Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Эта работа была поддержана испанским министерством экономики и конкурентоспособности через Мигель Сервет программу [CP13/00077] создана ФЕДЕР (Европейский фонд регионального развития) и присуждена к д-р р. Гомес, а также Карлос III институт здравоохранения гранты Dr R Гомес [ПЭ14/00547 и PI17/02329] и профессор а. Кано [ПЭ12/02582].

Использование образцов человеческой ткани был одобрен институциональных Наблюдательный Совет и Комитет по этике из больницы Университарио La Fe. Все пациенты условии письменного информированного согласия. Исследование с участием животных была одобрена Комитетом институционального у...

<ol>
	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

Протокол здесь подробно описывает реализацию животной модели эндометриоз, в котором архитектура имплантации поражения архитектура сохраняется пока одновременно позволяет реального времени оценки флуоресценции испускаемого mCherry с меткой эндометрия ткани. В этом протоколе мы описыв?...

Эндометриоз является хронические гинекологические расстройства, инициированных имплантации функциональных эндометрия вне полости матки. Эктопическая поражения растут и вызвать воспалительные процессы, ведущие к хронической тазовой боли и бесплодие1. Предполагается, что до 10 – 15% женщин репродуктивного возраста страдают от endometriosis2, и она присутствует в примерно 40 – 50% от бесплодных женщин3. Текущий фармакологического лечения эндометриоза удалось полностью искоренить поражения и не свободной от побочных эффектов4,5. Исследования для более эффективного лечения требует уточнения существующих животных моделей эндометриоза таким образом, что можно надлежащим образом имитировать человека поражений, и воздействие соединений на размер поражения среди прочего могут оцениваться тесно.
Предводитель модели были использованы для имитации эндометриоза, по разработке внематочная поражения гистологически идентичные и подобные сайты как люди6,,78; Однако этические проблемы и высокие экономические издержки связанные с эксперименты с приматов предел их использования9. Следовательно использование мелких животных, особенно грызунов, для реализации моделей-vivo эндометриоза продолжает отдавать предпочтение как позволяет исследования с большим количеством лиц10,11. Эндометриоз может быть наведено в этих животных путем пересадки куски грызунов маточные Рожки («гомологичных модели»)12,13 или эндометрия/endometriotic тканей человека внематочная сайты (гетерологичных модели)14 . В отличие от людей грызуны не сбрасывают их эндометрия ткани и тем самым эндометриоз может не быть разработаны спонтанно в этих видов. Таким образом гомологичных мышь, которую модели эндометриоза подверглись критике с тем, что имплантированных внематочная мыши маточных тканей не отражает характеристик человека endometriotic поражений15.
В гетерологичных модели эндометриоз, где свежий человека фрагменты эндометрия вживляются в иммунодефицитных животных можно имитировать соответствующий физиологии эндометриоза. В обычных гетерологичных модели терапевтическое воздействие соединений интерес обычно оцениваются в конечной точке оценки размера поражения с использованием суппорта16. Очевидным ограничением является, что, таким образом, конечной Животные модели не позволяют изучать динамику имплантации или endometriotic поражение развития с течением времени. Дополнительное ограничение, что использование суппорта не позволяет точные измерения размера поражения. Действительно стандартная ошибка, предоставляемый суппортами находится в том же диапазоне (то есть, миллиметров) размер повреждений, имплантированные в мышей, таким образом ограничивая потенциал этих инструментов для выявления фактического изменения в размер.
Для того, чтобы преодолеть такие ограничения, здесь, мы описываем поколения гетерологичных мышиной модели эндометриоза, в котором спроектирован имплантированных тканей человека выразить репортер m вишня флуоресцентный белок. Обнаружение флуоресцентного сигнала с системой соответствующего изображения позволяет Неинвазивный мониторинг состояния поражения с одновременным количественного определения его размера в режиме реального времени. Таким образом наша модель имеет явные преимущества по сравнению с обычными конечной модели, как он приносит возможность Неинвазивный мониторинг в режиме реального времени и возможность для выполнения более объективной и точной оценки вариации размеров поражения.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

