Name: high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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우리는 친절 하 게 우리 일부 예비 실험에 대 한 그의 멀티 모드 검색 플랫폼을 사용 하 수 있도록 박사 제시 Kwiek (오하이오 주립 대학)를 인정 합니다. 이 문서에서 보고 하는 연구는 알레르기 국립 연구소와 전염병의 스테파니 Seveau에 보너스 번호 RO1AI107250에서 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다.

1입니다. 준비
<ol><li>셀 도금 참고: 인간 자 궁 경부 상피 세포, 헬러와 히스톤 2B-GFP (H2B-GFP), 표현 헬러가이 프로토콜에서 사용 되었다 그러나이 분석 결과 다른 포유류 세포19에 적용할 수 있습니다.<ol>
<li>0.25% Trypsin EDTA의 2 mL와 함께 셀을 세척 하 여 75 cm는2 셀은 문화 플라스 크에서 부착 세포를 분리 합니다. 사용 된 트립 신을 2 mL 신선한 트립 신-EDTA 0.25%의 바꿉니다.<...

이 분석 결과 막 셀 인구 수준 높은 처리량 용량 resealing의 효율성을 측정 합니다. 그것은 사용 될 수 있다 세포 구성 요소 또는 막 복구에 영향을 미칠 수 있는 약물 라이브러리에 대 한 화면으로. 기술된 분석 결과 96 잘 접시 형식을 사용 하지만 높은 처리량에 대 한 384-잘 접시를 적응 시킬 수 있다. 이 분석 결과의 장점은 과도 한 셀 셀 분리, 고정, 또는 형광 라벨 후 고정 등 처리에 대 한 필요 없?...

