Name: determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

أشكر المؤلف المساهمة في الأعمال الأولية التي هي الأساس لهذا المنشور. بفضل أيتور أغيري، جنفييف هاء ريان وايريكا ل. للحصول على تعليمات إعداد المخطوطة. وبفضل جيسيكا لي سورا والذقن أوستن للمساعدة التقنية مع المخطوطة. وأيد H.M.H. يونيس كينيدي شرايفر الوطني معهد صحة الطفل والتنمية البشرية من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة رقم R00HD084759.

تم الموافقة على "رعاية الحيوان المؤسسية" و "اللجنة استخدام من جامعة ولاية ميشيغان" كافة الأساليب الموصوفة هنا وتجري وفقا للدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.
1. تحديد بداية البلوغ
<ol><li>اتبع المبادئ التوجيهية المؤسسية للملابس، كحد أدنى، ومن الضروري ارتداء معطف مختبر...

<ol>
	<li>Schneider, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+balance+and+reproduction.">Energy balance and reproduction.</a> Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).</li><li>Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+photoperiod+on+hormones,+behavior,+and+immune+function.">Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function.</a> Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, (2016).</li><li>Kauffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+differentiation+and+the+Kiss1+system:+Hormonal+and+developmental+considerations.">Sexual differentiation and the Kiss1 system: Hormonal and developmental considerations.</a> Peptides. , (2009).</li><li>Bronson, F. H., Dagg, C. P., Snell, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reproduction. , (1966).</li><li>Chehab, F. F., Mounzih, K., Lu, R., Lim, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+onset+of+reproductive+function+in+normal+female+mice+treated+with+leptin.">Early onset of reproductive function in normal female mice treated with leptin.</a> Science. , (1997).</li><li>Yoshimura, S., Yamaguchi, H., Konno, K., Ohsawa, N., Noguchi, S., Chisaka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+Preputial+Separation+is+a+Useful+Tool+for+Evaluating+Endocrine+Active+Chemicals.">Observation of Preputial Separation is a Useful Tool for Evaluating Endocrine Active Chemicals.</a> J Toxicologic Pathology. 18, 141-157 (2005).</li><li>Ahima, R. S., Dushay, J., Flier, S. N., Prabakaran, D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+accelerates+the+onset+of+puberty+in+normal+female+mice.">Leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 99 (3), 391-395 (1997).</li><li>Bohlen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+short-day+photoperiod+delays+the+timing+of+puberty+in+female+mice+via+changes+in+the+kisspeptin+system.">A short-day photoperiod delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system.</a> Frontiers in Endocrinology. 9 (FEB), 1-9 (2018).</li><li>Shahab, M., Mastronardi, C., Seminara, S. B., Crowley, W. F., Ojeda, S. R., Plant, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+hypothalamic+GPR54+signaling:+A+potential+mechanism+for+initiation+of+puberty+in+primates.">Increased hypothalamic GPR54 signaling: A potential mechanism for initiation of puberty in primates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2005).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, 5-9 (2016).</li><li>Navarro, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neurokinin+B+in+the+Control+of+Female+Puberty+and+Its+Modulation+by+Metabolic+Status.">Role of Neurokinin B in the Control of Female Puberty and Its Modulation by Metabolic Status.</a> Journal of Neuroscience. 32 (7), 2388-2397 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Tamrazian, A., Xie, H., P&#233;rez-Mill&#225;n, M. I., Kauffman, A. S., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+deletion+of+ventral+anterior+homeobox+(Vax1)+causes+subfertility+in+mice.">Heterozygous deletion of ventral anterior homeobox (Vax1) causes subfertility in mice.</a> Endocrinology. 155 (10), 4043-4053 (2014).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kisspeptin+Receptor+GPR54+Is+Required+for+Sexual+Differentiation+of+the+Brain+and+Behavior.">The Kisspeptin Receptor GPR54 Is Required for Sexual Differentiation of the Brain and Behavior.</a> Journal of Neuroscience. 27 (33), 8826-8835 (2007).</li><li>Teles, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+report:+A+GPR54-activating+mutation+in+a+patient+with+central+precocious+puberty.">Brief report: A GPR54-activating mutation in a patient with central precocious puberty.</a> New England Journal of Medicine. , (2008).</li><li>Korenbrot, C. C., Huhtaniemi, I. T., Weiner, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preputial+separation+as+an+external+sign+of+pubertal+development+in+the+male+rat.">Preputial separation as an external sign of pubertal development in the male rat.</a> Biology of reproduction. , (1977).</li><li>Gaytan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+precise+dating+of+female+puberty+in+laboratory+rodents:+The+puberty+ovarian+maturation+score+(Pub-Score).">Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: The puberty ovarian maturation score (Pub-Score).</a> Scientific Reports. 7 (March), 1-11 (2017).</li><li>Caligioni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 1-11 (2010).