Здесь мы описываем протокол для реализации гетерологичных мыши модели, в которой прогрессирования эндометриоз может оцениваться в реальном времени через неинвазивного мониторинга флуоресценции, испускаемых имплантированных внематочная эндометрия ткани человека. Для этой цели биопсии эндометрия человека получены от доноров женщин продолжающихся ооцитов. Человека эндометрия фрагменты культивированный присутствии аденовирусов спроектирован, чтобы выразить cDNA для репортера флуоресцентный белок mCherry. После визуализации помечены тканей с оптимальной скоростью флуоресценции после инфекции, впоследствии выбрали для имплантации в получателей мышей. Одну неделю до операции имплантации, oophorectomized получателей мышей, и эстрадиола гранулы находятся подкожно для поддержания выживания и роста поражений. В день операции мыши являются наркотизированных и брюшной полости, осуществляется через небольшой (1,5 см) разрез linea alba. Дневно обозначенные имплантатов являются tweezed, кратко пропитанной клеем и придает перитонеальных слоев. Зашиваются надрезы, и животных осталось вернуть на пару дней. Флуоресцирование, излучаемых endometriotic имплантаты обычно неинвазивным контролируется каждые 3 дня за 4 недели с системой визуализации в естественных условиях. Вариации в размере endometriotic имплантантов может быть оценена в реальном времени путем количественной оценки mCherry сигнал и нормализации против начальный момент времени, показаны максимальные флуоресценции интенсивности.
Традиционные грызунов доклинических моделей эндометриоз не позволяют Неинвазивный мониторинг поражения в режиме реального времени, но скорее позволяют производить оценку воздействия наркотиков assayed в конечной точке. Этот протокол позволяет отслеживать поражений в режиме реального времени и более полезным для изучения терапевтический потенциал наркотиков в доклинических моделях эндометриоза. Основным ограничением модели таким образом, что Неинвазивный мониторинг не возможно более длительных периодов времени из-за episomal выражение Ad-вируса.

Здесь мы описывают процесс создания гетерологичных модели эндометриоза, в котором сохраняется архитектура поражений путем имплантации дневно обозначенные частей человеческого эндометрия в ослабленным мышей, таким образом позволяя неинвазивных мониторинг прогрес?...

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Здесь мы представляем протокол для жить изображений дневно обозначенные человека эндометрия фрагментов, привитые на мышах. Этот метод позволяет изучать последствия препаратами выбора размера endometriotic поражения посредством мониторинга и количественной оценки флуоресценции, испускаемых флуоресцентные репортер в реальном времени

Неинвазивный мониторинг размера поражения в гетерологичных мыши модели эндометриоза

