Name: high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Reconocemos el Dr. Jesse Kwiek (The Ohio State University) para que amablemente nos permite utilizar su plataforma de detección de varios modos de funcionamiento para algunos experimentos preliminares. En este artículo de investigación fue apoyado por el Instituto Nacional de alergias y enfermedades infecciosas de los institutos nacionales de salud con el número de concesión RO1AI107250 a Stephanie Seveau. El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representan necesariamente las opiniones oficiales de los institutos nacionales de salud.

1. preparación
<ol><li>Galjanoplastia de la célula Nota: Humanas células epiteliales cervicales, HeLa y HeLa expresando histona 2B-GFP (GFP-H2B), fueron utilizadas en el presente Protocolo, pero este análisis pueden ser adaptado a otras células de mamífero19.<ol>
<li>Separar las células adherentes de un frasco de cultivo celular 75 cm2 , lavar las células con 2 mL de tripsina-EDTA 0.25%. Reemplazar la tripsina usada con 2 mL de tripsina-EDTA fresco 0.25%.</li>
		<li>Incube ...

Este ensayo mide la eficiencia de cierre de membrana a nivel de población celular con capacidad de alto rendimiento. Puede ser utilizado para detectar componentes celulares o las bibliotecas de drogas que pueden afectar la reparación de la membrana. El ensayo descrito utiliza un formato de placa de 96 pocillos, pero puede ser adaptado para placas de 384 pocillos para un mayor rendimiento. Una ventaja de este ensayo es su capacidad para obtener medidas de fluorescencia de las células vivas adherente en tiempo real sin ...

