Name: clinical protocol of producing adipose tissue-derived stromal vascular fraction for potential cartilage regeneration
Uploaded: 2018-09-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration at JoVE.com

Der Autor räumt die Unterstützung aus dem Personal der Mipro Medical Clinic und die Figur-Design by Jaepil/David Lee. Unterstützt wurde diese Arbeit mit Forschungsstipendien von Bio & Medical Technology Development Program der NRF finanziert die MSIT (Anzahl NRF-2017M3A9E4078014); und die National Research Foundation von Korea (NRF) gefördert durch das Ministerium für Wissenschaft und IKT (Numeri NRF-2017R1A2B4002315 und NRF-2016R1C1B2010308).

Die Genehmigung und Zustimmung zu Berichten folgende Fallberichte wurden vom Myongji University Institutional Review Board Committee (MJUIRB) verzichtet. Darüber hinaus wurde das klinische Protokoll in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki und Verordnung Richtlinien der KFDA. Für die Verfahren wurden die Patienten informierte Einwilligungen eingeholt.
(1) Fettabsaugung
Hinweis: Führen Sie mit steriler Technik.
<ol><li>Verwenden Sie die folgenden Ei...

<ol>
	<li>Arnoczky, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+a+meniscus.+Biologic+considerations.">Building a meniscus. Biologic considerations.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. (367 Suppl), S244-S253 (1999).</li><li>Barry, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+therapy+in+joint+disease.">Mesenchymal stem cell therapy in joint disease.</a> Novartis Foundation Symposium. 249, 86-241 (2003).</li><li>Usuelli, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+in+orthopaedic+pathologies.">Adipose-derived stem cells in orthopaedic pathologies.</a> British Medical Bulletin. 124 (1), 31-54 (2017).</li><li>Zhang, H. 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Liberase TL information available from Sigma Millipore online Available from: <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en&amp;region=US">https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/05401020001?lang=en&amp;region=US</a> (2018)</li><li>. Liberase TM information available from Sigma Millipore online Available from: <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en&amp;region=US">https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/Libtmro?lang=en&amp;region=US</a> (2018)</li><li>Childs, J. D., Piva, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychometric+properties+of+the+functional+rating+index+in+patients+with+low+back+pain.">Psychometric properties of the functional rating index in patients with low back pain.</a> European Spine Journal. 14 (10), 1008-1012 (2005).</li><li>Price, D. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-derived+collagenase+inhibitor:+characterization+and+subcellular+localization.">Platelet-derived collagenase inhibitor: characterization and subcellular localization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (9), 2779-2783 (1985).</li><li>Uzuki, M., Sawai, T. 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Im Jahr 2001 Zuk Et Al. isolierten Stammzellen aus Fettgewebe durch den Abbau von Kollagen-Matrix mit Kollagenase6. Danach zeigte die Gruppe, dass diese Stammzellen aus dem Fettgewebe isoliert verwandeln konnte, in Knorpel und anderen Geweben des Mesoderm Ursprungs, was beweist, dass diese Stammzellen mesenchymalen Ursprungs waren.
Ebenso ist das Verfahren in diesem Artikel vorgestellten ein modifiziertes Protokoll menschlichen Patienten ähnliche Methode zuwei...

Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) sind bekannt, die Fähigkeit zur Regeneration von Knorpel1,2,3,4,5,6. Sie erhalten leicht aus verschiedenen Quellen: Knochenmark, Nabelschnurblut und Fettgewebe unter vielen anderen. Unter diesen Quellen ist Fettgewebe die einzige Quelle, eine ausreichende Anzahl von MSCs ohne jede Kultur-Erweiterung zur Regeneration von Knorpel in den klinischen Einstellungen7,8abgerufen werden können. Ebenso erhalten Sie leicht autologe Knochenmark Stromazellen vaskulären Bruch (SVF). Allerdings ist die Anzahl der Stammzellen in der nicht-Kultur erweiterte Knochenmark enthalten sehr geringe7,8. Nabelschnurblut kann eine ausreichende Zahl von MSCs enthalten. Nabelschnurblut ist jedoch nicht leicht zugänglich Quelle von autologen SVF.
Für klinische Anwendungen gibt es zahlreiche Methoden der Verarbeitung Fettgewebe SVF zu erhalten. Unter diesen, die Methode zur Gewinnung von MSCs aus Fettgewebe mit Kollagenase, entwickelt und von Zuk Et Al. bestätigt 5 , 6, wird sehr gut angenommen. Diese Methode der Verwendung von Kollagenase wurde für klinische Anwendungen in der Orthopädie modifiziert. Um auf klinischen Einstellungen angewendet werden, muss das System ein geschlossenes System, die Sterilität beizubehalten und gleichzeitig die Bequemlichkeit zu halten sein. Eine bestimmte Änderung in diesem Artikel vorgestellten beinhaltet Homogenisierung der lipoaspirate. Kleiner dimensionierte lipoaspirate werden, die die ungleiche Aufteilung des Fettgewebes führt sind relativ schneller als die größeren verdaut. Darüber hinaus können diese größer dimensionierte lipoaspirate Bindegewebe produzieren, die Spritzen und Nadeln verstopfen können während der Durchführung gemeinsamer Injektionen9,10. Um diese Probleme zu vermeiden, kann die lipoaspirate durch das Schneiden und Zerkleinern der lipoaspirate vor der Inkubation mit Kollagenase homogenisiert werden. Die daraus resultierende Fettgewebe abgeleitet SVF kann gleichmäßigeren extrazellulären Matrix (ECM) im Vergleich zu lipoaspirate, die nicht homogenisierte11enthalten. Die kaputte ECM in der SVF enthalten kann als ein Gerüst12arbeiten.
Im Jahr 2009 ermöglichte körpereigenem Fettgewebe abgeleitet SVF durch die Korean Food and Drug Administration (KFDA) Wenn innerhalb einer medizinischen Einrichtung mit minimale Verarbeitung von einem Arzt13verarbeitet. Danach wurde autologes Fettgewebe abgeleitet SVF verwendet worden, als potenzielle Agent Knie Funktionen bei Osteoarthritis (OA) Patienten zu verbessern, indem potenziell regenerierende Knorpel-ähnliches Gewebe10,14,15 , 16 , 17 , 18 . 
Im Jahr 2011 zeigte Pak zum ersten Mal, dass Fettgewebe Stammzellen (ASC) in das Fettgewebe abgeleitet SVF enthaltenen Knie Funktionen möglicherweise regenerierende Knorpel-ähnliches Gewebe im menschlichen OA Patienten injiziert mit Platelet-Rich verbessern können Plasma (PRP) 14. Darüber hinaus haben Pak Et Al. Sicherheitsdaten in 2013 mit 91 Patienten berichtet. Die mittlere Wirksamkeit Rate berichtet in diesem Sicherheitsdatenblatt betrug 67 %15. Anschließend zeigte weitere Studien von Pak Et Al. verbesserte Knie Funktionen möglicherweise durch Regeneration von Knorpel-ähnliches Gewebe bei Patienten mit einem Meniskus Riss und Chondromalazie Patellae10,16,17 ,18. Basierend auf Artikel berichtet, ist es bekannt, dass die Anzahl der Stammzellen enthalten in 100 g des Fettgewebes durch das Protokoll in diesem Artikel vorgestellten bearbeitet von 1.000.000-40.000.000 je nach Patienten Merkmale8, reichen kann 19 , 20 , 21 , 22 , 23.
Hier präsentieren wir Ihnen ein klinisches Protokoll der menschlichen Arthrose mit körpereigenem Fettgewebe abgeleitet SVF mit HA und PRP mit Calciumchlorid aktiviert. Die erste Version des klinischen Protokolls, mit einer geschlossenen, manuelle System zur Aufrechterhaltung der Sterilität wurde in 201114berichtet. Das gleiche Protokoll wurde optimiert, Aufrechterhaltung der Sterilität, und wurde in 2013 und 201610,15berichtet. Hier ist das optimierte Protokoll präsentiert. Die schematische Übersicht des Protokolls ist in Abbildung 1dargestellt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58363/58363fig1.jpg"> Abbildung 1: Schematische Übersicht des Protokolls. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58363/58363fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:941px;" width="941">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Material</td>
			<td style="width:221px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td style="width:303px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5% Betadine (povidone-iodine)&#160;</td>
			<td>Firson Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">657400260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2% Lidocaine&#160;</td>
			<td>Daehan Pharmaceutical Co.</td>
			<td style="width:156px;">670603480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;">Tumescent solution&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Myungmoon Pharm. Co. Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">N01BB01</td>
			<td style="width:303px;">The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Liberase TL and TM research grade&#160;</td>
			<td style="width:221px;">Roche Applied Science</td>
			<td style="width:156px;">5401020001</td>
			<td style="width:303px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D5LR</td>
			<td>Dahan Pharm. Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">645101072</td>
			<td>Dextrose 5% in lactated Ringer&#39;s solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;">Anticoagulant citrate dextrose solution&#160;</td>
			<td>Fenwal, Inc.</td>
			<td style="width:156px;">NDC:0942-0641</td>
			<td style="width:303px;">The solution was composed of 0.8% citric acid, 
			0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3% (w/v) Calcium chloride&#160;</td>
			<td>Choongwae Pharmaceutical Co.</td>
			<td style="width:156px;">644902101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid )</td>
			<td>Dongkwang pharm. Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">645902030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Ropivacaine</td>
			<td>Huons Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">670600150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Equipment</td>
			<td style="width:221px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3.0 mm Cannula&#160;</td>
			<td style="width:221px;">WOOJU Medical Instruments Co.</td>
			<td style="width:156px;">ML30200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60-mL Luer-Lock syringe</td>
			<td style="width:221px;">BD (Becton Dickinson)&#160;</td>
			<td style="width:156px;">309653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Barrel Kit&#160;</td>
			<td>CPL Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">30-0827044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue homogenizer that contains blades</td>
			<td>CPL Co., Ltd.</td>
			<td style="width:156px;">30-0827045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rotating incubator mixer</td>
			<td style="width:221px;">Medikan Co., Ltd</td>
			<td style="width:156px;">MS02060092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:221px;">Hanil Scientific Inc.</td>
			<td style="width:156px;">CE1133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Magnetic Resonance Imaging</td>
			<td style="width:221px;">Philips Medical Systems Inc.</td>
			<td style="width:156px;">18068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:261px;">Ultrasound Imaging System</td>
			<td style="width:221px;">Samsung Medison co., Ltd</td>
			<td style="width:156px;">CT-LK-V10-ICM-09.05.2007</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

