Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
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Os autores agradecer T. Sato, M. Kanbayashi e S. Kouyama para sua assistência técnica. Este trabalho foi apoiado pelo JSPS KAKENHI Grant números JP15K14322 e JP16H06143, a Takeda Science Foundation, Fundação Memorial Uehara e o Collaborative Research projeto de Niigata University cérebro Research Institute 2017-2923 (H.M) e KAKENHI JP16K14559, JP15H01454 e JP15H04263 e Grant-em investigação científica nas áreas de inovação "Regulamento dinâmico da função cerebral por Scrap & Build System" (JP16H06459) do MEXT (T.I.).

Experimentos devem ser realizados de acordo com as normas de bem-estar animal prescritas pela instituição do experimentador.
1. preparação dos filhotes para a imagem latente
Nota: Filhotes com escassamente rotulados neurônios corticais podem ser obtidos por no utero eletroporação (IUE) de Supernova vetores5,6. O sistema de Supernova consiste dos seguintes dois vetores: TRE-Cre e CAG-loxP-STOP-l...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

Passos críticos no protocolo e solução de problemas:
O passo mais importante do protocolo é a remoção do crânio (passo 3.2 do protocolo). Mediante a inserção, a lâmina de barbear frequentemente adere a dura-máter, causando sangramento dural e danos ao cérebro. Isto pode ser evitado adicionando uma gota de buffer de córtex no crânio e removendo o crânio no buffer do córtex.
Sangramento da dura e a pele após preparação janela cranial leva a oclusão da...

A fiação precisa de circuitos neuronais no córtex cerebral é essencial para funções superiores do cérebro incluindo a percepção, cognição e aprendizagem e memória. Circuitos corticais são dinamicamente refinados durante o desenvolvimento pós-natal. Estudos têm investigado o processo de formação de circuito cortical usando histológico e em vitro análises de cultura. No entanto, a dinâmica da formação do circuito em mamíferos viventes manteve-se na maior parte inexplorada.
Microscopia de dois fotões tem sido amplamente utilizada para as análises em vivo dos circuitos neuronais no cérebro do rato adulto1,2. No entanto, devido a desafios técnicos, somente um número limitado de estudos abordaram a formação do circuito neuronal em ratos recém-nascidos. Por exemplo, Carrillo et al realizaram a lapso de tempo imagem de fibras no cerebelo na segunda semana pós-parto3de escalada. Porteira-Cailliau et al relataram a imagem dos axônios na camada cortical 1 na primeira semana pós-natal4. No presente estudo, resumimos um protocolo para a observação de neurônios corticais de camada 4 e suas dendrites em camundongos recém-nascidos. Os resultados obtidos através da aplicação do presente protocolo, que inclui duas metodologias, são relatados em nossa recente publicação5. Primeiro, usamos a Supernova vetor sistema5,6 para rotular os neurônios individuais no cérebro neonatal. No sistema de Supernova, as proteínas fluorescentes usadas para rotular neuronal são knockdown exchangeable e etiquetados célula específica do gene e edição/nocaute análises também são possíveis. Em segundo lugar, descrevemos um procedimento cirúrgico para a preparação de janela cranial em camundongos neonatais frágil. Juntas, essas metodologias permitem a observação na vivo de neurônios individuais no cérebro neonatal.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

Imagem de dois fotões é uma poderosa ferramenta de análise de circuitos neuronais do cérebro de mamíferos na vivo . No entanto, um número limitado de no vivo de imagem métodos existe para examinar o tecido do cérebro de mamíferos recém-nascidos ao vivo. Aqui resumimos um protocolo para imagens individuais neurônios corticais em camundongos neonatais vivos. Este protocolo inclui as seguintes duas metodologias: (1) o sistema de Supernova para esparsas e brilhantes rotulagem dos neurônios corticais no cérebro em desenvolvimento e (2) um procedimento cirúrgico para o crânio neonatal frágil. Este protocolo permite a observação de mudanças temporais de neuritos corticais individuais durante estágios neonatais com uma alta relação sinal-ruído. Silenciamento de genes de células específicas rotuladas e nocaute também podem ser alcançados pela combinação da Supernova com interferência do RNA e gene CRISPR/Cas9 sistemas de edição. Este protocolo pode, assim, ser utilizado para analisar a dinâmica do desenvolvimento dos neurônios corticais, mecanismos moleculares que controlam a dinâmica neuronal e mudanças na dinâmica neuronal em modelos de doenças.

Figuras 2D - 2F mostrar resultados representativos da imagem latente de lapso de tempo de dois fotões de neurônios corticais de camada 4 usando o presente protocolo. Para efeitos de análise, selecione os neurônios com morfologia dendrítica claro durante os períodos de imagem. Analisamos a morfologia dendrítica de neurônios imagens usando software de análise morfológica. Reconstrução de morfologia dendrítica representativa é mostrada na <stro...

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In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Apresentamos um na vivo dois fotões protocolo para o córtex cerebral de ratos neonatais de imagem de imagem. Este método é adequado para analisar a dinâmica do desenvolvimento dos neurônios corticais, os mecanismos moleculares que controlam a dinâmica neuronal e as mudanças na dinâmica neuronal em modelos de doenças.

