Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

この作品はスペイン経済省ミゲル サーブレット プログラム [CP13/00077] (欧州地域開発基金) のフェダーによって共同設立を通じて競争力に支え、授与カルロス III 健康研究所助成金によってと同様、R をゴメス博士に授与Dr R をゴメス [PI14/00547 と PI17/02329] して教授 A. カノ [PI12/02582]。

人体標本の使用は、制度検討委員会と病院ウニベルシタリオ La Fe の倫理委員会によって承認されました。すべての患者には、書面によるインフォームド コンセントが用意されています。動物を含む研究は、セントロ ・ デ ・ Investigacion プリンシペ フェリペ ・ デ ・ バレンシア ・機関の動物の世話委員会によって承認され、すべてのプロシージャを行った国立衛生研究所からケアと哺乳類?...

<ol>
	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

ここに詳細なプロトコル記述する子宮内膜症の病変のアーキテクチャのアーキテクチャによって維持される放出される蛍光のリアルタイム評価を同時にできるようにしながら mCherry の動物モデルの実装子宮内膜組織をラベル付けします。このプロトコルでは特定のインビボ イメージング システムとラベルの病変によって放出される蛍光を非侵襲的評価に関連するソフトウェアの使用をにつ?...

子宮内膜症は、子宮腔外機能性子宮内膜の着床による慢性婦人科疾患です。異所性の病変は、成長し、慢性の骨盤の痛みや不妊症の1につながる炎症性プロセスを誘発します。10-15% の生殖年齢の女性には受けないこと endometriosis2、推定されている、不妊女性3の約 40-50% であります。子宮内膜症の現在の薬理学的治療法は病変を完全に根絶することができないと副作用4、5の自由ではないです。効率的な治療法の研究は人間の病変を適切にまねることができます、その化合物の他の中の病巣の大きさに及ぼす影響を密接に評価することができますこのような方法で子宮内膜症の既存の動物モデルの洗練が必要です。
打ち込むこと異所性病変の組織学的に同一と人間6,7,8; のように似たようなサイトでは、子宮内膜症を模倣する霊長類モデルを使用されています。ただし、倫理的な問題や高度の経済コストに関連する制限の霊長類での実験の使用9。その結果、子宮内膜症の生体モデルの実施のため特に齧歯動物、小動物の使用は、個人10,11の大きい数を用いる調査のためそれを支持する続けています。子宮内膜症によって誘導されうるこれらの動物の齧歯類子宮角 (「相同モデル」)12,13の部分または異所性サイト (異種モデル) ヒトの子宮内膜・子宮内膜症組織を移植14.人間と対照をなして齧歯動物は自分の子宮内膜組織を流したか、それにより子宮内膜症が開発されない自発的にこれらの種の。したがって、子宮内膜症のモデルと異所性マウス子宮組織を注入したという事実のために批判されている同種のマウスはひと子宮内膜症病変15の特性を反映しません。
子宮内膜症の適切な生理は、子宮内膜症免疫不全動物に新鮮なひと子宮内膜の断片を注入する、異種モデルでまねることができます。異種従来終了点では、興味の化合物の治療効果一般的ノギス16を使って病巣の大きさの評価によって評価されます。明白な制限など、エンドポイント動物モデルは許可されている注入ダイナミクスや時間の経過とともに子宮内膜症病変を勉強します。追加の制限は、キャリパーの使用は、病巣の大きさの正確な測定を許可しないことです。確かに、キャリパーによって提供される標準誤差は、サイズが実際の変化を検出するこれらのツールの容量を制限する、マウスに注入病変の大きさと同じ範囲 (ミリメートルなど) でです。
このような制限を克服するためにここで、我々 は移植人体組織が記者 m 桜の蛍光蛋白質を表現する設計は子宮内膜症の異種マウス モデルの生成をについて説明します。適切なイメージを用いた蛍光信号の検出は、リアルタイムでそのサイズの同時定量と病変の状態を非侵襲的監視できます。したがって、我々 のモデルは、病巣の大きさでより客観的、バリエーションの正確な推定を実行するリアルタイムの非侵襲的モニタリングの機会と可能性をもたらす、エンドポイントの従来モデルと比較して明確な利点を提供します。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

