Name: imaging cell interaction in tracheal mucosa during influenza virus infection using two-photon intravital microscopy
Uploaded: 2018-08-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי המענקים הקרן הלאומית השוויצרית (SNF) (176124, 145038 ו 148183), אירופה הנציבות מארי קירי אפשרות המענק (612742), את SystemsX.ch עבור מענק D.U.P. (2013/124).

כל ההליכים בבעלי חיים עכברים מעורבים בוצעו על פי הנחיות המשרד הווטרינרי הפדרלי השוויצרי ופרוטוקולים בעלי חיים אושרו על-ידי השלטונות הווטרינר המקומי.
1. שפעת זיהום של CD11c-YFP עכברים
<ol><li>אבטחה הערה: המתח העכבר מותאם של שפעת H1N1 ריקו/8/34 A/Puerto (PR8) גדל בהביצים, מטוהרים, טי...

<ol>
	<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nature Methods. 2 (12), 932-940 (2005).</li><li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+magic:+multiphoton+microscopy+in+the+biosciences.">Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li><li>Fein, M. R., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caught+in+the+act:+revealing+the+metastatic+process+by+live+imaging.">Caught in the act: revealing the metastatic process by live imaging.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 580-593 (2013).</li><li>Dombeck, D. A., Harvey, C. D., Tian, L., Looger, L. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+imaging+of+hippocampal+place+cells+at+cellular+resolution+during+virtual+navigation.">Functional imaging of hippocampal place cells at cellular resolution during virtual navigation.</a> Nature Neuroscience. 13 (11), 1433-1440 (2010).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annual review of immunology. 26, 585-626 (2008).</li><li>Germain, R. N., Robey, E. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Decade+of+Imaging+Cellular+Motility+and+Interaction+Dynamics+in+the+Immune+System.">A Decade of Imaging Cellular Motility and Interaction Dynamics in the Immune System.</a> Science. 336 (6089), 1676-1681 (2012).</li><li>Coombes, J. L., Robey, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+host-pathogen+interactions+in+vivo.">Dynamic imaging of host-pathogen interactions in vivo.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 353-364 (2010).</li><li>Pulendran, B., Maddur, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immune+Sensing+and+Response+to+Influenza.">Innate Immune Sensing and Response to Influenza.</a> Life Science Journal. 6 (4), 23-71 (2014).</li><li>Lim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+trails+guide+influenza-+specific+CD8+++T+cells+in+the+airways.">Neutrophil trails guide influenza- specific CD8 + T cells in the airways.</a> Science. 349 (6252), (2015).</li><li>Kim, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tracheal+epithelial+cells+in+mice+during+airway+regeneration.">In vivo imaging of tracheal epithelial cells in mice during airway regeneration.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. 47 (6), 864-868 (2012).</li><li>Kretschmer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autofluorescence+multiphoton+microscopy+for+visualization+of+tissue+morphology+and+cellular+dynamics+in+murine+and+human+airways.">Autofluorescence multiphoton microscopy for visualization of tissue morphology and cellular dynamics in murine and human airways.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 96 (8), 918-931 (2016).</li><li>Veres, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-free+in+vivo+imaging+of+the+tracheal+mucosa+using+two-photon+microscopy.">Intubation-free in vivo imaging of the tracheal mucosa using two-photon microscopy.</a> Scientific Reports. 7 (1), 694 (2017).</li><li>Looney, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilized+imaging+of+immune+surveillance+in+the+mouse+lung.">Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung.</a> Nature. 8 (1), 91-96 (2011).</li><li>Thornton, E. E., Krummel, M. F., Looney, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+the+Lung.">Live Imaging of the Lung.</a> Current Protocols in Cytometry. 60 (1), (2012).</li><li>Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+murine+pulmonary+microcirculation.">Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation.</a> Journal of Applied Physiology. 104 (2), 338-346 (2008).</li><li>Fiole, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+intravital+imaging+of+lungs+during+anthrax+infection+reveals+long-lasting+macrophage-dendritic+cell+contacts.">Two-photon intravital imaging of lungs during anthrax infection reveals long-lasting macrophage-dendritic cell contacts.</a> Infection and immunity. 82 (2), 864-872 (2014).</li><li>Secklehner, J., Lo Celso, C., Carlin, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+in+historic+and+contemporary+immunology.">Intravital microscopy in historic and contemporary immunology.</a> Immunology and Cell Biology. 95 (6), 506-513 (2017).