Name: ex vivo imaging of cell-specific calcium signaling at the tripartite synapse of the mouse diaphragm
Uploaded: 2018-10-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm at JoVE.com

Эта работа было поддержано средств от национальных институтов здравоохранения (НИЗ) GM103554 и GM110767 (T.W.G.) и национального центра по 5P20RR018751 научно-исследовательских ресурсов и национального института Генеральной медицинских наук 8P 20 GM103513 (для G.W.H.).

Животноводство и эксперименты были проведены в соответствии с национальными институтами здравоохранения руководство для ухода и использования лабораторных животных и IACUC при университете Невады.
1. Подготовка диафрагмы и диафрагмального нервов от трансгенных мышей
<o...

<ol>
	<li>Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction.">Development of the vertebrate neuromuscular junction.</a> Annual Review of Neuroscience. 22, 389-442 (1999).</li><li>Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromuscular+synaptogenesis:+coordinating+partners+with+multiple+functions.">Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions.</a> Nature Reviews Neuroscience. 15 (11), 703-718 (2014).</li><li>Fatt, P., Katz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+end-plate+potential+recorded+with+an+intracellular+electrode.">An analysis of the end-plate potential recorded with an intracellular electrode.</a> Journal of Physiology. 115 (3), 320-370 (1951).</li><li>Todd, K. J., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+modulation+of+synaptic+signalling+at+the+neuromuscular+junction.">Purinergic modulation of synaptic signalling at the neuromuscular junction.</a> Pflugers Archive. 452 (5), 608-614 (2006).</li><li>Hennig, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Genetically+Encoded+Calcium+Indicators+(GECIs)+Combined+with+Advanced+Motion+Tracking+Techniques+to+Examine+the+Behavior+of+Neurons+and+Glia+in+the+Enteric+Nervous+System+of+the+Intact+Murine+Colon.">Use of Genetically Encoded Calcium Indicators (GECIs) Combined with Advanced Motion Tracking Techniques to Examine the Behavior of Neurons and Glia in the Enteric Nervous System of the Intact Murine Colon.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 9, 436 (2015).</li><li>Heredia, D. J., Schubert, D., Maligireddy, S., Hennig, G. W., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Striated+Muscle-Specific+Myosin-Blocking+Drug+for+the+Study+of+Neuromuscular+Physiology.">A Novel Striated Muscle-Specific Myosin-Blocking Drug for the Study of Neuromuscular Physiology.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 10, 276 (2016).</li><li>Johnson, B. R., Hauptman, S. A., Bonow, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+simple+suction+electrode+for+extracellular+recording+and+stimulation.">Construction of a simple suction electrode for extracellular recording and stimulation.</a> Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 6 (1), A21-A26 (2007).</li><li>Hong, S. J., Chang, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+geographutoxin+II+(mu-conotoxin)+for+the+study+of+neuromuscular+transmission+in+mouse.">Use of geographutoxin II (mu-conotoxin) for the study of neuromuscular transmission in mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 97 (3), 934-940 (1989).</li><li>Heredia, D. J., Feng, C. Y., Hennig, G. W., Renden, R. B., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-induced+Ca2++signaling+in+perisynaptic+Schwann+cells+of+the+early+postnatal+mouse+is+mediated+by+P2Y1+receptors+and+regulates+muscle+fatigue.">Activity-induced Ca2+ signaling in perisynaptic Schwann cells of the early postnatal mouse is mediated by P2Y1 receptors and regulates muscle fatigue.</a> Elife. 7, e30839 (2018).</li><li>Cho, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GCaMP-R+Family+of+Genetically+Encoded+Ratiometric+Calcium+Indicators.">The GCaMP-R Family of Genetically Encoded Ratiometric Calcium Indicators.</a> ACS Chemical Biology. 12 (4), 1066-1074 (2017).</li></ol>

Здесь мы предлагаем некоторые примеры измерения Ca2 + ответы в определенных ячейках нетронутыми нервно-мышечной ткани, с помощью выражения ГЕЧИ мышей. Для того, чтобы успешно выполнить эти эксперименты, крайне важно, чтобы не травмировать диафрагмального нерва во время вскрытия. Ч?...