</li><li>Mayer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+completion+of+puberty+in+female+mice+depend+on+estrogen+receptor+-signaling+in+kisspeptin+neurons.">Timing and completion of puberty in female mice depend on estrogen receptor -signaling in kisspeptin neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (52), 22693-22698 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Vaginal+Lavage,+Crystal+Violet+Staining,+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification.">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), 4-9 (2012).</li><li>Hedrich, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Trang, C., Gong, P., Kimura, I., Pandolfi, E. C., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+Vax1+from+Gonadotropin-Releasing+Hormone+(GnRH)+Neurons+Abolishes+GnRH+Expression+and+Leads+to+Hypogonadism+and+Infertility.">Deletion of Vax1 from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Abolishes GnRH Expression and Leads to Hypogonadism and Infertility.</a> Journal of Neuroscience. 36 (12), 3506-3518 (2016).</li><li>Sloboda, D. M., Howie, G. J., Pleasants, A., Gluckman, P. D., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postnatal+nutritional+histories+influence+reproductive+maturation+and+ovarian+function+in+the+rat.">Pre- and postnatal nutritional histories influence reproductive maturation and ovarian function in the rat.</a> PLoS ONE. , (2009).</li><li>Manual, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Strategies+for+Maintaining+Colonies+of+Laboratory+Mice.">Breeding Strategies for Maintaining Colonies of Laboratory Mice.</a> Management. , (2007).</li><li>Kennedy, G. C., Mitra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+weight+and+food+intake+as+initiating+factors+for+puberty+in+the+rat.">Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat.</a> The Journal of Physiology. , (1963).</li><li>Sisk, C. L., Foster, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+basis+of+puberty+and+adolescence.">The neural basis of puberty and adolescence.</a> Nature Neuroscience. 7 (10), 1040-1047 (2004).</li><li>Nelson, J. F., Karelus, K., Felicio, L. S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influences+on+the+timing+of+puberty+in+mice.">Genetic influences on the timing of puberty in mice.</a> Biology of reproduction. , (1990).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. , (1982).</li><li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+and+age+at+puberty+in+female+and+male+mice+of+strains+selected+for+large+and+small+body+size.">Weight and age at puberty in female and male mice of strains selected for large and small body size.</a> Genetical Research. , (1984).</li><li>Rodriguez, I., Araki, K., Khatib, K., Martinou, J. C., Vassalli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vaginal+opening+is+an+apoptosis-dependent+process+which+can+be+prevented+by+the+overexpression+of+Bcl2.">Mouse vaginal opening is an apoptosis-dependent process which can be prevented by the overexpression of Bcl2.</a> Developmental Biology. , (1997).</li><li>Lomniczi, A., Wright, H., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+female+puberty.">Epigenetic regulation of female puberty.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 36, 90-107 (2015).</li><li>Selmanoff, M. K., Goldman, B. D., Ginsburg, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+serum+luteinizing+hormone,+follicle+stimulating+hormone+and+androgen+levels+in+males+of+two+inbred+mouse+strains.">Developmental changes in serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and androgen levels in males of two inbred mouse strains.</a> Endocrinology. 100 (1), 122-127 (1977).</li><li>Larder, R., Clark, D. D., Miller, N. L. G., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+Dysregulation+and+Infertility+in+Mice+Lacking+the+Homeodomain+Protein+Six6.">Hypothalamic Dysregulation and Infertility in Mice Lacking the Homeodomain Protein Six6.</a> Journal of Neuroscience. 31 (2), 426-438 (2011).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+Effects+of+litter+size+and+lactation+number.">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comparative Biochemistry and Physiology -- Part A: Physiology. 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Chahoud, I., Paumgartten, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+litter+size+on+the+postnatal+growth+of+rat+pups:+is+there+a+rationale+for+litter-size+standardization+in+toxicity+studies.">Influence of litter size on the postnatal growth of rat pups: is there a rationale for litter-size standardization in toxicity studies.</a> Environmental research. 109 (8), 1021-1027 (2009).</li><li>Pandolfi, E. C., Hoffmann, H. M., Schoeller, E. L., Gorman, M. R., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+SIX3+Abolishes+Male+Reproductive+Behavior+Through+Disrupted+Olfactory+Development,+and+Impairs+Female+Fertility+Through+Disrupted+GnRH+Neuron+Migration.">Haploinsufficiency of SIX3 Abolishes Male Reproductive Behavior Through Disrupted Olfactory Development, and Impairs Female Fertility Through Disrupted GnRH Neuron Migration.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li></ol>

