Name: determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

Ringrazio gli autori che contribuiscono al lavoro iniziale che è alla base di questa pubblicazione. Grazie a Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan ed Erica L. Schoeller per aiuto preparazione del manoscritto. Grazie a Jessica Sora Lee e Austin Chin per assistenza tecnica con il manoscritto. H.M.H è stato sostenuto da Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & sviluppo umano dei National Institutes of Health, sotto Premio numero R00HD084759.

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dal istituzionale Animal Care e uso Comitato della Michigan State University e condotti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio.
1. determinare Inizio puberale
<ol><li>Seguire le linee guida istituzionali per l'abbigliamento, come minimo, è necessario indossare un camice da laboratorio pulito e guanti puliti. Maneggiare sempre topi indossando guanti puliti.</li>
	<li>Preparare l'area di lavoro posizionando u...

<ol>
	<li>Schneider, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+balance+and+reproduction.">Energy balance and reproduction.</a> Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).</li><li>Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+photoperiod+on+hormones,+behavior,+and+immune+function.">Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function.</a> Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, (2016).</li><li>Kauffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+differentiation+and+the+Kiss1+system:+Hormonal+and+developmental+considerations.">Sexual differentiation and the Kiss1 system: Hormonal and developmental considerations.</a> Peptides. , (2009).</li><li>Bronson, F. H., Dagg, C. P., Snell, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reproduction. , (1966).</li><li>Chehab, F. F., Mounzih, K., Lu, R., Lim, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+onset+of+reproductive+function+in+normal+female+mice+treated+with+leptin.">Early onset of reproductive function in normal female mice treated with leptin.</a> Science. , (1997).</li><li>Yoshimura, S., Yamaguchi, H., Konno, K., Ohsawa, N., Noguchi, S., Chisaka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+Preputial+Separation+is+a+Useful+Tool+for+Evaluating+Endocrine+Active+Chemicals.">Observation of Preputial Separation is a Useful Tool for Evaluating Endocrine Active Chemicals.</a> J Toxicologic Pathology. 18, 141-157 (2005).</li><li>Ahima, R. S., Dushay, J., Flier, S. N., Prabakaran, D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+accelerates+the+onset+of+puberty+in+normal+female+mice.">Leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 99 (3), 391-395 (1997).</li><li>Bohlen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+short-day+photoperiod+delays+the+timing+of+puberty+in+female+mice+via+changes+in+the+kisspeptin+system.">A short-day photoperiod delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system.</a> Frontiers in Endocrinology. 9 (FEB), 1-9 (2018).</li><li>Shahab, M., Mastronardi, C., Seminara, S. B., Crowley, W. F., Ojeda, S. R., Plant, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+hypothalamic+GPR54+signaling:+A+potential+mechanism+for+initiation+of+puberty+in+primates.">Increased hypothalamic GPR54 signaling: A potential mechanism for initiation of puberty in primates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2005).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, 5-9 (2016).</li><li>Navarro, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neurokinin+B+in+the+Control+of+Female+Puberty+and+Its+Modulation+by+Metabolic+Status.">Role of Neurokinin B in the Control of Female Puberty and Its Modulation by Metabolic Status.</a> Journal of Neuroscience. 32 (7), 2388-2397 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Tamrazian, A., Xie, H., P&#233;rez-Mill&#225;n, M. I., Kauffman, A. S., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+deletion+of+ventral+anterior+homeobox+(Vax1)+causes+subfertility+in+mice.">Heterozygous deletion of ventral anterior homeobox (Vax1) causes subfertility in mice.</a> Endocrinology. 155 (10), 4043-4053 (2014).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kisspeptin+Receptor+GPR54+Is+Required+for+Sexual+Differentiation+of+the+Brain+and+Behavior.">The Kisspeptin Receptor GPR54 Is Required for Sexual Differentiation of the Brain and Behavior.</a> Journal of Neuroscience. 27 (33), 8826-8835 (2007).</li><li>Teles, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+report:+A+GPR54-activating+mutation+in+a+patient+with+central+precocious+puberty.">Brief report: A GPR54-activating mutation in a patient with central precocious puberty.</a> New England Journal of Medicine. , (2008).</li><li>Korenbrot, C. C., Huhtaniemi, I. T., Weiner, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preputial+separation+as+an+external+sign+of+pubertal+development+in+the+male+rat.">Preputial separation as an external sign of pubertal development in the male rat.</a> Biology of reproduction. , (1977).</li><li>Gaytan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+precise+dating+of+female+puberty+in+laboratory+rodents:+The+puberty+ovarian+maturation+score+(Pub-Score).">Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: The puberty ovarian maturation score (Pub-Score).