NMJ, как все синапсы, состоит из трех элементов: Пресинаптический терминал производным от нейрона, постсинаптических нейронов/эффекторных клеток, и perisynaptic глиальных клеток в1,2. Хотя основные аспекты синаптической передачи были впервые представлены на этом синапса3, многие аспекты этого процесса остается неизвестным, отчасти из-за выражение же молекул путем различных клеточных элементов этой синапса. Например рецепторы для пуриновых нуклеотидов аденина СПС и ацетилхолин (АКП), которые совместно выпущенная двигательных нейронов в позвоночных NMJ, выраженные мышцы, Шванновские клетки и двигательных нейронов, что затрудняет интерпретации любого функциональное действие, оказываемое этими веществами (например, передатчик выпуска или ответ, мышечной силы поколения)4. Кроме того хотя трехсторонний компоненты NMJ просты по сравнению с, например, нейронов в центральной нервной системе, которые часто exhibit несколько синаптических входов, ли двигательных нейронов, мышечных клеток или Шванновские клетки изменяться в ответ на стимулы на основе на их внутреннюю неоднородность (например, эмбриональных дифференцирование, волокна подтип, морфология) остается неясным. Для того, чтобы рассмотреть каждый из этих вопросов, было бы целесообразно одновременно отслеживать реакцию многих клеток в пределах одной синаптических элемента, а также трек, в то же время, такой ответ в любом из отдельных элементов. Обычные стратегии, используя химические красители для измерения сигналов кальция не могут достичь этих двух целей, потому что краска ванна прикладной занимает несколько типов клеток после применения к ткани, и внутриклеточно загружен краситель может использоваться только для визуализации отдельных лиц или небольших групп клеток. Здесь, используя трансгенных мышей, выражая GECIs предназначен для измерения кальция клеток конкретных сигнализации, вместе с конкретных изображений и программного обеспечения инструменты5, мы продемонстрировать первый из этих двух общих целей и обсудить как добавление новых Трансгенные инструменты поможет достижению второй. Эта техника будет полезно для тех, кто заинтересован в отслеживания динамики кальция или других сотовых сигнализации наблюдаемых событий через ген закодированы оптических датчиков в несколько клеточных популяций в то же время.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Myf5-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#007893</td>
			<td>Drives muscle cell expression as early as E136</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wnt1-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#003829</td>
			<td>Drives expression into all&#160; Schwann cells at E13 but not P209</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox10-Cre mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#025807</td>
			<td>Drives Schwann cell expression at older ages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditional GCaMP3 mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#029043</td>
			<td>Expresses GCaMP3 in cell-specific fashion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditional GCaMP6f mice</td>
			<td>Jax</td>
			<td>#024105</td>
			<td>Expresses GCaMP6f in cell-specific fashion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHC (3-(N-butylethanimidoyl)-4-hydroxy-2H-chromen-2-one)</td>
			<td>Hit2Lead</td>
			<td>#5102862</td>
			<td>Blocks skeletal muscle myosin but not neurotransmission6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CF594-&#945;-BTX</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>#00007</td>
			<td>Labels acetylcholine receptor clusters at NMJ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-conotoxin GIIIb</td>
			<td>Peptides Int&#39;l</td>
			<td>#CONO20-01000</td>
			<td>Blocks Nav1.4 voltage-dependent sodium channel8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Dielectric Gel; aka Sylgard</td>
			<td>Ellswoth Adhesives</td>
			<td># Sil Dielec Gel .9KG&#160;</td>
			<td>Allows for the immobilization of the diaphragm by minutien pins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien pins (0.1mm diameter)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td>Immobilizes diaphragm onto silicone dielectric gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse FN1 upright microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MBA74100</td>
			<td>Allows staging and observation of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Fixed Microscope Platform with Manual XY Microscope Translator&#160;</td>
			<td>Autom8</td>
			<td>MXMScr</td>
			<td>Allows movement of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual micromanipulator&#160;</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>M-152</td>
			<td>Holds recording and stimulating electrodes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier&#160;</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Axoclamp 900A</td>
			<td>Allows sharp electrode intracellular electrophysiological recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode low-noise data acquisition system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>Digidata 1550&#160;</td>
			<td>Allows electrophysiological data acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode data analysis system</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>PCLAMP 10 Standard</td>
			<td>Performs electrophysiological data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square wave stimulator</td>
			<td>Grass</td>
			<td>S48</td>
			<td>Stimulates nerve to excite muscle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulus Isolation Unit</td>
			<td>Grass</td>
			<td>PSIU6</td>
			<td>Reduces&#160; stimulation artifacts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate filaments, 1.0 mm outer diameter, 0.5mm internal diameter&#160;</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>FG-GBF100-50-15</td>
			<td>Impales and records nerve-evoked muscle potentials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate filaments, 1.5 mm outer diameter, 1.17mm internal diameter&#160;</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>BF150-117-15</td>
			<td>Lengthened and used for suction electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P-97&#160;</td>
			<td>Pulls and prepares recording electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1200x1200 pixel, back-illuminated cMOS camera&#160;</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>Prime 95b</td>
			<td>Sensitive camera that allows high-resolution, high-speed imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Source</td>
			<td>Lumencor</td>
			<td>Spectra X</td>
			<td>Provides illumination from LEDs for fluorescence obsevation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Infinity-corrected fluorescent water immersion objectives, W.D. 2mm&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>CFI60</td>
			<td>Provide long working distances for visualization of specimen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Illuminator with Halogen lamp</td>
			<td>Sumita</td>
			<td>LS-DWL-N</td>
			<td>Provides illumination for brightfield observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>W-View Gemini Image Splitter&#160;</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>A12801-01</td>
			<td>Projects 1 pair of dual wavelength images separated by a dichroic to single camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-band Bandpass Filters&#160; (512/25-25 and 630/92-25)&#160;</td>
			<td>SemRock</td>
			<td>FF01-512/25-25; FF01-630/92-25</td>
			<td>Permits dual band imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>560 nm Single-Edge Dichroic Beamsplitter</td>
			<td>Sem Rock</td>
			<td>FF560-FDi01-25x36</td>
			<td>Dichroic mirror which separates beams of light to allow dual-wavelength imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging data acquisition system</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NIS Elements - MQS31000</td>
			<td>Allows imaging data acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wavelength control module</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MQS41220</td>
			<td>Module for imaging data acqusiition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission splitter hardware module&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MQS41410</td>
			<td>Module for imaging data acqusiition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging data analysis system</td>
			<td>NA</td>
			<td>Volumetry 8D5, Fiji</td>
			<td>Allows analysis of fluorescence intensity and other imaging data</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo imaging of cell-specific calcium signaling at the tripartite synapse of the mouse diaphragm

