Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

Forfatterne takker T. Sato og M. Kanbayashi S. Kouyama for deres kundestøtte. Dette arbeidet ble støttet av JSP KAKENHI Grant tall JP15K14322 og JP16H06143, Takeda Science Foundation, Uehara Memorial Foundation og de samarbeidende forskning prosjekt av Niigata University hjernen Research Institute 2017-2923 (H.M.) og KAKENHI JP16K14559, JP15H01454, og JP15H04263 og Grant i vitenskapelig forskning på innovasjon områder "Dynamisk regulering av hjernefunksjon av skrap & nybygg System" (JP16H06459) fra MEXT (ti).

Eksperimenter bør utføres i henhold til dyrevelferd veiledning foreskrevet av det eksperimentator institusjon.
1. forberedelse av Pups for Imaging
Merk: Pups med tynt merket kortikale neurons kan fås ved i utero electroporation (IUE) Supernova vektorer5,6. Supernova systemet består av følgende to vektorer: TRE-grobunn og CAG-loxP-STOP-loxP-gen X-ires-tTA-WPRE. I dette systemet avhengig sparsom me...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

Avgjørende skritt i protokollen og feilsøking:
Det viktigste trinnet av protokollen er fjerning av skallen (protokollen trinn 3.2). Ved innsetting overholder den razor bladet ofte dura, forårsaker dural blødning og skade på hjernen. Dette kan unngås ved å legge en dråpe cortex buffer på skallen og fjerne skallen cortex buffer.
Blødning fra dura og huden etter skallen vinduet forberedelse fører til okklusjon av vinduet. For å unngå dette, vevet lim og denta...

Den nøyaktige kablingen for nevrale kretser i hjernebarken er viktig for høyere hjernefunksjoner inkludert persepsjon, kognisjon, og læring og hukommelse. Kortikale kretser er dynamisk raffinert under postnatal utvikling. Studier har undersøkt prosessen av kortikale krets dannelsen ved hjelp av histologiske og i vitro kulturanalyser. Men har dynamikken i kretsen formasjonen i levende pattedyr vært stort sett uutforsket.
To-fotonet mikroskopi er mye brukt for i vivo -analyser av nevrale kretser i voksen mus hjernen1,2. Men på grunn av tekniske utfordringer, har bare et begrenset antall studier adressert neuronal krets formasjonen i nyfødte mus. For eksempel utført Carrillo et al. tidsinnstilt bildebehandling klatring fibre i lillehjernen i andre postnatal uke3. Portera-Cailliau et al. rapportert avbilding av axons i kortikale lag 1 i første postnatal uke4. Studien oppsummere vi en protokoll for observasjon av lag 4 kortikale nevroner og deres dendrites i nyfødte mus. Resultatene ved å bruke denne protokollen, som inkluderer to metoder, rapporteres i våre siste publikasjon5. Først bruker vi Supernova vektor system5,6 for merking individuelle neurons i neonatal hjernen. I Supernova systemet, fluorescerende proteiner brukes for neuronal merking er utskiftbare og merket celle-spesifikke genet knockdown og redigering/knockout analyser er også mulig. Andre, beskriver vi en kirurgisk prosedyre for kraniale vinduet forberedelse i skjøre neonatal mus. Sammen tillater disse metodene i vivo observasjon av individuelle neurons i neonatal hjernen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

To-fotonet bildebehandling er et kraftig verktøy for i vivo analyse av nevrale kretser i pattedyr hjernen. Imidlertid finnes et begrenset antall i vivo tenkelig metoder for å undersøke hjernevev live nyfødte pattedyr. Her oppsummere vi en protokoll for imaging personlige kortikale nevroner i levende neonatal mus. Denne protokollen inkluderer de følgende to metodikkene: (1) Supernova system for sparsom og lyse merking av kortikale nerveceller i utvikle hjernen, og (2) en kirurgisk prosedyre for skjøre neonatal skallen. Denne protokollen tillater observasjon av tidsmessige endringer av personlige kortikale neurites under neonatal stadier med en høy signal-til-støy-forhold. Merket celle-spesifikke genet stanse og knockout kan også oppnås ved å kombinere Supernova RNA-interferens og CRISPR/Cas9 gene redigering systemer. Denne protokollen kan dermed brukes for å analysere utviklingsmessige dynamikken i kortikale nevroner, molekylære mekanismer som styrer neuronal dynamikk, og endringer i neuronal dynamikk i sykdom modeller.

Tallene 2D - 2F Vis representant resultatene av to-fotonet tidsinnstilt bildebehandling lag 4 kortikale neurons bruker stede protokollen. For analyse, Velg neurons med klart dendrittiske morfologi gjennom tenkelig periodene. Vi analyserte dendrittiske morfologi av fotografert neurons bruker morfologisk analyseprogramvare. Representant dendrittiske morfologi gjenoppbygging er vist i figur 2F. Neurons viser frakoblet dendrites ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Vi presenterer en i vivo to-fotonet imaging protokoll for imaging hjernebarken neonatal mus. Denne metoden er egnet for å analysere utviklingsmessige dynamikken i kortikale nevroner, molekylære mekanismer som kontrollerer neuronal dynamikken og endringene i neuronal dynamikk i sykdom modeller.

