Name: determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats
Uploaded: 2018-10-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

Jag tackar författarna bidra till den inledande arbete som är grunden för denna publikation. Tack Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan och Erica L. Schoeller för hjälp förbereda manuskriptet. Tack till Jessica Sora Lee och Austin hakan för tekniskt bistånd med manuskriptet. H.M.H. stöddes av Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & mänsklig utveckling av det nationella Institutes of Health under Award nummer R00HD084759.

Alla metoderna som beskrivs här har godkänts av institutionella djur vård och användning kommittén av Michigan State University och utförs i enlighet med guiden för skötsel och användning av försöksdjur.
1. Bestäm pubertala debut
<ol><li>Följ anvisningar för kläder, minst, är det nödvändigt att bära en ren labbrock och rena handskar. Hantera alltid möss med rena handskar.</li>
	<li>Förbered arbetsytan genom att placera en pad på bordet.<ol>
<li>Placera en ren mus bur to...

<ol>
	<li>Schneider, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+balance+and+reproduction.">Energy balance and reproduction.</a> Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).</li><li>Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+photoperiod+on+hormones,+behavior,+and+immune+function.">Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function.</a> Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, (2016).</li><li>Kauffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+differentiation+and+the+Kiss1+system:+Hormonal+and+developmental+considerations.">Sexual differentiation and the Kiss1 system: Hormonal and developmental considerations.</a> Peptides. , (2009).</li><li>Bronson, F. H., Dagg, C. P., Snell, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reproduction. , (1966).</li><li>Chehab, F. F., Mounzih, K., Lu, R., Lim, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+onset+of+reproductive+function+in+normal+female+mice+treated+with+leptin.">Early onset of reproductive function in normal female mice treated with leptin.</a> Science. , (1997).</li><li>Yoshimura, S., Yamaguchi, H., Konno, K., Ohsawa, N., Noguchi, S., Chisaka, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+Preputial+Separation+is+a+Useful+Tool+for+Evaluating+Endocrine+Active+Chemicals.">Observation of Preputial Separation is a Useful Tool for Evaluating Endocrine Active Chemicals.</a> J Toxicologic Pathology. 18, 141-157 (2005).</li><li>Ahima, R. S., Dushay, J., Flier, S. N., Prabakaran, D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+accelerates+the+onset+of+puberty+in+normal+female+mice.">Leptin accelerates the onset of puberty in normal female mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 99 (3), 391-395 (1997).</li><li>Bohlen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+short-day+photoperiod+delays+the+timing+of+puberty+in+female+mice+via+changes+in+the+kisspeptin+system.">A short-day photoperiod delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system.</a> Frontiers in Endocrinology. 9 (FEB), 1-9 (2018).</li><li>Shahab, M., Mastronardi, C., Seminara, S. B., Crowley, W. F., Ojeda, S. R., Plant, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+hypothalamic+GPR54+signaling:+A+potential+mechanism+for+initiation+of+puberty+in+primates.">Increased hypothalamic GPR54 signaling: A potential mechanism for initiation of puberty in primates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2005).