الرفاه العام للفئران أمر بالغ الأهمية ل تحليل خصوبة ناجحة21. عند القيام تحليل خصوبة، من المهم أن لا جسديا التحقق في الفئران كل يوم كهذا يمكن أن يسبب الإجهاد. كذلك تجنب التغييرات المتكررة القفص، أن هذه أيضا مرهقة. من الناحية المثالية سوف يتم التغييرات القفص لا يزيد عن 1-2 مرات في ?...

المرحلة الانتقالية من خلال سن البلوغ مطلوب لبلوغ مرحلة النضج الجنسي والكفاءة التناسلية. الانتقال البلوغ والحفاظ على معدل الخصوبة في سن البلوغ ينظم المحور الإنجابية، كما وصف المحور طائي جوندال الغدة النخامية (الشكل 1). وينظم توقيت بداية البلوغ والحفاظ على خصوبة محكم العوامل الداخلية، فضلا عن البيئة زيادة فرص البقاء على قيد الحياة للأبناء والآباء والأمهات1،2. يوفر هذا البروتوكول نهجاً غير الغازية لتحديد بداية البلوغ في الفئران والجرذان للتأكد من النضج الجنسي قبل إعداد دراسة خصوبة لتقييم الكفاءة التناسلية.
دراسة خصوبة في الحيوانات الناضجة جنسياً ويمكن أن تبدأ بعد أن مرت الحيوانات إلى سن البلوغ. قبل بداية البلوغ، محور الإنجابية هادئة، والدافع الرئيسي للنضج الجنسي، تروج – الإفراج عن هرمون (GnRH)، يطلق على الغدة النخامية بكميات غير كافية الشروع في سن البلوغ (الشكل 1). بداية البلوغ هو عملية معقدة والتي ينتج عنها زيادة جنره الإفراج في نيافة الوسيط. جنره يشجع الهرمون (LH) والمسام تحفيز إفراز هرمون (FSH) من الغدة النخامية، هما هرمونات ضرورية نضج جوندال ووظيفتها الإنجابية (الشكل 1)3،،من45 .
الإهانات إلى المحور الإنجابية يؤدي إلى انخفاض الخصوبة ويمكن أيضا التقدم أو التأخر في بداية البلوغ. وتشمل الشروط المعروفة للتأثير في توقيت بداية البلوغ والكفاءة الإنجابية التعرض للمواد الكيميائية6،7،1،وزن الجسم ارتفع أو انخفض8تغييرات في الصماء 2،طول اليوم9 والطفرات الوراثية10،11،،من1213،،من1415.
بداية مرحلة النضج الجنسي هو خطوة حاسمة يتعين استكماله قبل إعداد مقايسة خصوبة. مزايا تحديد بداية البلوغ من خلال فصل بريبوتيال وفتح المهبل والسفاد الأول، هي الخصائص غير الغازية لهذه الإجراءات، كما أنها لا تتطلب جمع الدم أو التضحية بالحيوان16، 17.
بعد أن يتم تحديد بداية البلوغ، بشكل صحيح إعداد دراسة خصوبة سوف توفر معلومات هامة حول السلامة المحور الإنجابية، وعادة ما يكون له ميزة ثانية لتوليد الحيوانات التجريبية لإجراء مزيد من الدراسات (التنقيح) 18-إعداد دراسة الخصوبة الموصوفة في هذا البروتوكول يمكن الكشف عن العجز في الصغيرة والكبيرة على حد سواء في الكفاءة التناسلية في الذكور والإناث. مفتاح معلمات تقييم تشمل 1) الوقت للقمامة الأولى، 2) عدد ليتر ولدت في حجم 3) القمامة وإطار زمني معين. وأخيراً، ترد توصيات لنوع متابعة الدراسات التي يمكن إجراؤها لتحديد سبب ضعف الخصوبة.
وصف البروتوكول يشير إلى الفئران وبيانات تمثيلية تعكس العمل المنجز في الفئران المعدلة وراثيا. ومع ذلك، كافة البروتوكولات شملت تصلح أيضا في الفئران.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1092">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Sterile Cotton Balls</td>
			<td style="width:167px;">Fisher</td>
			<td style="width:280px;">22456885</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surface protector</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1420637</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Light meter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21800-014</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope Slides</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>29-101</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Optimouse rack with cages</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C89100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Water Bottle Basket&#160;</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C61011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Filtered Cage Tops</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C78210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimice Standard Feeder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C40100SG</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Card Holder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C43251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Cards</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>M52010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bottle Assambley</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C79122P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bed R&#39;Nest Nesting</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">BRN4WSR</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1/8&#34; Corn Cob bedding&#160;</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">8B</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Standard mouse chow</td>
			<td>Teklad</td>
			<td style="width:280px;">7904 (7004)</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scale</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:280px;">10205-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polypropylene Beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-111F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats

تقييم الكفاءة الإنجابية أمر بالغ الأهمية لفهم تأثير المعاملة أو التلاعب بالجينات على محور الإنجابية، كما وصف المحور طائي جوندال الغدة النخامية. المحور الإنجابية هو integrator رئيسية المدخلات البيئية والداخلية تكييف الخصوبة إلى الظروف المواتية للاستنساخ. قبل الشروع في دراسة خصوبة في الفئران والجرذان، يتم تقييم النضج الجنسي لاستبعاد إمكانية أن تعمل الإنجابية ملاحظتها هي سبب تأخر أو تغيب بداية البلوغ. ويصف هذا البروتوكول نهجاً غير الغازية لتقييم بداية البلوغ في الذكور من خلال تحديد فصل بريبوتيال، وفي الإناث عن طريق فتح المهبل والسفاد الأول. بعد التأكد من إتمام البلوغ وبلوغ مرحلة النضج الجنسي، يمكن الشروع في دراسة خصوبة. يصف الإجراء شروط التربية المثلى للفئران والجرذان وكيفية إعداد دراسة خصوبة، وما المعايير لتقييم وتحديد ما إذا كان العلاج أو حذف الجينات تؤثر على الخصوبة.

النتائج المعروضة من اثنين من نماذج مختلفة وراثيا الماوس حيث تم حذف النسخ عامل البطني الأمامي هوميوبوكس 1 (Vax1) في الجسم كله في اليل واحد، يشار هنا إلى heterozygote الفئران (HET)13، أو Vax1 تم حذف شرطيا داخل جنره الخلايا العصبية22، يطلق عليها هنا كو ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

تحديد الكفاءة الإنجابية التي تؤكد بداية البلوغ، والقيام تحليل خصوبة في الفئران والجرذان

العديد من العلاجات والطفرات الجينية تؤثر على توقيت النضج الجنسي والخصوبة. ويصف هذا البروتوكول طريقة غير الغازية لتقييم بداية البلوغ في الفئران والجرذان قبل إعداد دراسة خصوبة في الحيوانات الناضجة جنسياً.