Células de mamífero están sujetos a estrés mecánico, osmótico y bioquímico, resultando en la pérdida de la integridad de la membrana plasmática. Sin cierre rápido y eficiente, las células dañadas sucumbirían rápidamente a la muerte programada o necrótica. Desde la década de 1960, esfuerzos por entender la membrana plasmática resellado proceso han sido motivados por las devastadoras consecuencias asociadas con sus disfunciones. De hecho, enfermedades como miembro-rodea Distrofia Muscular, diabetes, síndrome de Chediak-Higashi se han ligado a membrana del plasma deficiente reparación debido a mutaciones en el gene codificación dysferlin, producción de productos finales de glicación avanzada o defectos en el regulador de tráfico lisosomal gen CHS1, respectivamente1,2,3,4,5,6. Sin embargo, hasta la fecha, nuestra comprensión de la membrana de cierre es todavía limitado7. Estudios iniciales han demostrado que la membrana resellado se inicia por la afluencia de extracelular Ca2 + a través de la membrana plasmática dañada8,9,10. Desde entonces, varios no-excluyentes Ca2 +-dependiente de mecanismos han sido propuestos para sellar las células. La hipótesis de parche propone que cerca de la herida, vesículas intracelulares se fusionan unos con otros y la membrana de plasma dañada para actuar como un parche11,12,13,14. Un segundo modelo propone que exocitosis dependiente de calcio de lisosomas en la herida sitio lanza la esfingomielinasa ácida lysosomal de la enzima, que convierte la esfingomielina a ceramida en el prospecto externo de la membrana plasmática. Este repentino cambio en la composición de lípido produce endocitosis ceramida-conducido de la región dañada15,16,17. Por último, el tercer mecanismo propuesto consiste en un papel para la endosomal clasificación compleja necesaria para que el transporte (TRASVESTIS) para promover la formación de vesículas de exteriores que brote fuera de la membrana plasmática18. Sólo un conjunto limitado de proteínas fue identificado en estos modelos, y su maquinaria debe ser aclarado aún más.
Aquí describimos un análisis de alto rendimiento que medidas de la membrana plasmática resellado eficacia en células de mamífero adherentes sujeto a daño mediadas por recombinante listeriolysin O (LLO)19. LLO es una toxina formadora de poros (PFT) secretada por el patógeno intracelular facultativo Listeria monocytogenes20,21,22 y pertenece a MACPF/CDC (complejo de ataque a membrana, perforin, y Superfamilia cytolysin dependiente de colesterol). MACPF son mamífero poro-formando las proteínas implicadas en las defensas inmunitarias, que son las toxinas bacterianas principalmente producción por patógenos gram-positivos que dañan las células del huésped para promover sus estilos de vida patógenos23. CDC se sintetiza como monómeros solubles en agua o dímeros que se unen al colesterol presentan en la membrana plasmática y oligomerize en un prepore complejo de subunidades hasta 50. El complejo del prepore luego reorganiza para insertar β-filamentos a través de la bicapa lipídica, formando un poro barril β que se extiende por 30-50 nm de diámetro24,25,26,27.  Estos poros grandes permiten flujos de iones y componentes celulares pequeños dentro y fuera de la célula; sin embargo, algunos estudios han propuesto que los poros de tamaños más pequeños son también formado28,29,30. Entre la CDC, LLO muestra características únicas incluyendo la agregación irreversible de dependiente de pH y temperatura, que es propicia para el análisis de alto rendimiento31,32. LLO se puede Agregar al medio de cultivo de células a 4 ° c, una temperatura permisiva para su unión a las células, pero no a la formación de lo complejos del poro. Inicio de formación de poro se puede sincronizar luego por aumento de la temperatura a 37 ° c, permitiendo para la eficiente difusión de las moléculas de toxina en el plano de la membrana a oligómeros de forma y para la remodelación conformacionales implicados en la generación de poro. Por lo tanto, después el interruptor de temperatura, la cinética de daño celular depende de la cantidad de toxina a la membrana plasmática. Lo importante, LLO soluble (no limitado a la membrana plasmática) rápidamente e irreversiblemente agregados cuando la temperatura alcance 37 ° c, que alivia la necesidad de eliminar las moléculas de la toxina no unida y limita la extensión del daño de la membrana con el tiempo. Por último, porque LLO se une al colesterol y forma poros en las membranas ricas en colesterol, este ensayo es sensible a una amplia gama de células de mamíferos. Es importante tener en cuenta que LLO afecta a la célula huésped señalización principalmente a través de formación de poro, con algunas excepciones en que celda independiente del poro de señalización puede ocurrir33,34,35,36 ,37,38,39. Por lo tanto, no puede ser excluido que LLO señalización actividades pueden influir en el proceso de reparación de la membrana.
Este análisis evalúan directamente el grado de herir la célula mediante la medición de la incorporación de una célula impermeant fluorocromo (p. ej., yoduro de propidio) que entra en las células heridas pasivo y se convierte en altamente fluorescente cuando se asocia a ácidos nucleicos . Por lo tanto, se puede mantener el fluorocromo en el medio de cultivo celular durante todo el experimento, permitiendo análisis en tiempo real de células herir. La intensidad de la fluorescencia del tinte de unión a ácidos nucleicos aumentará con la concentración de la toxina y, para una determinada concentración de toxina, se incrementará con el tiempo hasta que se forman todos los poros y las células se reparan completamente o hasta que se alcanza la saturación. La afluencia de extracelular Ca2 + a través de los poros de la membrana es un evento de la condición sine qua non para volver a sellar. Por lo tanto, la eficacia de la mismo-resellado puede ser evidenciada indirectamente comparando células heridas en medio de cultivo con Ca2 + (condición permisiva de reparación) para herir en un Ca2 +-medio libre (condición restrictiva de reparación). Debido a la intensidad de la fluorescencia del tinte de unión a ácidos nucleicos es directamente proporcional a la concentración de células en cada pozo, es importante para las células de la semilla en la misma concentración en todos los pocillos. También es importante enumerar las células en cada pozo antes y después del ensayo para asegurar que la separación de la célula no ocurre, como flotando, agregadas células pueden ocultar lecturas de fluorescencia que pueden complicar la interpretación de los datos. Para enumerar las células, las células que expresan las histonas nucleares localizados 2B-GFP (GFP-H2B) fueron utilizadas en este ensayo. Control de temperatura, varios modos de funcionamiento, los lectores de microplacas combinan medidas rápidas, alto rendimiento (utilizando un formato de 96 o 384 pocillos de la placa) de las intensidades de fluorescencia con imagen de microscopía de células vivas a 37 ° C. Este último puede utilizarse para enumerar el número de células y observar la posible formación de poblaciones celulares distintas.
En definitiva, este ensayo proporciona a los usuarios la capacidad de ampliar su conocimiento de la complejidad de los mecanismos de reparación de la membrana mediante la detección de las moléculas del anfitrión o exógeno agregados compuestos que pueden controlar la membrana de reparación. El siguiente protocolo se describen los pasos experimentales para medir la eficiencia mismo-resellado de las células expuestas a LLO y evaluar los efectos de un determinado medicamento o tratamiento celular en eficiencia mismo-resellado.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="610">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">i3x</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">MiniMax 300 Imaging cytometer</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">5024062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">TO-PRO-3</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Propidium Iodide</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">HeLa H2B-GFP</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SCC117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsin-EDTA 0.25%</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td align="left" height="63" style="height:63px;width:216px;">96-well Corning flat bottom black polystyrene tissue culture treated plate</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; balanced Salts</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H4891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">EGTA</td>
			<td align="left" style="width:108px;">ISC BioExpress</td>
			<td style="width:119px;">0732-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td align="left" height="42" style="height:42px;width:216px;">HEPES</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:216px;">D-(+)-Glucose, HybriMax</td>
			<td align="left" style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G5146-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput measurement of plasma membrane resealing efficiency in mammalian cells