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в оценке терапевтических эффектов препарата в области эндометриоза, таких как влияние антиандрогенных соединений на размер эндометриотических поражений. Основным преимуществом этого метода является то, что эффекты конкретных препаратов могут быть оценены в животных моделях эндометриоза в режиме реального времени, а не в конечной точке. Демонстрация процедуры будет Джессика Мартинес, который является техником из моей лаборатории, а также Вивиана Бисбал и Нереа Марин, которые являются ветеринарами из Centro de Investigacion Principe Фелипе и которые являются близкими сотрудниками с нашей командой.За два-три дня до операции по имплантации перенесите промытые, здоровые фрагменты биопсии эндометриальной ткани в 10-сантиметровую чашку Петри, содержащую полную среду, и используйте скальпели, чтобы измельчить ткань на кусочки в 5-10 миллиметров. Используя микропипюту, добавьте от 30 до 50 капель микролитров DMEM по дну нового 10-сантиметрового блюда культуры, оставляя достаточно места между каждой каплей, чтобы они не соедились друг с другом. Когда все капли были помещены, используйте шприц иглы разместить один кусок фрагмента биопсии ткани в каждой капли.Далее добавьте от 100 до 200 микролитров свежеприготовленных адено-мчерри к одной скважине из 96 скважин на фрагмент ткани, плюс три скважины с аденовирусным DMEM в качестве отрицательного контроля. Затем используйте иглу для передачи одного образца ткани в каждую колодец адено-мчерри раствора для ночной инкубации при 37 градусах по Цельсию и 5%CO2. На следующее утро поместите пластину на стадии флуоресценции микроскопа и использовать 568 нанометровый лазер, чтобы проверить фрагменты для оптимальной маркировки.Использование соответствующего разбавления инфекционного аденовируса mCherry является ключевым для эффективной маркировки тканей. Таким образом, чтобы определить соответствующую концентрацию, несколько для разбавления mCherry, для каждого отдельного эксперимента, должны быть оценены. Затем перенесите самые блестящие фрагменты в отдельные скважины новой пластины 96 скважин, содержащей свежую, полную среду.По крайней мере, через семь дней после оофорэктомии, декант эндометрия фрагменты ткани в чашку Петри, и подтвердить отсутствие реакции на щипать в анестезированной, oophorectomized животных. С помощью мыши в положении на спине дезинфицировать брюшной полости и сделать 1,5 сантиметр продольный разрез в брюшной полости. Отделить кожу от мышцы и сделать второй 1,5 сантиметра разрез в мышце для доступа к брюшной полости.Держа левый край брюшной мышечной стенки с мини-типсами, сложите мышцу, чтобы разоблачить внутреннее лицо брюшной полости на внешней стороне животного. Используйте мини-пинцет, чтобы кратко замочить один эндометриальный имплантат в n-бутил эстер цианоакрилат клей и прикрепить фрагмент к брюшной полности. Когда клей высохнет, поместите второй имплантат на контралатеральной стороне брюшной полности, как только что продемонстрировано.Используйте абсорбируемый 6-0 шов, чтобы закрыть мышечный слой и неаспасаемый 6-0 шов, чтобы закрыть кожу. Затем очистите разрез кожи антисептическим раствором и поместите животное в зону восстановления с контролем до полного уми положении. Для флуоресцентной визуализации имплантированных фрагментов тканей через 24-48 часов после операции по имплантации включите систему визуализации in-vivo, инициализируйте программное обеспечение и позвольте камере CCD остыть в течение нескольких минут.После того, как инструмент будет готов место первой обезболивающей мыши в клетку системы визуализации in-vivo, в положении на спине, с головой внутри трубоушки подключен к анестезии машины, и закрыть крышку. Затем нажмите приобрести и сохранить пять полученных изображений. Для количественной оценки флуоресценции in-vivo в соответствующем программном обеспечении для анализа изображений щелкните просмотр и выберите несмешанный файл, представляющий интерес для анализа.Появится новое окно. Нажмите добавить в список, чтобы включить все несмешаемые файлы от каждого животного в разные моменты времени и нажмите нагрузки в группе. Все изображения должны отображаться в одной последовательности.В окне палитры инструментов, неизбранный отдельный флажок масштаба, чтобы настроить все изображения в той же шкале, и дважды нажмите на одно изображение последовательности. Чтобы создать область интереса, в области интересов инструменты выберите контур и авто один вариант, и нажмите на форму круга, чтобы поместить круг в центре флуоресцентного сигнала. Нажмите создать, чтобы создать область интереса и скопировать и вставить область интереса на фоне, где нет сигнала.Затем нажмите измерить области, представляющие интерес, и выберите все для отображения значений для интенсивности флуоресценции каждого региона и скопировать и вставить эти значения в электронную таблицу. Маркировка фрагментов эндометрия достигается инфекцией аденовирусом, разработанным для экспрессии mCherry, белка, который испускает флуоресценцию в ближнем инфракрасном разделе, который значительно более надежный, чем неинденциальная аутофторесценция эндометрия. Во время мониторинга, в дополнение к эталонной длине волны для mCherry, флуоресцентные изображения принимаются с различными парами возбуждения выбросов длины волны фильтров.Для определения характерных флуоресцентных профилей излучения тканей поражений из фона, а также аутофторесценции, испускаемой тканями хозяина, мониторинг изображения, содержащие сырые флуоресценции, испускаемые животными в течение каждого времени точки собираются вместе, ненормальные, в одном файле. Далее флуоресценция не смешивается, нормализуется и представляется как ложное цветное изображение, а области интересов, соответствующие конкретным легионным и фоновым сигналам, автоматически распознаются программой и количественно. Фоновая область сигнализации интересов вычитается из области интересов легиона сигнализации.И результаты интенсивности в каждой точке времени нормализуются по отношению к точке времени, в которой интенсивность максимальна. После нескольких недель мониторинга жизнеспособные имплантаты могут быть восстановлены для дальнейшего анализа ниже по течению. При попытке этой процедуры важно помнить, чтобы выбрать концентрацию Ad-mCherry, который обеспечивает самый блестящий сигнал без ущерба для жизнеспособности ткани.После этой процедуры, поражения могут быть восстановлены и использованы для изучения дополнительных отличительных параметров. Эта процедура оптимизирована для неинвазивного мониторинга поражений ксенотрансплантата человеческого эндометриоза. Тем не менее, он может быть легко адаптироваться для оценки воздействия конкретных препаратов, представляющих интерес на местах ксенотрансплантата в режиме реального времени.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

В естественных изображений и лечебных процедур в Ортотопическая мышиной модели рака яичников

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

Неинвазивный метод отбора проб волос для получения высоких ДНК Качество от Неуловимый мелких млекопитающих

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Долгосрочные Смертельное испытания токсичности с ракообразных Артемия franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Валидация модели мышей, чтобы сорвать ЛИНК Комплексы в манере соты

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Транс внутренняя ячейка массы впрыска эмбриональных стволовых клеток приводит к более высоким ставкам химеризма

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Мыши модель частичной непроходимостью кишечника

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Анализ масс-спектрометрии для выявления повсеместного ания метеоуожего тега CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

Визуализация ответных встреч с поражением, помеченным антигеном, блокирующим поражение

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Мышь Модель поясничного позвоночника нестабильности

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Мониторинг динамического роста сосудов сетчатки в мышиной модели инсулин-индуцированной ретинопатии

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...