Name: ex vivo imaging of cell-specific calcium signaling at the tripartite synapse of the mouse diaphragm
Uploaded: 2018-10-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm at JoVE.com

この仕事は、資金の健康 (NIH) の GM103554 と GM110767 (T.W.G.) に国立衛生研究所国立研究資源 5P20RR018751 センターから国立総合医学研究所 8 P 20 GM103513 (G.W.H.) にも対応しました。

動物飼育および実験はされたのケアおよび実験動物の使用とネバダ大学で IACUC 国立の機関健康ガイドに従って実行されます。
1. ダイヤフラムおよびトランスジェニック マウスからの横隔神経の準備
<ol><li>トランスジェニック マウスおよびオリゴヌクレオチドのプライマー遺伝子型がこれらのマウスを購入します。 注: プライマーは、これらのマウスのそれぞれの「...

<ol>
	<li>Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction.">Development of the vertebrate neuromuscular junction.</a> Annual Review of Neuroscience. 22, 389-442 (1999).</li><li>Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromuscular+synaptogenesis:+coordinating+partners+with+multiple+functions.">Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions.</a> Nature Reviews Neuroscience. 15 (11), 703-718 (2014).</li><li>Fatt, P., Katz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+end-plate+potential+recorded+with+an+intracellular+electrode.">An analysis of the end-plate potential recorded with an intracellular electrode.</a> Journal of Physiology. 115 (3), 320-370 (1951).</li><li>Todd, K. J., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+modulation+of+synaptic+signalling+at+the+neuromuscular+junction.">Purinergic modulation of synaptic signalling at the neuromuscular junction.</a> Pflugers Archive. 452 (5), 608-614 (2006).</li><li>Hennig, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Genetically+Encoded+Calcium+Indicators+(GECIs)+Combined+with+Advanced+Motion+Tracking+Techniques+to+Examine+the+Behavior+of+Neurons+and+Glia+in+the+Enteric+Nervous+System+of+the+Intact+Murine+Colon.">Use of Genetically Encoded Calcium Indicators (GECIs) Combined with Advanced Motion Tracking Techniques to Examine the Behavior of Neurons and Glia in the Enteric Nervous System of the Intact Murine Colon.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 9, 436 (2015).</li><li>Heredia, D. J., Schubert, D., Maligireddy, S., Hennig, G. W., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Striated+Muscle-Specific+Myosin-Blocking+Drug+for+the+Study+of+Neuromuscular+Physiology.">A Novel Striated Muscle-Specific Myosin-Blocking Drug for the Study of Neuromuscular Physiology.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 10, 276 (2016).</li><li>Johnson, B. R., Hauptman, S. A., Bonow, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+simple+suction+electrode+for+extracellular+recording+and+stimulation.">Construction of a simple suction electrode for extracellular recording and stimulation.</a> Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 6 (1), A21-A26 (2007).</li><li>Hong, S. J., Chang, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+geographutoxin+II+(mu-conotoxin)+for+the+study+of+neuromuscular+transmission+in+mouse.">Use of geographutoxin II (mu-conotoxin) for the study of neuromuscular transmission in mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 97 (3), 934-940 (1989).</li><li>Heredia, D. J., Feng, C. Y., Hennig, G. W., Renden, R. B., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-induced+Ca2++signaling+in+perisynaptic+Schwann+cells+of+the+early+postnatal+mouse+is+mediated+by+P2Y1+receptors+and+regulates+muscle+fatigue.">Activity-induced Ca2+ signaling in perisynaptic Schwann cells of the early postnatal mouse is mediated by P2Y1 receptors and regulates muscle fatigue.</a> Elife. 7, e30839 (2018).</li><li>Cho, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GCaMP-R+Family+of+Genetically+Encoded+Ratiometric+Calcium+Indicators.">The GCaMP-R Family of Genetically Encoded Ratiometric Calcium Indicators.</a> ACS Chemical Biology. 12 (4), 1066-1074 (2017).</li></ol>

ここでは、Ca2 +応答 GECI 発現マウスを用いたそのままの筋組織の特定のセルを測定するいくつかの例を提供します。これらの実験を正常に実行するために横隔神経を傷つけないように解剖中が不可欠です。低または高電力 (すなわち20 X、60 X) でシュワン細胞の Ca2 +応答をイメージするには、BHC またはブロックの動きに μ-コノトキシンのいずれかを使用する必要です。?...