</li><li>Hoffmann, H. M., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+population+of+hypothalamic+neurons+govern+fertility:+the+critical+role+of+VAX1+in+GnRH+neuron+development+and+fertility+maintenance.">A small population of hypothalamic neurons govern fertility: the critical role of VAX1 in GnRH neuron development and fertility maintenance.</a> Neuroscience communications. 2, 5-9 (2016).</li><li>Navarro, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Neurokinin+B+in+the+Control+of+Female+Puberty+and+Its+Modulation+by+Metabolic+Status.">Role of Neurokinin B in the Control of Female Puberty and Its Modulation by Metabolic Status.</a> Journal of Neuroscience. 32 (7), 2388-2397 (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Tamrazian, A., Xie, H., P&#233;rez-Mill&#225;n, M. I., Kauffman, A. S., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygous+deletion+of+ventral+anterior+homeobox+(Vax1)+causes+subfertility+in+mice.">Heterozygous deletion of ventral anterior homeobox (Vax1) causes subfertility in mice.</a> Endocrinology. 155 (10), 4043-4053 (2014).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kisspeptin+Receptor+GPR54+Is+Required+for+Sexual+Differentiation+of+the+Brain+and+Behavior.">The Kisspeptin Receptor GPR54 Is Required for Sexual Differentiation of the Brain and Behavior.</a> Journal of Neuroscience. 27 (33), 8826-8835 (2007).</li><li>Teles, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+report:+A+GPR54-activating+mutation+in+a+patient+with+central+precocious+puberty.">Brief report: A GPR54-activating mutation in a patient with central precocious puberty.</a> New England Journal of Medicine. , (2008).</li><li>Korenbrot, C. C., Huhtaniemi, I. T., Weiner, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preputial+separation+as+an+external+sign+of+pubertal+development+in+the+male+rat.">Preputial separation as an external sign of pubertal development in the male rat.</a> Biology of reproduction. , (1977).</li><li>Gaytan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+method+for+precise+dating+of+female+puberty+in+laboratory+rodents:+The+puberty+ovarian+maturation+score+(Pub-Score).">Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: The puberty ovarian maturation score (Pub-Score).</a> Scientific Reports. 7 (March), 1-11 (2017).</li><li>Caligioni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 1-11 (2010).</li><li>Mayer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+completion+of+puberty+in+female+mice+depend+on+estrogen+receptor+-signaling+in+kisspeptin+neurons.">Timing and completion of puberty in female mice depend on estrogen receptor -signaling in kisspeptin neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (52), 22693-22698 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Vaginal+Lavage,+Crystal+Violet+Staining,+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification.">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), 4-9 (2012).</li><li>Hedrich, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2012).</li><li>Hoffmann, H. M., Trang, C., Gong, P., Kimura, I., Pandolfi, E. C., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+Vax1+from+Gonadotropin-Releasing+Hormone+(GnRH)+Neurons+Abolishes+GnRH+Expression+and+Leads+to+Hypogonadism+and+Infertility.">Deletion of Vax1 from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Abolishes GnRH Expression and Leads to Hypogonadism and Infertility.</a> Journal of Neuroscience. 36 (12), 3506-3518 (2016).</li><li>Sloboda, D. M., Howie, G. J., Pleasants, A., Gluckman, P. D., Vickers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postnatal+nutritional+histories+influence+reproductive+maturation+and+ovarian+function+in+the+rat.">Pre- and postnatal nutritional histories influence reproductive maturation and ovarian function in the rat.</a> PLoS ONE. , (2009).