Name: in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice
Uploaded: 2018-10-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

Författarna tackar T. Sato, M. Kanbayashi och S. Kouyama för deras tekniskt bistånd. Detta arbete var stöds av JSPS KAKENHI Grant nummer JP15K14322 och JP16H06143, Takeda vetenskapsstiftelsen, Stiftelsen Uehara Memorial och den Collaborative Research Project av Niigata University Brain Research Institute 2017-2923 (H.M.) och KAKENHI JP16K14559, JP15H01454, och JP15H04263 och Grant-i vetenskaplig forskning på områden som Innovation ”dynamisk reglering av hjärnans funktion av skrot & Build System” (JP16H06459) från MEXT (TI).

Experiment skall utföras enligt de riktlinjer för djurskydd som ordinerats av de experimenter's institution.
1. beredning av Pups för avbildning
Obs: Valpar med glest märkt kortikala nervceller kan erhållas av Utero elektroporation (IUE) Supernova vektorer5,6. Supernova systemet består av följande två vektorer: TRE-Cre och CAG-loxP-STOP-loxP-Gen X-ires-tTA-WPRE. I detta system åberopat glesa ...

<ol>
	<li>Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+plasticity+of+dendritic+spines+in+the+developing+rat+barrel+cortex+in+vivo.">Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing rat barrel cortex in vivo.</a> Nature. 404 (6780), 876-881 (2000).</li><li>Grutzendler, J., Kasthuri, N., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+dendritic+spine+stability+in+the+adult+cortex.">Long-term dendritic spine stability in the adult cortex.</a> Nature. 420 (6917), 812-816 (2002).</li><li>Carrillo, J., Nishiyama, N., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+translocation+establishes+the+winner+in+cerebellar+climbing+fiber+synapse+elimination.">Dendritic translocation establishes the winner in cerebellar climbing fiber synapse elimination.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (18), 7641-7653 (2013).</li><li>Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+modes+of+axon+elaboration+in+the+developing+neocortex.">Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex.</a> PLoS Biology. , e272 (2005).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDAR-regulated+dynamics+of+layer+4+neuronal+dendrites+during+thalamocortical+reorganization+in+neonates.">NMDAR-regulated dynamics of layer 4 neuronal dendrites during thalamocortical reorganization in neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li><li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supernova:+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo.">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 35747 (2016).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+activity-dependent+cortical+wiring:+formation+of+interhemispheric+connections+in+neonatal+mouse+visual+cortex+requires+projection+neuron+activity.">Evidence for activity-dependent cortical wiring: formation of interhemispheric connections in neonatal mouse visual cortex requires projection neuron activity.</a> The Journal of Neuroscience. 27 (25), 6760-6770 (2007).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240 (1), 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li><li>Mizuno, H., Hirano, T., Tagawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+neuronal+activity+supports+the+axon+development+of+callosal+projection+neurons+during+different+post-natal+periods+in+the+mouse+cerebral+cortex.">Pre-synaptic and post-synaptic neuronal activity supports the axon development of callosal projection neurons during different post-natal periods in the mouse cerebral cortex.</a> European Journal of Neuroscience. 31 (3), 410-424 (2010).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3024 (2011).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca(2+)+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137-141 (2001).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patchwork-Type+Spontaneous+Activity+in+Neonatal+Barrel+Cortex+Layer+4+Transmitted+via+Thalamocortical+Projections.">Patchwork-Type Spontaneous Activity in Neonatal Barrel Cortex Layer 4 Transmitted via Thalamocortical Projections.</a> Cell Reports. 22 (1), 123-135 (2018).</li><li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+double+markers+in+mice.">Mosaic analysis with double markers in mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li><li>Young, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+with+inducible+Cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice.">Single-neuron labeling with inducible Cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 721-728 (2008).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Repeated+Exposure+to+Isoflurane+not+Sevoflurane+in+Mice+Reversibly+Impaired+Spatial+Cognition+at+Juvenile-Age.">Neonatal Repeated Exposure to Isoflurane not Sevoflurane in Mice Reversibly Impaired Spatial Cognition at Juvenile-Age.</a> Neurochemical Research. 42 (2), 595-605 (2017).</li><li>Kondo, M., Kobayashi, K., Ohkura, M., Nakai, J., Matsuzaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+calcium+imaging+of+the+medial+prefrontal+cortex+and+hippocampus+without+cortical+invasion.">Two-photon calcium imaging of the medial prefrontal cortex and hippocampus without cortical invasion.</a> eLIFE. 6, e26839 (2017).</li><li>Nakazawa, S., Mizuno, H., Iwasato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+dynamics+of+cortical+neuron+dendritic+trees+revealed+by+long-term+in+vivo+imaging+in+neonates.">Differential dynamics of cortical neuron dendritic trees revealed by long-term in vivo imaging in neonates.</a> Nature Communications. 9 (1), 3106 (2018).</li></ol>

