Name: noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Bu eser İspanyolca Ekonomi ve rekabet Miguel Servet FEDER (Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu) tarafından cofounded programı [CP13/00077] aracılığıyla Bakanlığı tarafından desteklenen ve Dr R. Gómez yanı sıra ödül Carlos III Sağlık Enstitüsü hibe tarafından ödüllendirildi Dr R Gómez [PI14/00547 ve PI17/02329] ve Prof A. Cano [PI12/02582].

İnsan dokusu örnekler kullanımı Kurumsal değerlendirme Komitesi ve hastane Universitario La Fe Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Tüm hastalar yazılı Onam sağlanan. Hayvanları içeren çalışma Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia kurumsal hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi ve tüm yordamlar Ulusal kurumları için bakım ve memeliler kullanım yönergeleri izleyerek gerçekleştirilmiştir Sağlık.
1. rahim dokusu koleksiyonu ve ön işleme
<ol...

<ol>
	<li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+endometriosis.">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice &amp; Research: Clinical Obstetrics &amp; Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li><li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis+and+infertility.">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li><li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+endometriosis.">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li><li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain.">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li><li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+(Papio+anubis,+Papio+cynocephalus).">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li><li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony.">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li><li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions.">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility &amp; Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li><li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression.">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li><li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peritoneal+endometriosis:+validation+of+an+in-vivo+model.">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li><li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+non-invasive+model+of+endometriosis+for+monitoring+the+efficacy+of+antiangiogenic+therapy.">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li><li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions.">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li><li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiangiogenesis+therapy+for+endometriosis.">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+(Pro-EGCG)+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice.">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li><li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis.">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li><li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers.">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics &amp; Gynecology. 197 (6), 578 (2007).</li><li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis.">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis.">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li><li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis:+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method.">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li></ol>

Burada ayrıntılı iletişim kuralı aynı anda gerçek zamanlı değerlendirmesini Floresans izin yayılan iken lezyonlar mimari Reproduction Mimarlık mCherry tarafından korunur endometriozis bir hayvan modeli uygulamasını açıklar endometrium dokusu etiketli. Bu protokol için belirli içinde vivo görüntüleme sistemi ve non-invaziv etiketli lezyon tarafından yayılan Floresans değerlendirmek için ilgili yazılım kullanımını açıklar. Her kullanıcı bağlı olarak belirli görüntü aygıtı ve ilgili ...