clinical protocol of producing adipose tissue-derived stromal vascular fraction for potential cartilage regeneration

Osteoarthritis (OA) ist eine der häufigsten schwächenden Erkrankungen. Vor kurzem wurden zahlreiche Versuche unternommen, die Funktionen der Knie mit verschiedenen Formen von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) verbessern. In Korea, dem Knochenmark Konzentrate und Kabel sind Blut-Stammzellen von der Korean Food and Drug Administration (KFDA) für knorpelregeneration zugelassen. Darüber hinaus wurde ein Fettgewebe abgeleitet Stromazellen vaskulärer Bruch (SVF) von der KFDA für gemeinsame Injektionen bei menschlichen Patienten erlaubt. Autologen Fettgewebe abgeleitet SVF enthält extrazellulären Matrix (ECM) neben mesenchymalen Stammzellen. ECM scheidet verschiedene Zytokine, die zusammen mit Hyaluronsäure (HA) und Platelet-Rich Plasma (PRP) durch Kalzium-Chlorid, aktiviert MSCs helfen kann zu Knorpel regenerieren und Knie-Funktionen verbessern. In diesem Artikel präsentierten wir ein Protokoll, um Knie Funktionen zu verbessern, indem die Regeneration von Knorpel-ähnliches Gewebe bei menschlichen Patienten mit OA. Das Ergebnis des Protokolls wurde erstmals im Jahr 2011, gefolgt von ein paar zusätzliche Publikationen berichtet. Das Protokoll beinhaltet Fettabsaugung autologe lipoaspirate zu erhalten, die mit Kollagenase gemischt werden. Diese lipoaspirate-Kollagenase-Mischung ist dann schneiden und homogenisiert, um große fibrösem Gewebe zu entfernen, die während der Injektion Nadel verstopfen kann. Danach wird die Mischung inkubiert, um Fettgewebe abgeleitet SVF zu erhalten. Die daraus resultierende Fettgewebe abgeleitet SVF mit Fettgewebe abgeleitet MSCs und Reste von ECM, in Knie des Patienten, kombiniert mit HA injiziert und Calciumchlorid aktiviert PRP. Enthalten sind drei Fälle von Patienten, die mit unserem Protokoll woraus Verbesserung der Knieschmerzen, Schwellungen und Strecke der Bewegung zusammen mit MRI-Nachweis von hyalinem Knorpel-ähnliches Gewebe behandelt wurden.