포유류 세포 원형질 막 무결성의 손실의 결과로 기계, 삼 투, 및 생 화 확 적인 스트레스를 받습니다. 신속 하 고 효율적인 resealing 없이 손상 된 세포는 신속 하 게 프로그램 또는 회 저 성 죽음에 굴복 하 고. 1960 년대 이후, 노력 과정 resealing 플라즈마 멤브레인을 이해 하는 엄청난 결과 장애와 관련 된 동기가 있다. 실제로, 사지 띠 근 위축 증, 당뇨병, 및 Chediak-히가시 증후군 같은 질병 돌연변이 유전자 인코딩 dysferlin, 고급 glycation 엔드 제품의 생산에서 및 결함 결핍 플라즈마 막 복구에 연결 되었습니다. lysosomal 밀매 레 귤 레이 터 CHS1, 각각1,2,,34,,56. 그러나, 날짜, 막의 우리의 이해를 resealing은 여전히 제한7입니다. 초기 연구는 세포 외 캘리포니아2 + 원형질 막 손상 된8,,910의 유입에 의해 시작 막 resealing 증명 하고있다. 그 이후, 여러 비 배타적이 캘리포니아2 +-종속 메커니즘 셀 봉인에 제안 되었습니다. 패치 가설 상처에 근접, 세포내 소포는 패치11,12,,1314로 손상 된 원형질 막 서로와 퓨즈를 제안 합니다. 두 번째 모델 제안 그 칼슘 의존 exocytosis 상처에서 리소좀의 사이트 해제 하는 lysosomal 효소 산 sphingomyelinase, 원형질 막의 외부 전단에서 세 라마 이드 sphingomyelin 변환. 지질 구성에서이 갑자기 변경 결과 손상 된 지역15,,1617의 세 라마 이드 기반 endocytosis. 마지막으로, 세 번째 제안 된 메커니즘 endosomal 정렬 복잡 한 전송 (ESCRT) 플라즈마 막18에서 떨어져 새싹 외부와 접한 vesicles의 형성을 촉진 하는 데 필요한에 대 한 역할을 포함 한다. 단백질의 제한 된 집합에 대해서만 이러한 모델에서 확인 된 그리고 그들의 기계를 더 해명 합니다.
여기 우리가 대책 resealing 효율 부착 포유류 세포에서 원형질 막 손상 받게 재조합 listeriolysin O (LLO)19에 의해 중재 높은 처리량 분석 결과 설명 합니다. LLO facultative 세포내 병원 체 Listeria monocytogenes20,,2122 분 비는 기 공 형성 독 (PFT) 이며 MACPF/CDC에 속한다 (막 공격 복합물, perforin, 그리고 콜레스테롤-종속 cytolysin) superfamily입니다. MACPF는 포유류 기 공 형성 단백질 반면 CDCs 세균성 독 소 주로 면역 방어에 관련 된 그들의 병원 성 생활23홍보 호스트 세포 손상 그람 양성 병원 균에 의해 생산. CDCs 수용 성 단위체로 합성 됩니다 또는 콜레스테롤을 바인딩할 이합체 플라즈마 멤브레인에 최대 50 subunits의 복잡 한 prepore에 oligomerize. Prepore 복잡 한 지질 bilayer, β 배럴 공 직경24,25,,262730-50 nm에 걸쳐 형성에서 β-가닥을 삽입할 다음 재정렬 합니다.  이러한 큰 모 공 세포;와 이온 및 작은 세포 구성 성분의 용 허용 하지만, 일부 연구는 작은 크기의 숨 구멍 형성된28,,2930도 제안 했다. CDCs, 가운데 LLO 높은 처리량 분석31,32에 도움이 되는 돌이킬 수 없는 pH 및 온도 의존 집계를 포함 한 독특한 속성을 표시 합니다. LLO 4 ˚C, 셀, 있지만 복잡 한 기 공 형성 수 없습니다 그것의 바인딩을 허용 온도에서 세포 배양에 추가 될 수 있습니다. 기 공 형성의 개시 다음 허용 양식 올리고 하 막의 비행기에 있는 독 소 분자의 효율적인 확산에 대 한 구조적 리 모델링에 대 한 기 공 생성에 관여 하는 37 ˚C를 온도 올려서 동기화 수 있습니다. 따라서, 온도, 세포 손상의 운동에 스위치에 따라 원형질 막에 바인딩된 독 소의 양을에 달라 집니다. 중요 한 것은, 녹는 LLO (원형질 막에 바인딩되지 않은) 신속 하 고 irreversibly 집계 온도 37 ˚C, 언바운드 독 소 분자를 멀리 세척 하는 필요를 완화 하 고 시간이 지남에 막 손상의 범위를 제한에 도달 하면. 마지막으로, LLO 콜레스테롤에 바인딩하고 콜레스테롤이 풍부한 세포 막에 있는 숨 구멍을 형성,이 분석 결과 이므로 다양 한 포유류 세포에 순종. LLO 호스트 셀 기 공 형성을 통해 주로 신호에 영향을 주는 다는 것을 명심 하는 것이 중요 하다는 기 공-독립 셀에 몇 가지 예외 신호33,,3435,36 발생할 수 있습니다 ,,3738,39. 따라서, 그것은 수 없습니다 그 LLO 활동 막 복구의 과정에 영향을 미칠 수 있습니다 신호를 제외.