En su entorno fisiológico, células de mamíferos a menudo son sometidas a tensiones mecánicas y bioquímicas que resultan en daño de la membrana plasmática. En respuesta a estos daños, maquinarias moleculares complejas rápidamente volver a cerrar herméticamente la membrana plasmática para recuperar su función de barrera y mantener la supervivencia celular. A pesar de 60 años de investigación en este campo, todavía no tenemos un conocimiento profundo de la célula resellado maquinaria. Con el objetivo de identificar los componentes celulares cierre de membrana del plasma de control o fármacos que pueden mejorar el servicio, hemos desarrollado un ensayo de alto rendimiento basado en la fluorescencia que mide la membrana plasmática resellado eficacia en células de mamíferos cultivadas en microplacas. Como sistema modelo para el daño de la membrana plasmática, las células se exponen a la bacterianas formadoras de poro toxina listeriolysin O (LLO), que forma grandes 30-50 nm de diámetro proteínico poros en colesterol membranas. El uso de un lector de microplacas de varios modos de funcionamiento con control de temperatura permite mediciones spectrofluorometric rápido y sensible en combinación con brightfield y de imágenes de microscopía de fluorescencia de las células vivas. Análisis cinético de la intensidad de fluorescencia emitida por un fluorocromo membrana de unión a ácidos nucleicos impermeant reflejan el grado de membrana heridos y el cierre a nivel de la población de células, lo que permite el cálculo de la celda resellado eficiencia . Imágenes de microscopía de fluorescencia permite la enumeración de las células, que constitutivamente expresan una quimera fluorescente de la nuclear de la proteína histona 2B, en cada pocillo de la microplaca para tener en cuenta posibles variaciones en su número y permite la eventual identificación de poblaciones celulares distintas. Este ensayo de alto rendimiento es una poderosa herramienta pretende ampliar nuestra comprensión de los mecanismos de reparación de la membrana mediante proyección de genes host o exógeno agregado compuestos eso membrana del plasma de control resellado.

Precisión de conteo celular: células HeLa se utilizan con frecuencia como una línea de células de mamífero modelo para explorar los mecanismos de reparación de la membrana. Al evaluar la reparación de la membrana a nivel de población de la célula, es importante a las células de la placa en la misma concentración en todos los pocillos para interpretación de datos adecuado. También es importante verificar en el momento de la prueba de que el número de células es equivalente a...

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High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

Aquí describimos un análisis basado en la fluorescencia de alto rendimiento que mide la membrana plasmática resellado eficiencia mediante análisis fluorométrico y proyección de imagen en células vivas. Este ensayo puede utilizarse para la detección de drogas o genes diana que regulan el cierre de membrana plasmática en células de mamíferos.

Medida de alto rendimiento de membrana plasmática resellado eficacia en células de mamíferos

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...

