연구 연구소 2017-2923 (흠)와 의해 지원 되었다 KAKENHI JP16K14559, JP15H01454, 및 JP15H04263 및 그랜트에 과학에 대 한 연구 혁신 분야 "스크랩 및 빌드 시스템에 의해 뇌 기능의 동적 규칙" (JP16H06459)에서 문 부 과학성 (릭).

실험은 실험의 기관에 의해 규정 된 동물 복지 지침에 따라 수행 되어야 한다.
1입니다. 영상에 대 한 강아지의 준비
참고: 새끼 띄엄띄엄 레이블이 대뇌 피 질의 뉴런으로 얻어질 수 있다 electroporation (IUE) utero에 의해 초신성 벡터5,6. 다음 두 벡터의 초신성 시스템 구성: 트 레-Cre, CAG-loxP-정지-loxP-유전자 X-ire...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

프로토콜의 중요 한 단계 문제 해결:
프로토콜의 가장 중요 한 단계는 두개골 (프로토콜 단계 3.2)의 제거 이다. 삽입 시 면도날 종종 경 막 출혈과 뇌 손상을 일으키는 경질을 준수 합니다. 이 두개골에 피 질 버퍼의 한 방울을 추가 하 고 피 질 버퍼에 두개골을 제거 하 여 방지할 수 있습니다.
윈도우의 폐색 이끌어 낸다 두개골 창 준비 후 경질, 피부에서 출?...

대뇌 피 질에 있는 신경 회로의 정확한 배선 지 각, 인식, 그리고 학습 및 메모리를 포함 하 여 더 높은 두뇌 기능을 위해 필수적 이다. 대뇌 피 질의 회로 출생 후 개발 하는 동안 동적으로 정제 된 있다입니다. 조직학 대뇌 피 질의 회로 형성을 사용 하 여 프로세스와 문화 분석 생체 외에서 연구 조사 했습니다. 그러나, 생활 포유류에 회로 형성의 역학 미개척 주로 남아 있다.
두 광자 현미경은 성인 마우스 뇌1,2에 있는 신경 회로의 분석 vivo에서 널리 사용 되었습니다. 그러나, 때문에 기술 과제, 연구의 제한 된 수만 언급 신생아 쥐에 있는 신경 회로 형성. 예를 들어 Carrillo 외. 두 번째 출생 후 주3에서 소 뇌에 섬유를 등반의 시간 경과 영상 수행. Portera-리아우 외. 첫 번째 출생 후 주4에서 대뇌 피 질의 레이어 1에에서 축 삭의 영상 보고. 현재 연구에서 우리는 계층 4 대뇌 피 질의 뉴런을 신생아 쥐에 있는 그들의 dendrites의 관찰에 대 한 프로토콜 요약. 두 가지 방법론을 포함,이 프로토콜을 적용 하 여 얻은 결과 우리의 최근 게시5에 보고 됩니다. 첫째, 초신성 벡터 시스템5,6 사용 하 여 개별 신경 신생아 두뇌의 라벨에 대 한. 초신성 시스템에서 신경 라벨에 사용 되는 형광 단백질 교환 및 레이블이 셀 특정 유전자 최저 이며 편집/녹아웃 분석은 또한 가능. 둘째, 우리는 연약한 신생아 쥐에 있는 두개골 창 준비에 대 한 수술을 설명합니다. 함께, 이러한 방법론 신생아 두뇌에 개별 뉴런의 vivo에서 관찰 하실 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

두 광자 영상 포유류 두뇌에 있는 신경 회로의 비보에 분석을 위한 강력한 도구입니다. 그러나, vivo에서 화상 진 찰 방법의 제한 된 수 라이브 신생아 포유류의 뇌 조직 검사에 대 한 존재 합니다. 여기 우리 생활 신생아 쥐에 있는 개별 대뇌 피 질의 신경 세포 이미징에 대 한 프로토콜을 요약 합니다. 이 프로토콜 다음 두 가지 방법론을 포함 한다: (1) 초신성 시스템 스파스 하 고 밝은 개발 두뇌에 연약한 신생아 두개골에 대 한 수술 (2)는 대뇌 피 질의 뉴런의 라벨에 대 한. 이 프로토콜에는 높은 신호 대 잡음 비율 신생아 단계 개별 외피 neurites의 시간적 변화 관찰 수 있습니다. 레이블이 지정 된 셀 특정 유전자 침묵 및 녹아웃 RNA 간섭 및 편집 시스템 CRISPR/Cas9 유전자는 초신성을 결합 하 여 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜 수 있습니다, 따라서, 대뇌 피 질의 뉴런, 신경 역학 및 질병 모델에서 신경 역학에 변화를 제어 하는 분자 메커니즘의 개발 역학을 분석 하는 데 사용할 수 있습니다.