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+Dendritic+Cells+in+Respiratory+Viral+Infection+and+Asthma:+From+Protection+to+Immunopathology.">Lung Dendritic Cells in Respiratory Viral Infection and Asthma: From Protection to Immunopathology.</a> Annual Review of Immunology. 30 (1), 243-270 (2012).</li><li>Camp, J. V., Jonsson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+neutrophils+in+viral+respiratory+disease.">A role for neutrophils in viral respiratory disease.</a> Frontiers in Immunology. 8, (2017).</li><li>van Gisbergen, K. P. J. M., Sanchez-Hernandez, M., Geijtenbeek, T. B. H., van Kooyk, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+mediate+immune+modulation+of+dendritic+cells+through+glycosylation-dependent+interactions+between+Mac-1+and+DC-SIGN.">Neutrophils mediate immune modulation of dendritic cells through glycosylation-dependent interactions between Mac-1 and DC-SIGN.</a> The Journal of experimental medicine. 201 (8), 1281-1292 (2005).</li><li>Gonzalez, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture+of+influenza+by+medullary+dendritic+cells+via+SIGN-R1+is+essential+for+humoral+immunity+in+draining+lymph+nodes.">Capture of influenza by medullary dendritic cells via SIGN-R1 is essential for humoral immunity in draining lymph nodes.</a> Nature Immunology. 11 (5), 427-434 (2010).</li><li>Lindquist, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+dendritic+cell+networks+in+vivo.">Visualizing dendritic cell networks in vivo.</a> Nature immunology. 5 (12), 1243-1250 (2004).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+V&#947;9V&#948;2-T+cells+efficiently+kill+influenza+virus-infected+lung+alveolar+epithelial+cells.">Human V&#947;9V&#948;2-T cells efficiently kill influenza virus-infected lung alveolar epithelial cells.</a> Cellular and Molecular Immunology. 10 (2), 159-164 (2013).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+transgenic+cyan+fluorescent+protein+(CFP)-expressing+nude+mouse+for+&amp;#34;technicolor&amp;#34;+cancer+imaging.">Development of the transgenic cyan fluorescent protein (CFP)-expressing nude mouse for &amp;#34;technicolor&amp;#34; cancer imaging.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 107 (2), 328-334 (2009).</li><li>Jaber, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+regimens,+variability,+and+complications+associated+with+using+repeat-bolus+dosing+to+extend+a+surgical+plane+of+anesthesia+in+laboratory+mice.">Dose regimens, variability, and complications associated with using repeat-bolus dosing to extend a surgical plane of anesthesia in laboratory mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science JAALAS. 53 (6), 684-691 (2014).</li><li>Pizzagalli, D. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+Tracking+Database,+a+collection+of+immune+cell+tracks+from+intravital+2-photon+microscopy+videos.">Leukocyte Tracking Database, a collection of immune cell tracks from intravital 2-photon microscopy videos.</a> Scientific Data. , (2018).</li><li>Sommer, C., Straehle, C., Kothe, U., Hamprecht, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ilastik:+Interactive+learning+and+segmentation+toolkit.">Ilastik: Interactive learning and segmentation toolkit.</a> 2011 IEEE International Symposium on Biomedical Imaging: From Nano to Macro. , 230-233 (2011).</li><li>Beltman, J. B., Mar&#233;e, A. F. M., De Boer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+immune+cell+migration.">Analysing immune cell migration.</a> Nature Reviews Immunology. 9 (11), 789-798 (2009).</li><li>Keller, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motility,+cell+shape,+and+locomotion+of+neutrophil+granulocytes.">Motility, cell shape, and locomotion of neutrophil granulocytes.</a> Cell motility. 3 (1), 47-60 (1983).</li><li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Microscopy.">Intravital Microscopy.</a> Immunity. 21 (3), 315-329 (2004).</li><li>Lambert Emo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+Influenza+Infection+of+the+Trachea+Reveals+Dynamic+Regulation+of+CD8++T+Cell+Motility+by+Antigen.">Live Imaging of Influenza Infection of the Trachea Reveals Dynamic Regulation of CD8+ T Cell Motility by Antigen.</a> PLOS Pathogens. 12 (9), e1005881 (2016).</li><li>Kjos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+fluorescent+Streptococcus+pneumoniae+for+live-cell+imaging+of+host-pathogen+interactions.">Bright fluorescent Streptococcus pneumoniae for live-cell imaging of host-pathogen interactions.</a> Journal of bacteriology. 197 (5), 807-818 (2015).</li></ol>

עבודה זו מציגה פרוטוקול מפורט לדור של תמונות 4D מציג את ההעברה של נויטרופילים הועבר adoptively והאינטראקציה שלהם עם DC במהלך זיהום שפעת לקנה העכבר. המודל שתואר 2, P-IVM יהיו רלוונטיים בחקר דינמיקה תא החיסון במהלך זיהום דרכי הנשימה.
לאחרונה, מספר מודלים בהתבסס על הפריט החזותי של דינמי?...