NMJ は、すべてのシナプスのような 3 つの要素で構成されます: シナプス前終末に由来するニューロンは、シナプス後ニューロン/エフェクター細胞とグリア perisynaptic セル1,2。シナプス伝達の基本的な側面は、このシナプス3で披露された最初中、このプロセスの多くの側面のこのシナプスの異なる細胞要素によって同じ分子の発現のために部分、不明なまま。いずれかの解釈をこのように複雑運動ニューロン、シュワン細胞、筋肉、脊椎動物の略記で運動ニューロンによって解放共同、プリン アデニン ヌクレオチド ATP とアセチルコリン (ACh) の両方の受容体を表現するなどこれらの物質 (例えば伝達物質放出または応答の、筋力生成) の4によって加えられる機能に影響します。さらに、略記の三者のコンポーネントは単純な比較に、たとえば、複数のシナプス入力をよく表わす中枢神経系ニューロン運動神経細胞、筋細胞や Schwann 細胞による刺激に応じて変化するかどうか本質的な不均一性 (例えば、萌芽期の誘導、繊維のサブタイプ、形態) は明確ではないです。これらの各問題を対処するために有利なトラック、同時に、その他の個別の要素のいずれかでこのような反応と同様、1 つのシナプス要素内の多くの細胞の応答を同時に追跡することです。バス適用色素は組織に適用された後複数の細胞のタイプによってとらし、細胞内で読み込まれている色素は、視覚化するのみ使用できますのでカルシウム シグナルを測定する化学染料を使用して従来の戦略はこれら 2 つの目標を達成できません。セルの個人や小集団。ここでは、セル固有カルシウム シグナル、特定のイメージングとソフトウェア ツール5、これらの 2 つの全体的な目標の最初から、議論を測定するように設計 GECIs を発現するトランスジェニック マウスを用いた方法のまた新しいトランスジェニック ツールは、2 番目の達成を助けるでしょう。この手法はカルシウム動態や同時に複数のセル人口の遺伝子符号化光センサーを通してイベント観測可能なオブジェクトをシグナルその他の携帯電話の追跡に興味がある人の役に立つでしょう。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Myf5-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#007893</td>
			<td>Drives muscle cell expression as early as E136</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wnt1-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#003829</td>
			<td>Drives expression into all&#160; Schwann cells at E13 but not P209</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox10-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#025807</td>
			<td>Drives Schwann cell expression at older ages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditional GCaMP3 mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#029043</td>
			<td>Expresses GCaMP3 in cell-specific fashion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditional GCaMP6f mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#024105</td>
			<td>Expresses GCaMP6f in cell-specific fashion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHC (3-(N-butylethanimidoyl)-4-hydroxy-2H-chromen-2-one)</td>
			<td>Hit2Lead</td>
			<td>#5102862</td>
			<td>Blocks skeletal muscle myosin but not neurotransmission6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CF594-&#945;-BTX</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>#00007</td>
			<td>Labels acetylcholine receptor clusters at NMJ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-conotoxin GIIIb</td>
			<td>Peptides Int&#39;l</td>
			<td>#CONO20-01000</td>
			<td>Blocks Nav1.4 voltage-dependent sodium channel8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Dielectric Gel; aka Sylgard</td>
			<td>Ellswoth Adhesives</td>
			<td># Sil Dielec Gel .9KG&#160;</td>
			<td>Allows for the immobilization of the diaphragm by minutien pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins (0.1mm diameter)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>Immobilizes diaphragm onto silicone dielectric gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse FN1 upright microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MBA74100</td>
			<td>Allows staging and observation of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Fixed Microscope Platform with Manual XY Microscope Translator&#160;</td>
			<td>Autom8</td>
			<td>MXMScr</td>
			<td>Allows movement of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual micromanipulator&#160;</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>M-152</td>
			<td>Holds recording and stimulating electrodes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier&#160;</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Axoclamp 900A</td>
			<td>Allows sharp electrode intracellular electrophysiological recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode low-noise data acquisition system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Digidata 1550&#160;</td>
			<td>Allows electrophysiological data acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode data analysis system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>PCLAMP 10 Standard</td>
			<td>Performs electrophysiological data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square wave stimulator</td>
			<td>Grass</td>
			<td>S48</td>
			<td>Stimulates nerve to excite muscle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus Isolation Unit</td>
			<td>Grass</td>
			<td>PSIU6</td>
			<td>Reduces&#160; stimulation artifacts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate filaments, 1.0 mm outer diameter, 0.5mm internal diameter&#160;</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>FG-GBF100-50-15</td>
			<td>Impales and records nerve-evoked muscle potentials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate filaments, 1.5 mm outer diameter, 1.17mm internal diameter&#160;</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>BF150-117-15</td>
			<td>Lengthened and used for suction electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P-97&#160;</td>
			<td>Pulls and prepares recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1200x1200 pixel, back-illuminated cMOS camera&#160;</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>Prime 95b</td>
			<td>Sensitive camera that allows high-resolution, high-speed imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Source</td>
			<td>Lumencor</td>
			<td>Spectra X</td>
			<td>Provides illumination from LEDs for fluorescence obsevation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Infinity-corrected fluorescent water immersion objectives, W.D. 2mm&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>CFI60</td>
			<td>Provide long working distances for visualization of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Illuminator with Halogen lamp</td>
			<td>Sumita</td>
			<td>LS-DWL-N</td>
			<td>Provides illumination for brightfield observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>W-View Gemini Image Splitter&#160;</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>A12801-01</td>
			<td>Projects 1 pair of dual wavelength images separated by a dichroic to single camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-band Bandpass Filters&#160; (512/25-25 and 630/92-25)&#160;</td>
			<td>SemRock</td>
			<td>FF01-512/25-25; FF01-630/92-25</td>
			<td>Permits dual band imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>560 nm Single-Edge Dichroic Beamsplitter</td>
			<td>Sem Rock</td>
			<td>FF560-FDi01-25x36</td>
			<td>Dichroic mirror which separates beams of light to allow dual-wavelength imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging data acquisition system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NIS Elements - MQS31000</td>
			<td>Allows imaging data acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wavelength control module</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MQS41220</td>
			<td>Module for imaging data acqusiition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission splitter hardware module&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MQS41410</td>
			<td>Module for imaging data acqusiition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging data analysis system</td>
			<td>NA</td>
			<td>Volumetry 8D5, Fiji</td>
			<td>Allows analysis of fluorescence intensity and other imaging data</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo imaging of cell-specific calcium signaling at the tripartite synapse of the mouse diaphragm

