Name: high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells at JoVE.com

Vi erkjenner Dr. Jesse Kwiek (Ohio State University) for vennlig tillater oss å bruke hans Multi-mode oppdagelsen plattform for noen foreløpige eksperimenter. Forskning i denne artikkelen ble støttet av National Institute of Allergy og smittsomme sykdommer i National Institutes of Health prisen nummer RO1AI107250 til Stephanie Seveau. Innholdet er ansvar forfattere og representerer ikke nødvendigvis den offisielle synet til National Institutes of Health.

1. forberedelse
<ol><li>Cellen Plating Merk: Human cervical epitelceller, jakten og HeLa uttrykke Histone 2B-GFP (H2B-GFP), ble brukt i denne protokollen, men denne analysen kan tilpasses til andre pattedyrceller19.<ol>
<li>Koble tilhenger celler fra en 75 cm2 celle kultur kolbe ved å vaske cellene med 2 mL Trypsin-EDTA 0,25%. Erstatte den brukte trypsin med 2 mL frisk trypsin-EDTA 0,25%.</li>
		<li>Inkuber cellene på 37 grader i 5 min til cellene har avrundede og løsrevet fra f...

Denne analysen måler effektiviteten av membran resealing på befolkningsnivå cellen med høy gjennomstrømming kapasitet. Den kan brukes til skjermen for cellulære komponenter eller narkotika biblioteker som kan påvirke membran reparasjon. Beskrevet analysen brukt en 96-brønns plate format, men det kan tilpasses til 384-vel plater for høyere gjennomstrømming. En fordel med denne analysen er dens evne til å få fluorescens målinger av tilhenger levende celler i sanntid uten overdreven cellen behandling som cellen...

