Name: imaging cell interaction in tracheal mucosa during influenza virus infection using two-photon intravital microscopy
Uploaded: 2018-08-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par les subventions de la Fondation National Suisse (FNS) (176124, 145038 et 148183), la Commission européenne Marie Curie réinsertion Grant (612742) et le SystemsX.ch une subvention pour la D.U.P. (2013/124).

Toutes les procédures animales portant sur des souris ont été effectuées conformément aux directives de l’Office vétérinaire fédéral suisse et protocoles animales ont été approuvées par les autorités de vétérinaire local.
1. influenza Infection des souris CD11c-YFP
<ol><li>Prévention des risques biotechnologiques Remarque : La souche de souris adaptée de la grippe H1N1 Rico/8/34 A/Puerto (PR8) a été cultivée dans des oeufs fécondés, purifiée et t...

<ol>
	<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nature Methods. 2 (12), 932-940 (2005).</li><li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+magic:+multiphoton+microscopy+in+the+biosciences.">Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li><li>Fein, M. R., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caught+in+the+act:+revealing+the+metastatic+process+by+live+imaging.">Caught in the act: revealing the metastatic process by live imaging.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 580-593 (2013).</li><li>Dombeck, D. A., Harvey, C. D., Tian, L., Looger, L. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+of+hippocampal+place+cells+at+cellular+resolution+during+virtual+navigation.">Functional imaging of hippocampal place cells at cellular resolution during virtual navigation.</a> Nature Neuroscience. 13 (11), 1433-1440 (2010).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annual review of immunology. 26, 585-626 (2008).</li><li>Germain, R. N., Robey, E. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Decade+of+Imaging+Cellular+Motility+and+Interaction+Dynamics+in+the+Immune+System.">A Decade of Imaging Cellular Motility and Interaction Dynamics in the Immune System.</a> Science. 336 (6089), 1676-1681 (2012).</li><li>Coombes, J. L., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+host-pathogen+interactions+in+vivo.">Dynamic imaging of host-pathogen interactions in vivo.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 353-364 (2010).</li><li>Pulendran, B., Maddur, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immune+Sensing+and+Response+to+Influenza.">Innate Immune Sensing and Response to Influenza.</a> Life Science Journal. 6 (4), 23-71 (2014).</li><li>Lim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+trails+guide+influenza-+specific+CD8+++T+cells+in+the+airways.">Neutrophil trails guide influenza- specific CD8 + T cells in the airways.</a> Science. 349 (6252), (2015).</li><li>Kim, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tracheal+epithelial+cells+in+mice+during+airway+regeneration.">In vivo imaging of tracheal epithelial cells in mice during airway regeneration.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. 47 (6), 864-868 (2012).</li><li>Kretschmer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autofluorescence+multiphoton+microscopy+for+visualization+of+tissue+morphology+and+cellular+dynamics+in+murine+and+human+airways.">Autofluorescence multiphoton microscopy for visualization of tissue morphology and cellular dynamics in murine and human airways.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 96 (8), 918-931 (2016).</li><li>Veres, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-free+in+vivo+imaging+of+the+tracheal+mucosa+using+two-photon+microscopy.">Intubation-free in vivo imaging of the tracheal mucosa using two-photon microscopy.</a> Scientific Reports. 7 (1), 694 (2017).</li><li>Looney, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilized+imaging+of+immune+surveillance+in+the+mouse+lung.">Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung.</a> Nature. 8 (1), 91-96 (2011).</li><li>Thornton, E. E., Krummel, M. F., Looney, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+the+Lung.">Live Imaging of the Lung.</a> Current Protocols in Cytometry. 60 (1), (2012).</li><li>Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+murine+pulmonary+microcirculation.">Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation.</a> Journal of Applied Physiology. 104 (2), 338-346 (2008).</li><li>Fiole, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+intravital+imaging+of+lungs+during+anthrax+infection+reveals+long-lasting+macrophage-dendritic+cell+contacts.">Two-photon intravital imaging of lungs during anthrax infection reveals long-lasting macrophage-dendritic cell contacts.</a> Infection and immunity. 82 (2), 864-872 (2014).</li><li>Secklehner, J., Lo Celso, C., Carlin, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+in+historic+and+contemporary+immunology.">Intravital microscopy in historic and contemporary immunology.</a> Immunology and Cell Biology. 