Электрической активности клеток в тканях может контролироваться электрофизиологические методы, но они обычно ограничены к анализу отдельных клеток. Поскольку увеличение внутриклеточного кальция (Ca2 +) в цитозоле часто возникает из-за электрической активности, или в ответ на множество других раздражителей, этот процесс может контролироваться изображений клеток загружен с флуоресцентные кальция чувствительных красители.  Однако трудно изображение этот ответ в типе отдельной ячейки в пределах всей ткани, потому что эти красители, принимаются все типы клеток в тканях. Напротив показатели генетически закодированный кальция (GECIs) может быть выражена типа отдельной ячейки и флуоресцировать в ответ на увеличение числа внутриклеточных Ca2 +, позволяя изображений Ca2 + сигнализации в всей популяции типы отдельных клеток. Здесь мы применяем использование GECIs GCaMP3/6 к мыши нервно-Джанкшн, трехсторонний синапса между двигательных нейронов, скелетных мышц и терминал/perisynaptic Шванновские клетки. Мы продемонстрировать полезность этой техники в классическом ex vivo ткани препаратов. С помощью оптического сплиттера, мы выполняем двойной длины волны изображений Ca2 + сигналов динамической и статической метки нервно-Джанкшн (NMJ) в рамках подхода, который может быть легко адаптирована для мониторинга двух клеток конкретных ГЕЧИ или генетически закодированный напряжения показатели (GEVI) одновременно. Наконец мы обсуждаем процедуры, используемые для захвата пространственных карты интенсивности флуоресценции. Вместе эти оптические, трансгенных и аналитические методы могут быть использованы для изучения биологической активности отдельных клеток субпопуляций в NMJ в самых разнообразных контекстах.