電気生理学的手法による組織内の細胞の電気的活動を監視できますが、これらは通常個々 の細胞の分析に限られています。細胞のイメージングを搭載蛍光カルシウムに敏感な細胞内カルシウム (Ca2 +) 細胞質の増加は多くの場合電気的活動のため発生しますまたは、無数の他の刺激に応答して、このプロセスを監視できますので染料。 しかし、これらの染料は、組織内のすべてのセル型からとられるので全体の組織内の個々 のセル型のこの反応をイメージすることは困難です。対照的に、遺伝的コード化カルシウム指示薬 (GECIs) 個々 のセル型で表現できるので、細胞内 Ca2 +Ca2 +の全人口におけるシグナル伝達のイメージングが可能の増加への応答で蛍光を発する個々 のセルの種類。ここでは、マウス神経筋接合部に使用 GECIs GCaMP3/6 の適用、シュワン細胞の運動神経細胞、骨格筋、「ターミナル/間の三者のシナプス。古典的な前のヴィヴォティッシュの準備でこの手法の有用性を示す.光スプリッターを使用すると、我々 実行動的 Ca2 +シグナルのデュアル波長イメージングと神経筋接合部 (NMJ) の静的なラベル 2 つのセルに固有の GECI または遺伝的コード化の電圧監視に容易に適応させることができる方法で指標 (GEVI) 同時に。最後に、蛍光強度の空間マップをキャプチャするために使用されるルーチンをについて説明します。一緒に、さまざまなコンテキストで NMJ で明瞭な細胞の亜集団の生物活性を検討するこれらの光、トランスジェニック、分析技術を使用できます。

