Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

इस काम के द्वारा समर्थित किया गया था स्पेनी अर्थव्यवस्था और प्रतिस्पर्धा के miguel servet कार्यक्रम के माध्यम से [CP13/00077] feder द्वारा cofounded (यूरोपीय क्षेत्रीय विकास कोष) और डॉ आर gómez को संमानित किया गया और साथ ही कार्लोस III स्वास्थ्य अनुदान संस्थान द्वारा संमानित डॉ आर gómez करने के लिए [PI14/00547 and PI17/02329] और प्रो A. cano करने के लिए [PI12/02582] ।

मानव ऊतक नमूनों के उपयोग के संस्थागत समीक्षा बोर्ड और अस्पताल विश्विद्यालय ला Fe की नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था । सभी मरीजों को लिखित सूचना सहमति प्रदान की । जानवरों से जुड़े अध्ययन centro डे ...

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	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

इस के साथ साथ विस्तृत प्रोटोकॉल endometriosis के एक पशु मॉडल है जिसमें घावों वास्तुकला प्रत्यारोपण की वास्तुकला संरक्षित है whilst एक साथ mcherry द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति के वास्तविक समय आकलन की अनुमति के कार्या?...

एंडोमेट्रोसिस एक पुरानी स्त्रीरोगों विकार है जो गर्भाशय गुहा के बाहर कार्यात्मक एंडोमेट्रयम के प्रत्यारोपण द्वारा शुरू किया जाता है । एक्टोपिक घावों के बढ़ने और जीर्ण श्रोणि दर्द और बांझपन1के लिए अग्रणी भड़काऊ प्रक्रियाओं को प्रेरित । यह अनुमान है कि प्रजनन आयु की महिलाओं के 10 से 15% तक endometriosis2 से प्रभावित हैं, और यह लगभग 40 में मौजूद है-50% महिलाओं के3। endometriosis के लिए वर्तमान औषधीय उपचार पूरी तरह से घावों के उन्मूलन और साइड इफेक्ट से मुक्त नहीं करने में असमर्थ हैं4,5. अधिक कुशल चिकित्सा के लिए अनुसंधान इस तरह से endometriosis के मौजूदा पशु मॉडल के शोधन की आवश्यकता है कि मानव घावों को उचित रूप से नकल की जा सकती है, और दूसरों के बीच घाव आकार पर यौगिकों के प्रभाव बारीकी से मूल्यांकन किया जा सकता है ।
प्राइमेट मॉडल अस्थानिक घावों का imstologically समान और मनुष्यों के रूप में समान साइटों पर में endometriosis की नकल करने के लिए इस्तेमाल किया गया है6,7,8; हालांकि, नैतिक चिंताओं और उच्च आर्थिक प्राइमेट्स उनके उपयोग की सीमा के साथ प्रयोग से संबंधित लागत9। नतीजतन, छोटे जानवरों का उपयोग, विशेष रूप से कृंतकों, endometriosis के vivo मॉडल के कार्यान्वयन के लिए इष्ट के रूप में यह10,11व्यक्तियों की बड़ी संख्या के साथ अध्ययन की अनुमति देता है जारी है । endometriosis या तो कृंतक गर्भाशय सींग ("समजात मॉडल")12,13 या मानव एंडोमेट्रियल/endometriosis ऊतक अस्थानिक साइटों के लिए प्रत्यारोपण द्वारा इन पशुओं में प्रेरित किया जा सकता है (विषमजातीय मॉडल)14 . मनुष्यों के विपरीत, कृंतकों उनके एंडोमेट्रियल ऊतक शेड नहीं है और इस तरह endometriosis इन प्रजातियों में सहज रूप से विकसित नहीं किया जा सकता है । इसलिए, endometriosis के समजात माउस मॉडल तथ्य यह है कि प्रत्यारोपित अस्थानिक माउस गर्भाशय ऊतक मानव endometriosis घावों की विशेषताओं को प्रतिबिंबित नहीं करता है की वजह से आलोचना की गई है15.
endometriosis के उपयुक्त शरीर क्रिया विज्ञान endometriosis के विषमजातीय मॉडल में नकल की जा सकती है जहां ताजा मानव एंडोमेट्रियल टुकड़े immunoकी कमी जानवरों में प्रत्यारोपित कर रहे हैं । पारंपरिक विषमजात मॉडलों में, ब्याज के यौगिकों के उपचारात्मक प्रभाव सामान्यतः कैलिपर्स के उपयोग के साथ घाव के आकार के आकलन द्वारा अंत बिंदु पर मूल्यांकन कर रहे हैं16. एक स्पष्ट सीमा है कि, इस तरह के रूप में, समापन बिंदु पशु मॉडल समय के साथ प्रत्यारोपण गतिशीलता या एंडोमेट्रियल घाव के विकास का अध्ययन करने की अनुमति नहीं है । एक अतिरिक्त सीमा है कि कैलिपर्स का उपयोग घाव आकार की सटीक माप की अनुमति नहीं है । वास्तव में, मानक त्रुटि कैलिपर्स द्वारा प्रदान की एक ही श्रेणी में है (यानी, मिलीमीटर) घावों के आकार के रूप में चूहों में प्रत्यारोपित, इस प्रकार इन उपकरणों की क्षमता सीमित आकार में वास्तविक विविधताओं का पता लगाने के लिए.
आदेश में ऐसी सीमाओं पर काबू पाने के लिए, इस के साथ साथ, हम endometriosis के एक विषमजातीय माउस मॉडल की पीढ़ी का वर्णन जिसमें प्रत्यारोपित मानव ऊतक एक रिपोर्टर एम-चेरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन एक्सप्रेस इंजीनियर है । एक उचित छवि प्रणाली के साथ फ्लोरोसेंट संकेत का पता लगाने के वास्तविक समय में अपने आकार के एक साथ परिमाणन के साथ घाव स्थिति की गैर इनवेसिव निगरानी सक्षम बनाता है । इस प्रकार, हमारे मॉडल स्पष्ट लाभ प्रदान करता है जब पारंपरिक समापन बिंदु मॉडल की तुलना में यह वास्तविक समय गैर इनवेसिव निगरानी और अधिक उद्देश्य और घाव के आकार में बदलाव की सटीक अनुमान प्रदर्शन करने की संभावना का अवसर लाता है ।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