Este ensayo fue desarrollado para abordar cuestiones clave en el campo de la biología de la membrana plasmática y para establecer cómo las células dañadas pueden volver a sellar su membrana plasmática. Esta técnica se puede utilizar para medir la eficiencia del resaculo de membrana plasmática en una capacidad de alto rendimiento e identificar proteínas específicas y las vías correspondientes que median el resaector de membrana plasmática. Comience agregando 20 mililitros de una 2,5 veces 10 a las quintas células de HeLa por mililitro de suspensión media de crecimiento en una cuenca de pipeta estéril y utilice una pipeta serológica de 10 mililitros para mezclar a fondo las células.A continuación, utilice una micropipeta multicanal para sembrar 100 microlitros de células por pozo en triplicado en una placa tratada de cultivo de tejido de poliestireno negro de 96 pocillos. Recuerde que una distribución celular homogénea es clave para un experimento exitoso, ya que las comparaciones entre todas las condiciones experimentales requieren recuentos de células equivalentes. Después de 24 horas en la incubadora de cultivo celular humidificado a 37 grados Celsius y 5%CO2, precalienta el lector de placas a 37 grados Celsius y establece la configuración óptica en monocromador, el modo de lectura a fluorescencia y el tipo de lectura en cinético.En la configuración de longitud de onda, seleccione una excitación de nueve nanómetros y un paso de banda de emisión de 15 nanómetros. Para ensayos que utilicen yoduro de propidio, establezca las longitudes de onda de excitación y emisión en 535 nanómetros y 617 nanómetros, respectivamente. En Tipo de placa, seleccione 96-wells para el formato de placa y seleccione una configuración de placa preestablecida correspondiente a una placa inferior transparente de pared negra.En el área de lectura, resalte los pozos que se analizarán a lo largo del ensayo cinético. En PMT y óptica, preestablece los destellos por lectura a seis y marque la casilla para leer desde abajo. En el tiempo, introduzca cero horas 30 minutos y cero segundos en el tiempo total de ejecución para un ensayo cinético de 30 minutos e introduzca cero horas cinco minutos y cero segundos para el intervalo.Confirme la configuración especificada en la información de configuración y haga clic en Aceptar. A continuación, haga clic en Leer para iniciar la ejecución cinética. Para establecer los parámetros de imagen dentro del modo de configuración, establezca MiniMax para la configuración óptica, la creación de imágenes para el modo de lectura y el punto final para el tipo de lectura. En longitudes de onda, seleccione la luz transmitida y las cajas de fluorescencia apropiadas correspondientes a las longitudes de onda experimentales de excitación y emisión.Establezca el tipo de placa y el área de lectura como se acaba de demostrar y en la configuración del área de pozo, establezca el número de sitios dentro de un pozo para ser creados. En la configuración de adquisición de imágenes para GFP, configure el dispositivo para que cree una imagen de todo el pozo con un tiempo de exposición de 20 milisegundos por imagen. Para la luz transmitida, adquiera una sola imagen del centro de cada pozo con un tiempo de exposición de ocho milisegundos.Para el yoduro de propidio, adquiera una sola imagen en el centro de cada pozo con un tiempo de exposición de 20 milisegundos. A continuación, confirme la configuración en la información de configuración y haga clic en Aceptar y lea para iniciar la imagen. Para configurar un ensayo basado en fluorescencia de alto rendimiento para las condiciones permisivas de reparación, lave las células dos veces con 200 microlitros de 37 grados Celsius M1 medio por pozo y agregue 100 microlitros de medio M1 de 37 grados Celsius fresco complementado con 30 micromolares de yoduro de propidium después de desechar el segundo lavado.Para condiciones restrictivas de reparación, lave las células una vez con 200 microlitros de 37 grados Celsius M2 medio complementados con cinco EGTA milimétricas por pozo seguido de un lavado con 200 microlitros de M2 medio solo. Después de desechar el segundo lavado, añadir 100 microlitros de medio fresco de 37 grados Celsius M2 complementado con 30 micromolar propidium yoduro per well. A continuación, imagine la placa bajo la luz transmitida, GFP y PI como se acaba de demostrar.Mientras se está imagenndo la placa, coloque una microplaca de polipropileno de fondo redondo de 96 pozos sobre hielo y configure la placa como se acaba de demostrar para la placa anterior. Para condiciones permisivas de reparación, añadir 100 microlitros de hielo frío M1 medio complementado con 60 micromolar propidium yoduro per bien seguido de la adición de 100 microlitros de hielo frío M1 con o sin 4X listeriolysin O per well. Para condiciones restrictivas de reparación, añadir 100 microlitros de medio M2 helado complementado con 60 micromolares proppidium yoduro per well seguido de la adición de 100 microlitros de hielo frío M2 con o sin 4X listeriolysin O per well.Es imperativo preparar la listeriolysin O a la concentración experimental adecuada sobre hielo aproximadamente cinco minutos antes del inicio del ensayo cinético cuando la placa uno está sobre hielo y se está preparando la placa dos. Cuando la primera placa haya terminado de hacer la toma de imágenes, transfiera inmediatamente la placa a