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الإنجاب، مثل كيفية تحديد بداية البلوغ في الفئران والجرذان من خلال الفصل قبل البلوغ، وفتح المهبل، وإنشاء أول estrus قبل إجراء دراسة الخصوبة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه من خلال تأسيس بداية البلوغ باستخدام النهج غير الغازي المُثبت ، من الممكن متابعة وإجراء دراسة الخصوبة في الحيوانات الناضجة جنسيًا. وتمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو تشخيص العجز في الإنجاب، كما هو ناجم عن الطفرات الجينية أو العلاجات المعرضة للتأثير على الكفاءة الإنجابية، مثل المواد الكيميائية التي تعطل الغدد الصماء.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة الكفاءة الإنجابية في الفئران، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على أنظمة نموذج أخرى، مثل الفئران والهامستر. إن العرض المرئي لهذه الطريقة أمر بالغ الأهمية، لأنه يتطلب مهارات جيدة وحساسة للتعامل مع الحيوانات. من المهم بشكل خاص أن تعقد الفئران بشكل صحيح لتحديد البصرية التالية من فصل preputial وفتحة المهبل.لتحضير منطقة العمل، ضع لوحة على الطاولة. ثم وضع قفص الماوس نظيفة أعلى مع الشبكة التي تواجه، على لوحة. بعد ذلك، قم بإعداد مقياس في منطقة العمل.وضع من 500 إلى 1000 ميليلتر منقار نظيفة على مقياس و tare ذلك. ثم ضع ورقة بجانب منطقة العمل لتسجيل البيانات. بعد ذلك، ضع قفص الماوس في منطقة العمل.افتح القفص وأزل الغطاء وزجاجة الماء وحامل الطعام إلى الطاولة. بينما عقد الماوس من الذيل، وضعه على أعلى قفص الماوس نظيفة. مع الحفاظ على عقد من الذيل، والسماح للماوس لاستكشاف الشبكة من أعلى القفص.سحب بلطف الذيل إلى الوراء والاقتراب من جهة أخرى إلى الجلد على مقربة من الرقبة والأذنين. فهم الجلد فضفاض بين الكتفين والرقبة مع الإبهام والسبابة. ثم الاستيلاء على الجلد على ظهره مع الأصابع المتبقية وعقد الماوس عن طريق الضغط بلطف على اليد.مع اليد الحرة، ودفع بلطف الجلد حول القضيب مرة أخرى. في الفصل قبلية، الجلد preputial الشرائح إلى الوراء، وفضح القضيب جلانس. بعد الفحص، تسجيل وجود أو عدم وجود فصل preputial.بعد ذلك، قم بوزن الفأرة وسجل وزنها. ثم إعادة إدخال الماوس إلى قفص السكن من خلال عقد منقار على أرضية القفص والسماح للماوس للخروج من تلقاء نفسها. ضع كرة قطنية، وقارب كبير، وزجاجة من الماء المعقم في منطقة العمل.صب الماء المعقم في القارص. ثم، ترطيب الكرة القطن مع الماء العقيم في الكوابر، ووضعها بجوار أعلى قفص نظيفة. ضع قفص الماوس في منطقة العمل.ثم نقل الماوس إلى أعلى القفص من خلال عقد من قبل قاعدة ذيله. سحب بلطف على ذيل الماوس لتشجيع حركة إلى الأمام من قبل الماوس. بعد ذلك، رفع الذيل في حين دعم الوركين مع ثلاثة أصابع.تنظيف بلطف الفرج مع الكرة القطن المرطبة، ثم فحص الفرج لتحديد ما إذا كان المهبل مفتوح تماما. سجل إذا حدث فتح مهبلي. ثم وزن الماوس وإعادته إلى القفص المنزل.إعداد قفص الماوس نظيفة مع غطاء، الماء، والغذاء، والفراش، والمواد التعشيش لكل زوج تربية الفئران. ثم املأ بطاقات القفص بالمعلومات المطلوبة. وضع قفص الفراش المعدة على طاولة نظيفة، ثم ببطء إدخال يد قفاز في قفص الماوس وتركها في القفص لفترة قصيرة من الزمن.اقترب ببطء من الفئران بيد قفاز. عندما الفئران تشغيل أكثر من جهة، والاستيلاء على ذيل الماوس واحد بين الإبهام وإصبع السبابة، ثم رفع الماوس من الذيل. يمكن أن تعقد الماوس من قبل الذيل دون دعم من الجسم لمدة تصل إلى اثنين إلى ثلاث ثوان.ضع الفأر في قفص التكاثر المعد ، ثم أغلق القفص بعد التأكد من أن الفئران الذكور والإناث لديهم الطعام والماء ومواد التعشيش. وباستخدام الطريقة المعروضة، تمت دراسة نموذجين مختلفين للماوس المعدل وراثيا. حدث فتحة المهبل والفصل قبلية في نفس العمر والوزن في كل من الفئران غير المغايرة والفئران التحكم.وعلى العكس من ذلك، تأخر فتح المهبل والفصل قبل البوتيال بشكل كبير في خروج الإناث والذكور المشروطين، وارتبطا بزيادة وزن الجسم. في 4.5 أسابيع من العمر، والضوابط الإناث والفئران بالضربة القاضية المشروطة كان وزن الجسم مماثلة، في حين أن الذكور بالضربة القاضية المشروطة كانت أثقل قليلا من الضوابط. وهذا يشير إلى أن التأخير في فتحة المهبل والفصل قبلية من الفئران خروج المشروطة لم يكن مرتبطا مع تأخير في زيادة الوزن.بعد الانتهاء من بداية البلوغ ، بدأت دراسة الخصوبة في سن 10 إلى 16 أسبوعا. كل من الذكور والإناث الفئران غير المغايرة كانت دون الخصوبة. ولدت الإناث غير المغايرة عدد أقل من القمامة في الدراسة التي استمرت ثلاثة أشهر، وولدت الفئران غير المغايرة للذكور والإناث نفايات أصغر.ولتوضيح أهمية تأكيد بداية البلوغ قبل إعداد فحص الخصوبة، تم تقييم الكفاءة الإنجابية في فئران الضربة القاضية المشروطة. خلال دراسة الخصوبة لمدة 70 يومًا ، لم يولد الذكور أو الإناث المشروطين أي نفايات. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر التعامل مع الفئران بعناية والبقاء هادئًا أثناء الاقتراب والتعامل مع الحيوانات.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل قياس مستويات هرمون الجنس المتداولة للإجابة على أسئلة إضافية، مثل ما إذا كان العقم أو أي نوع فرعي آخر ناجم عن هرمون تستوستيرون غير طبيعي، هرمون الاستروجين، هرمون تحفيز بصيلات، ومستويات هرمون اللوتين. لا تنسى أن العمل مع الفئران يمكن أن يكون خطيرا بسبب خطر العض وتطوير الحساسية. للحد من التعرض، ينبغي دائما اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء القفازات ومعطف المختبر، والتعامل الدقيق مع الفئران، أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Biology