यहां, हम एक heterologous माउस मॉडल के कार्यांवयन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन जिसमें endometriosis की प्रगति प्रत्यारोपित अस्थानिक मानव एंडोमेट्रियल ऊतक द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति की noninvasive निगरानी के माध्यम से वास्तविक समय में मूल्यांकन किया जा सकता है । इस प्रयोजन के लिए, मानव एंडोमेट्रियम की बायोप्सी दाता महिलाओं चल रही अंडक दान से प्राप्त कर रहे हैं । मानव एंडोमेट्रियल टुकड़े एडिनोवायरस रिपोर्टर फ्लोरोसेंट प्रोटीन mcherry के लिए cdna एक्सप्रेस के लिए इंजीनियर की उपस्थिति में सुसंस्कृत हैं । दृश्य पर, संक्रमण के बाद प्रतिदीप्ति की इष्टतम दर के साथ लेबल वाले ऊतकों को बाद में प्राप्तकर्ता चूहों में प्रत्यारोपण के लिए चुना जाता है । एक सप्ताह के प्रत्यारोपण सर्जरी से पहले, प्राप्तकर्ता चूहों oophorectomized हैं, और एस्ट्राडियोल छर्रों के अस्तित्व और घावों के विकास को बनाए रखने के लिए subcutaneously रखा जाता है । सर्जरी के दिन चूहों एनेस्थेटाइज्ड हैं, और पेरिटोनियल गुहा linea-अल्बा द्वारा एक छोटे (१.५ सेमी) चीरा के माध्यम से पहुँचा. प्रतिदीप्ति लेबल प्रत्यारोपण tweezed हैं, संक्षेप में गोंद और पेरिटोनियल परत से जुड़ी लथपथ । चीरों sutured कर रहे हैं, और जानवरों के कुछ दिनों के लिए ठीक करने के लिए छोड़ दिया है । एंडोमेरिओटिक प्रत्यारोपण द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति आमतौर पर वीवो इमेजिंग सिस्टम के साथ 4 सप्ताह के लिए हर 3 दिनों में गैर-आक्रामक रूप से निगरानी की जाती है । एंडोमेट्रियल प्रत्यारोपण के आकार में भिन्नता mcherry संकेत के परिमाणन और प्रारंभिक समय-बिंदु अधिकतम प्रतिदीप्ति तीव्रता दिखा के खिलाफ सामान्यीकरण द्वारा वास्तविक समय में अनुमान लगाया जा सकता है ।
endometriosis के मॉडल के पारंपरिक पूर्व नैदानिक कुतर वास्तविक समय में घाव की गैर आक्रामक निगरानी की अनुमति नहीं है बल्कि अंत बिंदु पर बीएसए दवाओं के प्रभाव के मूल्यांकन की अनुमति नहीं है । इस प्रोटोकॉल एक वास्तविक समय में घावों को ट्रैक करने के लिए अनुमति देता है और endometriosis के पूर्व नैदानिक मॉडल में दवाओं की चिकित्सीय क्षमता का पता लगाने के लिए और अधिक उपयोगी है । इस प्रकार उत्पन्न मॉडल की मुख्य सीमा यह है कि गैर-इनवेसिव मॉनिटरिंग विज्ञापन-वायरस के एपिसोमल अभिव्यक्ति के कारण समय की लंबी अवधि से संभव नहीं है ।

