Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af spanske Ministeriet for økonomi og konkurrenceevne gennem Miguel Servet Program [CP13/00077] cofounded af FEDER (Europæiske Regionaludviklingsfond) og tildelt til Dr. R. Gómez samt af Carlos III Institute of Health tilskud Dr R Gómez [PI14/00547 og PI17/02329] og Prof. A. Cano [PI12/02582].

Brugen af menneskelige væv prøver blev godkendt af institutionelle Review Board og etiske komité i den Hospital Universitario La Fe. Alle patienter givet skriftlig informeret samtykke. Den undersøgelse, der involverer dyr blev godkendt af det institutionelle Animal Care udvalg på Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia, og alle procedurer blev udført efter retningslinjer for pleje og brug af pattedyr fra de nationale kontorer af sundhed.
1. endometriosevævet indsamling og forb...

<ol>
	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

Protokollen heri detaljeret beskriver gennemførelsen af en dyremodel af endometriose, hvor arkitektur af implanterer læsioner arkitektur er bevaret mens samtidig giver mulighed for tidstro vurdering af fluorescens udledes af mCherry mærket endometriosevævet. I denne protokol beskriver vi brugen af en bestemt in vivo billedbehandlingssystem og tilhørende software til ikke-invasivt vurdere fluorescens udledes af mærket læsion. Hver bruger skal tilpasse protokollen afhængigt af specifikke imaging enhed og tilhørend...

Endometriose er en kronisk gynækologisk lidelse initieret af implantation af funktionelle endometrium uden for livmoderhulen. Ektopiske læsioner vokse og inducerer inflammatoriske processer, der fører til kronisk bækken smerter og barnløshed1. Det anslås, at op til 10-15% af kvinder i den fødedygtige alder er påvirket af endometriosis2, og det er til stede i ca. 40 – 50% af infertile kvinder3. Nuværende farmakologiske behandlinger for endometriose er ude af stand til helt udrydde læsioner og ikke fri for bivirkninger4,5. Forskning for mere effektive terapier kræver af forfinelse af de eksisterende Dyremodeller for endometriose på en sådan måde, at menneskelige læsioner kan efterlignes korrekt, og virkningerne af forbindelser på læsion størrelse blandt andre kan vurderes nøje.
Primat modeller har været brugt til at efterligne endometriose ved at implantere ektopisk læsioner til histologisk identiske og på lignende steder som mennesker6,7,8; Men, etiske overvejelser og de høje økonomiske omkostninger relateret til forsøg med primater grænse deres brug9. Brugen af små dyr, især gnavere, til gennemførelsen af in vivo modeller af endometriose fortsat blive begunstiget, da det giver mulighed for undersøgelser med et større antal individer10,11. Endometriose kan være fremkaldt hos disse dyr ved hjælp af transplantation enten stykker af gnaver uterin horn ("homologe modeller")12,13 eller menneskelige endometrie/endometriotic væv til ektopiske steder (heterolog modeller)14 . I modsætning til mennesker, gnavere kaste ikke deres endometriosevævet og dermed endometriose kan ikke udvikles spontant i disse arter. Homologe mus modeller af endometriose er blevet kritiseret, at implanteret ektopisk mus uterin væv afspejler derfor ikke Karakteristik af menneskelige endometriotic læsioner15.
Passende fysiologi af endometriose kan efterlignes i heterolog modeller af endometriose hvor frisk menneskelige endometrie fragmenter er implanteret i immundefekte dyr. I konventionelle heterolog modeller vurderes de terapeutiske virkninger af forbindelser af interesse almindeligvis ved slutpunktet ved vurdering af læsion størrelse med brug af calipre16. En indlysende begrænsning er, at som sådan slutpunkt dyremodeller ikke studerer implantation dynamics eller endometriotic læsion udvikling over tid. En yderligere begrænsning er, at brugen af calipre ikke tillader nøjagtige målinger af læsion størrelse. Faktisk, standard fejlmargen af calipre er i den samme række (f.eks. millimeter) som størrelsen af de læsioner, som implanteres i mus, dermed begrænser evne af disse værktøjer til at registrere faktiske variationer i størrelse.
For at overvinde sådanne begrænsninger, heri, beskriver vi generation af en heterolog musemodel af endometriose, hvor indopereret humant væv er manipuleret til at udtrykke en reporter m-Cherry fluorescerende proteiner. Påvisning af de fluorescerende signal med et passende billede system gør det muligt for ikke-invasiv overvågning af læsion status med samtidige kvantificering af sin størrelse i realtid. Således giver vores model klare fordele i forhold til konventionelle slutpunkt modeller, da det giver mulighed for real-time non-invasiv overvågning og muligheden for at udføre mere objektive og nøjagtig vurdering af variationer i læsion størrelse.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