그림 2D - 2 층 현재 프로토콜을 사용 하 여 레이어 4 대뇌 피 질의 뉴런의 두 광자 시간 경과 화상의 대표적인 결과. 분석을 위해 신경 세포 이미징 기간 내내 분명 수지상 형태와 선택 합니다. 우리는 형태소 분석 소프트웨어를 사용 하 여 이미지 신경 세포의 수지상 형태 분석. 대표 수지상 형태 재구성 그림 2 층에 표시 됩니?...

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In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

우리는 현재 vivo에서 2 광자 영상 이미징 신생아 쥐의 대뇌 피 질에 대 한 프로토콜. 이 메서드는 대뇌 피 질의 뉴런, 신경 역학 및 질병 모델에서 신경 역학에 변화를 제어 하는 분자 메커니즘의 발달 역학 분석에 적합 합니다.

Vivo에서 신생아 쥐에 있는 대뇌 피 질의 뉴런의 두 광자 영상

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

이 방법은 신경 과학의 주요 질문에 대답 하는 데 도움이 수 있습니다., 특히 신경 소켓 형성관련. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 살아있는 신생아 마우스에 있는 개별 적인 뉴런의 형태학적 변화를 분석할 수 있다는 것입니다. 마취 된 산후 5 일 새끼로 시작하여 꼬리 핀치 테스트에 대한 반응이없는 경우에만 진행하십시오.먼저 70%에탄올로 닦아 두피를 살균합니다. 그런 다음 70%에탄올로 멸균된 가위를 사용하여 두개골을 덮는 피부의 약 20 평방 밀리미터를 제거합니다. 다음으로, 멸균 집게와 피질 버퍼에 담근 깨끗한 면봉을 사용하여 두개골의 근막을 제거하십시오.로딩 팁을 사용하여 착공할 부위를 피하면서 출혈을 막기 위해 절개 된 피부 표면에 조직 접착제를 적용합니다. 다른 가열 패드에 강아지를 놓고 섭씨 37도로 설정하고 마취에서 회복 할 수 있습니다. 조직 접착제가 건조되고 고화될 때까지 약 30분 정도 기다립니다.조직 접착제가 건조되면, 다시 마취 마우스에 두개골 창 준비를 시작합니다. 두개골에 피질 버퍼 한 방울을 바른 다음 멸균 면도날을 사용하여 두개골직경 1mm의 영역을 조심스럽게 열어 두라를 그대로 유지합니다. 피질 버퍼를 적용하여 뇌 표면을 촉촉하게 유지합니다.피질 버퍼에 담근 작은 젤라틴 스폰지를 사용하여 출혈을 막습니다. 신선한 조각을 사용하여 두개골 절제술의 한쪽을 압축하고 두라를 만지지 않고 두랄 표면에서 완충과 혈액을 배출하십시오. 이 단계는 명확한 창을 준비하는 가장 중요한 단계입니다.두라는 손상되지 않아야 하며 브러시를 노출된 두라에서 제거해야 합니다. 다음으로 파이펫 팁을 사용하여 피질 완충에 용해된 1% 낮은 녹는 아가로즈의 얇은 층을 적용합니다. 아가로즈 젤 층에 둥근 3밀리미터 유리 커버 슬립을 발라주세요.덮개 슬립과 아가로즈 젤 층 사이의 모든 거품을 제거하여 그들 사이에 아가로즈 젤을 초과하여 부어. 핀셋을 사용하여 커버 슬립 아래에서 튀어나온 과도한 젤을 제거합니다. 시멘트 분말과 시멘트 액체를 혼합합니다.파이펫 팁을 사용하여 혼합물을 두개골에 적용한 후 고형화됩니다. 그런 다음 치과 시멘트를 사용하여 맞춤형 티타늄 바를 두개골 뼈에 부착하십시오. 티타늄 바를 정렬하고 커버가 평행하게 미끄러져 이미지를 쉽게 캡처할 수 있습니다.노출된 두개골을 치과 시멘트로 덮습니다. 그런 다음, 피하 진통제를 주입. 치과 시멘트가 고화될 때까지 1시간 동안 섭씨 37도의 열패드에 새끼를 놓습니다.이미징을 시작하려면 먼저 2광자 레이저 파장을 설정합니다. RFP 여기의 경우 1000 나노미터의 파장을 사용하십시오. 커버 슬립의 표면을 70%에탄올로 닦아냅니다.티타늄 바를 사용하여 마취된 강아지를 이미징 스테이지의 티타늄 플레이트에 부착합니다. 