Несколько примеров изменения интенсивности флуоресценции, посредничестве увеличивает внутриклеточную Ca2 + в пределах определенных клеток типы NMJ, показать полезности такого подхода. Эти результаты представлены в виде пространственной флуоресценции интенсивн?...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm at JoVE.com

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

Здесь мы представляем протокол к изображение кальция сигнализации в популяциях типов индивидуальных клеток на перекрестке мышиных нервно.

Ex Vivo Визуализации ячейки конкретных кальция сигнализации на трехсторонней синапса диафрагмы мыши

The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в нервно-мышечной области, такие как роль кальция сигнализации в мышцах или schwann клеток в ответ на стимуляцию нерва. Основным преимуществом этой техники является то, что можно изображение активации конкретных типов клеток в ответ на стимуляцию нервов. Для начала, получить трансгенных мышей, и генотип их, как описано в текстовом протоколе.После эвтаназии, поперечно раздел по всему животному чуть ниже печени и чуть выше сердца и легких с ножницами иридэктомии. Рассекают печень, сердце и легкие. Быть осторожным, чтобы поддерживать длину френического нерва, который достаточно долго, чтобы быть втянутым в всасывающий электрод.Далее удалите грудную клетку и позвоночник, за исключением тонкого хребта вокруг диафрагмы. Поместите диафрагму и образец френического нерва в микрофьюдж-трубку с раствором Кребс-Рингер, содержащим один микрограмм на миллилитр флуоресцентно помеченного альфа-бунгаротоксина. Разрешить образцу инкубировать в растворе в течение 10 минут в темноте.Используя минутин булавки обездвижить диафрагму, прикрепив его на шесть сантиметров блюдо, покрытое силиконовым диэлектрическим гелем и заполнены примерно восемь миллилитров кислородом Krebs-Ringer раствора. Поместите блюдо на сцену микроскопа. Затем, perfuse диафрагмы с более Krebs-Ringer раствор на восемь миллилитров в минуту в течение 30 минут.В четыре раза увеличение, с помощью микроманипулятора, переместить всасывающий электрод над левым френическим нервом. Нанесите всасывание, вытащив ствол пятими миллилитрового шприца, подключенного к трубе, которая крепится к всасывающему электроду. Убедитесь, что диафрагма контрактов в ответ на один герц стимуляции, визуально рассматривая его с Брайтфилд освещения.Если нет, отрегулируйте напряжение, поворачивая ручку напряжения постепенно для достижения надмаксимального импульса, который может быть проверен визуальным исследованием сокращения мышц. Если все еще не видно, выдуть нерв шприцем и попытаться привлечь его снова, применяя всасывания. Теперь выключите перфузию, чтобы добавить мышцы конкретных ингибитор миозин BHC или напряжение закрытого канала натрия антагонист му-конотоксин.Подготовка BHC предварительного разбавления путем трубопроводов четыре микролитров 200 миллимолярный запас BHC в DMSO в один миллилитр Кребс-Рингер раствор. Удалите из блюда один миллилитр раствора Кребс-Рингер. Затем добавьте предварительно разбавленный БХК в блюдо.Через 30 минут включите перфузию свежего раствора Кребс-Рингер еще на 20-30 минут. Надев перчатки, подготовьте записывающий электрод, поместив борозиликатное нитематическое стекло с внешним диаметром в один миллиметр и внутренним диаметром 0,4 миллиметра в шкив микропайпта. Затяните циферблаты, чтобы зажать его в положение и закрыть дверь шкив.Затем запрограммировать шкив, как описано в текстовом протоколе. Для эмбриональных диафрагм, измерить сопротивление с помощью программного обеспечения управления усилителем. Убедитесь, что сопротивление составляет около 60 мегаохм и для старых диафрагм, от 10 до 20 мегаохм.