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

دليل ضبط النفس وطرق الإدارة المشتركة في مجمع الفئران والجرذان

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

التشخيص والتشريح والأنسجة عينة مختارة كوكتيل في الجرذان والفئران

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and 17ÃƒÅ½Ã‚Â²-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

استئصال المبيض و17β استراديول، مع تبديل في الجرذان والفئران: تظاهرة البصرية

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

A Rapid and Specific Microplate Assay for the Determination of Intra- and Extracellular Ascorbate in Cultured Cells

A السريع والنوعي صفيحة ميكروسكوبية الفحص لتحديد أسكوربات البينية وخارج الخلية في الخلايا المستزرعة

Vitamin C (ascorbate) plays numerous important roles in cellular metabolism, many of which have only come to light in recent years. For instance, within ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

في فيفو حقن مكروي و Electroporation ماوس الخصية

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

أون كشف الوجه من اكسيد النيتريك وفوق الأكسيد في طبقة بطانة الأوعية الدموية من شرايين سليمة

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

الماوس معزولة تقنية الكلى Perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

تحديد الأحماض السياليك في الكبد وعينات الحليب من البرية من نوع و<em&gt; CMAH</em&gt; خروج المغلوب الفئران.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

التقنيات الإنجابية لرصد المبيض والسيطرة عليه في البرمائيات

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...