</li><li>Manual, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+Strategies+for+Maintaining+Colonies+of+Laboratory+Mice.">Breeding Strategies for Maintaining Colonies of Laboratory Mice.</a> Management. , (2007).</li><li>Kennedy, G. C., Mitra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body+weight+and+food+intake+as+initiating+factors+for+puberty+in+the+rat.">Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat.</a> The Journal of Physiology. , (1963).</li><li>Sisk, C. L., Foster, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+basis+of+puberty+and+adolescence.">The neural basis of puberty and adolescence.</a> Nature Neuroscience. 7 (10), 1040-1047 (2004).</li><li>Nelson, J. F., Karelus, K., Felicio, L. S., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influences+on+the+timing+of+puberty+in+mice.">Genetic influences on the timing of puberty in mice.</a> Biology of reproduction. , (1990).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. , (1982).</li><li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+and+age+at+puberty+in+female+and+male+mice+of+strains+selected+for+large+and+small+body+size.">Weight and age at puberty in female and male mice of strains selected for large and small body size.</a> Genetical Research. , (1984).</li><li>Rodriguez, I., Araki, K., Khatib, K., Martinou, J. C., Vassalli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vaginal+opening+is+an+apoptosis-dependent+process+which+can+be+prevented+by+the+overexpression+of+Bcl2.">Mouse vaginal opening is an apoptosis-dependent process which can be prevented by the overexpression of Bcl2.</a> Developmental Biology. , (1997).</li><li>Lomniczi, A., Wright, H., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+female+puberty.">Epigenetic regulation of female puberty.</a> Frontiers in Neuroendocrinology. 36, 90-107 (2015).</li><li>Selmanoff, M. K., Goldman, B. D., Ginsburg, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+serum+luteinizing+hormone,+follicle+stimulating+hormone+and+androgen+levels+in+males+of+two+inbred+mouse+strains.">Developmental changes in serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and androgen levels in males of two inbred mouse strains.</a> Endocrinology. 100 (1), 122-127 (1977).</li><li>Larder, R., Clark, D. D., Miller, N. L. G., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+Dysregulation+and+Infertility+in+Mice+Lacking+the+Homeodomain+Protein+Six6.">Hypothalamic Dysregulation and Infertility in Mice Lacking the Homeodomain Protein Six6.</a> Journal of Neuroscience. 31 (2), 426-438 (2011).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+Effects+of+litter+size+and+lactation+number.">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comparative Biochemistry and Physiology -- Part A: Physiology. 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Chahoud, I., Paumgartten, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+litter+size+on+the+postnatal+growth+of+rat+pups:+is+there+a+rationale+for+litter-size+standardization+in+toxicity+studies.">Influence of litter size on the postnatal growth of rat pups: is there a rationale for litter-size standardization in toxicity studies.</a> Environmental research. 109 (8), 1021-1027 (2009).</li><li>Pandolfi, E. C., Hoffmann, H. M., Schoeller, E. L., Gorman, M. R., Mellon, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+SIX3+Abolishes+Male+Reproductive+Behavior+Through+Disrupted+Olfactory+Development,+and+Impairs+Female+Fertility+Through+Disrupted+GnRH+Neuron+Migration.">Haploinsufficiency of SIX3 Abolishes Male Reproductive Behavior Through Disrupted Olfactory Development, and Impairs Female Fertility Through Disrupted GnRH Neuron Migration.</a> Molecular Neurobiology. , (2018).</li></ol>