이 분석 결과 직접 셀 한 셀 impermeant 형광 색소 (예를 들어, propidium 요오드 화물) 수 동적으로 상처 입은 세포를 입력 하 고 높은 형광 일단 핵 산으로 연결 되는의 설립을 측정 하 여 상처의 정도 평가 . 따라서, 허용 셀 부상의 실시간 분석 실험에 걸쳐 세포 배양에는 형광 색소를 유지할 수 있습니다. 핵 산 바인딩 염료의 형광 강도 독 소의 농도 증가 하 고, 독 소의 특정된 농도 대 한 것입니다 시간이 지남에 모든 숨 구멍 형성 되 고 세포는 완전히 수리 될 때까지 또는 증가 채도 도달할 때까지. 세포 외 캘리포니아2 + 막 숨 구멍을 통해 유입 resealing에 대 한 사인 qua 비 이벤트입니다. 따라서, resealing 효율 명시 될 수 있다 직접 하지 셀 부상 포함 된 캘리포니아2 + (수리 허용 조건)는 캘리포니아2 +에서 부상 하는 문화 매체에 비교 하 여-자유로운 매체 (수리 제한적인 조건). 핵 산 바인딩 염료의 형광 강도 각 음에 셀 농도에 직접 비례 하기 때문에 모든 우물에 같은 농도에서 종자 세포에 중요 하다. 그것은 또한 전후에 셀 분리 발생 하지 않습니다, 부동,으로 집계 셀 데이터 해석 복잡 하 게 만들 수 있습니다 하는 형광 읽기 애매 한 수 있도록 분석 결과 셀에 각 잘 열거 하는 것이 중요. 셀, 열거할 지역화 핵 히스톤 2B-GFP (H2B-GFP)를 표현 하는 세포는이 분석 결과에서 사용 되었다. 온도 제어, 멀티 모드 microplate 리더 결합 형광 강렬의 급속 한, 높은 처리량 측정 (를 사용 하 여 96 또는 384-잘 플레이트 형식) 37 ° c.에 살아있는 세포의 현미경 이미징 후자는 휴대폰 번호를 열거 하 고 뚜렷한 세포 인구의 최종 형성 관찰을 사용할 수 있습니다.
궁극적으로,이 분석 결과 사용자 호스트 분자에 대 한 심사에 의해 막 복구 메커니즘의 복잡성의 그들의 지식을 확장 하는 기능을 제공 한다 또는 수리 하는 것 추가 화합물 멤브레인을 제어할 수 있습니다. 다음 프로토콜 LLO에 노출 하는 셀의 resealing 효율성을 측정 하는 실험 단계를 설명 하 고 특정된 약물 또는 resealing 효율성에 세포 치료의 효과 평가.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="610">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">i3x</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">MiniMax 300 Imaging cytometer</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">5024062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">TO-PRO-3</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Propidium Iodide</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa H2B-GFP</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SCC117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td align="left" height="63" style="height:63px;width:216px;">96-well Corning flat bottom black polystyrene tissue culture treated plate</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; balanced Salts</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H4891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">EGTA</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ISC BioExpress</td>
			<td style="width:119px;">0732-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">HEPES</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">D-(+)-Glucose, HybriMax</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G5146-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells

그들의 생리 적인 환경에서 포유류 세포 원형질 막 손상 기계 및 생 화 확 적인 스트레스를 자주 받게 됩니다. 이러한 손해에 대응, 복잡 한 분자 기계는 빠르게 원형질 막의 장벽 기능 복원 및 세포 생존을 유지 다시 봉인. 이 분야에 있는 연구의 60 년에 불구 하 고 우리는 여전히 기계를 resealing 셀에 대 한 철저 한 이해 부족. 세포질 구성 요소를 식별 하는 목적으로 그 제어 플라즈마 멤브레인 resealing 또는 resealing, 향상 시킬 수 있는 약물 개발 했습니다 플라즈마 멤브레인 resealing 포유류 세포에 있는 효율성을 측정 하는 형광 기반의 높은 처리량 분석 결과 microplates에서 경작. 원형질 막 손상에 대 한 모델 시스템으로 서 세포 세균 기 공 형성 독 소 listeriolysin O (LLO), 큰 30 ~ 50 nm 직경 배치할 포함 하는 콜레스테롤에 숨 구멍을 형성 하에 노출 되는 세포 막. 명시 및 살아있는 세포의 형광 현미경 이미지와 함께 신속 하 고 민감한 spectrofluorometric 측정 온도 제어 멀티 모드 microplate 리더를 사용 하 여 수 있습니다. 부상 및 효율 resealing 셀의 계산을 허용 세포 인구 수준 resealing 막의 정도 반영 하는 막 impermeant 핵 산 바인딩 형광 색소에 의해 방출 되는 형광 강도의 운동 분석 . 형광 현미경 영상 constitutively 핵 단백질 히스톤 2B 잠재적인 변화 그들의 수에 대 한 계정에 미 판의 각 우물에서의 형광 키메라를 표현 하 고 결국 세포의 열거 허용 뚜렷한 세포 인구의 식별입니다. 이 높은 처리량 분석 결과 호스트 유전자에 대 한 심사를 통해 막 복구 메커니즘에 대 한 우리의 이해를 확장 하는 것으로 예상 된다 또는 것 추가 하는 강력한 도구는 제어 플라즈마 멤브레인 resealing 화합물 이다.