Теперь загрузите записывающий электрод тремя хлоридом толярного калия. При 10-м увеличении опустите электрод в мышцу, используя второй микроманипулятор на противоположной стороне сцены в качестве стимулирующего электрода. Использование электрофизиологического программного обеспечения для получения данных ждать, пока потенциал отдыха мембраны меняется от нуля до минус 65 милливольт или ниже.Стимулировать на одном герц и проверить наличие мышечного потенциала действий, проверяя на большой потенциал, который демонстрирует скромный превышение. Не путайте артефакт стимуляции с потенциалом действия. В 20 раз увеличение найти конец полосы пластины в центре мышцы, глядя на флуоресцентно помечены альфа bungarotoxin нервно-мышечных соединений под зеленым желтым светом возбуждения.Переключитесь на возбуждение синего света для изображения реакций кальция в мышечных, моторных нейронах или клетках Шванн. В этом примере GCaMP три выражается в мышечных клетках. При желании на настройку сплиттера изображения с помощью фильтров для прохода полосы и дихроического фильтра с одним краем для изображения двойной длины волны.Выполните эксперименты с яркостью бар на столе lookup набор до 110% от уровня, на котором генетически закодированный индикатор кальция, выражаюющий ткани экспонатов насыщения в 20 раз увеличение без binning в ответ на хлорид калия. Запись на 20 кадров в секунду, чтобы не пропустить каких-либо быстрых событий. Стимулировать с 1 до 45 секунд от 20 до 40 герц стимуляции нерва путем доставки поезд импульсов с помощью всасывающего электрода и собирать динамические флуоресцентные реакции кальция в одной клетке подтипа вместе со статической флуоресцентно помечены альфа bungarotoxin нервно-мышечного сигнала соединения.Фармакологические агонисты также могут быть добавлены путем применения ванны или перфузии и динамические реакции флуоресцентного кальция могут быть собраны таким же образом. Когда визуализация или электрофизиологические эксперименты закончены, потому что желаемые результаты были достигнуты, пронизывать воду через линии перфузии и сосать воду два-три раза через всасывающий электрод, чтобы гарантировать, что соли не строятся. Пространственная карта реакции кальция клетки Schwann к phrenic стимуляции нерва Wnt одного GCaMP 3 диафрагмы мыши на столбе натальном дне 7 показывает ограничение к клеткам schwann терминального парасинаптика на нервном мышечном соединении.Та же диафрагма была изображена после маркировки флуоресцентно помечены альфа-бунгаротоксин, который связывает, чтобы ацетилхолиновые рецепторы нервно-мышечного соединения. Та же диафрагма была также изображена под освещением Брайтфилда, чтобы направлять записывающий электрод к постсинаптической области мышцы нервно-мышечным соединением. Здесь показана пространственная демаркация цветных клеток или областей, представляющих интерес для анализа отдельных переходных кальциев.Пространственная карта реакции кальция мышечных клеток mth 5 GCaMP трех mouse diaphragm на P 4 к френической стимуляции нерва в присутствии ингибитора миозин BHC показывает реакцию повсеместно в весь регион всех клеток мышц диафрагмы. В отличие от этого, стимуляция той же диафрагмы в присутствии му-конотоксина вызывает пространственно ограниченный ответ кальция в медиальной области всех клеток мышц диафрагмы, что соответствует кластеру рецепторов ацетилхолина обогащенной конечной полосы пластины. После этой процедуры другие методы, такие как иммуно-гистохимия или иммуноблоттинг могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как, что молекулярный профиль клеток, выявленных электрофизиологии или кальция изображений?Этот метод может обеспечить понимание реакции населения клеток Шванн и мышечных клеток на стимуляцию нервов у нормальных неонатальных мышей. Он также может быть применен к изучению старых мышей или к изучению мышей, выражаюющих нервно-мышечные заболевания, связанные с белками.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Кальция изображений для визуализации мозга ответы на эндокринных сигнализации в дрозофилы