Det allmänna välmåendet av mössen är avgörande för en framgångsrik fertilitet assay21. När du utför en fertilitet analys, är det viktigt att inte fysiskt kontrollera på möss varje dag eftersom detta kan orsaka stress. Ytterligare undvika frekvent buren förändringar, eftersom dessa är också stressande. Helst kommer att bur ändringar göras mer än 1 - 2 gånger per vecka. Ljusexponering under den mörka fasen inverkar negativt avel i nattaktiva gnagare. Slå inte på lampor i avel...

Att uppnå könsmognad och reproduktiv kompetens krävs övergången igenom puberteten. Pubertala övergången och upprätthållandet av fertiliteten i vuxen ålder är reglerat av den reproduktiva axeln, också betecknas i hypotalamus-hypofysaxeln (figur 1). Tidpunkten för pubertala debut och underhåll av fertilitet är hårt reglerad av inre såväl som miljömässiga faktorer för att öka chanserna för överlevnad av avkomman och föräldrar1,2. Detta protokoll ger en icke-invasiv metod för att bestämma pubertala debut hos mus och råtta bekräftar könsmognad innan ställa in en fertilitetsstudie att bedöma reproduktiv kompetens.
En fertilitetsstudie utförs i könsmogna djur och kan initieras efter djuren har gått igenom puberteten. Den reproduktiva axeln är quiescent före könsmognad debut, och nyckel föraren av sexuell mognad, gonadotropinfrisättande hormon (GnRH), släpps på hypofysen i otillräckliga mängder att initiera pubertet (figur 1). Pubertala debut är en komplicerad process som resulterar i ökad GnRH frisättning vid median överlägsenhet. GnRH främjar luteiniserande hormon (LH) och follikelstimulerande hormon (FSH) sekretion från hypofysen, två hormoner som är väsentliga för gonadala mognad och fortplantningsförmågan (figur 1)3,4,5 .
Förolämpningar reproduktiv axel resultera i minskad fertilitet och kan också förskott eller dröjsmål pubertala debut. Villkoren kända för att påverka tidpunkten för pubertala debut och reproduktiv kompetens omfattar exponering för hormonstörande kemikalier6,7, ökade/minskade kropp vikt1,8, förändringar i dag längd2,9 och genetiska mutationer10,11,12,13,14,15.
Uppkomsten av sexuell mognad är ett avgörande steg som måste slutföras innan ställa in en fertilitet assay. Fördelarna med att fastställa pubertala debut genom preputiala separation, slidöppningen och första brunst, är dessa förfaranden, icke-invasiva egenskaper som de inte kräver blodinsamling eller offer av djur16, 17.
Efter pubertala debut bestäms, korrekt ställa in en fertilitetsstudie kommer att ge viktig information om integriteten i den reproduktiva axeln och har vanligtvis den andra fördelen generera försöksdjur för fortsatta studier (förfining) 18. den fertility studie inställning som beskrivs i detta protokoll kan upptäcka både mindre och större underskott i reproduktiv kompetens hos män och kvinnor. Viktiga parametrar utvärderas inkluderar 1) tid till den första kullen, 2) antal kullar som genereras i en given tidsram och 3) kull storlek. Slutligen ingår rekommendationer för typ av uppföljning av studier som kan genomföras för att identifiera orsaken till nedsatt fertilitet.
Protokollet beskrivs refererar till möss och representativa data återspeglar arbetet i transgena möss. Alla medföljande protokoll är dock lika giltiga i råttor.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1092">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Sterile Cotton Balls</td>
			<td style="width:167px;">Fisher</td>
			<td style="width:280px;">22456885</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surface protector</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1420637</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Light meter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21800-014</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microscope Slides</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>29-101</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Optimouse rack with cages</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C89100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Water Bottle Basket&#160;</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C61011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Filtered Cage Tops</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C78210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimice Standard Feeder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C40100SG</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Card Holder</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C43251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cage Cards</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>M52010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bottle Assambley</td>
			<td>AnimalCare systems</td>
			<td>C79122P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bed R&#39;Nest Nesting</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">BRN4WSR</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1/8&#34; Corn Cob bedding&#160;</td>
			<td style="width:167px;">The Andersons</td>
			<td style="width:280px;">8B</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Standard mouse chow</td>
			<td>Teklad</td>
			<td style="width:280px;">7904 (7004)</td>
			<td style="width:429px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scale</td>
			<td>VWR</td>
			<td style="width:280px;">10205-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Polypropylene Beaker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-111F</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of reproductive competence by confirming pubertal onset and performing a fertility assay in mice and rats

Bedömning av reproduktiva kompetens är avgörande för att förstå effekten av en behandling eller genetisk manipulation den reproduktiva axeln, också betecknas i hypotalamus-hypofysaxeln. Den reproduktiva axeln är en nyckel integratör av miljö- och inre indata anpassning fertilitet till goda förutsättningar för reproduktion. Innan du påbörjar en fertilitetsstudie på möss och råttor, könsmognad utvärderas för att utesluta att de observerade reproduktiv fenotyperna orsakas av fördröjd eller frånvarande pubertala debut. Det här protokollet beskriver en icke-invasiv metod för att bedöma pubertala debut hos män genom bestämning av preputiala separation, och hos kvinnor genom slidöppningen och första brunst. Efter bekräftelse av slutförandet av puberteten och uppnåendet av sexuell mognad, kan en fertilitetsstudie initieras. Förfarandet beskrivs de optimala avel villkor för möss och råttor, hur du ställer in en fertilitetsstudie och vilka parametrar som ska utvärdera och avgöra om behandlingen eller gen radering har en inverkan på fertilitet.