셀 계산 정확도: 헬러 세포 막 복구 메커니즘을 탐구 모델 포유류 세포 선으로 자주 사용 됩니다. 세포 인구 수준에서 막 복구를 평가할 때는 적절 한 데이터 해석에 대 한 모든 우물에 같은 농도에서 판 세포에 중요 하다. 그것은 또한 웰 스에서 핸드폰 번호는 해당 시험의 시간에 확인 해야 합니다. 헬러 세포 constitutively 히스톤 2B GFP (H2B-GFP) 융합을 표현 하는이 분석 결과?...

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High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

여기는 살아있는 세포에서 fluorometric 및 이미징 분석 통해 효율 resealing 플라즈마 멤브레인을 측정 하는 높은 처리량 형광 기반 분석 결과 설명 합니다. 이 분석 결과 약 또는 포유류 세포에서 원형질 막 resealing 규제 대상 유전자 검사에 대 한 사용할 수 있습니다.

포유류 세포에서 효율 Resealing 원형질 막의 높은 처리량 측정

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...

이 분석은 플라즈마 막 생물학 분야의 주요 질문을 해결하고 얼마나 효율적으로 손상된 세포가 플라즈마 막을 재밀봉 할 수 있는지 확립하기 위해 개발되었습니다. 이 기술은 고처리량 용량에서 플라즈마 멤브레인 재밀봉의 효율성을 측정하고 플라즈마 멤브레인 재밀봉을 중재하는 특정 단백질 및 해당 경로를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 먼저 성장 중간 현탁액의 밀리리터 당 5번째 HeLa 세포에 20밀리리터를 멸균 파이펫 분지에 추가하고 10 밀리리터 세로지컬 파이펫을 사용하여 세포를 철저히 혼합합니다.다음으로, 멀티채널 마이크로파이프를 사용하여 96웰의 평평한 투명한 바닥, 블랙 폴리스티렌 조직 배양판에서 트리플리케이트에서 잘 100 마이크로리터의 세포를 시드한다. 동질적인 세포 분포는 모든 실험 조건 간의 비교가 동등한 세포 수를 필요로 하기 때문에 성공적인 실험의 핵심이라는 것을 기억하십시오. 가습된 세포 배양 배양인인 배양기에서 섭씨 37도 및 CO2 5%에서 24시간 후, 플레이트 판독기를 섭씨 37도로 예열하고 광학 구성을 단색으로 조정하고, 형광에 대한 판독 모드, 및 판독형을 운동으로 설정하였다.파장 설정에서 9나노미터 발산과 15나노미터 방출 대역을 선택합니다. 오오드리움을 이용한 아세약의 경우, 각각 535나노미터 및 617나노미터로 발산 및 방출 파장을 설정한다. 플레이트 유형에서 플레이트 형식에 대해 96웰을 선택하고 검정벽 클리어 하단 플레이트에 해당하는 사전 설정 플레이트 구성을 선택합니다.읽기 영역 아래에서 운동 분석 전반에 걸쳐 분석될 우물을 강조표시합니다. PMT 및 광학 에서 읽기 당 깜박임을 6으로 미리 설정하고 아래에서 읽을 수있는 상자를 선택합니다. 타이밍에 따라 총 런타임에 30분 0초를 입력하여 30분 운동 분석서를 입력하고 간격에 대해 0시간 5분 0초를 입력합니다.설정 정보에서 지정된 설정을 확인하고 확인을 클릭합니다. 그런 다음 읽기를 클릭하여 운동 실행을 시작합니다. 설정 모드 내에서 이미징 매개 변수를 설정하려면 광학 구성에 대한 MiniMax, 읽기 모드 이미징 및 읽기 유형에 대한 끝점을 설정합니다. 파장 하에서, 실험 흥분 및 방출 파장에 대응하는 전송된 빛 및 적절한 형광 상자를 선택합니다.플레이트 유형과 읽기 영역을 방금 시연한 대로 설정하고 웰 영역 설정 아래에 이미지를 이미지할 웰 내의 사이트 수를 설정합니다. GFP의 이미지 수집 설정에서 이미지를 이미지당 노출 시간 당 20밀리초로 전체 이미지를 잘 이미지하도록 장치를 설정합니다. 전송된 빛의 경우 8밀리초 노출 시간으로 각 웰의 중심의 단일 이미지를 획득합니다.프로피듐 요오드의 경우 20밀리초 노출 시간으로 각 우물의 중앙에 단일 이미지를 획득하십시오. 그런 다음 설정 정보의 설정을 확인하고 확인을 클릭하고 이미징을 시작하려면 읽기를 클릭합니다. 수리 허용 조건에 대한 고처리량 형광 계 분석기를 설정하려면, 200 마이크로리터로 세포를 두 번 씻어 37도 M1 배지의 마이크로리터를 잘 세척하고 두 번째 세척후 30 마이크로 모라 프로피듐 요오디드로 보충 된 신선한 37도 M1 배지의 마이크로 리터 를 추가하십시오.수리 제한 조건의 경우, 37도 의 마이크로 리터 200 마이크로 리터로 세포를 한 번 세척하여 잘 5 밀리모어 EGTA로 보충한 다음 M2 배지의 200 마이크로 리터만 으로 한 번 세척하십시오. 두 번째 세척을 폐기한 후, 100 마이크로리터를 추가하여 37도 의 신선한 섭씨 M2 배지를 잘 30 마이크로몰라 프로피듐 요오드로 보충합니다. 그런 다음 방금 시연된 대로 전송된 빛, GFP 및 PI 아래에서 플레이트를 이미지합니다.플레이트가 이미지화되는 동안, 얼음에 96 잘 둥근 바닥 폴리 프로필렌 마이크로 플레이트를 배치하고 단지 이전 플레이트에 대해 입증 된 것처럼 플레이트를 구성. 수리 허용 조건의 경우, 잘 당 60 마이크로 몰라 프로디듐 요오드로 보충 얼음 차가운 M1 매체의 100 마이크로 리터를 추가하고 잘 당 4X 리스테리오리신 O 또는 없이 얼음 차가운 M1의 100 마이크로 리터를 추가합니다. 