蛍光強度の変化、細胞内 Ca2 +の略記には、定義済みのセル型内での増加を介するのいくつかの例では、このアプローチの有用性を示しています。これらの結果、応答細胞の場所だけでなく、どのように多くの細胞応答とどのくらいの各セルの特定応答評価することができます、その反応の強度を提供する空間の蛍光強度マップとして表示します。刺激。たと?...

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Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

マウスの神経筋接合部で個々 のセル型の集団のイメージ カルシウムにプロトコルをご紹介します。

Ex Vivoセル固有カルシウム マウス ダイヤフラムの三者のシナプスでシグナル伝達のイメージング

The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of ...

この方法は、神経刺激に応答して筋肉やシュワン細胞におけるカルシウムシグナル伝達の役割など、神経筋分野の重要な質問に答えることができます。この技術の主な利点は、神経刺激に応答して特定の細胞タイプの活性化を画像化できることである。まず、トランスジェニックマウスを取得し、テキストプロトコルで詳述されているように遺伝子型化する。安楽死後、肝臓のすぐ下の動物全体を横切り、虹色の16>はさみで心臓と肺のすぐ上に横断的に横断する。肝臓、心臓、肺を解剖する。吸引電極に引き込まれるのに十分な長さの筋神経の長さを維持するように注意すること。さらに、横隔膜の周りの薄い隆起を除いて、リブケージと椎骨柱を取り除きます。ダイヤフラムとフレニック神経サンプルを、蛍光標識されたアルファブンガロトキシンのミリリットル当たり1マイクログラムを含むクレブスリンガー溶液を含むマイクロフュージチューブに入れる。試料を溶液中で10分間暗い中でインキュベートさせます。minutienピンを使用して、シリコーン誘電ゲルでコーティングされた6センチメートルの皿に固定し、約8ミリリットルの酸素化クレブスリンガー溶液で満たしてダイヤフラムを固定化します。皿を顕微鏡のステージに置きます。その後、隔膜に対して、1分間に8ミリリットルでより多くのクレブスリンガー溶液を30分間浸透させます。4倍の倍率で、マイクロマニピュレーターを用いて、吸引電極を左のレニック神経上に移動させる。吸引電極に取り付けられた管に接続された5ミリリットルのシリンジのバレルを引き出すことによって吸引を適用します。ブライトフィールド照明で視覚的に調べることにより、1ヘルツ刺激に応答してダイヤフラムが収縮することを確認します。もしそうでなければ、電圧ノブを段階的に回して、筋肉収縮の目視検査で検証できる上限パルスを得るように電圧を調整します。まだ目に見えない場合は、注射器で神経を吹き飛ばし、吸引を適用して再び引き込もうとします。今度は、筋肉特異的ミオシン阻害剤BHCまたは電圧ゲートナトリウムチャネルアンタゴニストのムコノトキシンを加えるために、灌流をオフにします。1 ミリリットルのクレブスリンガー溶液で DMSO で 200 ミリモルストック BHC の 4 マイクロリットルをピペット処理して BHC プレ希釈を準備します。皿からクレブスリンガー溶液の1ミリリットルを取り除きます。その後、あらかじめ希釈したBHCを皿に加えます。30分後、新鮮なクレブスリンガー溶液の灌流をさらに20〜30分間オンにします。手袋を着用し、直径1ミリメートル、内径0.4ミリメートルのホウケイ酸フィラメントガラスをマイクロピペットプーラーに配置して記録電極を準備します。ダイヤルを締めて位置にクランプし、引き手のドアを閉めます。次に、テキスト プロトコルで説明されているように、プーラーをプログラムします。胚性ダイアフラムの場合、アンプのソフトウェア制御を使用して抵抗を測定します。