I Vivo To-fotonet avbilding av kortikale nevroner i Neonatal mus

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål i nevrovitenskap, spesielt de som er relatert til nevronkontaktdannelse. Den største fordelen med denne teknikken er at forskere kan analysere de morfologiske endringene av individuelle nevroner i levende nyfødte mus. Begynn med en bedøvet postnatal dag fem valp og fortsett bare i fravær av en reaksjon på haleklemmetesten.Først steriliser hodebunnen ved å tørke den med 70% etanol. Deretter bruker saks sterilisert med 70% etanol for å fjerne ca 20 kvadratimen millimeter av huden som dekker skallen. Deretter bruker du sterile tang og en ren bomullspinne gjennomvåt i cortex buffer, for å fjerne fascia av skallen.Bruk en lastspiss til å påføre vevslim på den skrå hudoverflaten for å stoppe blødningen samtidig som du unngår at området avbildes. Plasser valpen på en annen varmepute, sett til 37 grader Celsius, og la den komme seg fra anestesi. Vent ca 30 minutter til vevlimet har tørket og størknet.Når vevslimet har tørket, begynner kranialvindusforberedelsen på den re-bedøvede musen. Påfør en dråpe cortex buffer på skallen, og bruk deretter et sterilt barberblad for å åpne et en millimeter diameterområde av skallen, slik at duraen er intakt. Påfør cortex buffer for å holde hjerneoverflaten fuktig.Bruk et lite stykke gelatin svamp gjennomvåt i cortex buffer for å stoppe blødning. Bruk et friskt stykke til å komprimere den ene siden av kraniotomien og drenere buffer og blod fra duraloverflaten uten å berøre duraen. Dette er det mest kritiske trinnet for å klargjøre klart vindu.Duraen må være uskadet og børsten skal fjernes fra den eksponerte duraen. Deretter bruker du en pipettespiss til å påføre et tynt lag med en prosent lavsmeltende agarose, oppløst i cortex buffer. Påfør et rundt, tre millimeter glassdeksel som glir på agarose gellaget.Fjern alle bobler mellom dekselet slip og agarose gel laget ved å helle i overkant av agarose gel mellom dem. Bruk pinsett for å fjerne overflødig gel, som stikker ut fra under dekselet slip. Bland sementpulver og sementvæsken.Bruk en pipettespiss til å påføre blandingen på skallen før den blir størknet. Deretter fester du en skreddersydd titanstang til kranialbenet ved hjelp av tannsement. Juster titanstangen, og dekselet glir parallelt for å ta bilder enkelt.Dekk den eksponerte skallen med tannsement. Deretter injiserer subkutant et smertestillende. Plasser valpen i et gjenopprettingsbur på en 37 grader celsius varmepute i en time til tannsementen har størknet.For å begynne å bilde, først angi to-foton laser bølgelengde. For RFP-eksitasjon, bruk en bølgelengde på 1000 nanometer. Tørk av overflaten av dekselet slip med 70% etanol.Fest den bedøvede valpen til titanplaten på bildestadiet ved hjelp av titanstangen. Bruk goniometerstadiet, for å justere hodet, slik at dekselet glir parallelt med objektivet. Opprettholde kroppstemperaturen til valpen under avbildning ved hjelp av en varmepute satt til 37 grader Celsius og redusere isoflurankonsentrasjonen til 0,7% til 1% Plasser bildestadiet under 20x objektivobjektiv av de to fotonmikroskopet.Påfør en dråpe vann på dekselet slip. Angi at programvaren skal hente Z-stakkbilder med intervaller på 1,4 mikron. For lag fire nevronavbildning setter du Z-bredden til mellom 150 og 300 mikrometer for å bilde av hele dendrittiske morfologien.Bruk langsom skanning og snitt for å få klare bilder som viser nevronal morfologi. Det tar vanligvis mer enn 20 minutter å skaffe hele dendrittiske morfologien. Dette bildet viser et representativt Z-stack bilde av laget fire kortikale nevroner av P5 pup.Pilen indikerer at nevronen skal analyseres. Nevroner med uskarpe dendritter bør fjernes fra analysen. Dette bildet viser et høyere forstørrelsesbilde av det angitte nevronen i det forrige bildet.Blå pilspisser indikerer dendrittiske tips som vil bli trukket tilbake til neste gang, og de små hvite pilhodene indikerer aksonen til en nærliggende celle. Etter 4,5 timer trekkes de dendrittiske spissene med blå pilspisser tilbake, og dendrittiske spissene med gule pilspisser er langstrakte. En representativ dendrittisk morfologi rekonstruksjon er vist her, nevroner som viser frakoblede dendritter som sett her, bør utelukkes fra analyser.Mens du prøver denne prosedyren, det er viktig å holde dura intakt, under prosessen. Ved hjelp av denne prosedyren kan andre metoder som i fremdriftsavbildningen utføres for å svare på flere spørsmål knyttet til nevronaktivitetsmønsteret i neonatal hjerne.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging av Mouse Spinal Cord Bruke to-foton Mikroskopi

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

I Vivo to-foton avbildning av erfaring-avhengige molekylære endringer i kortikale Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo to-foton mikroskopi av Enkeltnerveender i hud

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

To-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging av dendrittutløperne i Mouse Cortex Bruke en Tynnet-skalle Forberedelse

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

To-foton Imaging av Cellular Dynamics i Mouse Spinal Cord

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Samtidig To-foton<em&gt; I Vivo</em&gt; Imaging av synaptiske innganger og postsynaptiske mål i Mouse Retrosplenial Cortex

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

Kvantifisering av Trådformede Actin (F-aktin) puncta i Rat kortikale nevroner

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

To-fotonet kalsium Imaging i Neuronal Dendrites i hjernen skiver

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualisere protein kinase en aktivitet i hodet-fast oppfører mus bruke in vivo to-Foton fluorescens Lifetime Imaging mikroskopi

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...