ここでは、子宮内膜症の進行を注入された異所性ひと子宮内膜組織によって放出される蛍光の非侵襲的モニタリングを通じてリアルタイムで評価される異種マウス モデルの実装のプロトコルについて述べる。このため、ひと子宮内膜の生検はドナー女性寄付継続的な卵から取得されます。ひと子宮内膜断片アデノ レポーター蛍光タンパク質 mCherry の cDNA を表現するために設計の前で培養されます。可視化、時に感染症はその後選ばれた受信者マウスに注入した後、蛍光の最適な速度と組織をラベル付けします。注入術前 1 週間は、受信者マウスが経時およびエストラジ オールのペレットは、生存と病変の成長を維持するために皮下配置されます。手術の日にマウスが麻酔をかけられたと腹膜キャビティ白線. (1.5 cm) の小さな切開を通してアクセス蛍光に分類されたインプラントが tweezed、簡単に接着剤に浸漬し、腹膜の層に接続されています。切開、縫合、動物と日のカップルのための回復します。臓インプラントによって放出される蛍光は通常非侵襲的インビボ イメージング システムと 4 週間毎の 3 日間が監視されます。臓インプラントのサイズの変化は、mCherry 信号と最大蛍光強度を示す初期の時点に対する正規化の数量化によるリアルタイムで推定できます。
子宮内膜症モデルの伝統的な臨床齧歯動物はリアルタイムで病変の非侵襲的モニタリングを許可しないが、むしろ終点で薬の効果の評価になります。このプロトコルは、リアルタイムで病変を追跡することができ、子宮内膜症モデルで臨床薬の治療の可能性を探索するより便利です。このように生成されたモデルの主な制限は、非侵襲的モニタリングが不可能である広告ウイルス episomal 式のための時間の長い期間にわたってです。

ここで、非侵襲的なので子宮内膜症病変のアーキテクチャが、免疫不全マウスにひと子宮内膜の蛍光に分類された部分をはめ込むことによって保持されます異種モデルを作成するためのプロセスを説明します。病変の進行を監視できます。子宮内膜の断片のラベリングは、エクスプレス mCherry、近赤外領域の蛍光を発するタンパク質に設計されたアデノ ウイルスの感?...

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

ここでは、マウスに移植した蛍光に分類されたひと子宮内膜片のライブ イメージングのためのプロトコルを提案する.メソッドは、リアルタイムの蛍光レポーターによって放出される蛍光の定量化と監視によって子宮内膜症の病巣の大きさの選択の薬の影響を研究します。