यहां, हम endometriosis के एक heterologous मॉडल बनाने के लिए प्रक्रिया का वर्णन जिसमें घावों की वास्तुकला प्रतिरक्षा चूहों में प्रतिदीप्ति मानव endometriosis के टुकड़े लेबल दाखिल द्वारा संरक्षित है, इस प्रकार गैर इ...

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Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

यहां, हम प्रतिदीप्ति के लाइव इमेजिंग के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत मानव एंडोमेट्रियल टुकड़े चूहों में इसराईल लेबल । विधि की निगरानी और वास्तविक समय पर फ्लोरोसेंट रिपोर्टर द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति के परिमाणन के माध्यम से एंडोमेट्रियल घाव के आकार पर पसंद की दवाओं के प्रभाव का अध्ययन करने की अनुमति देता है

endometriosis के एक विषमजात माउस मॉडल में घाव आकार की noninvasive निगरानी

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

यह विधि एंडोमेट्रियोसिस क्षेत्र में चिकित्सीय दवा प्रभावों के मूल्यांकन में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने में मदद कर सकती है, जैसे एंडोमेट्रियोटिक घावों के आकार पर एंटी-एंड्रोजेनिक यौगिकों का प्रभाव। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि विशिष्ट दवाओं के प्रभावों का आकलन एंडोमेट्रियोसिस के पशु मॉडल में वास्तविक समय में किया जा सकता है, बजाय अंत बिंदु पर। प्रक्रिया का प्रदर्शन जेसिका मार्टिनेज, जो मेरी प्रयोगशाला से एक तकनीशियन है, साथ ही विवियाना बिस्बल और नेरिया मारिन, जो सेंट्रो डी Investigacion प्रिंसिप फेलिप से पशु चिकित्सक हैं और जो हमारी टीम के साथ करीबी सहयोगी हैं।प्रत्यारोपण सर्जरी से दो से तीन दिन पहले, कुल्ला, स्वस्थ एंडोमेट्रियल ऊतक बायोप्सी टुकड़ों को 10 सेंटीमीटर पेट्री डिश में स्थानांतरित करें जिसमें पूर्ण माध्यम होता है, और ऊतक को पांच से 10 मिलीमीटर क्यूब किए गए टुकड़ों में कीमा बनाने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें। एक माइक्रोपिपेट का उपयोग करके, एक नए 10 सेंटीमीटर कल्चर डिश के नीचे डीएमईएम की 30 से 50 माइक्रोलीटर बूंदें जोड़ें, जिससे प्रत्येक बूंद के बीच पर्याप्त जगह छोड़ दें ताकि वे एक दूसरे के संपर्क में न आएं। जब सभी बूंदों को रखा गया है, तो प्रत्येक बूंद में बायोप्सी ऊतक टुकड़े का एक टुकड़ा रखने के लिए सिरिंज सुई का उपयोग करें।इसके बाद, एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में एडेनोवायरस मुक्त डीएमईएम के साथ तीन कुओं, प्रति ऊतक खंड के 96 अच्छी तरह से प्लेट के एक कुएं में ताजा तैयार एडेनो-म्हेरी के 100 से 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। फिर सुई का उपयोग 37 डिग्री सेल्सियस और 5% CO2 पर एक रात के इनक्यूबेशन के लिए एडेनो-म्हेरी समाधान के प्रत्येक कुएं में एक ऊतक नमूना स्थानांतरित करने के लिए। अगली सुबह प्लेट को फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप चरण पर रखें और इष्टतम लेबलिंग के लिए टुकड़ों की जांच करने के लिए 568 नैनोमीटर लेजर का उपयोग करें।रीचेरी एडेनोवायरस को संक्रमित करने के उचित कमजोर पड़ने का उपयोग ऊतक के एक कुशल लेबलिंग के लिए महत्वपूर्ण है। तो उचित एकाग्रता निर्धारित करने के लिए, प्रत्येक व्यक्तिगत प्रयोग के लिए, mCherry कमजोर पड़ने के लिए कई, मूल्यांकन किया जाना है । फिर ताजा, पूर्ण माध्यम युक्त एक नई 96 अच्छी तरह से प्लेट के व्यक्तिगत कुओं में सबसे शानदार टुकड़े स्थानांतरित करें।