수리 제한 조건의 경우, 잘 당 60 마이크로 몰라 프로디듐 요오드로 보충 얼음 차가운 M2 배지 의 100 마이크로 리터를 추가하고 잘 당 4X 리스테리오리신 O 또는 없이 얼음 차가운 M2의 100 마이크로 리터를 추가합니다.플레이트 1개가 얼음과 플레이트 2에 있을 때 운동 분석이 시작되기 약 5분 전에 얼음에 대한 적절한 실험 농도로 리스테리오리신 O를 준비하는 것이 필수적이다. 첫 번째 플레이트가 이미징이 완료되면 즉시 접시를 얼음 위에 알루미늄 호일 시트로 옮기습니다. 5분 후, 제1 냉각판에 해당하는 양상수로 두 번째 플레이트의 각 우물에서 100마이크로리터를 옮기고, 독소의 적절한 분포를 위해 혼합하지 않고 부피를 배출하기 전에 각각의 용액의 반월상연상 아래에 파이펫 팁을 삽입한다.독소가 1분 동안 숙주 셀에 결합하고 분광성계 모드를 사용하여 운동 후 분석법에 대한 플레이트 판독기로 즉시 이전할 수 있도록 합니다. 운동 분석의 끝에서, 즉시 사전 운동 이미징에 대해 입증 된 바와 같이 플레이트 이미지의 운동 후 이미징을 취득. 핵 형광에 기초하여 세포 수를 결정하기 위해, 마이크로 플레이트 셀 열거 소프트웨어에서 설정하에, 재분석 을 선택하고, 이미지 분석 설정에서, 개체를 찾기위한 파장으로 541을 사용하여 이산 개체 분석을 선택합니다.찾기 개체 옵션 내에서 이미지 찾기 방법에 대한 그리기를 사용하고 핵을 선택하고 적용을 클릭한 다음 확인을 클릭하고 읽기를 클릭하여 셀 계산 알고리즘을 시작합니다. GFP 발현은 리스테리오리신 O 처리의 존재 또는 부재에서 프로피듐 요오드 강도 측정을 방해하지 않는다. 프로피듐 요오드의 발현은 전운동 분석에 비해 운동 후 이미징 분석에서 HeLA H2B-GFP 세포에서 GFP 형광 강도의 증가에 의해 입증된 바와 같이 GFP 형광을 통해 출혈할 수 있다.중요한 그러나, 이러한 크로스오버는 GFP 형광의 증가에 영향을 받지 않는 핵의 열거에 관여하는 세분화 과정이 영향을 받지 않기 때문에 세포 계수에 영향을 미치지 않는다. listeriolysin O의 부재에서, 플라즈마 막 무결성은 세포외 칼슘의 존재 또는 부재에서 일정한 남아, 칼슘 보충 매체의 존재에 리스테리오리신 O 치료는 프로피듐 요오드 형광 강도의 꾸준한 증가를 초래하는 동안. 그러나 세포외 칼슘이 없는 경우, 장재밀봉의 부재를 반영하여 프로피듐 요오드 형광이 상당히 가파르게 증가합니다.대안적으로, 카보시아닌 핵산 결합염은 먼 빨간색의 형광을 함유하여 프로피듐 요오드로 대체되어 GFP와의 스펙트럼 중첩을 최소화할 수 있다. 또한, 먼 적색 염료에 대한 더 큰 흥분 계수는 소음 비율에 더 높은 신호와 수리 허용 및 수리 제한 조건 사이의 더 나은 해상도를 나타낸다. 이 절차를 시도하는 동안, 실험의 날에 시약 준비의 모든 당신을 준비하기 때문에, 실험의 하루 전에 튜브의 모든 라벨을 하는 것이 좋습니다.이 절차에 따라, 이미지 세포측정과 같은 다른 방법은 모공 형성 독소가 모든 세포를 균일하게 손상시키거나 일부 세포가 다른 세포보다 더 민감하게 손상되는 등의 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 다른 세포 모형의 수리 효율성에 공공 크기의 효력을 탐구하기 위하여 전염병 및 혈장 막 복구의 필드에 있는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

포유류의 상피 세포에 박테리아의 접착 시험 관내 분석

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

연구

면역학 및 감염병학

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Microplate 응고 분석을 사용하여 인간의 플라즈마에 반영 V 활동의 측정

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

T 세포 양적 높은 처리량 단일 세포 세포 독성 분석

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

세포 외 DNA 릴리스의 높은 처리량 측정 및 인간 호중구의 양적 NET 형성<em&gt; 체외</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험<em&gt; 브루셀라</em&gt; HeLa 세포의 감염

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

높은 처리량 유전자 태그에<em&gt; 트리파노소마 (Trypanosoma) brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

신장 면역 세포의 신뢰성 및 고효율 추출

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

투과성 막 삽입 기반 감염 시스템의 구현은 포유 동물 숙주 세포에서 분비 세균 독소의 효과를 연구하기

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

나노 PCR에 의한 동물 표본의 호흡기 병원체의 높은 처리량 검출

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...