</a> Scientific Reports. 7 (March), 1-11 (2017).</li><li>Caligioni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 1-11 (2010).</li><li>Mayer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+completion+of+puberty+in+female+mice+depend+on+estrogen+receptor+-signaling+in+kisspeptin+neurons.">Timing and completion of puberty in female mice depend on estrogen receptor -signaling in kisspeptin neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (52), 22693-22698 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Vaginal+Lavage,+Crystal+Violet+Staining,+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification.">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), 4-9 (2012).</li><li>Hedrich, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Trang, C., Gong, P., Kimura, I., Pandolfi, E. C., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+Vax1+from+Gonadotropin-Releasing+Hormone+(GnRH)+Neurons+Abolishes+GnRH+Expression+and+Leads+to+Hypogonadism+and+Infertility.">Deletion of Vax1 from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Abolishes GnRH Expression and Leads to Hypogonadism and Infertility.</a> Journal of Neuroscience. 36 (12), 3506-3518 (2016).</li><li>Sloboda, D. M., Howie, G. J., Pleasants, A., Gluckman, P. D., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postnatal+nutritional+histories+influence+reproductive+maturation+and+ovarian+function+in+the+rat.">Pre- and postnatal nutritional histories influence reproductive maturation and ovarian function in the rat.</a> PLoS ONE. , (2009).</li><li>Manual, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Strategies+for+Maintaining+Colonies+of+Laboratory+Mice.">Breeding Strategies for Maintaining Colonies of Laboratory Mice.</a> Management. , (2007).</li><li>Kennedy, G. C., Mitra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+weight+and+food+intake+as+initiating+factors+for+puberty+in+the+rat.">Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat.</a> The Journal of Physiology. , (1963).</li><li>Sisk, C. L., Foster, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+basis+of+puberty+and+adolescence.">The neural basis of puberty and adolescence.</a> Nature Neuroscience. 7 (10), 1040-1047 (2004).</li><li>Nelson, J. F., Karelus, K., Felicio, L. S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influences+on+the+timing+of+puberty+in+mice.">Genetic influences on the timing of puberty in mice.</a> Biology of reproduction. , (1990).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. , (1982).</li><li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+and+age+at+puberty+in+female+and+male+mice+of+strains+selected+for+large+and+small+body+size.">Weight and age at puberty in female and male mice of strains selected for large and small body size.</a> Genetical Research. , (1984).</li><li>Rodriguez, I., Araki, K., Khatib, K., Martinou, J. C., Vassalli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vaginal+opening+is+an+apoptosis-dependent+process+which+can+be+prevented+by+the+overexpression+of+Bcl2.">Mouse vaginal opening is an apoptosis-dependent process which can be prevented by the overexpression of Bcl2.</a> Developmental Biology. , (1997).</li><li>Lomniczi, A., Wright, H., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+female+puberty.">Epigenetic regulation of female puberty.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 36, 90-107 (2015).</li><li>Selmanoff, M. K., Goldman, B. D., Ginsburg, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+serum+luteinizing+hormone,+follicle+stimulating+hormone+and+androgen+levels+in+males+of+two+inbred+mouse+strains.">Developmental changes in serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and androgen levels in males of two inbred mouse strains.</a> Endocrinology. 100 (1), 122-127 (1977).</li><li>Larder, R., Clark, D. D., Miller, N. L. G., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+Dysregulation+and+Infertility+in+Mice+Lacking+the+Homeodomain+Protein+Six6.">Hypothalamic Dysregulation and Infertility in Mice Lacking the Homeodomain Protein Six6.</a> Journal of Neuroscience. 31 (2), 426-438 (2011).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+Effects+of+litter+size+and+lactation+number.">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comparative Biochemistry and Physiology -- Part A: Physiology. 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Chahoud, I., Paumgartten, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+litter+size+on+the+postnatal+growth+of+rat+pups:+is+there+a+rationale+for+litter-size+standardization+in+toxicity+studies.">Influence of litter size on the postnatal growth of rat pups: is there a rationale for litter-size standardization in toxicity studies.</a> Environmental research. 109 (8), 1021-1027 (2009).</li><li>Pandolfi, E. C., Hoffmann, H. M., Schoeller, E. L., Gorman, M. R., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+SIX3+Abolishes+Male+Reproductive+Behavior+Through+Disrupted+Olfactory+Development,+and+Impairs+Female+Fertility+Through+Disrupted+GnRH+Neuron+Migration.">Haploinsufficiency of SIX3 Abolishes Male Reproductive Behavior Through Disrupted Olfactory Development, and Impairs Female Fertility Through Disrupted GnRH Neuron Migration.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li></ol>