Endometriozis rahim boşluğuna dışında işlevsel endometrium implantasyonu tarafından başlatılan kronik bir jinekolojik hastalıktır. Ektopik lezyonlar büyümek ve iltihabi süreçleri kronik pelvik ağrı ve infertilite1için önde gelen neden. Bu kadar üreme çağındaki kadınların % 10-15 endometriosis2 tarafından etkilendiğini tahmin edilmektedir ve infertil kadınlar3yaklaşık % 40-50 mevcut. Endometriozis için mevcut farmakolojik tedaviler lezyonlar tamamen ortadan kaldırmak için ve yan etkileri4,5özgür değil. Endometriozis insan lezyonlar uygun şekilde taklit ve diğerleri arasında lezyon boyutu bileşikler etkilerini yakından tespit edilebilir şekilde varolan hayvan modellerinin arıtma, daha etkili tedaviler için araştırma gerektirir.
Primat modelleri endometriozis Ektopik lezyonlar implantasyonu histolojik olarak aynı ve benzer sitelerde olduğu gibi insanlar6,7,8taklit etmek için kullanılmıştır; Ancak, etik kaygılar ve yüksek ekonomik maliyetler primatlar sınırı ile deneme onların kullanım9ile ilgili. Sonuç olarak, küçük hayvanlar, özellikle kemirgenler, kullanım endometriozis ın-vivo modellerinin uygulanması için çalışmalar bireyler10,11daha büyük sayılarla verdiğinden tercih devam ediyor. Endometriozis indüklenen bu hayvanlara kemirgen rahim boynuzları ("homolog modelleri")12,13 adet veya Ektopik sitelere (kapaklı modelleri) insan endometrium/endometriotic doku nakli tarafından14 . Aksine insanlar, kemirgenler endometrium doku döken değil ve böylece endometriozis kendiliğinden bu türler içinde geliştirilebilir değil. Bu nedenle, homolog fare modelleri endometriozis gerçeğini Ektopik fare rahim dokusu implante nedeniyle eleştirdi var insan endometriotic lezyonlar15özelliklerini yansıtacak.
Endometriozis uygun fizyolojisi nerede taze insan endometrium parçaları immünyetmezligi hayvana implante edilir endometriozis kapaklı modelleri taklit. Geleneksel Contegra modellerinde bileşikler ilgi tedavi edici etkileri yaygın lezyon boyutu değerlendirme Çap pergeli16kullanımı ile tarafından bitiş noktası değerlendirilir. Bu nedenle, bitiş noktası hayvan modelleri implantasyon dynamics ya da zaman içinde endometriotic lezyon geliştirme eğitim izin vermez, bir açık kısıtlamadır. Çap pergeli kullanımı doğru ölçümler lezyon boyutu izin vermez bir ek kısıtlamadır. Nitekim, aynı aralıkta (yani, milimetre) farelerde, böylece gerçek varyasyonları boyutu algılamak için bu araçları kapasitesine sınırlama implante lezyonlar boyutu olarak Çap pergeli tarafından sağlanan standart hata olduğunu.
Gibi sınırlamalar üstesinden gelmek için burada, implante insan dokusu içinde bir muhabir m-kiraz floresan protein hızlı şekilde tasarlanmıştır endometriozis bir kapaklı fare modeli oluşturmayı açıklar. Bir uygun görüntü sistemi ile floresan sinyal tespiti non-invaziv lezyon durumunu gerçek zamanlı olarak boyutunun aynı anda miktar ile izleme sağlar. Böylece, bizim model derecede o getirmek gerçek zamanlı non-invaziv izleme fırsatı ve olasılığı daha objektif ve varyasyonları doğru tahmin lezyon boyutunda gerçekleştirmek için geleneksel bitiş noktası modelleri karşılaştırıldığında Net avantajlar sağlar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Endosampler&#8482;</td>
			<td>Medgyn</td>
			<td>22720</td>
			<td>Cannula for sampling the uterine endometrium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>HYCLSH30285.FS</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-mCherry</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>1767</td>
			<td>Adenoviral vector expressing mCherry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X solution, sterile, pH 7,4</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E504-500ML</td>
			<td>Buffer for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/ 60 days</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td>SE-121</td>
			<td>Hormone pellets for rodents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond&#8482; Tissue Adhesive</td>
			<td>3M</td>
			<td>780-680</td>
			<td>Tissue adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes in polystyrene crystal</td>
			<td>Levantina</td>
			<td>367-P101VR20</td>
			<td>Petri dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, medical 10 ml 0,5 ml</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CODA626616</td>
			<td>Syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves, powder-free</td>
			<td>VWR</td>
			<td>112-2754</td>
			<td>Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soft swiss nude mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>SNUSSFE05S</td>
			<td>Mice for animal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ivis Spectrum In vivo Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo Monitoring equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image&#174; (Ivis software)</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>---</td>
			<td>In vivo monitoring software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Enrichment serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well cell culture treated plates</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>167008</td>
			<td>Culture plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urine flasks</td>
			<td>Summedical</td>
			<td>4004-248-001</td>
			<td>Flasks for washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blades</td>
			<td>(Aesculap Division) Sanycare</td>
			<td>1609022-0008</td>
			<td>Surgical blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isovet 1000 mg/g</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Isoflurane (Anesthetic)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprex&#174; 0.3 mg</td>
			<td>Schering Plough S.A.</td>
			<td>---</td>
			<td>Buprenorphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injectable morphine solution 10 mg/mL</td>
			<td>B BRAUN</td>
			<td>---</td>
			<td>Morphine (Analgesic solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofyl&#174; Absorbable Sutures</td>
			<td>COVIDIEN</td>
			<td>---</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinclor chlorhexidine</td>
			<td>Promedic SA</td>
			<td>---</td>
			<td>Antiseptic solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy DMi8</td>
			<td>Leica Mycrosystems</td>
			<td>---</td>
			<td>fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hera Cell 150 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51026282</td>
			<td>Incubator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis

Burada, biz hangi endometriozis ilerlemesini noninvaziv implante Ektopik insan endometrium dokusu tarafından yayılan Floresans izleme aracılığıyla gerçek zamanlı olarak tespit edilebilir bir kapaklı fare modeli uygulanması için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu amaçla, insan endometrium biyopsi donör kadınlar devam eden oosit bağış elde edilir. İnsan endometrium parçaları muhabir floresan protein mCherry için hızlı cDNA için tasarlanmış adenovirüse bakın huzurunda kültürlü. Enfeksiyon daha sonra seçilen alıcı farelerde implantasyon için görselleştirme, doku floresan en uygun bir fiyata sahip adlı. İmplantasyon ameliyat öncesi bir hafta alıcı fareler oophorectomized ve östradiol granül subkutan hayatta kalma ve büyüme lezyonların sürdürebilmek için yerleştirilir. Ameliyat günü fareler küçük (1.5 cm) kesi linea alba. tarafından erişilen imzalat ve Periton boşluğu vardır. Fluorescently etiketli implantlar kaşların, kısa bir süre içinde tutkal batırılmış ve Periton katmana bağlı. İnsizyon sütüre ve hayvanlar birkaç gün kurtarmak için yaptı. Floresan endometriotic implantlar tarafından yayılan genellikle non-invaziv 3 günde 4 hafta içinde vivo bir görüntüleme sistemi ile izlenir. Endometriotic implantları boyutunda varyasyonlar gerçek zamanlı olarak mCherry sinyal ve normalleştirme maksimal floresan yoğunluğu gösteren ilk zaman noktası karşı miktar tarafından tahmin edilebilir.
Endometriozis modellerin geleneksel preklinik kemirgenler non-invaziv lezyon gerçek zamanlı izleme izin vermez ama oldukça bitiş noktası denetlesinler ilaçların etkilerinin izin. Bu iletişim kuralı bir lezyonlar gerçek zamanlı olarak izlemek izin verir ve endometriozis Preklinik modellerin uyuşturucu tedavi potansiyelini keşfetmek için daha yararlı olduğunu. Böylece üretilen modeli ana sınırlandırılması non-invaziv izleme reklam-virüs episomal ifadesi nedeniyle uzun süreler boyunca mümkün değildir.

Burada, böylece non-invaziv izin insan endometrium fluorescently etiketli adet immün fareler yerleştirerek tarafından lezyonlar mimarisini korunduğu endometriozis kapaklı bir model oluşturmak için süreci tanımlamak lezyon ilerlemesini izleme. Endometrium parçaları etiketleme tarafından Enfeksiyon Mod hızlı mCherry, Floresans yakın kızılötesi bölgesi yayan bir protein için tasarlanmış adenovirus ile elde edilir. Şekil 1' de, Ad-mCherry ...

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis at JoVE.com

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Burada, canlı görüntüleme, farelerde aşılı fluorescently etiketli insan endometrium parçacıkları için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntemi seçim ilaçların etkileri izleme aracılığıyla endometriotic lezyon boyutu ve gerçek zamanlı olarak flüoresan muhabir tarafından yayılan Floresans miktar sağlar

Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Bu yöntem, anti-androjenik bileşiklerin endometriotik lezyonların boyutu üzerindeki etkileri gibi endometriozis alanındaki terapötik ilaç etkilerinin değerlendirilmesinde anahtar soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, spesifik ilaçların etkilerinin son noktadan ziyade gerçek zamanlı olarak endometriozisin hayvan modellerinde değerlendirilebiliyor olmasıdır. Prosedürü gösteren Jessica Martinez, benim laboratuvarbir teknisyen, yanı sıra Viviana Bisbal ve Nerea Marin, Centro de Investigacion Principe Felipe veterinerler ve ekibimiz ile yakın işbirlikçileri vardır.İmplant ameliyatından 2-3 gün önce, durulanmış, sağlıklı endometrial doku biyopsi si parçalarını tam orta içeren 10 santimetrelik Petri kabına aktarın ve dokuyu 5 ila 10 milimetreküp küp parçalara dönüştürmek için neşterler kullanın. Bir mikropipet kullanarak, yeni bir 10 santimetrelik kültür çanak altında DMEM 30 ila 50 mikrolitre damla ekleyin, böylece birbirleriyle temas gelmez her damla arasında yeterli boşluk bırakarak. Tüm damlalar yerleştirildiğinde, her damla içine biyopsi doku parçası tek bir parça yerleştirmek için bir şırınga iğnekullanın.Daha sonra, doku parçası başına 96 kuyu plakası bir kuyuya taze hazırlanmış adeno-mCherry 100 ila 200 mikrolitre ekleyin, artı negatif kontrol olarak adenovirüs içermeyen DMEM ile üç kuyu. Daha sonra 37 santigrat derece ve% 5 CO2 bir gecede kuluçka için adeno-mCherry çözeltisi her kuyuiçine bir doku örneği aktarmak için iğne kullanın. Ertesi sabah bir floresan mikroskop aşamasında plaka yerleştirin ve optimum etiketleme için parçaları kontrol etmek için 568 nanometre lazer kullanın.MCherry adenovirüs enfekte uygun seyreltme kullanarak dokunun etkili bir etiketleme için anahtardır. Bu nedenle uygun konsantrasyonu belirlemek için, her bir deney için mCherry seyreltme için birkaç, değerlendirilmesi gerekir. Daha sonra en parlak parçaları taze, eksiksiz orta içeren yeni bir 96 kuyu plakasının tek tek kuyularına aktarın.Ooforektomiden en az yedi gün sonra, endometriyal doku parçalarını petri kabına ayırın ve anestezili oophorectomized bir hayvanda ayak ucuna yanıt eksikliğini doğrulayın. Supine pozisyonda fare ile ventral alanı dezenfekte ve karın bir 1.5 santimetre uzunlamasına kesi yapmak. Kas dan cilt ayırın ve periton boşluğuna erişmek için kas ikinci bir 1.5 santimetre kesi yapmak.Mini-forceps ile karın kas duvarının sol kenarı tutarak, hayvanın dışında periton iç yüzünü ortaya çıkarmak için kas katlayın. N-butil ester siyanoakrilat yapıştırıcısında bir endometrial implantı kısa bir süre ıslatmak ve parçayı periton'a bağlamak için mini cımbız kullanın. Yapıştırıcı kurutulduğunda, az önce gösterildiği gibi peritonun kontralateral tarafına ikinci bir implant yerleştirin.Kas tabakasını kapatmak için emilebilir bir 6-0 sütür ve cildi kapatmak için emilemez 6-0 dikiş kullanın. Daha sonra deri kesisini antiseptik solüsyonla temizleyin ve hayvanı tam recumbency'ye kadar izleyerek iyileşme bölgesine yerleştirin. İmplante edilen doku parçalarının in-vivo floresan görüntülemesi için, implantasyon ameliyatından 24 ila 48 saat sonra in-vivo görüntüleme sistemini açın, yazılımı başlattırın ve CCD kameranın birkaç dakika soğumasını bekleyin.Cihaz hazır olduğunda ilk anestezili fareyi in-vivo görüntüleme sistemi kafesine, supine pozisyonunda, başı anestezi makinesine bağlı bir borunun içine yerleştirin ve kapağı kapatın. Ardından edinme'yi tıklatın ve elde edilen beş görüntüyü kaydedin. In-vivo floresan ölçmek için, uygun görüntü analizi yazılımı göz atın ve analiz edilecek ilgi karıştırılmamış dosyaseçin.Yeni bir pencere görüntülenir. Her hayvanın karışık olmayan tüm dosyalarını farklı zaman noktalarında eklemek için listeye ekle'yi tıklatın ve grup olarak yükle'yi tıklatın. Tüm görüntüler tek bir sırayla görünmelidir.Araç paleti penceresinde, tüm görüntüleri