Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Detta arbete stöddes av spanska ministeriet för ekonomi och konkurrenskraft genom Miguel Servet Program [CP13/00077] tillsammans grundade av ERUF (Europeiska regionalutvecklingsfonden) och tilldelas till Dr R. Gómez samt av Carlos III Institute of Health bidrag att Dr R Gómez [PI14/00547 och PI17/02329] och Prof A. Cano [PI12/02582].

Användning av mänsklig vävnad exemplar godkändes av den institutionella Review Board och etikkommittén Hospital Universitario La FE. Alla patienter som skriftligt informerat samtycke. Studien som involverar djur godkändes av utskottet institutionella djur vård vid Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia, och alla procedurer utfördes efter riktlinjerna för skötsel och användning av däggdjur från de nationella instituten av hälsa.
1. livmodercancer vävnad insamling och f...

<ol>
	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

Protokollet beskrivs häri beskriver genomförandet av en djurmodell av endometrios där arkitekturen att implantera lesioner arkitekturen är bevarad medan samtidigt tillåter realtid bedömning av fluorescens som avges av mCherry märkt livmodercancer vävnad. I detta protokoll beskriver vi användning av en specifik i vivo imaging system och tillhörande programvara att bedöma icke-invasivt fluorescens som avges av märkt lesionen. Varje användare bör anpassa protokollet beroende på specifika bildenhet och relater...

Endometrios är en kronisk gynekologisk sjukdom som initierats av implantation av funktionella livmoderslemhinnan utanför livmoderhålan. Ektopisk lesioner växer och inducerar inflammatoriska processer som leder till kronisk bäcken smärta och infertilitet1. Det uppskattas att upp till 10 – 15% av kvinnor i fertil ålder är drabbade av endometriosis2, och det är närvarande i cirka 40 – 50% av infertila kvinnor3. Aktuella farmakologiska behandlingar för endometrios är inte att helt utrota lesioner och inte fria från biverkningar4,5. Forskning för effektivare terapier kräver av förfiningen av de befintliga djurmodeller av endometrios på ett sådant sätt att människors lesioner kan vara lämpligt härmade och effekterna av föreningar på lesionsstorlek bland annat kan bedömas noggrant.
Primate modeller har använts för att efterlikna endometrios genom att implantera ektopisk lesioner histologiskt identiska och på liknande platser som människor6,7,8. dock relaterade etiska betänkligheter och de höga ekonomiska kostnaderna till experiment med primater gräns deras användning9. Följaktligen, användning av små djur, speciellt gnagare, för genomförandet av in vivo-modeller av endometrios fortsätter att vara gynnad eftersom det tillåter studier med större antal individer10,11. Endometrios kan induceras hos dessa djur av omplantering antingen bitar av gnagare livmoderns horn (”homologa modeller”)12,13 eller mänsklig endometriehyperplasi/endometriotic vävnad till ektopisk webbplatser (heterologa modeller)14 . I motsats till människor, gnagare utgjuta inte deras livmodercancer vävnad och därmed endometrios kan inte utvecklas spontant i dessa arter. Homologa mus modeller av endometrios har kritiserats på grund av att implanteras ektopisk mus uterin vävnad avspeglar därför inte kännetecknen av mänskliga endometriotic lesioner15.
Lämpliga fysiologi endometrios kan vara härmade i heterologa modeller av endometrios där färska mänskliga livmodercancer fragment implanteras i nedsatt immunförsvar djur. I konventionella heterologa modeller bedöms de terapeutiska effekterna av föreningar av intresse vanligen vid slutpunkten av bedömningen av mållesionens storlek med hjälp av bromsok16. En uppenbar begränsning är att, som sådan, endpoint djurmodeller inte tillåter studerar implantation dynamics eller endometriotic lesion utveckling över tid. En ytterligare begränsning är att användningen av bromsok inte tillåter noggranna mätningar av mållesionens storlek. Standardfel som tillhandahålls av bromsok är faktiskt i samma intervall (dvs millimeter) i samma storlek som de lesioner som implanteras i möss, vilket begränsar kapaciteten av dessa verktyg att upptäcka faktiska variationer i storlek.
För att övervinna sådana begränsningar, beskriver vi häri, generering av ett heterologt musmodell av endometrios där implanterade mänsklig vävnad är konstruerad för att uttrycka en reporter m-Cherry fluorescerande protein. Påvisande av fluorescerande signalen med en lämplig bild system möjliggör icke-invasiv övervakning av lesion status med samtidiga kvantifiering av dess storlek i realtid. Vår modell ger således tydliga fördelar jämfört med konventionella endpoint modeller eftersom det ger möjlighet för icke-invasiv övervakning i realtid och möjligheten att utföra mer objektiva och korrekt uppskattning av variationer i lesionsstorlek.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