抵抗が60メガオーム近くにあり、古いダイアフラムの場合は10〜20メガオームであることを確認してください。次に、3つの塩化カリウムモルを記録電極に積み込みます。10倍倍の倍率で、刺激電極としてステージの反対側にある第2のマイクロマニピュレータを用いて電極を筋肉に下げる。電気生理学的データ取得ソフトウェアを使用すると、静止膜電位がゼロからマイナス65ミリボルト以下に変化するまで待ちます。1つのヘルツで刺激し、控えめなオーバーシュートを示す大きな可能性をチェックすることによって、筋肉の作用の可能性の存在を確認します。刺激アーティファクトとアクションポテンシャルを混同しないでください。20倍の倍率で、緑色の黄色の光励起の下で蛍光標識されたアルファブンガロトキシン神経筋接合部を探すことによって、筋肉の中心にエンドプレートバンドを見つける。筋肉、運動ニューロン、またはシュワン細胞のカルシウム応答を画像に青色光励起に切り替えます。この例では、GCaMP 3は筋細胞で発現している。必要に応じて、バンドパスフィルタと二重波長イメージング用の二色性シングルエッジフィルタを使用してイメージスプリッタを設定します。ルックアップテーブルバーの明るさバーを使用して実験を行い、遺伝子組み換えカルシウム指標表を発現する組織が塩化カリウムに反応してビニングをせずに20倍の倍率で飽和を示すレベルの110%に設定します。速いイベントを見逃さないように、毎秒20フレームで記録してください。吸引電極を使用してインパルスの列車を送達することにより、20〜40ヘルツの神経刺激の1〜45秒で刺激し、静的蛍光標識されたアルファブンガロトキシン神経筋接合信号と一緒に1つの細胞サブタイプで動的蛍光カルシウム応答を収集します。薬理学的アゴニストは、浴用途または灌流によって添加することもできるし、動的蛍光カルシウム応答も同様に収集することができる。望ましい結果が得られたために画像化または電気生理学的実験が終わったら、灌流ラインを通して水を浸透させ、吸引電極を通して水を2〜3回吸い込み、塩が蓄積しないようにします。出生後7日目のWnt 1 GCaMP 3匹のマウス横隔膜の腎神経刺激に対するシュワン細胞カルシウム応答の空間地図は、神経筋接合部における末端パラシナプスシュワン細胞への制限を示す。同じダイヤフラムを、蛍光標識されたαバンガロトキシンで標識した後に、神経筋接合のアセチルコリン受容体を有効に結合した。同じダイヤフラムもブライトフィールド照明の下で画像化され、神経筋接合部によって筋肉のシナプス後領域に記録電極を導いた。ここに示されているのは、個々のカルシウム過渡性の分析のために取られた色分けされた細胞または関心のある領域の空間的な境界である。mth 5 GCaMPの3つのマウスダイヤフラムの筋肉細胞カルシウム応答の空間地図は、ミオシン阻害剤BHCの存在下でのP4の3つのマウス横隔膜のマウスの横隔膜刺激を、全横隔膜筋細胞の全領域全体に応答を示す。対照的に、mu-conotoxinの存在下で同じダイヤフラムの刺激は、アセチルコリン受容体クラスター濃縮エンドプレートバンドに対応するすべての横隔膜筋細胞の内側領域における空間的に制限されたカルシウム応答を引き起こす。この手順に従って、免疫体化学や免疫ブロット法のような他の方法は、エレクトロ生理学やカルシウムイメージングによって同定された細胞の分子プロファイルは何であるかなどの追加の質問に答えるために行うことができますか?この方法は、正常な新生児マウスにおける神経刺激に対するシュワン細胞および筋肉細胞の集団応答に関する洞察を提供することができる。また、古いマウスの研究や、神経筋疾患関連タンパク質を発現するマウスの研究にも適用できる。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivoショウジョウバエにおける内分泌シグナル伝達する脳の反応を可視化するためのカルシウム イメージング