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

In vivo Кальциевая визуализация реакции ганглионных нейронов мыши на вкусовые стимулы

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Кальций Изображения в мыши Нижняя Оливковая

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

In Vivo Wide-Field and Two-Photon Calcium Imaging from a Mouse Using a Large Cranial Window

In Vivo Wide-Field and Two-Photon Calcium Imaging from a Mouse Using a Large Cranial Window

В городе Виво Широкоугольная и двухфотонная визуализация кальция с помощью мыши с помощью большого краниального окна

Wide-field calcium imaging from the mouse&#39;s neocortex allows one to observe cortex-wide neural activity related to various brain functions. On the ...

Two-Photon and Wide-Field Calcium Imaging in the Superior Colliculus

Calcium Imaging in Mouse Superior Colliculus

Unveiling Neural Coding and Mechanisms of Visual Processing in the Superior Colliculus (Video) | JoVE

Визуализация кальция в Верхнем колликулусе мышей

The superior colliculus (SC), an evolutionarily conserved midbrain structure in all vertebrates, is the most sophisticated visual center before the ...

Mouse Retina OCT Fibergram Alignment with Confocal Images

Alignment of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina

Advancements in In Vivo and Ex Vivo Retinal Imaging for Improved Glaucoma Diagnosis and Treatment (Video) | JoVE

Совмещение фиброграмм оптической когерентной томографии видимого света с конфокальными изображениями той же сетчатки мыши

In recent years, in vivo retinal imaging, which provides non-invasive, real-time, and longitudinal information about biological systems and processes, has ...

Evaluating Calcium Activity in Retinal Ganglion Cells Layer

Calcium Imaging In Electrically Stimulated Flat-Mounted Retinas

An Innovative Approach to Neural Electrical Stimulation Using Calcium Imaging (Video) | JoVE

Визуализация кальция в электрически стимулированной плоской сетчатке

Retinal dystrophies are a leading cause of blindness worldwide. Extensive efforts are underway to develop advanced retinal prostheses that can bypass the ...

Monitoring Epileptiform Events in Drosophila via Calcium Imaging

Ex Vivo Calcium Imaging for Drosophila Model of Epilepsy

Insights into the Techniques and Findings of Recent Advancements in Epilepsy Research (Video) | JoVE

Ex vivo Кальциевая визуализация для модели эпилепсии дрозофилы

Epilepsy is a neurological disorder characterized by recurrent seizures, partially correlated with genetic origin, affecting over 70 million individuals ...

Implantation of the Headplate in Mouse for Calcium Imaging

Implantation of the Headplate in Mouse for Calcium Imaging  (Video) | JoVE 

Имплантация головной пластины мыши для визуализации кальция 

Implanting the Plug in the Mouse for Calcium Imaging

Implanting the Plug in the Mouse for Calcium Imaging (Video) | JoVE 

Имплантация штекера в мышь для визуализации кальция