מיקרוסקופ שני הפוטונים intravital (P 2-IVM) היא טכניקה יעילה בזמן אמת הדמיה של אינטראקציות לתא כפי שהן מופיעות בתוך הסביבה הטבעית שלהם1. אחד היתרונות העיקריים של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת חקר תהליכים תאיים בעומק הדגימה גדולה יותר (500 מיקרומטר עד 1 מ מ) לעומת מסורתיות אחרות הדמיה טכניקות2. במקביל, השימוש של שני פוטונים אנרגיה נמוכה שנוצר על ידי לייזר שני הפוטונים ממזער את צילום-הנזק לרקמות הקשורות בדרך כלל תהליך רכישת תמונה2. במהלך העשור האחרון, P 2-IVM הוחל ללמוד סוגים שונים של תאים תאים אינטראקציות מספר דיסציפלינות3,4,5. מחקרים אלו היו רלבנטיות במיוחד לחקור תאים חיסוניים, המאופיינים דינמיות גבוהה שלהם ואת היווצרות הקשר בולטת בעקבות את האותות שנוצר על ידי תאים אחרים ועל הסביבה. 2, P-IVM הוחל גם ללמוד את האינטראקציות בין פתוגניות וכן שורה6. ואכן, בעבר הוכח כי כמה פתוגנים ניתן לשנות את סוג ואת משך הקשר בין תאים חיסוניים, פוגעות, כתוצאה מכך, את התגובה החיסונית7.
רירית דרכי הנשימה הוא האתר הראשון שבו היא התגובה החיסונית נגד פתוגנים מוטס שנוצר8. לכן, אין ויוו ניתוח של פתוגן-פונדקאי אינטראקציות בתוך הרקמה הזו הוא קריטי להבין אתחול של מנגנוני ההגנה מארח במהלך זיהום. עם זאת, P 2-IVM של דרכי הנשימה הוא מאתגר בעיקר בשל הממצאים המיוצר על ידי מחזור נשימה של החיה, אשר פוגעת התהליך של ייבוא תמונות. לאחרונה, מודלים כירורגיים שונים תוארו עבור הדמיה מאתר את קנה הנשימה9,10,11,12 ו הריאות13,14,15, 16. P 2 בקנה הנשימה-IVM דגמים מייצגים של הגדרת מצוינת להמחיש את השלב הראשוני של התגובה החיסונית את דרכי הנשימה העליונות, ואילו הריאה-alveoli 2, P-IVM מודלים מתאימים יותר ללמוד לשלב מאוחר של זיהומים. הדגמים ריאות מפותחות להציג מגבלה הקשורים עם הנוכחות של alveoli מלא אוויר, אשר מגבילים את חדירת הלייזר אופטי, להפוך את שכבת הרירית של דרכי הנשימה intrapulmonary נגיש עבור ויוו הדמיה17 . לעומת זאת, המבנה של קנה הנשימה, שהוקמה על ידי האפיתל רציפה, מקלה על ייבוא תמונות.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול הכולל תיאור מפורט של כל השלבים הדרושים לביצוע שפעת זיהום, הכנה כירורגי של בעלי החיים, P 2-IVM של חוליות הצוואר. בנוסף, אנו מתארים את מלכודת ניסיוני ספציפי עבור הפריט החזותי של נויטרופילים, תאים דנדריטים (DC), שני סוגי תאים חיסוניים לשחק תפקיד חשוב בתור מגשרות של מנגנון ההגנה נגד שפעת וירוס18,19 . לבסוף, אנו מתארים הליך ניתוח אינטראקציות נויטרופילים-DC. אנשי קשר אלה הוכחו לווסת DC הפעלה, ובהמשך, להשפיע על תגובות מערכת החיסון נגד פתוגנים20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gigasept instru AF</td>
			<td>Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td></td>
			<td>4% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c-YFP mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>008829</td>
			<td>mice were bred in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CK6-ECFP mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>004218</td>
			<td>mice were bred in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 X Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline modified without Calcium Choride and Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 X Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline modified without Calcium Choride and Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1408-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll PLUS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E0414-1L</td>
			<td>Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin Labatec</td>
			<td>Labatec Pharma</td>
			<td>7680632310024</td>
			<td>Store at RT, store at 4&#176;C when in solution of ket/xyl mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun 2% (Xylazin)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>6293841.00.00</td>
			<td>Store at RT, store at 4&#176;C when in solution of ket/xyl mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G 1 mL Sub-Q BD Plastipak</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>305501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 0,3 mL BD Micro-Fine Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Syringes</td>
			<td>BD Plastipak</td>
			<td>300185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance 3 18 G needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>304622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introcan Safety 20G (catheter)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4251652.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 Well Cell Culture Cluster</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640 + HEPES (1X)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>42401-018</td>
			<td>Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL Research Grade</td>
			<td>Roche</td>
			<td>5401020001</td>
			<td>Store at -20&#176;C / collagenase (I and II) mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Amresco (VWR)</td>
			<td>0649-50KU</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTrace Violet stain</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C34557</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>EDS-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10270-106</td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 Micro Medical Tubing</td>
			<td>2Biological Instruments SNC</td>
			<td>#BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Plastic Tape</td>
			<td>M Plast</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>Ohropax</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Tolerance Glass Coverslip 15mm Round</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Portable Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuvo Lite mark 5</td>
			<td>GCE medline</td>
			<td>14111211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniTag (gaseous anesthesia and heating bench)</td>
			<td>Tem Sega</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURGICAL BOARD</td>
			<td>University of Bern</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrimScope II Two-photon microscope</td>
			<td>LaVision Biotec</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Vision Ti:Sa lasers</td>
			<td>Coherent Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25X NA 1.05 water immersion objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLPLN25XWMP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Cube&#38;The Box incubation chamber and temperature controller</td>
			<td>Life imaging Services</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris 9.1.0</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging cell interaction in tracheal mucosa during influenza virus infection using two-photon intravital microscopy