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

マウスの神経節神経節ニューロン反応のインビボカルシウムイメージングが味覚刺激に反応する

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

インビボ マウス劣オリーブにおけるカルシウムイメージング

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

In Vivo Wide-Field and Two-Photon Calcium Imaging from a Mouse Using a Large Cranial Window

In Vivo Wide-Field and Two-Photon Calcium Imaging from a Mouse Using a Large Cranial Window

インビボ 大きな頭蓋窓を用いたマウスからの広視野および2光子カルシウムイメージング

Wide-field calcium imaging from the mouse&#39;s neocortex allows one to observe cortex-wide neural activity related to various brain functions. On the ...

Two-Photon and Wide-Field Calcium Imaging in the Superior Colliculus

Calcium Imaging in Mouse Superior Colliculus

Unveiling Neural Coding and Mechanisms of Visual Processing in the Superior Colliculus (Video) | JoVE

マウス上結腸におけるカルシウムイメージング

The superior colliculus (SC), an evolutionarily conserved midbrain structure in all vertebrates, is the most sophisticated visual center before the ...

Mouse Retina OCT Fibergram Alignment with Confocal Images

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

Advancements in In Vivo and Ex Vivo Retinal Imaging for Improved Glaucoma Diagnosis and Treatment (Video) | JoVE

可視光光干渉断層撮影ファイバーグラムと同一マウス網膜の共焦点像のアライメント

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...

Evaluating Calcium Activity in Retinal Ganglion Cells Layer

Calcium Imaging In Electrically Stimulated Flat-Mounted Retinas

An Innovative Approach to Neural Electrical Stimulation Using Calcium Imaging (Video) | JoVE

電気刺激フラットマウント網膜におけるカルシウムイメージング

Retinal dystrophies are a leading cause of blindness worldwide. Extensive efforts are underway to develop advanced retinal prostheses that can bypass the ...

Monitoring Epileptiform Events in Drosophila via Calcium Imaging

Ex Vivo Calcium Imaging for Drosophila Model of Epilepsy

Insights into the Techniques and Findings of Recent Advancements in Epilepsy Research (Video) | JoVE

Ex Vivo(エクス・ビボ )てんかんのショウ ジョウバエ モデルに対するカルシウムイメージング

Epilepsy is a neurological disorder characterized by recurrent seizures, partially correlated with genetic origin, affecting over 70 million individuals ...

Implantation of the Headplate in Mouse for Calcium Imaging

Implantation of the Headplate in Mouse for Calcium Imaging  (Video) | JoVE 

カルシウムイメージングのためのマウスへのヘッドプレートの移植 

Implanting the Plug in the Mouse for Calcium Imaging

Implanting the Plug in the Mouse for Calcium Imaging (Video) | JoVE 

カルシウムイメージングのためのマウスへのプラグの埋め込み

Ex Vivoセル固有カルシウム マウス ダイヤフラムの三者のシナプスでシグナル伝達のイメージング

Ex Vivoセル固有カルシウムマウスダイヤフラムの三者のシナプスでシグナル伝達のイメージング