De presenterade resultaten är från två olika transgena musmodeller där de transkription faktorn ventrala främre homeobox 1 (Vax1) har tagits bort i hela kroppen på en allel, här kallade heterozygot möss (HET)13eller Vax1 har raderats villkorligt inom GnRH nervceller22, här kallas villkorad KO (cKO). Innan du konfigurerar fertilitetsstudien, är det viktigt att bekräfta pubertala debut i alla mössen.
<p class=...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats at JoVE.com

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Fastställandet av reproduktiva behörighet genom bekräftar pubertala debut och utföra en fertilitet analys av möss och råttor

Många behandlingar och genetiska mutationer påverkar tidpunkten för könsmognad och fertilitet. Det här protokollet beskriver en icke-invasiv metod för att utvärdera pubertala debut på möss och råttor innan ställa in en fertilitetsstudie på könsmogna djur.

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i det reproduktiva området, såsom hur man bestämmer pubertala debuten hos möss och råttor genom preputial separation, vaginal öppning, och upprättande första estrus innan du utför en fertilitetsstudie. Den största fördelen med denna teknik är att genom att etablera pubertala debuten med hjälp av den påvisade icke-invasiva metoden, är det möjligt att följa och genomföra en fertilitetsstudie på djur som är könsmogna. Konsekvenserna av denna teknik sträcker sig mot diagnos av underskott i reproduktion, som orsakas av genetiska mutationer eller behandlingar mottagliga för påverkan reproduktiv kompetens, såsom hormonstörande kemikalier.Även om denna metod kan ge insikt i reproduktiv kompetens hos möss, det kan också tillämpas på andra modellsystem, såsom råttor och hamstrar. Visuell demonstration av denna metod är kritisk, eftersom det kräver bra och delikat djurhantering färdigheter. Det är särskilt viktigt att hålla mössen korrekt för följande visuella identifiering av preputial separation och vaginal öppning.För att förbereda arbetsområdet, placera en pad på bordet. Placera sedan en ren mus bur topp med nätet uppåt, på pad. Därefter ställer du in en skala i arbetsområdet.Placera en ren 500 till 1000 milliliter bägare på vågen och tare den. Placera sedan ett blad bredvid arbetsområdet för att registrera data. Efter detta placerar du musburen i arbetsområdet.Öppna buren och ta bort locket, vattenflaskan och mathållaren till bordet. Medan du håller musen i svansen, placera den på den rena musen bur toppen. Samtidigt som du håller tag i svansen, låt musen för att utforska rutnätet av buren toppen.Dra försiktigt svansen bakåt och närma sig den andra handen till huden nära halsen och öronen. Ta tag i den lösa huden mellan axlarna och nacken med tummen och pekfingret. Ta sedan tag i huden på baksidan med de återstående fingrarna och håll musen genom att försiktigt trycka den mot handen.Med den fria handen, tryck försiktigt huden runt penis tillbaka. Vid preputial separation glider den preputiella huden bakåt, exponerar glans penis. Efter undersökning, registrera förekomsten eller frånvaron av preputial separation.Efter detta, väga musen och spela in dess vikt. Sedan återinföra musen till bostäder buren genom att hålla bägaren över buren golvet och låta musen för att avsluta på egen hand. Placera en bomullstuss, en stor bägare, och en flaska sterilt vatten i arbetsområdet.Häll sterilt vatten i bägaren. Därefter, befuktning bomullstuss med det sterila vattnet i bägaren, och placera den bredvid den rena buren toppen. Placera musburen i arbetsområdet.