95 (6), 506-513 (2017).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+Dendritic+Cells+in+Respiratory+Viral+Infection+and+Asthma:+From+Protection+to+Immunopathology.">Lung Dendritic Cells in Respiratory Viral Infection and Asthma: From Protection to Immunopathology.</a> Annual Review of Immunology. 30 (1), 243-270 (2012).</li><li>Camp, J. V., Jonsson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+neutrophils+in+viral+respiratory+disease.">A role for neutrophils in viral respiratory disease.</a> Frontiers in Immunology. 8, (2017).</li><li>van Gisbergen, K. P. J. M., Sanchez-Hernandez, M., Geijtenbeek, T. B. H., van Kooyk, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+mediate+immune+modulation+of+dendritic+cells+through+glycosylation-dependent+interactions+between+Mac-1+and+DC-SIGN.">Neutrophils mediate immune modulation of dendritic cells through glycosylation-dependent interactions between Mac-1 and DC-SIGN.</a> The Journal of experimental medicine. 201 (8), 1281-1292 (2005).</li><li>Gonzalez, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture+of+influenza+by+medullary+dendritic+cells+via+SIGN-R1+is+essential+for+humoral+immunity+in+draining+lymph+nodes.">Capture of influenza by medullary dendritic cells via SIGN-R1 is essential for humoral immunity in draining lymph nodes.</a> Nature Immunology. 11 (5), 427-434 (2010).</li><li>Lindquist, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo.">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nature immunology. 5 (12), 1243-1250 (2004).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+V&#947;9V&#948;2-T+cells+efficiently+kill+influenza+virus-infected+lung+alveolar+epithelial+cells.">Human V&#947;9V&#948;2-T cells efficiently kill influenza virus-infected lung alveolar epithelial cells.</a> Cellular and Molecular Immunology. 10 (2), 159-164 (2013).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+transgenic+cyan+fluorescent+protein+(CFP)-expressing+nude+mouse+for+&amp;#34;technicolor&amp;#34;+cancer+imaging.">Development of the transgenic cyan fluorescent protein (CFP)-expressing nude mouse for &amp;#34;technicolor&amp;#34; cancer imaging.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 107 (2), 328-334 (2009).</li><li>Jaber, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+regimens,+variability,+and+complications+associated+with+using+repeat-bolus+dosing+to+extend+a+surgical+plane+of+anesthesia+in+laboratory+mice.">Dose regimens, variability, and complications associated with using repeat-bolus dosing to extend a surgical plane of anesthesia in laboratory mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science JAALAS. 53 (6), 684-691 (2014).</li><li>Pizzagalli, D. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+Tracking+Database,+a+collection+of+immune+cell+tracks+from+intravital+2-photon+microscopy+videos.">Leukocyte Tracking Database, a collection of immune cell tracks from intravital 2-photon microscopy videos.</a> Scientific Data. , (2018).</li><li>Sommer, C., Straehle, C., Kothe, U., Hamprecht, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ilastik:+Interactive+learning+and+segmentation+toolkit.">Ilastik: Interactive learning and segmentation toolkit.</a> 2011 IEEE International Symposium on Biomedical Imaging: From Nano to Macro. , 230-233 (2011).</li><li>Beltman, J. B., Mar&#233;e, A. F. M., De Boer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+immune+cell+migration.">Analysing immune cell migration.</a> Nature Reviews Immunology. 9 (11), 789-798 (2009).</li><li>Keller, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility,+cell+shape,+and+locomotion+of+neutrophil+granulocytes.">Motility, cell shape, and locomotion of neutrophil granulocytes.</a> Cell motility. 3 (1), 47-60 (1983).</li><li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Microscopy.">Intravital Microscopy.</a> Immunity. 21 (3), 315-329 (2004).</li><li>Lambert Emo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Influenza+Infection+of+the+Trachea+Reveals+Dynamic+Regulation+of+CD8++T+Cell+Motility+by+Antigen.">Live Imaging of Influenza Infection of the Trachea Reveals Dynamic Regulation of CD8+ T Cell Motility by Antigen.</a> PLOS Pathogens. 12 (9), e1005881 (2016).</li><li>Kjos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+fluorescent+Streptococcus+pneumoniae+for+live-cell+imaging+of+host-pathogen+interactions.">Bright fluorescent Streptococcus pneumoniae for live-cell imaging of host-pathogen interactions.</a> Journal of bacteriology. 197 (5), 807-818 (2015).</li></ol>

Cet ouvrage présente un protocole détaillé pour la génération d’images de 4D montrant la migration des neutrophiles Moutschen transférés et de leurs interactions avec les DC lors d’une infection grippale dans la trachée de souris. Le modèle décrit 2p-IVM sera pertinent d’étudier la dynamique de cellules immunitaires lors d’une infection des voies respiratoires.
Récemment, plusieurs modèles basés sur la visualisation dynamique de cellules dans les voies aériennes ont ét?...