Här beskriver vi ett protokoll för genomförandet av ett heterologt musmodell där progression av endometrios kan bedömas i realtid genom icke-invasiv övervakning av fluorescens som avges av implanterade ektopisk mänsklig livmodercancer vävnad. För detta ändamål erhålls biopsier av mänskliga endometriet från givare kvinnor pågående äggcellen donation. Mänskliga livmodercancer fragment är odlade i närvaro av adenoviruses konstruerad att uttryckliga cDNA för den reporter fluorescerande protein mCherry. Vid visualisering, märkt vävnader med en optimal frekvens av fluorescens efter infektion väljs därefter för implantation i mottagarens möss. En vecka före implantation kirurgi, mottagarens möss är oophorectomized och estradiol pellets placeras subkutant för att upprätthålla överlevnad och tillväxt av lesioner. På operationsdagen är möss sövda och peritoneal hålighet nås genom en liten (1,5 cm) snitt av linea-alba. Fluorescently märkta implantat är tweezed, kortfattat indränkt i lim och bifogas peritoneal lagret. Snitt är sys, och djur kvar för att återvinna för ett par dagar. Fluorescens som avges av endometriotic implantat är oftast icke-invasivt övervakas varje 3 dagar i 4 veckor med ett in vivo imaging system. Variationer i storlek av endometriotic implantat kan beräknas i realtid genom kvantifiering av mCherry signal och normalisering mot den första tidpunkt visar maximal fluorescensintensiteten.
Traditionella prekliniska gnagare modeller av endometrios tillåter inte icke-invasiv övervakning av lesion i realtid men snarare möjliggöra utvärdering av effekterna av narkotika analyseras vid slutpunkten. Detta protokoll gör att man kan spåra lesioner i realtid och är mer användbar för att undersöka den terapeutiska potentialen av droger i prekliniska modeller av endometrios. Den största begränsningen av frigjorda-modellen är att icke-invasiv övervakning inte är möjligt under en längre tid på grund av ett episomal uttryck för Ad-virus.

Här, beskriver vi processen för att skapa ett heterologt modell av endometrios där arkitekturen av lesioner bevaras genom att implantera fluorescently märkt bitar av mänskliga endometriet till immunsupprimerade möss, vilket möjliggör icke-invasiv övervakning av lesion progression. Märkning av livmodercancer fragment uppnås genom infektion med adenovirus konstruerad att uttryckliga mCherry, ett protein som avger fluorescens i nära infraröda området. I fig...

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Här presenterar vi ett protokoll för live-imaging av fluorescently märkt mänskliga livmodercancer fragment ympas in möss. Metoden gör det möjligt att studera effekterna av droger val på endometriotic lesionsstorlek genom övervakning och kvantifiering av fluorescens som avges av fluorescerande reportern på realtid

Icke-invasiv övervakning av Mållesionens storlek i ett heterologt musmodell för endometrios