子宮内膜症の異種マウスモデルで病巣の大きさの非侵襲的モニタリング

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

この方法は、子宮内膜症の分野における治療薬の効果(子宮内膜病変の大きさに対する抗アンドロゲン化合物の影響など)を評価する際の重要な質問に答える助けとなる。この技術の主な利点は、特定の薬物の効果がエンドポイントではなくリアルタイムで子宮内膜症の動物モデルで評価することができるということです。この手順を実証するのは、私の研究室の技術者であるジェシカ・マルティネスと、セントロ・デ・インベスティガシオン・プリンシペ・フェリペの獣医師であり、私たちのチームとの緊密な協力者であるヴィヴィアナ・ビスバルとネリア・マリンです。インプラント手術の2〜3日前に、すすいで健康な子宮内膜組織生検断片を完全な媒体を含む10センチメートルのペトリ皿に移し、メスを使用して組織を5〜10ミリメートル立方体にミンチする。マイクロピペットを使用して、新しい10センチメートル培養皿の底に30〜50マイクロリットルのDMEMを加え、各滴の間に十分なスペースを残して、互いに接触しないようにします。すべての滴が置かれたら、注射針を使用して、各滴に生検組織断片の単一片を配置する。次に、組織片あたり96ウェルプレートの1つのウェルに、さらにネガティブコントロールとしてアデノウイルスフリーDMEMを備えた3つのウェルに、作りたてのアデノmCherryを100〜200マイクロリットル加えます。その後、針を使用して1つの組織サンプルをadeno-mCherry溶液の各ウェルに移し、摂氏37度と5%CO2で一晩インキュベーションします。翌朝、プレートを蛍光顕微鏡ステージに置き、568ナノメートルレーザーを使用して、最適な標識のために断片をチェックします。感染mCherryアデノウイルスの適切な希釈を使用することは、組織の効率的な標識のための鍵です。そこで適切な濃度を決定するために、mCherry希釈に対してのいくつかは、個々の実験ごとに、評価されなければならない。その後、新鮮な、完全な媒体を含む新しい96ウェルプレートの個々の井戸に最も華麗な断片を転送します。子宮摘出術の少なくとも7日後、子宮内膜組織断片をペトリ皿にデカントし、麻酔下の卵化動物におけるつま先ピンチに対する応答性の欠如を確認する。マウスを腹側の位置に消毒し、腹部に1.5センチメートルの縦切開を行います。筋肉から皮膚を分離し、腹腔にアクセスするために筋肉の2番目の1.5センチメートルの切開を行います。腹筋壁の左端をミニ鉗子で保持し、筋肉を折り畳んで動物の外側の腹膜の内面を露出させる。ミニピンセットを使用して、1つの子宮内膜インプラントをn-ブチルエステルシアノアクリル酸接着剤に短時間浸し、その断片を腹膜に取り付けます。接着剤を乾燥させたら、ちょうど実証したように腹膜の反対側に第2のインプラントを置く。吸収性6-0縫合糸を使用して筋肉層を閉じ、非吸収性6-0縫合糸を使用して皮膚を閉じます。その後、防腐液で皮膚切開をきれいにし、完全な再発まで監視して回復ゾーンに動物を置きます。移植された組織断片の生体内蛍光イメージングの場合、移植手術後24~48時間後に生体内イメージングシステムをオンにし、ソフトウェアを初期化し、CCDカメラを数分間冷却します。装置が準備ができたら、最初の麻酔マウスをインビボイメージングシステムケージに入れ、supineの位置に、麻酔機械に接続された管状の中に頭部を置き、蓋を閉じます。次に、[取得] をクリックして、結果として得られる 5 つの画像を保存します。インビボ蛍光を定量化するには、適切な画像解析ソフトウェアで[参照]をクリックし、分析対象の混合されていないファイルを選択します。新しいウィンドウが表示されます。[追加] をクリックして、異なるタイム ポイントで各動物の混合されていないファイルをすべて含め、グループとして [ロード] をクリックします。すべての画像は、1 つのシーケンスで表示されます。ツール パレット ウィンドウで、個々のスケール チェックボックスをオフにしてすべてのイメージを同じ尺度に調整し、シーケンスの 1 つのイメージをダブルクリックします。対象領域を作成するには、対象領域ツールで輪郭と自動1つのオプションを選択し、円の形状をクリックして、蛍光信号の中心に円を配置します。[作成] をクリックして対象領域を作成し、信号がない背景に対象領域をコピーして貼り付けます。次に、対象の領域を測定し、すべての領域を選択して各領域の蛍光強度の値を表示し、これらの値をスプレッドシートにコピーして貼り付けます。子宮内膜フラグメントの標識は、非感染した子宮内膜組織自家蛍光よりも有意に堅牢である近赤外セクションで蛍光を発するタンパク質であるmCherryを発現するように設計されたアデノウイルスによる感染によって達成される。モニタリング中、mCherryの基準波長に加えて、蛍光画像は励起発光波長フィルタの異なるペアで撮影されます。バックグラウンドからの病変の特徴的な蛍光組織発光プロファイル、および宿主組織によって発される自己蛍光を定義するために、各時間の間に動物が発する生蛍光を含むモニタリング画像を、単一のファイルにまとめ、非正規化する。次に、蛍光は、混合されず、正規化され、偽色画像として表され、特定の軍団および背景信号に対応する関心領域がプログラムによって自動的に認識され、定量化される。関心信号の背景領域は、対象の信号のリージョン領域から差し引かれます。そして、各時点における強度の結果は、強度が最大となる時点に対して正規化されます。数週間のモニタリングの後、実行可能なインプラントをさらに下流の分析のために回収することができる。この手順を試みている間、組織の生存率を損なうことなく、最も輝かしい信号を提供するAd-mCherryの濃度を選択することを忘れないでください。この手順に従って、病変を回収し、追加の特徴的なパラメータを研究するために使用することができます。この手順は、異種移植片ヒト子宮内膜症病変の非侵襲的モニタリングに最適化される。しかし、それは、リアルタイムで異種移植片の部位に対する関心のある特定の薬物の影響を評価するために容易に適応することができる。

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

見つけにくい小型哺乳類から高品質のDNAを得るために非侵襲ヘアサンプリング法

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

甲殻類との長期致死毒性試験アルテミアfranciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

細胞特異的にLINC複合体を破壊するマウスモデルの検証

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

トランス内部細胞のキメリズム率が高いため、胚性幹細胞の大量注入

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

腸の部分的な閉塞のマウス モデル

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP タグ付き CENP-A (EYFP-CENP-A) のユビキタス性を同定するための質量分析分析

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

抗原タグ付きブロッキング病変とのレプリソーム遭遇の可視化

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

腰椎不安定性のマウスモデル

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

酸素誘発網膜症マウスモデルにおける網膜血管の動的成長のモニタリング

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...