La microscopie intravitale biphotonique (2p-IVM) est une technique efficace pour d’imagerie en temps réel des interactions cellule-cellule lorsqu’ils se produisent dans leur environnement naturel1. L’un des principaux avantages de cette méthode est qu’elle permet l’étude des processus cellulaires à une plus grande profondeur de l’échantillon (500 µm à 1 mm) par rapport aux autres de techniques d’imagerie traditionnelle2. Dans le même temps, l’utilisation de deux photons de faible énergie générée par le laser à deux photons minimise la photo-lésions tissulaires généralement associées à l’image acquisition processus2. Au cours de la dernière décennie, 2p-IVM a été appliquée à l’étude des différents types d’interactions cellule-cellule dans plusieurs disciplines3,4,5. Ces études ont été particulièrement pertinents pour étudier les cellules immunitaires, qui sont caractérisent par leur dynamisme élevé et la formation d’importants contacts après les signaux générés par les autres cellules et l’environnement. 2P-IVM a été appliquée également pour étudier les interactions entre les pathogènes et hôte6. En effet, il a été précédemment démontré que certains agents pathogènes peuvent modifier le type et la durée des contacts entre les cellules immunitaires, qui entravent, en conséquence, la réponse immunitaire7.
La muqueuse des voies aériennes est le premier site où la réponse immunitaire contre les pathogènes aéroportés est généré8. En vivo analyse des interactions hôte-pathogène dans ce tissu est donc essentielle de comprendre l’initiation des mécanismes de défense de l’hôte au cours de l’infection. Cependant, 2p-IVM des voies respiratoires est difficile, principalement en raison des artefacts produits par le cycle de respiration de l’animal, ce qui compromet le processus d’acquisition d’images. Récemment, différents modèles chirurgicaux ont été décrites pour imagerie trachée murine9,10,11,12 et poumons13,14,15, 16. Trachéale 2p-IVM modèles représentent un excellent montage pour visualiser la phase initiale de la réaction immunitaire dans les voies aériennes supérieures, tandis que les alvéoles pulmonaires 2p-IVM modèles ne conviennent plus étudier la phase tardive des infections. Les modèles développés pulmonaires présentent une limitation associée à la présence d’alvéoles remplies d’air, qui restreignent la pénétration optique du laser et de rendre la muqueuse des voies respiratoires intrapulmonaires inaccessible pour in vivo de l’imagerie17 . À l’inverse, la structure de la trachée, formée par un épithélium continu, facilite l’acquisition d’images.
Nous présentons ici un protocole qui comprend une description détaillée des étapes requises pour effectuer une infection grippale, préparation chirurgicale des animaux et 2p-IVM de la trachée. En outre, les auteurs décrivent un montage expérimental spécifique pour la visualisation des neutrophiles et les cellules dendritiques (DC), deux types de cellules immunitaires qui jouent un rôle important comme médiateurs du mécanisme de défense contre l’influenza virus18,19 . Enfin, nous décrivons une procédure pour analyser les interactions de neutrophile-DC. Ces contacts auraient dû être divulgués pour moduler l’activation DC et, subséquemment, d’influer sur les réponses immunitaires contre les agents pathogènes20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gigasept instru AF</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td></td>
			<td>4% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c-YFP mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>008829</td>
			<td>mice were bred in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CK6-ECFP mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>004218</td>
			<td>mice were bred in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 X Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline modified without Calcium Choride and Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 X Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline modified without Calcium Choride and Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1408-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll PLUS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E0414-1L</td>
			<td>Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin Labatec</td>
			<td>Labatec Pharma</td>
			<td>7680632310024</td>
			<td>Store at RT, store at 4&#176;C when in solution of ket/xyl mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun 2% (Xylazin)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>6293841.00.00</td>
			<td>Store at RT, store at 4&#176;C when in solution of ket/xyl mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G 1 mL Sub-Q BD Plastipak</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 0,3 mL BD Micro-Fine Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Syringes</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>300185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 18 G needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>304622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introcan Safety 20G (catheter)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4251652.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Cell Culture Cluster</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640 + HEPES (1X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>42401-018</td>
			<td>Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL Research Grade</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5401020001</td>
			<td>Store at -20&#176;C / collagenase (I and II) mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Amresco (VWR)</td>
			<td>0649-50KU</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTrace Violet stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C34557</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>EDS-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10270-106</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Micro Medical Tubing</td>
			<td>2Biological Instruments SNC</td>
			<td>#BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Plastic Tape</td>
			<td>M Plast</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>Ohropax</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Tolerance Glass Coverslip 15mm Round</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Portable Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuvo Lite mark 5</td>
			<td>GCE medline</td>
			<td>14111211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniTag (gaseous anesthesia and heating bench)</td>
			<td>Tem Sega</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURGICAL BOARD</td>
			<td>University of Bern</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrimScope II Two-photon microscope</td>
			<td>LaVision Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Vision Ti:Sa lasers</td>
			<td>Coherent Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25X NA 1.05 water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLPLN25XWMP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Cube&#38;The Box incubation chamber and temperature controller</td>
			<td>Life imaging Services</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris 9.1.0</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging cell interaction in tracheal mucosa during influenza virus infection using two-photon intravital microscopy