Her, beskriver vi en protokol for gennemførelsen af en heterolog musemodel, hvor progressionen af endometriose kan vurderes i realtid via noninvasive overvågning af fluorescens udledes af implanterede ektopisk menneskelige endometriosevævet. Til dette formål fås biopsier af menneskelige endometriet fra donor kvinder løbende oocyt donation. Menneskelige endometrie fragmenter er kulturperler i overværelse af adenovirus manipuleret til at udtrykke cDNA for reporter fluorescerende protein mCherry. Efter visualisering, mærket væv med en optimal mængde af fluorescens efter infektion er efterfølgende valgt til implantation i modtagerens mus. En uge før implantering, recipient mus er oophorectomized, og estradiol pellets er placeret subkutant til at opretholde overlevelse og vækst af læsioner. På dagen for operationen er mus bedøvede og peritoneale hulrum adgang via en lille (1,5 cm) indsnit via linea-alba. Fluorescently mærket implantater er tweezed, kort indsmurt i lim og knyttet til laget peritoneal. Snit er syet, og dyr tilbage til at inddrive for et par dage. Fluorescens udledes af endometriotic implantater er normalt ikke-invasivt overvåget hver 3 dag for 4 uger med en in vivo billeddannelse system. Variationer i størrelsen af endometriotic implantater kan estimeres i realtid af kvantificering af mCherry signal og normalisering mod det oprindelige tidspunkt viser maksimal fluorescens intensitet.
Traditionelle prækliniske gnavere modeller af endometriose tillader ikke ikke-invasiv overvågning af læsion i realtid men snarere muliggøre evaluering af virkningerne af narkotika analyseres ved slutpunktet. Denne protokol tillader en at spore læsioner i realtid og er mere nyttigt at udforske den terapeutiske potentiale af narkotika i prækliniske modeller af endometriose. Den største begrænsning af modellen således genereret er non-invasiv overvågning ikke muligt over længere perioder på grund af det episomal udtryk for annonce-virus.

Her, beskriver vi processen til oprettelse af en heterolog model af endometriose hvor arkitektur af læsioner er bevaret ved at implantere fluorescently mærket stykker af menneskelige endometriet til immunkompromitterede mus, således at ikke-invasive overvågning af læsion progression. Mærkning af endometrie fragmenter opnås ved infektion med adenovirus manipuleret til at udtrykke mCherry, et protein, der udsender fluorescens i nær infrarøde område. I figur 1<...

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Vi præsenterer her, en protokol for live-imaging af fluorescently mærket menneskelige endometrie fragmenter podet i mus. Metoden giver mulighed for at studere virkningerne af narkotika af valg på endometriotic læsion størrelse gennem overvågning og kvantificering af fluorescens udledes af fluorescerende reporter på realtid

Noninvasiv overvågning af læsion størrelse i en heterolog musemodel af endometriose