Drei Patienten (eine 87 Jahre alte Patientin mit Stufe 3 OA, eine 68 Jahre alt, männlich mit Stufe 3 OA, und ein 60-jährige Weibchen mit Stufe 3 OA) ohne jede bedeutende Vergangenheit Anamnese in die Klinik mit anhaltenden Knieschmerzen vorgestellt und gewünscht für potenzielle autologen Fettgewebe abgeleitet SVF Behandlung. Alle drei Patienten hatten ihre Knie von einem Orthopäden untersucht und waren angeboten, Knie-Totalprothese (TKR) haben und sträubten sich operieren lassen. Vo...

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Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um eine Fettgewebe abgeleitet Stromazellen vaskulären Bruch und seine Anwendung auf Knie Funktionen zu verbessern, indem die Regeneration von Knorpel-ähnliches Gewebe bei menschlichen Patienten mit Arthrose zu produzieren.

Klinisches Protokoll zur Herstellung von Fettgewebe abgeleitet Stromazellen vaskulären Bruchteil für potenzielle Knorpelregeneration

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

Osteoarthritis ist eine der häufigsten schwächenden Erkrankungen bei älteren Menschen. Derzeit gibt es keine definitive Heilung für die zugrunde liegenden Ursachen der Arthrose. Dieses klinische Protokoll beschreibt ein innovatives Verfahren für eine vielversprechende, minimalinvasive und alternative Behandlung der menschlichen Kniearthrose durch Regenerierung von Knorpel wie Gewebe.Osteoarthritis ist eine der häufigsten schwächenden Erkrankungen bei älteren Menschen. Derzeit gibt es keine definitive Heilung für die unterstreichenden Ursachen von Arthrose. Dieses klinische Protokoll ist ein innovatives Verfahren für eine vielversprechende, minimalinvasive und alternative Behandlung der menschlichen Kniearthrose durch regenerierendes Knorpel-ähnliches Gewebe.Bringen Sie den Patienten mit einer Biohazard Class A Kapuze in einen Operationssaal und bringen Sie ihn in eine Supine-Position. Reinigen Sie den Bauchbereich des Patienten mit 5%Betadin-Povidin-Jod und drapieren Sie den Patienten mit der sterilen Technik, wobei der saubere Bereich des Bauches zur Fettabsaugung freigelegt wird. Etwa fünf Zentimeter infero-seitlich vom Nabel, betäuben zwei Stellen, eine auf der linken und die andere auf der rechten Seite des Nabels des Einschnitts gemacht werden.Mit zwei Milliliter 2%Lidocain ohne Adrenalin mit einer 25-Gauge 1,5-Zoll-Nadel in einer Fünf-Milliliter-Spritze durch Injektion jeder Stelle auf epidermaler Ebene. Anästhetisieren Sie die Einschnittstelle mit fünf Milliliter tumeszenzlösung und 10 Milliliter Spritze und der Nadel 25-Spur 1,5 Zoll gemacht werden. Machen Sie zwei Einschnitte von 0,5 Zentimetern etwa fünf Zentimeter unter dem Nabel seitlich durch Kneifen der Haut, um die Tiefe des subkutanen Niveaus zu erhöhen.Mit einer Klinge der Nummer 11, helfen Sie der erhöhten Haut, bis zum subkutanen Niveau zu durchdringen, aber nicht durch die Bauchwand zu durchdringen. Durch die Verwendung von 20 Zentimeter60-Spur-Kanülen, betäuben Sie den subkutanen Gehalt des gesamten Unterbauchbereichs, der mit 700 bis 800 Milliliter der tumeszenten Lösung fettabsaugt werden soll. Nach Abschluss der Infiltration des gesamten Unterbauchs mit tumeszenzlösung, bereiten Sie ein Fettabsaugungsgerät vor, indem Sie eine 3,0 Millimeter Kanüle mit einer 60 Milliliter oder 30 Milliliter Spritze zur manuellen Fettabsaugung oder speziell konstruierten 3,0-Millimeter-Kanüle, die mit einem Zentrifugensatz verbunden ist, anschließen.Eine geschlossene Systemspritze, die von uns entwickelt und von der FDA CDRH zugelassen wurde, um die Sterilität mit einer Vakuummaschine für vakuumunterstützte Fettabsaugung verbunden zu halten. Führen Sie die Fettabsaugung durch, um 100 bis 110 Gramm Fettgewebe ohne tumeszierende Lösung zu erhalten. Bei der Durchführung der Fettabsaugung wird Fettgewebe zusammen mit tumeszierender Lösung erhalten, sollte aber getrennt und entfernt werden.Um die tumeszierende Lösung zunächst durch Schwerkraft zu trennen, kann das Fettgewebe im Zentrifugen-Kit in eine 60-Milliliter-Spritze übertragen und die Spritze nach unten gelegt werden. Zum Beispiel befindet sich der Öffnungsteil der Spritze am unteren Rand. Durch das Warten von fünf bis sechs Minuten werden das Fettgewebe und die tumeszierende Lösung getrennt.Entfernen Sie die Flüssigkeit an der Unterseite der Spritze, indem