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor vid utvärdering av terapeutiska läkemedelseffekter i endometriosfältet, såsom effekterna av antiandrogena föreningar på storleken av endometriotiska lesioner. Den största fördelen med denna teknik är att effekterna av de specifika läkemedlen kan bedömas i djurmodeller av endometrios i realtid, snarare än vid slutpunkten. Demonstrera förfarandet kommer att Jessica Martinez, som är en tekniker från mitt labb, liksom Viviana Bisbal och Nerea Marin, som är veterinärer från Centro de Investigacion Principe Felipe och som är nära medarbetare med vårt team.Två till tre dagar före implantatet kirurgi, överföra sköljda, friska livmodercancer vävnad biopsi fragment till en 10 centimeter Petri skålen innehåller komplett medium, och använda skalpell att hacka vävnaden i fem till 10 millimeter kubik bitar. Med hjälp av en mikropipette, tillsätt 30 till 50 mikroliter droppar DMEM över botten av en ny 10 centimeter kultur skålen, lämnar tillräckligt med utrymme mellan varje droppe så att de inte kommer i kontakt med varandra. När alla droppar har placerats, använd en spruta nål för att placera en enda bit biopsi vävnad fragment i varje droppe.Därefter lägger du till 100 till 200 mikroliter av nyberedda adeno-mCherry till en brunn av en 96 brunnsplatta per vävnadsfragment, plus tre brunnar med adenovirus fri DMEM som en negativ kontroll. Använd sedan nålen för att överföra ett vävnadsprov till varje brunn av adeno-mCherry-lösning för en inkubation över natten vid 37 grader celsius och 5 %CO2. Nästa morgon placera plattan på en fluorescens mikroskop skede och använda en 568 nanometer laser för att kontrollera fragment för en optimal märkning.Att använda lämplig utspädning av infekterande mCherry adenovirus är nyckeln för en effektiv märkning av vävnaden. Så för att bestämma lämplig koncentration, flera för mCherry utspädning, för varje enskilt experiment, måste utvärderas. Överför sedan de mest lysande fragmenten i enskilda brunnar av en ny 96 brunnsplatta som innehåller färskt, komplett medium.Minst sju dagar efter ooforektomi, dekara endometrievävnad fragment i en Petri-skålen, och bekräfta en brist på svar på tå nypa i en sövd, oophorectomized djur. Med musen i ryggläge desinficera det ventrala området och gör en 1,5 centimeter längsgående snitt i buken. Separera huden från muskeln och gör ett andra 1,5 centimeter snitt i muskeln för att komma åt peritonealhålan.Hålla den vänstra kanten av buken muskulös vägg med mini-trikrå, vik muskeln för att exponera den inre ansikte bukhinnan på utsidan av djuret. Använd mini-pincett för att kort blötlägga ett livmodercancerimplantat i n-butylester cyanoakrylatlim och fäst fragmentet i peritoneum. När limmet torkas, placera ett andra implantat på kontralateral sidan av peritoneum som just visat.Använd en absorberbar 6-0 sutur för att stänga muskellagret och en icke-resorberbar 6-0 sutur för att stänga huden. Rengör sedan huden snitt med antiseptisk lösning och placera djuret i återhämtningszonen med övervakning tills full recumbency. För in-vivo fluorescerande avbildning av de implanterade vävnadsfragmenten, 24 till 48 timmar efter implantationsoperationen slår på in-vivo-bildsystemet, initiera programvaran och låta CCD-kameran svalna i några minuter.När instrumentet är redo placera den första sövda musen i in-vivo imaging systembur, i ryggläge, med huvudet inuti en tubule ansluten till anestesi maskinen, och stänga locket. Klicka sedan på skaffa och spara de fem resulterande bilderna. För att kvantifiera in-vivo fluorescens, i lämplig bild analys programvara klicka bläddra och välj den oblandade filen av intresse som ska analyseras.Ett nytt fönster kommer att visas. Klicka på Lägg till i listan för att inkludera alla de oblandade filerna från varje djur vid olika tidpunkter och klicka på ladda som en grupp. Alla bilderna ska visas i en enda sekvens.I fönstret med verktygspaletten avmarkerar du checkboxen för individuell skala för att justera alla bilderna till samma skala och dubbelklicka på en bild av sekvensen. För att skapa en region av intresse, i regionen intresseverktyg välja kontur och auto ett alternativ, och klicka på cirkeln form för att placera cirkeln i mitten av fluorescerande signal. Klicka på skapa för att skapa regionen av intresse och kopiera och klistra in regionen av intresse på en bakgrund där det inte finns någon signal.Klicka sedan på mät områden av intresse och välj alla för att visa värden för fluorescensintensen för varje region och kopiera och klistra in dessa värden i ett kalkylblad. Märkningen av endometriefragmenten uppnås genom infektion med adenovirus konstruerad för att uttrycka mCherry, ett protein som avger fluorescens i den nära infraröda delen som är betydligt mer robust än den icke-infekterade endometrievävnaden autofluorescens. Under övervakningen tas, förutom referensvåglängden för mCherry, fluorescerande bilder med olika par av excitationsutsläppsvåglängdsfilter.För att definiera de karakteristiska fluorescerande vävnadsemissionsprofilerna för lesionerna från bakgrunden, och autofluorescens som avges av värdvävnaderna, förs de övervakningsbilder som innehåller rå fluorescens som djuren utsänder under varje tidspunkt samman, omnormaliserade, i en enda fil. Därefter är fluorescensen oblandad, normaliserad och representerad som en falsk färgbild, och de regioner av intressen som motsvarar specifika legion- och bakgrundssignaler känns igen automatiskt av programmet och kvantifieras. Bakgrundsregionen av räntesignalering subtraheras från legionregionen av räntesignalering.Och resultaten av intensiteten vid varje tidpunkt normaliseras mot den tidpunkt då intensiteten är maximal. Efter flera veckors övervakning kan de livskraftiga implantaten återvinnas för ytterligare analys nedströms. Samtidigt försöker detta förfarande är det viktigt att komma ihåg att välja koncentrationen av Ad-mCherry som ger den mest lysande signal utan att äventyra livskraften i vävnaden.Efter detta förfarande kan lesionerna återvinnas och användas för att studera ytterligare särskiljande parametrar. Detta förfarande är optimerad för icke-invasiv övervakning av xenograft mänskliga endometrios skador. Emellertid, Det kan lätt anpassas för att bedöma effekterna av en specifik narkotika av intresse på platserna för en xenograft i realtid.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging och terapeutiska behandlingar i en Orthotopic musmodell av äggstockscancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

En icke-invasiv Hair provtagningsteknik för att med hög kvalitet DNA från Elusive små däggdjur

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Långsiktig Dödligt toxicitetstest med Crustacean Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering av en musmodell för att Disrupt LINC Anläggningar i en cell-specifik Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-inner Cell Mass injektion av embryonala stamceller leder till högre chimärism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musmodell av partiell tarmobstruktion

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Masspektrometri analys för att identifiera Ubiquitylation av EYFP-märkt CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

Visualisering av svarande möten med en antigenmärkt blockerande lesion

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

En musmodell av ryggradsinstabilitet i ländryggen

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Övervakning av dynamisk tillväxt av retinala kärl i syreinducerad retinopati musmodell

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...