aynı ölçekte ayarlamak için tek tek ölçek onay kutusunu seçin ve dizinin bir resmine çift tıklayın. İlgi çekici bir bölge oluşturmak için, ilgi alanları nın araçları kontur ve otomatik bir seçeneklerini seçin ve daire şeklini tıklayarak daireyi floresan sinyalin ortasına yerleştirin. İlgi alanı oluşturmak için oluştur'u tıklatın ve ilgi çekici bölgeyi sinyal inolmadığı bir arka planda kopyalayıp yapıştırın.Ardından ilgi çekici bölgeleri ölçü'ye tıklayın ve her bölgenin floresan yoğunluğuna yönelik değerleri görüntülemek için tümünü seçin ve bu değerleri bir elektronik tabloya kopyalayıp yapıştırın. Endometrial parçaların etiketlemesi, enfekte olmayan endometrial doku otofloresansına göre önemli ölçüde daha sağlam olan yakın kızılötesi bölümde floresan yayan bir protein olan mCherry'yi ifade etmek için tasarlanmış adenovirüs ile enfeksiyon la elde edilir. İzleme sırasında, mCherry için referans dalga boyuna ek olarak, floresan görüntüler uyarma emisyon dalga boyu filtreleri farklı çiftleri ile alınır.Arka plandaki lezyonların karakteristik floresan doku emisyon profillerini ve konak dokular tarafından yayılan otofloresanları tanımlamak için, hayvanların her zaman noktasında yaydığı ham floresan içeren izleme görüntüleri tek bir dosyada bir araya getirilir, normalleştirilmeecektir. Daha sonra, floresan karışık değil, normalleştirilmiş ve yanlış renkli bir görüntü olarak temsil edilir ve belirli lejyon ve arka plan sinyallerine karşılık gelen ilgi alanları otomatik olarak program tarafından tanınan ve ölçülür. İlgi sinyalizasyon arka plan bölgesi ilgi sinyallejyon bölgesinden çıkarılır.Ve her zaman noktasındaki yoğunluğun sonuçları, yoğunluğun maksimal olduğu zaman noktasına göre normale döner. Birkaç hafta süren izlemeden sonra, uygun implantlar daha fazla alt analiz için geri kazanılabilir. Bu prosedürü çalışırken, dokunun canlılığından ödün vermeden en parlak sinyali sağlayan Ad-mCherry konsantrasyonunun seçiciliğini seçmek önemlidir.Bu işlemden sonra lezyonlar kurtarılabilir ve ek ayırt edici parametrelerin incelenmesinde kullanılabilir. Bu işlem ksenogreft insan endometriozis lezyonlarının non-invaziv takibi için optimize edilebilmektedir. Ancak, bir ksenogreft siteleri üzerinde ilgi belirli bir ilaçların etkilerini değerlendirmek için kolayca gerçek zamanlı olarak adapte edilebilir.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Noninvasive Hair Sampling Technique to Obtain High Quality DNA from Elusive Small Mammals

Elusive Küçük Memeliler Yüksek Kalite DNA Edinme Noninvaziv Saç Örnekleme Tekniği

Noninvasive genetic sampling approaches are becoming increasingly important to study wildlife populations. A number of studies have reported using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Fare Modeli Doğrulanması Hücre-spesifik şekilde LINC kompleksler bozacak

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-iç hücre embriyonik kök hücrelerin kitle enjeksiyon daha yüksek Chimerism oranları için yol açar.

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Bağırsak kısmi tıkanıklık bir fare modeli

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP etiketli CENP-A (EYFP-CENP-A) Ubiquitylation tanımlamak için Kütle Spektrometresi Analizi

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Visualization of Replisome Encounters with an Antigen Tagged Blocking Lesion

Antijen Etiketli Blokaj Lezyonu ile Tekrarlayan Karşılaşmaların Görselleştirilmesi

Considerable insight is present into the cellular response to double strand breaks (DSBs), induced by nucleases, radiation, and other DNA breakers. In ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Bel Omurgası Kararsızlığının Fare Modeli

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Oksijene Bağlı Retinopati Fare Modelinde Retina Damarlarının Dinamik Büyümesinin İzlenmesi

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...