Pattedyrceller er underlagt mekanisk osmotisk og biokjemiske stress, noe som resulterer i tap av plasma membranen integritet. Uten rask og effektiv resealing, vil skadede celler raskt bukke til programmert eller nekrose død. Siden 1960, har innsats for å forstå plasma membranen resealing prosessen vært motivert av den ødeleggende konsekvenser forbundet med sin dysfunksjoner. Faktisk har sykdommer som lem-belte muskeldystrofi, diabetes og Chediak-Higashi syndrom vært knyttet til mangelfull plasma membranen reparasjon mutasjoner i genet koding dysferlin, produksjon av avanserte glycation end produkter og feil i lysosomale menneskehandel regulator CHS1, henholdsvis1,2,3,4,5,6. Men hittil, vår forståelse av membran er resealing fortsatt begrenset7. Første studier har vist at membran resealing startes av tilstrømningen av ekstracellulære Ca2 + gjennom skadet plasma membranen8,9,10. Siden da har flere ikke-gjensidig utelukkende Ca2 +-avhengige mekanismer har vært foreslått å reseal celler. Oppdateringen hypotesen foreslår at i nærhet til såret, intracellulær blemmer sikring med hverandre og skadet plasma membranen som en oppdatering11,12,13,14. En andre modellen foreslår at kalsium-avhengige exocytosis lysosomer på såret området utgivelser lysosomale enzym syre sphingomyelinase, som konverterer sphingomyelin til ceramide i ytre heftet av plasma membranen. Denne plutselige endringen i lipid komposisjon resulterer i ceramide-drevet endocytose skadet område15,16,17. Til slutt, den tredje foreslåtte mekanismen innebærer en rolle for endosomal sorteringen komplekse kreves for transport (ESCRT) å fremme dannelsen av utover mot blemmer som bud av plasma membranen18. Bare et begrenset antall proteiner ble identifisert i disse modellene, og deres maskiner må bli ytterligere belyst.
Her beskriver vi en høy gjennomstrømming analysen som måler plasma membranen resealing effektivitet i tilhenger pattedyrceller utsatt for skade formidlet av rekombinant listeriolysin O (LLO)19. LLO er en pore-forming gift (PFT) utskilles av facultative intracellulær patogen Listeria monocytogenes20,21,22 og tilhører MACPF/CDC (membran komplekset, perforin, og kolesterol-avhengige cytolysin) gruppe. MACPF er pattedyr pore-forming proteiner involvert i immunforsvar, mens CDCs er bakteriell giftstoffer hovedsakelig produsert av Gram-positive patogener som skader vertsceller å fremme deres patogene livsstil23. CDCs er synthesized som vannløselige monomerer eller dimers som binder til kolesterol presentere i plasma membranen og oligomerize til et prepore kompleks av opptil 50 underenheter. Prepore komplekse ordner deretter sette β-tråder over lipid bilayer, danner en β fat pore over 30-50 nm i diameter24,25,26,27.  Disse store porer tillater flukser ioner og små cellulære komponenter av cellen; men har noen studier foreslått at porene i mindre størrelser er også dannet28,29,30. Blant CDCs viser LLO unike egenskaper inkludert irreversibel pH - og temperaturen-avhengige aggregering, som bidrar til høy gjennomstrømming analyser31,32. LLO kan legges til celle kultur medium på 4 grader, en temperatur ettergivende til sin binding til celler, men ikke til dannelsen av pore komplekse. Initiering av pore formasjon kan deretter synkroniseres ved å heve temperaturen å 37 grader, slik at for effektiv spredningen av gift molekyler i flyet av membranen til skjemaet oligomers og conformational remodeling involvert i pore generasjon. Derfor avhenger etter bryteren i temperatur, kinetisk celle skade av mengden giftstoffer bundet til plasma membranen. Viktigere, løselig LLO (ikke bundet til plasma membranen) raskt og irreversibelt samler når temperaturen når 37 grader, noe som reduserer behovet for å vaske bort ubundet gift molekyler og begrenser omfanget av membran skader over tid. Til slutt, fordi LLO binder til kolesterol og danner porene i kolesterol-rik membraner, denne analysen er mottakelig for en rekke pattedyrceller. Det er viktig å huske at LLO påvirker verten celle signalisering hovedsakelig via pore formasjon, med noen få unntak i hvilken pore-uavhengig celle signalisering oppstå33,34,35,36 ,37,38,39. Derfor kan det ikke være utelukket at LLO signalering aktiviteter kan påvirker membranen reparasjon.
Denne analysen vurderer direkte omfanget av cellen såret ved å måle inkorporering av en celle impermeant fluorochrome (f.eks, propidium iodide) som passivt går inn sårede celler og blir svært fluorescerende når det knytter nukleinsyrer . Derfor kan fluorochrome vedlikeholdes i celle kultur medium hele eksperimentet slik at sanntid analyser av cellen såret. Fluorescens intensiteten av nukleinsyre bindende fargestoff vil øke med konsentrasjonen av gift, og for en gitt konsentrasjon av gift, vil øke over tid til alle porene er dannet, og cellene er fullt reparert eller metning er nådd. Tilstrømningen av ekstracellulære Ca2 + gjennom membranen porene er et sine qua non begivenhet for resealing. Derfor resealing effektiviteten kan bevitnes indirekte ved å sammenligne celle såret i kultur medium inneholder Ca2 + (reparasjon ettergivende tilstand) til såret i en Ca2 +-fri medium (reparasjon restriktive tilstand). Fordi fluorescens intensiteten av nukleinsyre bindende fargestoff er direkte proporsjonal med cellen konsentrasjonen i hver brønn, er det viktig å frø celler på samme konsentrasjonen i alle brønnene. Det er også viktig å nummerere celler i hver brønn før og etter analysen slik at celle avdeling ikke oppstår, som flytende, aggregert celler kan skjule fluorescens målinger som kan komplisere data tolkning. Hvis du vil nummerere celler, ble celler som uttrykker kjernefysiske lokalisert histone 2B-GFP (H2B-GFP) brukt i denne analysen. Temperatur-kontrollert, multi-modus, microplate lesere kombinerer rask, høy gjennomstrømming målinger (med en 96 eller 384-vel plate format) av fluorescens intensiteter med mikroskopi avbilding av levende celler på 37 ° C. Sistnevnte kan brukes til å nummerere celle nummer og observere endelige dannelsen av ulike celle populasjoner.
Til slutt denne analysen gir brukere muligheten til å utvide sin kunnskap om kompleksiteten i membranen reparasjonsmekanismene av screening for verten molekyler eller exogenously lagt forbindelser som kan styre membran reparere. Det følgende beskriver eksperimentelle trinnene for å måle resealing effektiviteten av celler som er utsatt for LLO og evaluere effekten av et gitt stoff eller cellular behandling på resealing effektivitet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="610">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">i3x</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">MiniMax 300 Imaging cytometer</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">5024062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">TO-PRO-3</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Propidium Iodide</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa H2B-GFP</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SCC117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td align="left" height="63" style="height:63px;width:216px;">96-well Corning flat bottom black polystyrene tissue culture treated plate</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; balanced Salts</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H4891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">EGTA</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ISC BioExpress</td>
			<td style="width:119px;">0732-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">HEPES</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">D-(+)-Glucose, HybriMax</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G5146-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells

I fysiologiske miljøet, er pattedyrceller ofte utsatt for mekaniske og biokjemiske påkjenninger som resultere i plasma membranen skader. Svar på disse skadene forsegle komplekse molekylær machineries raskt plasma membranen for å gjenopprette sin barriere funksjon og beholde celle overlevelse. Til tross for 60 år med forskning i dette feltet mangler vi fortsatt en grundig forståelse av cellen resealing maskiner. Med mål om å identifisere cellulære komponenter som kontroll plasma membranen resealing eller stoffer som kan forbedre resealing, har vi utviklet en fluorescens-baserte høy gjennomstrømming analysen som måler plasma membranen resealing effektivitet i pattedyrceller kultivert i microplates. Som et modellsystem for plasma membranen skade, celler blir utsatt for den bakterielle pore-forming gift listeriolysin O (LLO), som danner store 30-50 nm diameter proteinaceous porene i kolesterol inneholder membraner. Bruk av en temperaturkontrollert Multi-mode microplate leser gir raskere og følsom spectrofluorometric mål i kombinasjon med brightfield og fluorescens mikroskopi avbilding av levende celler. Kinetisk analyse fluorescens intensitet slippes ut av en membran impermeant nukleinsyre bindende fluorochrome reflekterer graden av membran såret og resealing på befolkningsnivå celle, slik at beregningen av cellen resealing effektivitet . Fluorescens mikroskopi bildebehandling åpner for opplisting av celler som constitutively uttrykke et fluorescerende chimera av kjernefysiske protein histone 2B, i hver brønn av microplate å ta hensyn til mulige variasjoner i antall og tillater eventuell Identifikasjon av ulike celle populasjoner. Denne høy gjennomstrømming analysen er et kraftig verktøy vil utvide vår forståelse av membran reparasjonsmekanismene via screening for verten gener eller exogenously legges forbindelser som kontroll plasma membranen resealing.

Cellen teller nøyaktighet: HeLa celler brukes ofte som en modell pattedyr cellen linje for å utforske membran reparasjonsmekanismene. Når vurdere membran reparasjon på befolkningsnivå cellen, er det viktig å plate celler på samme konsentrasjonen i alle brønner for riktig data tolkning. Det er også viktig å kontrollere på tidspunktet for analysen at cellen tallene er tilsvarende over brønner. HeLa celler som uttrykker constitutively histone 2B del GFP (H2B-GFP) ble introdusert ...

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells at JoVE.com

High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

Her beskriver vi en høy gjennomstrømming fluorescens-baserte analysen som måler plasma membranen resealing effektivitet gjennom fluorometric og tenkelig analyser i levende celler. Denne analysen kan brukes for screening narkotika eller målet gener som regulerer plasma membranen resealing i pattedyrceller.

Høy gjennomstrømming-måling av Plasma membran Resealing effektivitet i pattedyrceller

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...