ओफोरेक्टॉमी के कम से कम सात दिन बाद, एंडोमेट्रियल ऊतक के टुकड़ों को पेट्री डिश में डिकेंट करें, और एक एनेस्थेटाइज्ड, ओफोरेक्टोमिज्ड जानवर में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें। रीढ़ की स्थिति में माउस के साथ वेंट्रल क्षेत्र को कीटाणुरहित करें और पेट में 1.5 सेंटीमीटर देशांतर चीरा बनाएं। त्वचा को मांसपेशियों से अलग करें और पेरिटोनियल गुहा तक पहुंचने के लिए मांसपेशियों में एक दूसरा 1.5 सेंटीमीटर चीरा बनाएं।पेट की मांसपेशियों की दीवार के बाएं किनारे को मिनी-संदंश के साथ पकड़े हुए, जानवर के बाहर पेरिटोनम के आंतरिक चेहरे को बेनकाब करने के लिए मांसपेशियों को मोड़ें। एन-ब्यूटिल एस्टर सायनोक्रिलेट चिपकने वाले में एक एंडोमेट्रियल इंप्लांट को संक्षेप में भिगोने और पेरिटोनम के टुकड़े को संलग्न करने के लिए मिनी चिमटी का उपयोग करें। जब चिपकने वाला सूख जाता है, तो पेरिटोनम के कॉन्ट्रालेटरल साइड पर एक दूसरा प्रत्यारोपण रखें जैसा कि सिर्फ प्रदर्शन किया गया था।मांसपेशियों की परत को बंद करने के लिए एक अवशोषित 6-0 सीवन का उपयोग करें और त्वचा को बंद करने के लिए एक गैर-अवशोषित 6-0 सीवन। फिर एंटीसेप्टिक समाधान के साथ त्वचा चीरा साफ करें और पूर्ण अनुष् का होने तक निगरानी के साथ पशु को रिकवरी क्षेत्र में रखें। प्रत्यारोपित ऊतक के टुकड़ों की इन-वीवो फ्लोरोसेंट इमेजिंग के लिए, प्रत्यारोपण सर्जरी के 24 से 48 घंटे बाद इन-वीवो इमेजिंग सिस्टम चालू करें, सॉफ्टवेयर को शुरू करें, और सीसीडी कैमरे को कुछ मिनटों के लिए ठंडा करने दें।एक बार जब उपकरण तैयार हो जाता है तो पहले एनेस्थेटाइज्ड माउस को इन-वीवो इमेजिंग सिस्टम पिंजरे में, सुढ़ स्थिति में, संज्ञाहरण मशीन से जुड़े ट्यूबल के अंदर सिर के साथ, और ढक्कन बंद करें। फिर अधिग्रहण पर क्लिक करें और पांच परिणामस्वरूप छवियों को बचाने के लिए। इन-वीवो फ्लोरेसेंस को निर्धारित करने के लिए, उपयुक्त छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर में ब्राउज़ करें और विश्लेषण करने के लिए ब्याज की अनमिक्स्ड फाइल का चयन करें।एक नई खिड़की दिखाई देगी। अलग-अलग समय बिंदुओं पर प्रत्येक जानवर से सभी अनमिक्स्ड फ़ाइलों को शामिल करने के लिए सूची में जोड़ें और समूह के रूप में लोड पर क्लिक करें। छवियों के सभी एक ही अनुक्रम में दिखाई देना चाहिए।टूल पैलेट विंडो में, सभी छवियों को एक ही पैमाने पर समायोजित करने के लिए व्यक्तिगत पैमाने चेकबॉक्स को अनसेलेक्ट करें, और अनुक्रम की एक छवि पर डबल क्लिक करें। ब्याज का एक क्षेत्र बनाने के लिए, ब्याज उपकरणों के क्षेत्र में समोच्च और ऑटो एक विकल्प का चयन करें, और फ्लोरोसेंट सिग्नल के केंद्र में सर्कल जगह करने के लिए सर्कल आकार पर क्लिक करें। ब्याज का क्षेत्र बनाने और कॉपी करने के लिए बनाएं क्लिक करें और ब्याज के उस क्षेत्र को ऐसी पृष्ठभूमि पर चिपका दें जहां कोई संकेत नहीं है।फिर रुचि के क्षेत्रों को मापने पर क्लिक करें और प्रत्येक क्षेत्र की फ्लोरेसेंस तीव्रता के लिए मूल्यों को प्रदर्शित करने के लिए सभी का चयन करें और इन मूल्यों को स्प्रेडशीट में कॉपी और पेस्ट करें। एंडोमेट्रियल टुकड़ों की लेबलिंग एमचेरी को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर एडेनोवायरस के साथ संक्रमण द्वारा प्राप्त की जाती है, एक प्रोटीन जो निकट-अवरक्त अनुभाग में फ्लोरेसेंस उत्सर्जित करता है जो गैर-संक्रमित एंडोमेट्रियल ऊतक ऑटोफ्लोरेसेंस की तुलना में काफी अधिक मजबूत है। निगरानी के दौरान, रीचेरी के लिए संदर्भ तरंगदैर्ध्य के अलावा, फ्लोरोसेंट छवियों को विभिन्न जोड़ी उत्तेजन उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य फिल्टर के साथ लिया जाता है।