Il benessere generale dei topi è critico per un test di fertilità successo21. Quando si esegue un test di fertilità, è importante controllare non fisicamente sui topi ogni giorno come questo può causare stress. Evitare ulteriori modifiche frequenti gabbia, come questi sono anche stressanti. Idealmente le modifiche gabbia saranno fatto non più di 1 - 2 volte alla settimana. L'esposizione alla luce durante la fase scura influisce negativamente sulle allevamento nei roditori notturni. Non accen...

Per raggiungere la maturità sessuale e riproduttiva competenza è necessaria la transizione attraverso la pubertà. La transizione puberale e il mantenimento della fertilità in età adulta è regolata dall'asse riproduttivo, anche definito l'asse ipotalamico-ipofisi-gonadi (Figura 1). I tempi dell'Inizio puberale e mantenimento della fertilità è strettamente regolati da fattori interni, nonché dell'ambiente per aumentare le probabilità di sopravvivenza della prole e genitori1,2. Questo protocollo fornisce un approccio non invasivo per determinare l'Inizio puberale in topi e ratti per confermare la maturità sessuale prima della creazione di uno studio di fertilità per valutare la competenza riproduttiva.
Uno studio di fertilità viene eseguito negli animali sessualmente maturi e può essere avviato dopo che gli animali sono passati attraverso la pubertà. Prima dell'Inizio puberale, l'asse riproduttivo è quiescente, e il driver della chiave di maturazione sessuale, gonadotropina - releasing hormone (GnRH), viene rilasciato sulla ghiandola pituitaria in quantità insufficiente per iniziare la pubertà (Figura 1). Inizio puberale è un processo complesso che si traduce in un aumentato rilascio di GnRH presso l'eminenza mediana. GnRH promuove l'ormone luteinizzante (LH) e follicolo-stimolante secrezione dell'ormone (FSH) dall'ipofisi, due ormoni essenziali per maturazione gonadica e funzione riproduttiva (Figura 1)3,4,5 .
Insulti all'asse riproduttivo provocare ridotta fertilità e possono anche Inizio puberale di anticipo o ritardo. Condizioni note per influenzare la tempistica dell'Inizio puberale e competenza riproduttiva includono l'esposizione a sostanze chimiche6,7, aumentata/diminuita corpo peso1,8, cambiamenti nel sistema endocrino giorno lunghezza2,9 e mutazioni genetiche10,11,12,13,14,15.
L'inizio della maturità sessuale è un passo fondamentale che deve essere completato prima della creazione di un test di fertilità. I vantaggi della determinazione Inizio puberale attraverso la separazione del prepuzio, apertura vaginale e primo estro, sono le caratteristiche non-invasiva di queste procedure, in quanto non necessitano di raccolta del sangue o sacrificio dell' animale16, 17.
Dopo Inizio puberale è determinato, impostare correttamente da uno studio di fertilità fornirà importanti informazioni circa l'integrità dell'asse riproduttivo e di solito ha il secondo vantaggio di generare animali da esperimento per ulteriori studi (perfezionamento) 18. l'installazione di studio di fertilità descritto nel presente protocollo in grado di rilevare i deficit maggiori e minori in termini di competenza riproduttivo nei maschi e nelle femmine. Principali parametri valutati comprendono 1) tempo per la prima cucciolata, 2) numero di cucciolate generate in un determinato lasso di tempo e 3) lettiera le dimensioni. Infine, consigli per il tipo di follow-up studi che possono essere condotti per identificare la causa della compromissione della fertilità sono inclusi.
Il protocollo descritto si riferisce ai topi e i dati rappresentativi riflettono il lavoro svolto in topi transgenici. Tuttavia, tutti i protocolli inclusi sono ugualmente validi in ratti.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1092">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Sterile Cotton Balls</td>
			<td style="width:167px;">Fisher</td>
			<td style="width:280px;">22456885</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surface protector</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1420637</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Light meter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21800-014</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope Slides</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>29-101</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Optimouse rack with cages</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C89100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Water Bottle Basket&#160;</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C61011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Filtered Cage Tops</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C78210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimice Standard Feeder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C40100SG</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Card Holder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C43251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Cards</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>M52010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bottle Assambley</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C79122P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bed R&#39;Nest Nesting</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">BRN4WSR</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1/8&#34; Corn Cob bedding&#160;</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">8B</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Standard mouse chow</td>
			<td>Teklad</td>
			<td style="width:280px;">7904 (7004)</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scale</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:280px;">10205-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polypropylene Beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-111F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats

Valutazione della competenza riproduttiva è fondamentale per comprendere l'impatto di un trattamento o la manipolazione genetica sull'asse riproduttivo, anche definito l'asse ipotalamico-ipofisi-gonadi. L'asse riproduttivo è un integratore di chiave di input ambientali e interni, adattando la fertilità a condizioni favorevoli per la riproduzione. Prima di imbarcarsi su uno studio di fertilità nei topi e nei ratti, la maturità sessuale viene valutata per escludere la possibilità che i fenotipi osservati riproduttivi sono causati da ritardato o assente Inizio puberale. Questo protocollo descrive un approccio non invasivo per valutare Inizio puberale nei maschi attraverso la determinazione di separazione del prepuzio che nelle femmine attraverso l'apertura vaginale e primo estro. Dopo la conferma del completamento della pubertà e il raggiungimento della maturità sessuale, uno studio di fertilità può essere avviato. La procedura descrive le condizioni di allevamento ottimali per topi e ratti, come impostare uno studio di fertilità e i parametri da valutare e determinare se il trattamento o l'omissione del gene ha un impatto sulla fertilità.

I risultati presentati derivano da due modelli di topi transgenici differenti dove il fattore trascrizione anteriore ventrale homeobox 1 (Vax1) è stato eliminato in tutto il corpo su un allele, qui indicato come heterozygote topi (HET)13, o Vax1 è stato eliminato in modo condizionale all'interno di GnRH neuroni22, qui chiamato condizionale KO (cKO). Prima di impostare lo studio di fertilità, è importante confermare l'In...

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Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Determinazione della competenza riproduttiva confermando Inizio puberale e realizzazione di un test di fertilità in topi e ratti

Molti trattamenti e mutazioni genetiche impatto i tempi della maturità sessuale e la fertilità. Questo protocollo descrive un metodo non invasivo per valutare l'Inizio puberale in topi e ratti prima della creazione di uno studio di fertilità negli animali sessualmente maturi.