Denne analysen ble utviklet for å løse viktige spørsmål innen plasmamembranbiologi og for å fastslå hvor effektivt skadede celler kan reseal deres plasmamembran. Denne teknikken kan brukes til å måle effektiviteten av plasmamembranen ettersegling i en høy gjennomstrømningskapasitet og for å identifisere spesifikke proteiner og tilsvarende veier som medierer plasmamembranen ettersegling. Begynn med å legge til 20 milliliter av en 2,5 ganger 10 til de femte HeLa-cellene per milliliter vekstmediumsuspensjon i et sterilt pipettebasseng og bruk en 10 milliliter serologisk pipette til å blande cellene grundig.Deretter bruker du en flerkanals mikropipette til å frø 100 mikroliter celler per brønn i triplikate i en 96-brønns flat, klar bunn, svart polystyrenvevskultur behandlet plate. Husk at en homogen cellefordeling er nøkkelen til et vellykket eksperiment, da sammenligninger mellom alle eksperimentelle forhold krever tilsvarende celletellinger. Etter 24 timer i den fuktede cellekulturinkubatoren ved 37 grader Celsius og 5% CO2, førvarme plateleseren til 37 grader Celsius og sett den optiske konfigurasjonen til monokromator, lesemodus til fluorescens og lesetypen til kinetisk.Under bølgelengdeinnstillingene velger du en ni nanometer eksitasjon og en 15 nanometer utslippsbåndpass. For analyser ved hjelp av propidiumjodid, sett eksitasjons- og utslippsbølgelengdene til henholdsvis 535 nanometer og 617 nanometer. Under platetype velger du 96-brønner for plateformatet, og velger en forhåndsinnstilt platekonfigurasjon som tilsvarer en svart vegg klar bunnplate.Under leseområdet, markere brønnene som vil bli analysert gjennom kinetisk analyse. Under PMT og optikk forhåndsinnstiller du blitsene per leses til seks og merker av i boksen for lesing fra bunnen. Under timing angir du null timer 30 minutter og null sekunder inn i den totale kjøretiden for en 30 minutters kinetisk analyse og angir null timer fem minutter og null sekunder for intervallet.Bekreft de angitte innstillingene i innstillingsinformasjonen, og klikk OK. Klikk deretter lese for å starte kinetisk kjøre. Hvis du vil angi bildeparametrene i innstillingsmodus, angir du MiniMax for den optiske konfigurasjonen, bildebehandlingen for lesemodus og endepunktet for lesetypen. Under bølgelengder velger du overført lys og de aktuelle fluorescensboksene som tilsvarer de eksperimentelle eksitasjons- og utslippsbølgelengdene.Still inn platetypen og leseområdet som nettopp demonstrert, og under brønnområdeinnstillingen angir du antall nettsteder i en brønn som skal avbildes. Under innstillingene for bildeanskaffelse for GFP setter du enheten til å bilde hele brønnen med en eksponeringstid på 20 millisekunder per bilde. For overført lys, få et enkelt bilde av midten av hver brønn med en åtte millisekund eksponeringstid.For propidiumjodid, få et enkelt bilde i midten av hver brønn med en 20 millisekund eksponeringstid. Bekreft deretter innstillingene i innstillingsinformasjonen og klikk OK og les for å starte bildet. For å sette opp en høy gjennomstrømningsfluorescensbasert analyse for reparasjonspermissive forhold, vask cellene to ganger med 200 mikroliter på 37 grader Celsius M1 medium per brønn og tilsett 100 mikroliter frisk 37 grader Celsius M1 medium supplert med 30 mikromospropidiumjodidiumjodid etter å ha kastet den andre vasken.For reparasjon restriktive forhold, vaske cellene en gang med 200 mikroliter på 37 grader Celsius M2 medium supplert med fem millimolar EGTA per brønn etterfulgt av en vask med 200 mikroliter M2 medium alene. Etter å ha kastet den andre vasken, tilsett 100 mikroliter frisk 37 grader Celsius M2 medium supplert med 30 mikromolarpropidiumjodid per brønn. Deretter bilde platen under overført lys, GFP, og PI som nettopp demonstrert.Mens platen blir avbildet, plasser en 96 godt rund bunnmikroplate i polypropylen på isen og konfigurer platen som vist for den forrige platen. For reparasjonspermissive forhold, tilsett 100 mikroliter iskalde M1 medium supplert med 60 mikromolarpropidiumjodid per brønn etterfulgt av tillegg av 100 mikroliter iskald m1 med eller uten 4X listeriolysin O per brønn. For reparasjons restriktive forhold, tilsett 100 mikroliter iskalde M2 medium supplert med 60 mikromolar propidiumjodid per brønn etterfulgt av tillegg av 100 mikroliter iskalde M2 med eller uten 4X listeriolysin O per brønn.Det er viktig å forberede listeriolysin O ved riktig eksperimentell konsentrasjon på