Överför sedan musen till buren toppen genom att hålla den genom basen av sin svans. Dra försiktigt på musens svans för att uppmuntra en framåtrörelse av musen. Efter detta lyfter du på baken samtidigt som du stöder höfterna med tre fingrar.Rengör försiktigt vulva med den befuktade bomullstussen, sedan undersöka vulva för att avgöra om slidan är helt öppen. Registrera om vaginal öppning har inträffat. Väg sedan musen och lämna tillbaka den till hemburen.Förbered en ren musbur med lock, vatten, mat, sängkläder och häckande material för varje häckande par möss. Fyll sedan i burkorten med den information som krävs. Placera den förberedda ströburen på ett rent bord, sedan långsamt införa en handske i musen bur och lämna den i buren för en kort tid.Närma långsamt mössen med den handskar handen. När mössen kör över handen, ta tag i svansen på en mus mellan tummen och pekfingret, lyft sedan musen i svansen. Musen kan hållas av svansen utan stöd av kroppen i upp till två till tre sekunder.Placera musen i den förberedda avelsburen och stäng sedan buren efter att ha sett till att han- och honmössen har mat, vatten och häckningsmaterial. Med hjälp av den presenterade metoden studerades två olika transgena musmodeller. Vaginal öppning och preputial separation inträffade vid samma ålder och vikt i både heterozygous möss och kontroll möss.Omvänt, vaginal öppning och preputial separation var betydligt försenad i villkorlig knockout honor och hanar, och associeras med ökad kroppsvikt. Vid 4,5 veckors ålder hade kvinnliga kontroller och de villkorliga knockoutmössen jämförbar kroppsvikt, medan de villkorliga knockouthankarna var något tyngre än kontrollerna. Detta tyder på att förseningen i vaginal öppning och preputial separation av villkorlig knockout möss inte var associerad med en försening i viktökning.Efter avslutad pubertal debut, fertilitetsstudien startades vid ålder 10 till 16 veckor. Både manliga och kvinnliga heterozygote möss var sub-fertila. Heterozygote honor genererade färre kullar i tre månaders studie, och både manliga och kvinnliga heterozygote möss genererade mindre kullar.För att illustrera vikten av att bekräfta puberteten inset innan inrätta en fertilitet assay, var reproduktiv kompetens utvärderas i villkorlig knockout möss. Under den 70 dagar långa fertilitetsstudien genererade varken villkorliga knockout-hanar eller honor några kullar. Medan du försöker detta förfarande, är det viktigt att komma ihåg att hantera möss med omsorg och förbli lugn samtidigt närmar sig och hanterar djuren.Efter detta förfarande, andra metoder som att mäta cirkulerande könshormon nivåer kan utföras för att svara på ytterligare frågor, som om infertilitet eller annan subfertilitet orsakades av onormalt testosteron, östrogen, follikelstimulerande hormon, och luteiniserande hormonnivåer. Glöm inte att arbeta med möss kan vara farligt på grund av risken för bitning och utveckling av allergier. För att minska exponeringen bör försiktighetsåtgärder som att bära handskar och en labbrock, och noggrann hantering av mössen, alltid tas när du utför denna procedur.

Research

JoVE Journal

Biology

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Manuell Restraint och gemensamma Compound Rutter Administration hos möss och råttor

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

Diagnostiska obduktion och Selected Tissue och Provtagning på råttor och möss

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and 17ÃƒÅ½Ã‚Â²-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariektomi och 17β-östradiol ersättning i råttor och möss: A Visual Demonstration

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

A Rapid and Specific Microplate Assay for the Determination of Intra- and Extracellular Ascorbate in Cultured Cells

En snabb och specifik mikroplattor analys för bestämning av Intra-och extracellulära Askorbat i odlade celler

Vitamin C (ascorbate) plays numerous important roles in cellular metabolism, many of which have only come to light in recent years. For instance, within ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo mikroinjektion och elektroporation av Mus Testikel

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection av kväveoxid och superoxid i endotelskiktet intakt artärer

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Musen Isolerad perfusion njure Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

Bestämning av sialinsyror i lever och mjölkprover av vildtyp och<em&gt; CMAH</em&gt; Knock-out-möss.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Reproduktionsteknik för ovariell övervakning och kontroll i amfibier

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...