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo riproduttivo, come come determinare l'insorgenza pubertale in topi e ratti attraverso la separazione pre-espettorato, l'apertura vaginale e la creazione del primo estro prima di eseguire uno studio sulla fertilità. Il principale vantaggio di questa tecnica è che stabilendo l'esordio pubertale utilizzando l'approccio non invasivo dimostrato, è possibile seguire e condurre uno studio sulla fertilità in animali sessualmente maturi. Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la diagnosi di deficit nella riproduzione, causati da mutazioni genetiche o trattamenti suscettibili di impatto sulla competenza riproduttiva, come le sostanze chimiche che alterano il sistema endocrino.Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla competenza riproduttiva nei topi, può anche essere applicato ad altri sistemi modello, come ratti e criceti. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, in quanto richiede buone e delicate capacità di gestione degli animali. È particolarmente importante trattenere correttamente i topi per la seguente identificazione visiva della separazione preputale e dell'apertura vaginale.Per preparare l'area di lavoro, posizionare un pad sul tavolo. Quindi posizionare una parte superiore pulita della gabbia del mouse con la griglia rivolta verso l'alto, sul pad. Impostare quindi una scala nell'area di lavoro.Posizionare un becher pulito da 500 a 1000 millilitri sulla bilancia e tararlo. Quindi posizionare un foglio accanto all'area di lavoro per registrare i dati. Successivamente, posizionare la gabbia del mouse nell'area di lavoro.Aprire la gabbia e rimuovere il coperchio, la bottiglia d'acqua e il porta cibo sul tavolo. Mentre si tiene il mouse per la coda, posizionarlo sulla parte superiore pulita della gabbia del mouse. Pur mantenendo la presa della coda, consentire al mouse di esplorare la griglia della parte superiore della gabbia.Tirare delicatamente la coda all'indietro e avvicinarsi all'altra mano alla pelle vicino al collo e alle orecchie. Afferrare la pelle sciolta tra le spalle e il collo con il pollice e l'indice. Quindi afferrare la pelle sul retro con le dita rimanenti e tenere il mouse premendolo delicatamente contro la mano.Con la mano libera, spingere delicatamente la pelle intorno al pene indietro. Alla separazione preputale, la pelle preputale scivola all'indietro, esponendo il glande. Dopo l'esame, registrare la presenza o l'assenza di separazione precontenziale.Dopo questo, pesare il mouse e registrare il suo peso. Quindi reintrodurre il mouse nella gabbia di alloggiamento tenendo il becher sopra il pavimento della gabbia e permettendo al mouse di uscire da solo. Posizionare un batuffolo di cotone, un grande becher e una bottiglia di acqua sterile nell'area di lavoro.Versare acqua sterile nel becher. Quindi, umidifica il batuffolo di cotone con l'acqua sterile nel becher e posizionalo accanto al piano pulito della gabbia. Posizionare la gabbia del mouse nell'area di lavoro.Quindi trasferire il mouse sulla parte superiore della gabbia tenendolo per la base della coda. Tirare delicatamente la coda del mouse per incoraggiare un movimento in avanti da parte del mouse. Dopo questo, sollevare la coda mentre si sostengono i fianchi con tre dita.Pulire delicatamente la vulva con il batuffolo di cotone umidificato, quindi esaminare la vulva per determinare se la vagina è completamente aperta. Registrare se si è verificata l'apertura vaginale. Quindi pesare il topo e restituirlo alla gabbia di casa.Prepara una gabbia pulita per topi con coperchio, acqua, cibo, biancheria da letto e materiale di nidificazione per ogni coppia riproduttiva di topi. Quindi compilare le schede della gabbia con le informazioni necessarie. Posizionare la gabbia da letto preparata su un tavolo pulito, quindi introdurre lentamente una mano guantata nella gabbia del topo e lasciarla nella gabbia per un breve periodo di tempo.Avvicinati lentamente ai topi con la mano guantata. Quando i topi corrono sopra la mano, afferra la coda di un mouse tra il pollice e l'indice, quindi solleva il mouse per la coda. Il mouse può essere tenuto dalla coda senza supporto del corpo per un massimo di due o tre secondi.Posizionare il topo nella gabbia da riproduzione preparata, quindi chiudere la gabbia dopo aver assicurarsi che i topi maschi e femmine abbiano cibo, acqua e materiale di nidificazione. Utilizzando il metodo presentato, sono stati studiati due diversi modelli di topi transgenici. L'apertura vaginale e la separazione preputiale si sono verificate alla stessa età e peso sia nei topi eterozigoti che nei topi di controllo.Al contrario, l'apertura vaginale e la separazione pre-espettorato sono state significativamente ritardate nelle femmine e nei maschi knockout condizionali e associati all'aumento del peso corporeo. A 4,5 settimane di età, i controlli femminili e i topi knockout condizionali avevano un peso corporeo comparabile, mentre i maschi knockout condizionali erano leggermente più pesanti dei controlli. Ciò indica che il ritardo nell'apertura vaginale e nella separazione pre-espettorato dei topi knockout condizionali non è stato associato a un ritardo nell'aumento di peso.Dopo il completamento dell'esordio pubertale, lo studio sulla fertilità è stato avviato all'età di 10-16 settimane. Sia i topi eterozigoti maschi che femmine erano subfertili. Le femmine eterozigoti hanno generato meno cucciolate nello studio di tre mesi, e sia i topi eterozigoti maschi che quelli femmine hanno generato cucciolate più piccole.Per illustrare l'importanza di confermare l'esordio pubertale prima di istituire un saggio sulla fertilità, la competenza riproduttiva è stata valutata nei topi knockout condizionali. Durante lo studio sulla fertilità di 70 giorni, né maschi né femmine knockout condizionali hanno generato cucciolate. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di maneggiare i topi con cura e rimanere calmi mentre si avvicinano e maneggiano gli animali.Seguendo questa procedura, altri metodi come misurare i livelli di ormone sessuale circolante possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive, come se l'infertilità o altra subfertilità è stata causata da testosterone anormale, estrogeni, ormone follicolo stimolante e livelli di ormone luteinizzante. Non dimenticare che lavorare con i topi può essere pericoloso a causa del rischio di mordere e sviluppo di allergie. Per ridurre l'esposizione, durante l'esecuzione di questa procedura devono sempre essere prese precauzioni come indossare guanti e un camice da laboratorio e un'attenta manipolazione dei topi.

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