una lámina de aluminio sobre hielo. Después de cinco minutos, transfiera 100 microlitros de cada pozo de la segunda placa al pozo correspondiente apropiado en la primera placa enfriada, insertando las puntas de la pipeta por debajo del menisco de solución en cada pozo antes de expulsar el volumen sin mezclar para una distribución adecuada de la toxina.Permita que la toxina se adhie a las células del huésped durante un minuto y transfiera inmediatamente la primera placa al lector de placas para el ensayo postcinético utilizando el modo espectrofluorómetro. Al final del ensayo cinético, adquiera inmediatamente una imagen post-cinética de la imagen de la placa como se demuestra para la imagen precinética. Para determinar el recuento de celdas en función de la fluorescencia nuclear, en el software de enumeración de celdas de microplacas en la configuración, seleccione el renálisis y, en la configuración del análisis de imágenes, seleccione el análisis de objetos discretos utilizando 541 como longitud de onda para encontrar objetos.Dentro de la opción Buscar objetos, utilice el método de búsqueda de dibujos en imágenes, seleccione núcleos y haga clic en Aplicar, luego haga clic en Aceptar y lea para iniciar el algoritmo de recuento de celdas. La expresión de GFP no interfiere con las mediciones de intensidad de yoduro propidium en presencia o ausencia de tratamiento con listeriolysin O. La expresión de yoduro de propidio puede sangrar a través de la fluorescencia de GFP como lo demuestra un aumento de la intensidad de la fluorescencia de GFP en las células H2B-GFP de HeLA en el ensayo de imágenes postcinéticas en comparación con el análisis precinético.Sin embargo, es importante destacar que este cruce no afecta al recuento de células, ya que el proceso de segmentación implicado en la enumeración de los núcleos no se ve afectado por un aumento de la fluorescencia GFP. En ausencia de listeriolysin O, la integridad de la membrana plasmática permanece constante en presencia o ausencia de calcio extracelular, mientras que el tratamiento con listeriolysin O en presencia de medio suplementado con calcio da como resultado un aumento constante de la intensidad de fluorescencia de yoduro propidio. En ausencia de calcio extracelular sin embargo, hay un aumento significativamente más pronunciado en la fluorescencia de yoduro propidium, lo que refleja la ausencia de resedimiento de membrana.Alternativamente, un tinte de unión de ácido nucleico de cara nucociana con fluorescencia en el rojo lejano se puede sustituir por yoduro de propidio para minimizar la superposición espectral con la GFP. Además, el coeficiente de excitación más grande para el tinte rojo lejano exhibe una mayor relación señal-ruido y una mejor resolución entre las condiciones de reparación permisiva y restrictiva de la reparación. Al intentar este procedimiento, se recomienda etiquetar todos los tubos un día antes del experimento, ya que esto le preparará para toda la preparación del reactivo el día del experimento.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la citometría de imagen para responder preguntas adicionales, como si un poro forma toxina dañe todas las células uniformemente o que algunas células sean más susceptibles que otras. Después de su desarrollo, esta técnica ha allanado el camino para que los investigadores en los campos de la enfermedad infecciosa y la reparación de la membrana plasmática exploren los efectos del tamaño de los poros en la eficiencia de reparación de diferentes tipos de células.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

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Ensayo in vitro de la adhesión bacteriana a las células epiteliales de mamíferos

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Investigación

Inmunología e Infección

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

De alto rendimiento Método de detección de virus de la influenza

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Medición de actividad de factor V en el plasma humano usando un ensayo de coagulación de microplacas

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Cuantitativo de alto rendimiento de una sola célula de ensayo de citotoxicidad de las células T

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

Alto Rendimiento de medición de ADN extracelular de salida y la formación neta cuantitativa en neutrófilos humanos<em&gt; In Vitro</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Los ensayos basados ​​en la microscopía para la selección de alto rendimiento de los factores del huésped que participan en<em&gt; Brucella</em&gt; Infección de células Hela

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

De Alto Rendimiento de genes de marcado en las<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Fiable y de alta eficiencia de extracción de riñón de células inmunes

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

Implementación de un Sistema de infección basada en la inserción de membrana permeable para estudiar los efectos de toxinas secretadas bacterianas en células huésped de mamífero

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High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

La detección de alto rendimiento de los patógenos respiratorios de especímenes animales por PCR nanoescala

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...