पृष्ठभूमि से घावों की विशेषता फ्लोरोसेंट ऊतक उत्सर्जन प्रोफाइल को परिभाषित करने के लिए, और मेजबान ऊतकों द्वारा उत्सर्जित ऑटोफ्लोरेसेंस, प्रत्येक समय बिंदु के दौरान जानवरों द्वारा उत्सर्जित कच्चे फ्लोरेसेंस युक्त निगरानी छवियों को एक ही फ़ाइल में एक साथ लाया जाता है, नर्मनीय। इसके बाद, फ्लोरेसेंस को एक झूठी रंग छवि के रूप में अमिश्रित, सामान्यीकृत और प्रतिनिधित्व किया जाता है, और विशिष्ट सेना और पृष्ठभूमि संकेतों के अनुरूप हितों के क्षेत्रों को स्वचालित रूप से कार्यक्रम द्वारा पहचाना जाता है और मात्रा निर्धारित की जाती है। ब्याज संकेत की पृष्ठभूमि क्षेत्र ब्याज संकेत के सेना क्षेत्र से घटाया जाता है ।और प्रत्येक समय बिंदु पर तीव्रता के परिणाम उस समय बिंदु के खिलाफ सामान्यीकृत होते हैं जिस पर तीव्रता अधिकतम होती है। निगरानी के कई हफ्तों के बाद, व्यवहार्य प्रत्यारोपण आगे डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए बरामद किया जा सकता है । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय विज्ञापन-म्हेरी की एकाग्रता का चयन करना याद रखना महत्वपूर्ण है जो ऊतक की व्यवहार्यता से समझौता किए बिना सबसे शानदार संकेत प्रदान करता है।इस प्रक्रिया के बाद, घावों को बरामद किया जा सकता है और अतिरिक्त विशिष्ट मापदंडों का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। यह प्रक्रिया ज़ेनोबेड़ा मानव एंडोमेट्रियोसिस घावों की गैर-आक्रामक निगरानी के लिए अनुकूलित है। हालांकि, यह आसानी से वास्तविक समय में एक xenograft की साइटों पर ब्याज की एक विशिष्ट दवाओं के प्रभाव का आकलन करने के लिए अनुकूल किया जा सकता है ।

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

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Vivo इमेजिंग और डिम्बग्रंथि के कैंसर के एक Orthotopic माउस मॉडल में चिकित्सीय उपचार में

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

एक अवेध्य बालों नमूनाकरण मायावी छोटे स्तनधारी से उच्च गुणवत्ता डीएनए प्राप्त तकनीक

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

एक माउस मॉडल के मान्यकरण एक सेल विशेष तरीके में LINC परिसर बाधित करने के लिए

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

ट्रांस-इनर सेल भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के इंजेक्शन उच्च Chimerism दरों की ओर जाता है

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

आंतों आंशिक रुकावट का एक माउस मॉडल

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP-टैग किए गए सेनपी-ए (EYFP-CENP-A) के सर्वव्यापी की पहचान करने के लिए मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

एंटीजन टैग किए गए ब्लॉकिंग घाव के साथ रिप्लिसोम मुठभेड़ों का विज़ुअलाइज़ेशन

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

काठ रीढ़ की हड्डी अस्थिरता का एक माउस मॉडल

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

ऑक्सीजन प्रेरित रेटिनोपैथी माउस मॉडल में रेटिना वाहिकाओं के गतिशील विकास की निगरानी

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...