고니오미터 스테이지를 사용하여 커버 슬립이 객관적렌즈와 평행하도록 헤드를 조절한다. 37°C로 설정된 가열 패드를 사용하여 이미징 시 강아지의 체온을 유지하고 이소플루란 농도를 0.7%에서 1%로 감소시키는 두 광자 현미경의 20배 목표 렌즈 아래에 이미징 단계를 배치한다.뚜껑 슬립에 물 한 방울을 바하십시오. 1.4 미크론 간격으로 Z 스택 이미지를 획득하도록 소프트웨어를 설정합니다. 층 4 개의 뉴런 이미징의 경우 Z 너비를 150 에서 300 미크론으로 설정하여 전체 수지상 형태를 이미지화하십시오.느린 스캔 및 평균을 사용하여 신경 형태학을 보여주는 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다. 그것은 일반적으로 전체 수지상 형태를 취득하는 데 20 분 이상 걸립니다. 이 이미지는 P5 강아지의 4개의 피질 뉴런층의 대표적인 Z 스택 이미지를 나타낸다.화살표는 분석할 뉴런을 나타냅니다. 흐리게 된 수상월이있는 뉴런은 분석에서 제거해야합니다. 이 이미지는 이전 이미지에서 표시된 뉴런의 배율 이미지가 더 높은 것을 나타낸다.파란색 화살촉은 다음 시점에서 철회될 수지상 팁을 나타내며, 작은 흰색 화살촉은 이웃 셀의 축축을 나타냅니다. 4.5시간 후, 파란색 화살촉이 있는 수지상 팁이 철회되고 노란색 화살촉이 있는 수지상 팁이 길어지고 있습니다. 대표적인 수지상 형태 재구성은 여기에 표시되며, 여기서 볼 수 있듯이 연결이 끊어진 원더라이트를 보여주는 뉴런은 분석에서 제외되어야 합니다.이 절차를 시도하는 동안, 프로세스 중에 듀라를 그대로 유지하는 것이 중요합니다. 이 절차를 사용하여, 추진 화상 진찰에서 와 같은 그밖 방법은 신생아 두뇌에 있는 신경 활동 패턴에 관련있는 추가 질문에 대답하기 위하여 수행될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

만성 두 광자를위한 박막 해골 창 기법 생체내에서</emNeuroinflammation의 모델 Murine Microglia의> 이미징

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

연구

신경과학

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

두 광자 현미경을 사용하여 마우스 척수의 생체내 이미징에

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

두피 뉴런에서 생체 내 두 - 광자의 영상은 경험에 의존 분자 변경

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

피부의 단일 신경 종말의 생체 두 광자 현미경에서

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

두 광자<em&gt; 생체</em&gt; 시닝 두개골 준비를 사용하여 마우스 피질 돌기 쪽의 영상

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

마우스 척수의 세포 역학의 두 광자 이미징

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

동시에 두 광자<em&gt; 생체</em&gt; 마우스 Retrosplenial 코어 텍스에서 시냅틱 입력의 이미징 및 시냅스 대상

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

쥐 두피 뉴런의 사상 액틴 (F - 굴지) puncta의 정량

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

생체 내 2 광자 형광 평생 이미징 현미경 을 사용하여 머리 고정 행동 마우스에서 단백질 키나제 활동을 시각화

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...