Sie auf die Oberseite des Spritzenkolbens drücken. Führen Sie die oben genannten Schritte neun bis 11, bis insgesamt 100 Gramm bis 110 Gramm Fettgewebe Lipid Aspirat pro Knie angesammelt wurde. Nach der Trennung der Tumeszenzlösung durch Schwerkraft und akkumulieren 50 Gramm bis 55 Gramm Lipid-Aspirat pro 60 Milliliter Zentrifuge-Kit sterilgeschlossenes System, legen Sie die beiden Zentrifugen-Kits in einen Zentrifugenbehälter-Eimer und drehen Sie bei 1600 G für fünf Minuten, kondensieren das Lipid-Aspirat und trennen Flüssigkeit aus dem Fettgewebe.Dieser Prozess kondensiert das Lipid-Aspirat weiter und kann in bestimmten Fällen Fettöl produzieren. Achten Sie darauf, nicht zu schütteln, entfernen Sie die Sicherheitskappe und den Stecker an der Unterseite des Zentrifugen-Kits. Entfernen Sie die Bodenflüssigkeit, indem Sie langsam auf den Kolben des Zentrifugen-Kits drücken.Auf separate 60-Milliliter-Spritze, lösen Sie 10 Milligramm Kollagenase, fünf Milligramm Kollagennase spezifisch für Bindegewebe, und fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Fettgewebe mit 50 Milliliter normaler Saline. Mischen Sie etwa 25 bis 30 Milliliter kondensiertes Lipid-Aspirat mit gelöster Kollagennase, fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Bindegewebe und fünf Milligramm Kollagenase spezifisch für Fettgewebe im Verhältnis eins zu eins, Volumen zu Volumen, indem Sie die 60-Milliliter-Spritze mit einem Zentrifugen-Kit über einen speziellen Stecker verbinden. Mischen Sie gründlich, um das Prep-Aspirat und die Kollagenase zu kondensieren, indem Sie den Inhalt mit einem Stab oder einem Drücker zwischen die 60-Milliliter-Spritze und das Zentrifugen-Kit drücken.Übertragen Sie die Mischung aus Lipid-Aspirat und Kollagenase zurück auf die 60-Milliliter-Spritze. Verbinden Sie jede 60 Milliliter Spritze, die die Mischung enthält, mit dem Gewebehomogenisator, der Klingen enthält. Schließen Sie eine leere 60-Milliliter-Spritze an das andere Ende des Homogenisators an.Drücken Sie die Mischung vier- bis sechsmal durch den Homogenisator auf die andere 60-Milliliter-Spritze, was zum Schneiden und Zerlegen des Lipid-Aspirats führt. Übertragen Sie das homogenisierte Lipid-Aspirat und die kollagene Mischung durch einen speziellen Steckverbinder zurück in das 60 Milliliter Zentrifugen-Kit. Legen Sie die Zentrifugen-Kits in einen Behälter, der in einen Inkubator gelegt werden soll, der bei 37 Grad Celsius vorgewärmt wurde.Die beiden Zentrifugen-Kits mit der homogenisierten Mischung bei 37 Grad Celsius 40 Minuten lang inkubieren, während sie bei 45 U/min rotieren. Nach 40 Minuten Inkubation den Behälter steril aus dem Inkubator entfernen. Entfernen Sie dann die Zentrifugensätze und legen Sie sie in eine Zentrifugenmaschine.Zentrifugieren Sie die Mischungen bei 800 G für fünf Minuten, um die fettgewebe abgeleitete SVF zu trennen. Nach der Zentrifuge wird der Überstand, der Kollagennase und verdautes Fettgewebe enthält, aus jedem Zentrifugen-Kit entfernt, indem die Spritzenkappe auf dem Kolben entfernt und eine 30-Milliliter-Spritze über eine Spritzenverriegelung auf die Kolbenöffnung auf den Kolben gestellt wird. Drücken Sie langsam auf den Laufteil der 30-Milliliter-Spritze, damit der Überstand in die 30-Milliliter-Spritze gefüllt wird.Drücken Sie den 30-Milliliter-Spritzenlauf bis auf die letzten drei bis vier Milliliter des Bodens des Zentrifugen-Kits, so dass nur die letzten drei bis vier Milliliter aus Fettgewebe aus DemUS übrig bleiben. Der Überstand wird verworfen. Entfernen Sie die 30-Milliliter-Spritze von der Oberseite des Kolbens und füllen Sie die Spritze mit 5%dextrose laktierte Ringerlösung, auch bekannt als D5LR.Durch Anbringen der mit D5LR gefüllten 30-Milliliter-Spritze an der Oberseite der Kolbenöffnung füllen Sie die Zentrifugen-Kits mit drei bis vier Millilitern Ausfettgewebe mit D5LR bis zu 55 Millilitern. Dann die 30-Milliliter-Spritze entfernen, die Kolbenöffnung verkappen und die Zentrifugensätze für etwa vier Minuten wieder bei 300 G zentrieren. Wiederholen Sie die Schritte 17 bis Nummer 21 für insgesamt vier Waschungen.Nach der vierten Zentrifuge, um den endgültigen SVF für die Injektion zu erhalten, entfernen Sie die Sicherheitskappe und den Stecker an der unteren Öffnung des Zentrifugen-Kits, ohne zu schütteln oder drehen sie den