Kritiska steg i protokollet och felsökning:
Det mest kritiska steget i protokollet är avlägsnande av skallen (protokoll steg 3,2). Vid införande följer rakbladet ofta dura, orsakar dural blödningar och skador på hjärnan. Detta kan undvikas genom att tillsätta en droppe av cortex buffert på skallen och ta bort skallen i cortex buffert.
Blödning från dura och huden efter kraniala fönster förberedelse leder till ocklusion av fönstret. För att undvika detta...

Den exakta ledningar av neuronala kretsar i hjärnbarken är viktigt för högre hjärnfunktioner inklusive perception, kognition, och inlärning och minne. Kortikala kretsar förädlas dynamiskt under postnatal utveckling. Studier har undersökt processen av kortikala krets bildas med histologiska och in vitro- kultur analyser. Dynamiken i krets formation i levande däggdjur har förblev dock mestadels outforskade.
Två-foton mikroskopi har använts för de i vivo analyserna av neuronala kretsar i vuxen mus hjärnan1,2. Dock har endast ett begränsat antal studier på grund av tekniska utmaningar adresserat neuronala krets bildandet i nyfödda möss. Till exempel utförde Carrillo et al. time-lapse bildtagning av klättring fibrer i lillhjärnan i andra postnatala vecka3. Portera-Cailliau et al. rapporterade bildtagning av axoner i kortikala skikt 1 i den första postnatal vecka4. I den aktuella studien sammanfattar vi ett protokoll för observationen av layer 4 kortikala nervceller och deras dendriter i nyfödda möss. Resultat som erhålls genom tillämpning av detta protokoll, som omfattar två metoder, redovisas i vår senaste publikation5. Först använder vi Supernova vector systemet5,6 för märkning enskilda nervceller i neonatal hjärnan. I Supernova systemet, fluorescerande proteinerna används för neuronal märkning är utbytbara och märkta-specifika genen knockdown och redigering/knockout analyser är också möjliga. Det andra beskriver vi ett kirurgiskt ingrepp för kraniala fönster beredning i bräckliga neonatala möss. Tillsammans kan dessa metoder i vivo observation av enskilda nervceller i neonatal hjärnor.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pK031. TRE-Cre</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK029. CAG-loxP-STOP-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from RIKEN BRC and Addgene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pK273. CAG-loxP-STOP-loxP-CyRFP-ires-tTA-WPRE</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Available from authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Wako</td>
			<td>099-06571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>410 Anaesthesia Unit (isoflurane gas machine)</td>
			<td>Univentor</td>
			<td>8323101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond (tissue adhesive)</td>
			<td>3M</td>
			<td>084-1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M&#181;ltiFlex Round (loading tip)</td>
			<td>Sorenson</td>
			<td>13810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (gelatin sponge)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0353-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9793</td>
			<td>Low melting point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-shaped coverslip</td>
			<td>Matsunami</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unifast 2 (dental cement)</td>
			<td>GC</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium bar</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 1G)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl (carprofen)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>-</td>
			<td>Injectable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM7MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spertra-Physics</td>
			<td>Mai-Tai eHPDS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Titanium plate</td>
			<td>Authors</td>
			<td>-</td>
			<td>Custom made (see Figure 2A)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMARIS, FilamentTracer, MeasurementPro</td>
			<td>BITPLANE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniometer stage</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>GN2/M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-photon imaging of cortical neurons in neonatal mice