Na Vivo Imagem de dois fotões de neurônios Cortical em camundongos Neonatais

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na neurociência, especialmente aquelas relacionadas à formação de soquetes de neurônios. A principal vantagem dessa técnica é que os pesquisadores podem analisar as alterações morfológicas dos neurônios individuais em camundongos neonatais vivos. Comece com um filhote anesthetizado pós-natal 5 e prossiga apenas na ausência de uma reação ao teste de pinça de cauda.Primeiro, esterilize o couro cabeludo limpando-o com 70% de etanol. Em seguida, use uma tesoura esterilizada com 70% de etanol para remover aproximadamente 20 milímetros quadrados da pele que cobre o crânio. Em seguida, use fórceps estéreis e um cotonete limpo encharcado em tampão de córtex, para remover a fáscia do crânio.Use uma ponta de carregamento para aplicar adesivo de tecido na superfície da pele incisiva para parar o sangramento, evitando que a área seja imageada. Coloque o filhote em outra almofada de aquecimento, fixada em 37 graus Celsius, e permita que ele se recupere da anestesia. Aguarde aproximadamente 30 minutos até que o adesivo de tecido tenha secado e solidificado.Uma vez que o adesivo de tecido tenha secado, comece a preparação da janela craniana no rato re-anestesiado. Aplique uma gota de tampão de córtex no crânio, em seguida, use uma lâmina de barbear estéril para abrir cuidadosamente uma área de um milímetro de diâmetro do crânio, deixando a dura-dura intacta. Aplique tampão de córtex para manter a superfície cerebral úmida.Use um pequeno pedaço de esponja de gelatina embebida em tampão de córtex para parar qualquer sangramento. Use uma peça fresca para comprimir um lado da craniotomia e drenar qualquer tampão e sangue da superfície dural sem tocar na dura. Este é o passo mais crítico para preparar a janela clara.A dura dura deve ser intacta e a escova deve ser removida da dura exposta. Em seguida, use uma ponta de pipeta para aplicar uma camada fina de 1% de baixa agarose de fusão, dissolvida em tampão de córtex. Aplique uma tampa redonda de vidro de três milímetros na camada de gel de agarose.Remova todas as bolhas entre o deslizamento da tampa e a camada de gel de agarose derramando em excesso de gel de agarose entre elas. Use pinças para remover o excesso de gel, salientes sob o deslizamento da tampa. Misture o pó de cimento e o líquido de cimento.Use uma ponta de pipeta para aplicar a mistura no crânio antes que se solidifique. Em seguida, conecte uma barra de titânio feita sob medida ao osso craniano usando cimento dental. Alinhe a barra de titânio e a tampa deslize paralelamente às imagens de captura fácil.Cubra o crânio exposto com cimento dental. Então, subcutâneamente injete um analgésico. Coloque o filhote em uma gaiola de recuperação em uma almofada de calor de 37 graus celsius por uma hora até que o cimento dentário se solidifique.Para começar a imagem, primeiro defina o comprimento de onda laser de dois fótons. Para excitação RFP, use um comprimento de onda de 1000 nanômetros. Limpe a superfície da tampa com 70% de etanol.Conecte o filhote anestesiado à placa de titânio no estágio de imagem, usando a barra de titânio. Use o estágio goniômetro, para ajustar a cabeça, de modo que o deslizamento da tampa seja paralelo à lente objetiva. Mantenha a temperatura corporal do filhote durante a imagem usando uma almofada de aquecimento fixada em 37 graus Celsius e reduza a concentração de isoflurane para 0,7% a 1%Coloque o estágio de imagem sob a lente objetiva de 20x do microscópio de dois fótons.Aplique uma gota de água no deslizamento da tampa. Defina o software para adquirir imagens de pilha Z em intervalos de 1,4 mícrons. Para a imagem de neurônio de camada quatro, ajuste a largura Z entre 150 e 300 mícrons para imaginar toda a morfologia dendrítica.Use varredura lenta e média para obter imagens claras mostrando a morfologia neuronal. Normalmente leva mais de 20 minutos para adquirir toda a morfologia dendrítica. Esta imagem mostra uma imagem representativa da pilha Z da camada quatro neurônios corticais do filhote P5.A seta indica que o neurônio deve ser analisado. Neurônios com dendritos borrados devem ser removidos da análise. Esta imagem mostra uma imagem de ampliação mais elevada do neurônio indicado na imagem anterior.Pontas de flecha azul indicam pontas dendríticas que serão retraídas no próximo ponto, e as pequenas pontas de flecha branca indicam o axônio de uma célula vizinha. Após 4,5 horas, as pontas dendríticas com pontas de flecha azul são retraídas, e as pontas dendríticas com pontas de flecha amarelas são alongadas. Uma reconstrução representativa da morfologia dendrítica é mostrada aqui, neurônios mostrando dendritos desconectados como visto aqui, devem ser excluídos das análises.Ao tentar este procedimento, é importante manter a dura-dura intacta, durante o processo. Por meio desse procedimento, outros métodos como a imagem de propulsão podem ser realizados para responder a perguntas adicionais relacionadas ao padrão de atividade do neurônio no cérebro neonatal.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

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A Técnica de Janela crânio-fino para Crônica de dois fótons In vivo Imaging da Microglia murino em Modelos de Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

Neurociência

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

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Em Imaging vivo do Cordão do rato Spinal Usando Two-photon Microscopia

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Vivo em dois fótons de imagem de experiência dependentes de alterações moleculares em neurônios corticais

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

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In Vivo Two-Photon Microscopia de terminações nervosas individuais em Pele

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

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Two-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imagem de espinhas dendríticas no Rato Cortex Usando um desbaste-crânio Preparação

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

Dois fótons de imagem da Cellular Dynamics na Medula Espinhal Rato

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

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Simultânea de dois fótons<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagem de Synaptic Entradas e metas pós-sinápticos no córtex do rato retrosplï¿½ico

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

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Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualizando proteína quinase uma atividade na cabeça-corrigido ratos comportando-se usando in vivo microscopia da imagem latente da vida da fluorescência do dois-fotão

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...