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i evalueringen terapeutiske lægemiddel effekter i endometriose felt, såsom virkningerne af anti-androgene forbindelser på størrelsen af endometriotiske læsioner. Den største fordel ved denne teknik er, at virkningerne af de specifikke lægemidler kan vurderes i dyremodeller af endometriose i realtid, snarere end ved endepunktet. Demonstration af proceduren vil være Jessica Martinez, som er en tekniker fra mit laboratorium, samt Viviana Bisbal og Nerea Marin, som er dyrlæger fra Centro de Investigacion Principe Felipe, og som er nære samarbejdspartnere med vores team.To til tre dage før implantatoperationen, overførsel skylles, sunde endometrievæv biopsi fragmenter i en 10 centimeter petriskål indeholder komplet medium, og bruge skalpeller til at hakke vævet i fem til 10 millimeter kubik stykker. Ved hjælp af en mikropipette tilsættes 30 til 50 mikroliterdråber af DMEM i bunden af en ny 10 centimeters kulturskål, hvilket efterlader nok plads mellem hver dråbe, så de ikke kommer i kontakt med hinanden. Når alle dråberne er placeret, skal du bruge en sprøjtenål til at placere et enkelt stykke biopsivævsfragment i hver dråbe.Dernæst tilsættes 100 til 200 mikroliter frisklavet adeno-mCherry til en brønd af en 96 brøndplade pr. vævsfragment plus tre brønde med adenovirusfri DMEM som en negativ kontrol. Brug derefter nålen til at overføre en vævsprøve i hver brønd af adeno-mCherry-opløsning til en overnight inkubation ved 37 grader celsius og 5% CO2. Den næste morgen placere pladen på en fluorescens mikroskop fase og bruge en 568 nanometer laser til at kontrollere fragmenter for en optimal mærkning.Ved hjælp af passende fortynding af inficerende mCherry adenovirus er nøglen til en effektiv mærkning af vævet. For at bestemme den passende koncentration skal flere for mCherry-fortynding for hvert enkelt eksperiment evalueres. Overfør derefter de mest strålende fragmenter til individuelle brønde i en ny 96 brøndplade, der indeholder frisk, komplet medium.Mindst syv dage efter ooforektomi, dekantere endometrievæv fragmenter i en petriskål, og bekræfte en manglende reaktion på tå knivspids i en bedøvet, oofortoiseret dyr. Med musen i liggende position desinficere ventrale område og gøre en 1,5 centimeter langsgående snit i maven. Adskaf huden fra musklen og lav en anden 1,5 centimeter snit i musklen for at få adgang til bughulen.Hold venstre kant af bugmuskulære væg med mini-sceægt, fold musklen til at udsætte den indre side af bughinden på ydersiden af dyret. Brug mini-pincet til kort suge en endometrie implantat i n-butyl ester cyanoacrylat lim og vedhæfte fragmentet til bughinden. Når limen tørres, skal du placere et andet implantat på den kontralaterale side af bughinden som netop påvist.Brug en absorberbar 6-0 sutur til at lukke muskellaget og en ikke-absorberbar 6-0 sutur for at lukke huden. Rengør derefter hudsnitt med antiseptisk opløsning, og ansrette dyret i bjærgningszonen med overvågning, indtil det er fuldt recumbency. For in-vivo fluorescerende billeddannelse af de implanterede væv fragmenter, 24 til 48 timer efter implantation kirurgi tænde in-vivo imaging system, initialisere softwaren, og lad CCD kameraet til at køle ned i et par minutter.Når instrumentet er klar, skal den første bedøvede mus placeres i in vivo-billedsystemburet i liggende position med hovedet inde i en tubule forbundet til anæstesimaskinen, og låget lukkes. Klik derefter på hent og gem de fem resulterende billeder. For at kvantificere in-vivo fluorescens, i den relevante billedanalyse software klik gennemse og vælge den ublandede fil af interesse, der skal analyseres.Der vises et nyt vindue. Klik på Tilføj til liste for at medtage alle de ublandede filer fra hvert dyr på forskellige tidspunkter, og klik på belastning som en gruppe. Alle billederne skal vises i en enkelt sekvens.I værktøjspaletten skal du fjerne markeringen af det enkelte skaleringsafkrydsningsfelt for at justere alle billederne til samme skala og dobbeltklikke på et billede af sekvensen. For at oprette et område af interesse, i området af interesse værktøjer skal du vælge konturen og auto en muligheder, og klik på cirklen form for at placere cirklen i midten af fluorescerende signal. Klik på Opret for at oprette interesseområdet og kopiere og indsætte interesseområdet på en baggrund, hvor der ikke er noget signal.Klik derefter på måle interesseområder, og vælg alle for at få vist værdier for fluorescensintensiteten i hvert område og kopiere og indsætte disse værdier i et regneark. Mærkningen af endometriefragmenterne opnås ved infektion med adenovirus udviklet til at udtrykke mCherry, et protein, der udsender fluorescens i den nærinficerede sektion, der er betydeligt mere robust end den ikke-inficerede endometrievæv autofluorescens. Under overvågning, ud over reference bølgelængde for mCherry, fluorescerende billeder er taget med forskellige par excitation emission bølgelængde filtre.For at definere de karakteristiske fluorescerende vævsemissionsprofiler for læsioner fra baggrunden og autofluorescens, der udsendes af værtsvævet, samles de overvågningsbilleder, der indeholder rå fluorescens, som dyrene udsender under hvert tidspunkt, i en enkelt fil. Dernæst er fluorescens ublandet, normaliseret og repræsenteret som et falsk farvebillede, og de områder af interesser, der svarer til specifikke legion- og baggrundssignaler, genkendes automatisk af programmet og kvantificeres. Baggrundsregionen af interesse signalering trækkes fra legion region af interesse signalering.Og resultaterne af intensiteten på hvert tidspunkt er normaliseret i forhold til det tidspunkt, hvor intensiteten er maksimal. Efter flere ugers overvågning kan de levedygtige implantater genindvindes til yderligere downstream-analyse. Mens du forsøger denne procedure er det vigtigt at huske at vælge koncentrationen af Ad-mCherry, der giver den mest geniale signal uden at kompromittere levedygtigheden af vævet.Efter denne procedure kan læsionerne genvindes og bruges til at studere yderligere karakteristiske parametre. Denne procedure er optimeret til ikke-invasiv overvågning af xenograft humane endometriose læsioner. Det kan dog nemt tilpasses til vurdering af virkningerne af en bestemt medicin af interesse på de steder af en xenograft i realtid.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Langsigtet dødelige toksicitet Test med krebsdyr Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering af en musemodel at afbryde LINC komplekser i en celle-specifik måde

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre celle masse injektion af stamceller fra embryoner fører til højere kimærisme

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musemodel af delvis tarmobstruktion

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Massespektrometri analyse til at identificere allestedsnærværendelation af EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

Visualisering af gentagne møder med en antigenmærket blokerende læsion

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

En musemodel af ustabilitet i lændehvirvelsøjlen

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Overvågning af dynamisk vækst af retinale kar i oxygeninduceret retinopati musemodel

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...