Zentrifuge-Kit. Befestigen Sie eine 20-Milliliter-Spritze an der Bodenöffnung des Zentrifugensatzes mit einem speziell entwickelten Steckverbinder. Ziehen Sie den Kolben der 20-Milliliter-Spritze mehrmals hin und her, um die Zellen aufzurütteln, die sich auf dem Boden des Zentrifugensatzes niedergelassen haben.Entfernen Sie das gewünschte Gesamtvolumen des SVF, das sowohl ASTs als auch ECM enthält, zusammen mit anderen Zellen und Geweben. In der Regel etwa drei bis vier Milliliter von jedem Zentrifugen-Kit für Kniegelenk-Injektionen. Wir haben 30 Milliliter autologes Blut zusammen mit 2,5 Milliliter gerinnungshemmendes Citrat-Dextrose-Lösung.Dann wurde das entnommene Blut in die 60 Milliliter Zentrifuge Fass Kits übertragen. Es wurde dann bei 730 Schwerkraft für fünf Minuten zentrifugiert. Und der Überstand wurde entfernt und in ein neues 60 Milliliter Zentrifugenfass-Kit gesteckt.Der Überstand wurde vier Minuten lang mit 1350 Schwerkraft zentrifugiert und erhielt 4,4 Milliliter PRP. Reinigen Sie das Knie des Patienten mit 5%Betadin und drapieren Sie es steril. Palpate das Vorderdes des Knies für den Gelenkraum zwischen tibialen und femoralen Knochen.Anästhetisieren Sie die Injektionsstelle oberflächlich mit verdünntem Lidocain, einem Milliliter 1%lidocaine mit vier Milliliter n.A. normaler Saline verdünnt, von der Haut bis direkt außerhalb der Gelenkkapsel. Dann befeuchten Sie das Innere der Gelenkkapsel mit verdünntem Ropivacain, einem Milliliter 0,75%ropivacaine mit drei Milliliter normaler Saline verdünnt. Mischen Sie zwei Milliliter HA auf die sechs bis acht Milliliter SVF, die in einer 20-Milliliter-Spritze enthalten sind, durch eine Spritze zum Spritzenverbinder.Mit einer Spritze zum Spritzenverbinder 0,4 Milliliter Calciumchlorid zu den drei bis vier Millilitern autologem PRP hinzufügen, die bereits vorbereitet und in einer Fünf-Milliliter-Spritze fertig sind. Kombinieren Sie 3,5 bis 4,5 Milliliter PRP Calciumchlorid in einer Fünf-Milliliter-Spritze mit acht bis zehn MilliliterHA-SVF-Gemisch in einer 20-Milliliter-Spritze durch eine Spritze zum Spritzenverbinder. Injizieren Sie die Mischung, etwa 12 bis 15 Milliliter, sofort in das vordere tibial-femorale Gelenk des Knies, mit 38 Millimeter 18-Spur-Nadel mit oder ohne Ultraschallführung.Nach der Injektion die Injektionsstelle mit Druck binden, indem Sie 4x4 Baumwolle viermal falten und Bänder über die gefaltete 4x4 Gaze legen. Weisen Sie den Patienten an, 60 Minuten still zu bleiben, um eine Zellanhaftung zu ermöglichen. Weisen Sie den Patienten an, die Aktivitäten für minimale von einer Woche nach der Entlassung aus der Klinik zu begrenzen.Rückkehr in die Klinik für drei zusätzliche Injektionen von PRP durch Calciumchlorid über drei Wochen aktiviert. Der Patient mit der dritten Stufe OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten.Bis zur 16. Woche verbesserten sich die Schmerzen des Patienten und ROM signifikant um mehr als 70%Postbehandlung MRT, die nach der 16. Woche genommen wurde, zeigten die erhöhte Dicke des knorpelähnlichen Gewebes auf der medialen Seite des Knies. Ein weiterer Patient mit Stufe drei OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten.Bis zur 18. Woche verbesserten sich die Schmerzen und ROM signifikant auf 80%wiederholte MRT nach der 18. Woche nahm eine Erhöhung der Höhe des Knorpel-ähnlichen Gewebes auf der vorderen-medialen Seite des Knies. Der dritte Patient mit Stufe drei OA erhielt die Behandlung, wie im Protokollabschnitt beschrieben. Nach der zweiten Woche der ASV-ECM-Mischinjektion verbesserten sich die Schmerzen und ROM des Patienten um ca. 50% Bis zur 22. Woche verbesserten sich die Schmerzen und DAS ROM signifikant über 80%wiederholte MRTs, die nach der 22. Woche eingenommen wurden, zeigten eine Erhöhung der Höhe des knorpelähnlichen Gewebes auf der medialen Seite des Knies.Derzeit gibt es keine heilende Therapie für die Behandlung von OA. Die perkutane Injektion der Stammzelltherapie mit ASCs und homogenisiertem ECM zusammen mit HA und analogem PRP, das mit Calciumchlorid aktiviert wird, kann jedoch eine Alternative zur aktuellen Behandlungstherapie zur Behandlung von Knie-OA darstellen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Experimentelle Erzeugung von Karzinom-assoziierte Fibroblasten (CAF) von menschlichen Brustkrebszellen Fibroblasten