Två-foton bildbehandling är ett kraftfullt verktyg för i vivo analys av neuronala kretsar i hjärnan hos däggdjur. Dock finns ett begränsat antal i vivo imaging metoder för att undersöka hjärnvävnad av levande nyfödda däggdjur. Detta dokument sammanfattar vi ett protokoll för imaging enskilda kortikala nervceller i levande neonatala möss. Detta protokoll innehåller följande två metoder: (1) Supernova system för glesa och ljusa märkning av kortikala nervceller i hjärnans utveckling och (2) ett kirurgiskt ingrepp för bräckliga neonatal skallen. Detta protokoll tillåter observation av tidsmässiga förändringar av enskilda kortikala neuriter under neonatal stadier med högt signal-brus-förhållande. Märkt cell-specifik nedtystning och knockout kan också uppnås genom att kombinera supernovan med RNA-interferens och CRISPR/Cas9 gen redigering system. Detta protokoll kan således användas för att analysera utvecklingsmässiga dynamiken i kortikala neuroner, molekylära mekanismer som styr neuronala dynamics, och förändringar i neuronala dynamik i sjukdomsmodeller.

Siffror 2D - 2F Visa representativa resultat för två-photon time-lapse imaging av layer 4 kortikala nervceller använder detta protokoll. För analysändamål, Välj nervceller med tydlig dendritiska morfologi i hela imaging perioderna. Vi analyserade dendritiska morfologi av avbildad nervceller med morfologisk analysprogramvara. Representativa dendritiska morfologi återuppbyggnad visas i figur 2F. Nervceller som visar fr?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice at JoVE.com

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Vi presenterar en i vivo två-photon imaging protokoll för imaging hjärnbarken av neonatala möss. Denna metod är lämplig för att analysera utvecklingsmässiga dynamiken i kortikala neuroner, de molekylära mekanismer som styr den neuronala dynamiken, och förändringar i neuronala dynamics i sjukdomsmodeller.