L’analyse de cellule-cellule ou cellule-pathogen interactions in vivo est un outil important pour comprendre la dynamique de la réponse immunitaire à l’infection. Microscopie intravitale biphotonique (2p-IVM) permet l’observation des interactions entre les cellules dans les tissus profonds dans les animaux vivants, tout en minimisant le photoblanchiment généré lors de l’acquisition de l’image. A ce jour, différents modèles pour 2p-IVM des organes lymphoïdes et non lymphoïdes ont été décrits. Toutefois, l’imagerie des organes respiratoires reste un défi en raison de la circulation liée au cycle de respiration de l’animal.
Nous décrivons ici un protocole afin de visualiser in vivo des cellules immunitaires des interactions dans la trachée chez des souris infectées avec le virus de la grippe à l’aide de 2p-IVM. À cette fin, nous avons développé une plate-forme d’imagerie personnalisée, qui comprenait l’exposition chirurgicale et l’intubation de la trachée, suivie de l’acquisition des images dynamiques des neutrophiles et les cellules dendritiques (DC) dans l’épithélium muqueux. En outre, nous avons détaillé les étapes nécessaires à l’exercice de la grippe par voie nasale infection et flux analyse cytométrique des cellules immunitaires dans la trachée. Enfin, nous avons analysé les neutrophiles et la motilité DC ainsi que leurs interactions au cours d’un film. Ce protocole permet la génération d’images 4D stable et lumineux nécessaire pour l’évaluation des interactions cellule-cellule dans la trachée.

Dans cet ouvrage, nous décrit un protocole détaillé pour l’étude in vivo la motilité et les interactions entre les neutrophiles et DC au cours de l’infection grippale dans la trachée murine (Figure 3 a). À cette fin, nous avons isolé les neutrophiles CFP+ (92 % de pureté ; Figure 3 b) de CK6-ECFP souris et nous Moutschen transférés dans une souris CD11c-YFP contaminée par un virus. Après cela...

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Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Dans cette étude, nous présentons un protocole pour effectuer deux photons intravitale d’imagerie et de la cellule analyse des interactions dans la muqueuse trachéale murine après infection par le virus de la grippe. Ce protocole sera pertinent pour les chercheurs qui étudient la dynamique de cellules immunitaires lors d’infections respiratoires.

Imagerie cellulaire Interaction dans la muqueuse trachéale au cours de l’infection par le Virus grippal à l’aide de la microscopie intravitale biphotonique

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Utiliser l&#39;imagerie Bioluminescent chargé d&#39;enquêter sur une synergie entre Streptococcus pneumoniae Et virus Influenza A de souriceaux

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Recherche

Immunologie et infection

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Imagerie intravitale du Thymus souris utilisant la 2-microscopie biphotonique

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Virus de la grippe Propagation dans embryonnés de poulet Oeufs

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

À long terme intravitale microscopie multiphotonique imagerie des cellules immunitaires dans sains et malades du foie en utilisant des souris CXCR6.Gfp Reporter

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrophiles Isolement et analyse pour déterminer leur rôle dans le lymphome cellulaire Sensibilité aux agents thérapeutiques

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Études de Virus influenza de type A dans un modèle murin d’Infection

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

Essai de réparation Membrane cellulaire à l’aide d’un Microscope biphotonique Laser

Numerous pathophysiological insults can cause damage to cell membranes and, when coupled with innate defects in cell membrane repair or integrity, can ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Two-photon Imaging intravitale des leucocytes au cours de la réponse immunitaire dans le foie de souris traitées Lipopolysaccharide

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Mise en place d’une Infection virale et analyse de l’Interaction hôte-Virus chez Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

Un virus de la grippe Luciferase-fluorescent Reporter pour l'imagerie en direct et la quantification de l'infection virale

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...