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Forschung

Medizin

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

Reparatur eines Critical-sized Calvaria Defect Modells mit aus Fettgewebe gewonnenen Stromazellen aus Lipoaspirate Geerntet

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Verbessertes Protokoll für Laser Mikrodissektion Of Human Pankreasinseln Von chirurgischen Proben

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Clinical Examination Protocol to Detect Atypical and Classical Scrapie in Sheep

Klinisches Prüfungsprotokoll zur Erkennung atypischer und klassischer Scrapie bei Schafen

The diagnosis of scrapie, a transmissible spongiform encephalopathy (TSEs) of sheep and goats, is currently based on the detection of disease-associated ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Dreidimensionale Co-Kultur-Modell für Tumor-Stroma-Interaktion

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

Visualisierung von Gefäß- und Parenchymregeneration nach 70% Teilhepatektomie in normalen Mäusen

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

A Novel Clinical Grade Isolation Method for Human Kidney Perivascular Stromal Cells

Eine neue klinische Grade Isolationsmethode für menschliche Niere perivaskuläre Stromazellen Zellen

Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) are tissue homeostatic and immune modulatory cells that have shown beneficial effects in kidney diseases and ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

Stromazellen vaskuläre Bruchteil angereichertem Fett Pfropfung für die Behandlung von symptomatischen Ende-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Eine optimierte Evans blau Protokoll vaskulären Leck in der Maus bewerten

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplantation von Fettgewebe-Derived Stem Cell Blatt, Leckage nach teilweiser Colectomy in einem Rattenmodell zu reduzieren

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...