In Vivo Två-foton avbildning av kortikala nervceller hos neonatala möss

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Denna metod kan bidra till att svara på viktiga frågor i neurovetenskap, särskilt de som rör neuron socket bildning. Den största fördelen med denna teknik är att forskare kan analysera de morfologiska förändringarna av enskilda nervceller i levande neonatal möss. Börja med en sövd postnatal dag fem valp och fortsätt endast i avsaknad av en reaktion på svansen nypa test.Först sterilisera hårbotten genom att torka den med 70%etanol. Använd sedan sax steriliserad med 70%etanol för att ta bort cirka 20 kvadratmillimeter av huden som täcker skallen. Därefter använder sterila tlys och en ren bomullspinne indränkt i cortex buffert, för att ta bort fascian i skallen.Använd en lastspets för att applicera vävnadslim på den indrivna hudytan för att stoppa blödningen samtidigt som du undviker det område som ska avbildas. Placera valpen på en annan värmedyna, inställd på 37 grader Celsius, och låt den återhämta sig från anestesi. Vänta cirka 30 minuter tills vävnadslimmet har torkat och stelnat.När vävnadslimmet har torkat, börja den kraniella fönsterberedningen på den reesthetized musen. Applicera en droppe cortex buffert på skallen, använd sedan ett sterilt rakblad för att försiktigt öppna en millimeter diameter område av skallen, lämnar dura intakt. Applicera cortex buffert för att hålla hjärnytan fuktig.Använd en liten bit av gelatin svamp indränkt i cortex buffert för att stoppa blödning. Använd en fräsch bit för att komprimera ena sidan av kraniotomi och dränera någon buffert och blod från hamburgytan utan att vidröra dura. Detta är det mest kritiska steget för att förbereda rensa fönster.Duran måste vara oskadad och borsten ska avlägsnas från den exponerade duran. Därefter använder en pipett spets för att tillämpa ett tunt lager av en procent låg smältning uppstod, upplöst i cortex buffert. Applicera en rund, tre millimeter glaskåpa glida på agaros gelskiktet.Ta bort alla bubblor mellan täckslien och agarosgelskiktet genom att hälla i överskott av agarosgel mellan dem. Använd pincett för att avlägsna överskottet gel, utskjutande från under locket slip. Blanda cementpulver och cementvätskan.Använd en pipettspets för att applicera blandningen på skallen innan den stelnat. Sedan fäster du en skräddarsydd titanstång på hjärnbenet med hjälp av tandcement. Rikta in titanstången, och luckan i parallell för att enkelt fånga bilder.Täck den exponerade skallen med tandcement. Sedan injicerar subkutant ett smärtstillande medel. Placera valpen i en återhämtningsbur på en 37 grader celsius värmedyna i en timme tills tandcementet har stelnat.För att börja bildbehandling, först ställa in två-foton laser våglängd. För RFP-excitering, använd en våglängd på 1000 nanometer. Torka av luckans yta med 70%etanol.Fäst den sövda valpen på titanplattan på bildsteget, med hjälp av titanstången. Använd goniometerstadiet, för att justera huvudet, så att luckan är parallell med objektivet. Underhåll valpens kroppstemperatur under avbildning med hjälp av en värmedyna inställd på 37 grader Celsius och minska isoflurankoncentrationen till 0,7 %till 1 %Placera bildfasen under 20x objektivlinsen i de två fotonmikroskopet.Applicera en droppe vatten på täcksligen. Ställ in programvaran för att förvärva Z-stack bilder med 1,4 mikron intervall. För skikt fyra neuron imaging, ställ in Z bredd till mellan 150 och 300 mikrometer för att bilden hela dendritiska morfologi.Använd långsam skanning och genomsnitt för att få tydliga bilder som visar neuronal morfologi. Det tar vanligtvis mer än 20 minuter att förvärva hela dendritiska morfologi. Denna bild visar en representativ Z-stack bild av lagret fyra när nervceller av P5 valp.Pilen indikerar neuronen som ska analyseras. Nervceller med suddiga dendrites bör tas bort från analysen. Denna bild visar en högre förstoring bild av den angivna neuron i föregående bild.Blå pilspetsar anger dendritiska tips som kommer att dras tillbaka vid nästa tidspunkt, och de små vita pilspetsarna anger axonen för en granncell. Efter 4,5 timmar dras de dendritiska spetsarna med blå pilspetsar tillbaka, och de dendritiska spetsarna med gula pilspetsar är avlånga. En representativ dendritiska morfologi återuppbyggnad visas här, nervceller visar frånkopplad dendriter som ses här, bör uteslutas från analyser.Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att hålla dura intakt, under processen. Med hjälp av detta förfarande, andra metoder som i framdrivningen imaging kan utföras för att svara på ytterligare frågor relaterade till neuron aktivitetsmönstret i neonatal hjärnan.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

En tunn-skalle Fönster Teknik för kronisk två-photon In vivo Imaging av murina mikroglia i modeller av Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo avbildning av Mouse Spinal Cord Använda Två-foton mikroskopi

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In vivo Två-foton avbildning av erfarenhet beroende molekylära förändringar i kortikala neuron

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-foton mikroskopi av enstaka nervändar i huden

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Two-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging av Dendritutskotten i mus Cortex Använda en förtunnad-skalle Förberedelse

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

Två-foton Imaging av Cellular Dynamics i ryggmärgen hos möss

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

Samtidig Två-foton<em&gt; In Vivo</em&gt; Avbildning av synaptiska inmatningar och postsynaptiska mål i mus Retrosplenial Cortex

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

Kvantifiering av fintrådiga aktin (F-aktin) puncta i Rat kortikala Neuroner

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Två-foton kalcium Imaging i nervcellernas dendriter i hjärnan skivor

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Visualizing Protein Kinase A Activity In Head-fixed Behaving Mice Using In Vivo Two-photon Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualisera Proteinkinase en aktivitet i head-fast beter sig möss med in vivo två-Photon fluorescens livstid Imaging Microscopy

Neuromodulation exerts powerful control over brain function. Dysfunction of neuromodulatory systems results in neurological and psychiatric disorders. ...