is omtrent fem minutter før starten av den kinetiske analysen når plate en er på is og plate to blir forberedt. Når den første platen er ferdig med bildebehandling, umiddelbart overføre platen på et ark med aluminiumsfolie på is. Etter fem minutter overfører du 100 mikroliter fra hver brønn av den andre platen til riktig tilsvarende brønn i den første avkjølte platen, og setter inn pipettespissene under menisken av løsningen i hver brønn før du kaster ut volumet uten å blande for riktig fordeling av toksinet.La toksinet binde seg til vertscellene i ett minutt og overfør umiddelbart den første platen til plateleseren for den postkinetiske analysen ved hjelp av spektrfluorometermodus. På slutten av den kinetiske analysen får du umiddelbart en post-kinetisk bildebehandling av platebildet som demonstrert for den pre-kinetiske bildebehandlingen. Hvis du vil fastslå celleantallet basert på kjernefysisk fluorescens, velger du diskret objektanalyse ved hjelp av 541 som bølgelengde for å finne objekter i innstillingene for mikroplateceller under innstillinger.I alternativet søk etter objekter bruker du tegnemetoden for å finne bilder, velger kjerner og klikker bruk, og deretter klikker du OK og leser for å starte celletellingsalgoritmen. GFP-uttrykk forstyrrer ikke propidiumjodidintensitetsmålinger i nærvær eller fravær av listeriolysin O-behandling. Uttrykket for propidiumjodid kan blø gjennom GFP fluorescens som det fremgår av en økning i GFP fluorescensintensiteten i HeLA H2B-GFP-celler i post-kinetisk bildeanalyse sammenlignet med den pre-kinetiske analysen.Viktigere, dette crossover påvirker ikke celletelling, som segmenteringsprosessen involvert i opplisting av kjernene er upåvirket av en økning i GFP fluorescens. I fravær av listeriolysin O forblir plasmamembranintegriteten konstant i nærvær eller fravær av ekstracellulær kalsium, mens listeriolysin O-behandling i nærvær av kalsiumsupplert medium resulterer i en jevn økning i propidiumjodidfluorescensintensitet. I fravær av ekstracellulær kalsium er det imidlertid en betydelig brattere økning i propidiumjodidfluorescens, noe som reflekterer fraværet av membran resealing.Alternativt kan en karboocyaninkjernesyrebindende fargestoff med fluorescens i det fjerne røde erstattes for propidiumjodid for å minimere spektral overlapping med GFP. I tillegg viser den større eksitasjonskoeffisienten for det langt røde fargestoffet et høyere signal-til-støy-forhold og en bedre oppløsning mellom reparasjonspermissive og reparere restriktive forhold. Mens du prøver denne prosedyren, anbefales det å merke alle rørene en dag før eksperimentet, da dette vil forberede deg på alt reagenspreparatet på eksperimentdagen.Etter denne prosedyren kan andre metoder som bildecytometri utføres for å svare på flere spørsmål, for eksempel skader en pore forming toksin alle celler jevnt eller er noen celler mer utsatt enn andre. Etter utviklingen har denne teknikken banet vei for forskere innen smittsom sykdom og plasmamembranreparasjon for å utforske effekten av porestørrelse på reparasjonseffektiviteten til forskjellige celletyper.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-throughput Detection Method for influensavirus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Måling av Faktor V aktivitet i Human Plasma Ved hjelp av en Microplate koagulasjon Assay

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Kvantitativ Høy gjennomstrømming encellede Cytotoksisitet analysen for T celler

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

Høy gjennomstrømning Måling av ekstracellulært DNA Slipp og kvantitative NET-formasjonen i Human Neutrophils<em&gt; In Vitro</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Mikroskopi-baserte analyser for High-throughput screening av Host faktorer involvert i<em&gt; Brucella</em&gt; Infeksjon av HeLa-celler

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Høy throughput Gene Tagging i<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Pålitelig og høy effektivitet Utvinning av nyre immunceller

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

Implementering av en gjennomtrengelig membran Insert-baserte infeksjon System for å studere effekter av utskilt toksiner på Pattedyrvertsceller

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Høy throughput Påvisning av respiratoriske patogener i dyr eksemplarer av nanoskala PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...