הניתוח של תאים תאים או תא-פתוגן אינטראקציה ויוו היא כלי חשוב כדי להבין את הדינמיקה של התגובה החיסונית לזיהום. מיקרוסקופ שני הפוטונים intravital (P 2-IVM) מאפשרת התבוננות תא אינטראקציות רקמות עמוק בבעלי החיים, תוך צמצום של photobleaching שנוצרו במהלך ייבוא תמונות. עד כה, תוארו מודלים שונים 2, P-IVM איברים הלימפה והלימפה. עם זאת, הדמיה של איברי הנשימה נשאר אתגר עקב התנועה הקשורים מחזור נשימה של החיה.
כאן, אנו מתארים את פרוטוקול להמחיש ויוו תא החיסון אינטראקציות לקנה של עכברים נגועים בנגיף שפעת באמצעות 2, P-IVM. למטרה זו, פיתחנו פלטפורמה הדמיה מותאם אישית, שכללה צנרור של חוליות הצוואר, ואחריו רכישת תמונות דינמיות של נויטרופילים, תאים דנדריטים (DC) של האפיתל הרירית והחשיפה כירורגי. בנוסף, אנחנו מפורט הצעדים הדרושים לביצוע שפעת תוך-אפי זיהום זרימת cytometric וניתוח של תאים חיסוניים לקנה. לבסוף, ניתחנו נויטרופילים, תנועתיות DC וכן האינטראקציות שלהם במהלך הסרט. פרוטוקול זה מאפשר לדור של תמונות 4D יציב ובהיר הצורך להערכה של תא-תא אינטראקציות לקנה.

בעבודה זו, אנו המתואר פרוטוקול מפורט ללמוד ויוו תנועתיות ואינטראקציות בין נויטרופילים DC במהלך זיהום שפעת בקנה הנשימה מאתר (איור 3 א). למטרה זו, בודדנו CFP+ נויטרופילים (92% טוהר; איור 3B) מ- CK6-ECFP עכברים, ואנו adoptively אותם לתוך עכבר CD11c-YFP נ...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy at JoVE.com

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לבצע שני הפוטונים intravital הדמיה ותא ניתוח אינטראקציות בין רירית והכו אותי מאתר לאחר ההדבקה בנגיף שפעת. פרוטוקול זה יהיה רלוונטי עבור החוקרים ללמוד את הדינמיקה תא החיסון במהלך זיהומים בדרכי הנשימה.

אינטראקציה תא הדמיה ב רירית והכו אותי במהלך זיהום בנגיף שפעת באמצעות מיקרוסקופ שני הפוטונים Intravital

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

הדמיה Intravital של קורנית עכבר באמצעות 2-פוטון מיקרוסקופית

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

רביה וירוס השפעת בembryonated עוף ביצים

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

לטווח ארוך Intravital multiphoton מיקרוסקופית הדמיה של תאים חיסוני בבריאים וחולה כבד באמצעות עכברים CXCR6.Gfp Reporter

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

בידוד נויטרופילים וניתוח כדי לקבוע את תפקידם רגישות תאים לימפומה לסוכנים טיפוליים

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

Assay תיקון קרום התא באמצעות מיקרוסקופ שני הפוטונים לייזר

Numerous pathophysiological insults can cause damage to cell membranes and, when coupled with innate defects in cell membrane repair or integrity, can ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

שני הפוטונים הדמיה Intravital של לויקוציטים במהלך התגובה החיסונית בכבד עכבר שטופלו ליפופוליסכריד

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

לוציפראז-כתבת פלורסנט וירוס שפעת עבור הדמיה חיה וכימות של זיהום נגיפי

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...