Name: the mub40 peptide for use in detecting neutrophil-mediated inflammation events
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The MUB40 Peptide for Use in Detecting Neutrophil-Mediated Inflammation Events at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pela Fondation Laurette Fugain (se-2015-15) (B.S.M.) e ANR JCJC concede (ANR-17-CE15-0012) (B.S.M.).

Todos os métodos descritos aqui foram revistos e aprovados pelas organizações francesas modificaes (Comité de Recherche Clinique), CPP (des Personnes de Comité de proteção) e CNIL (Commission Nationale Informatique et Liberté).
1. neutrófilos no tecido histopatologia com a coloração fluorescente rotulados MUB40
<ol><li>Para obter o tecido para histopatologia, corrigi secções de tecido/biopsia em um volume adequado de paraformaldeído 4% (PFA) por 30 min até 4 h depen...

<ol>
	<li>Nathan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+and+immunity:+challenges+and+opportunities.">Neutrophils and immunity: challenges and opportunities.</a> Nature Reviews Immunology. 6 (3), 173-182 (2006).</li><li>Nicol&#225;s-&#193;vila, J. &. #. 1. 9. 3. ;., Adrover, J. M., Hidalgo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+in+Homeostasis,+Immunity,+and+Cancer.">Neutrophils in Homeostasis, Immunity, and Cancer.</a> Immunity. 46 (1), 15-28 (2017).</li><li>Coffelt, S. B., Wellenstein, M. D., de Visser, K. 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R., Print, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+neutrophil+survival+is+mediated+by+HIF-1alpha-dependent+NF-kappaB+activity.">Hypoxia-induced neutrophil survival is mediated by HIF-1alpha-dependent NF-kappaB activity.</a> Journal of Experimental Medicine. 201 (1), 105-115 (2005).</li><li>Monceaux, V., Chiche-Lapierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia+and+glucose+supplementation+preserve+neutrophil+viability+and+function.">Anoxia and glucose supplementation preserve neutrophil viability and function.</a> Blood. 128 (7), 993-1002 (2016).</li></ol>

Aqui, dois ensaios são descritos em que o peptídeo de40 MUB é usado para estudar a ativação e inflamação dos neutrófilos. Mostramos como MUB40 pode revelar os neutrófilos presentes nas seções de histopatologia ou mostram seu estado de ativação usando neutrófilos purificados ao vivo. As etapas críticas para usar MUB40 como um reagente de coloração são os mesmos que com qualquer outro método de deteção fluorescente. Deve ter cuidado para garantir a compatibilidade de si...

Os neutrófilos são um dos principais braços do sistema imune inato e rotineiramente são recrutados para os locais de inflamação ao redor do corpo. O estudo de neutrófilos foi em grande parte prejudicado por sua vida curta em vitro (menos de 8 h) e ferramentas de detecção limitada em condições basais ou após a ativação. Aqui, apresentamos um protocolo bem testado para a detecção de amplo e específico de neutrófilos mamíferos em amostras fixas/permeabilizado. Nós também fornecemos um protocolo detalhado para coloração de neutrófilos ao vivo com MUB40. Usando o protocolo de coloração dos neutrófilos ao vivo, o calendário e a localização da ativação de neutrófilos podem ser identificados. Este protocolo é ideal para os investigadores que desejem estudar a liberação de ativação ou grânulos neutrófilos. Além de suas funções antimicrobianas, neutrófilos agora são apreciados como imunomodulador células envolvidas em uma ampla gama de doenças e respostas imunes (inata e adaptativa)1,2. Os neutrófilos estão presentes em tecidos mais inflamatórios, em números elevados em tecidos infectados, em tumores inflamatórios3, durante a IBS e Crohn flare-ups4e em áreas de inflamação não-infecciosa, tais como a sinóvia de artrite reumatoide ( RA) pacientes5. Os neutrófilos contêm quatro classes de grânulos pré-formados, chamado azurophil (α), específicas (β1), grânulos de terciário (β2) e vesículas secretoras (γ)6. Após a migração para um site inflamatória, recrutados os neutrófilos se tornar ativados e sequencialmente secretam grânulo conteúdo (composto por adesão, compostos antimicrobianos e imunomoduladores moléculas), que promove ainda mais recrutamento e contribui para infecção de resolução (mas também de danos aos tecidos do hospedeiro)7. Enquanto os neutrófilos são considerados um aspecto crítico da imunidade inata, até à data, lá são alguns reagentes de detecção disponíveis para estudá-los, e ainda menos que pode ser usado para avaliar o estado de ativação de neutrófilos vivos.
Atuais métodos de detecção de neutrófilos dependem de anticorpos monoclonais gerados contra antígenos de superfície expostos, como Ly - 6G2 ou proteínas especificamente armazenadas nos grânulos neutrófilos em condições basais (por exemplo, mieloperoxidase lactoferrina). Vantagens de anticorpos monoclonais incluem sua forte ligação, sensibilidade e versatilidade em diversas condições de ensaio. No entanto, existem várias desvantagens ao uso de anticorpos monoclonais e anti-Ly - 6G em particular. Essas desvantagens incluem a especificidade, como Ly - 6G está presente na maioria das células mieloides, na medula óssea e em todos os granulócitos incluindo eosinófilos; Portanto, decifrar os neutrófilos de eosinófilos com este marcador requer mais complexos se aproxima de8. Outra troca frequente com anticorpos monoclonais é sua gama de especificidade de hospedeiros muitas vezes limitada, dificultando estudos de comparação com mais de uma espécie animal. Uma terceira desvantagem dos métodos de detecção de anticorpos, especialmente quando se utiliza células vivas ou in vivo, é o seu potencial para perturbar a função celular ou levar a ativação de células. Por exemplo, a administração de anti-Ly - 6G para ratos é comumente aplicada a depleção de neutrófilos e neutropenia transitória9. Além disso foi demonstrado que a injeção de anticorpos pode estimular neutrófilos função antitumoral10. Finalmente, pesquisa de anticorpos de neutrófilos não revela o estado de ativação da célula.
Nós identificamos um 40-amino peptídeo ácido chamado MUB,40, que pode ser usado em um número de ensaios para rotular os neutrófilos em condições em vitro e em vivo , bem como o status de ativação de neutrófilos ao vivo11de ensaios. MUB40 é derivado de MUB7012, um domínio do Lactobacillus reuteri superfície muco-proteína originalmente descrita por sua capacidade de vincular o muco13,14. MUB40 interage com lactoferrina glicosilados que está presente em altas concentrações em grânulos neutrófilos específicos e terciários. MUB40 pode ser exposto a estes grânulos através de etapas de permeabilização padrão presentes na histopatologia ou fluorescência-ativado da pilha protocolos (FACS) para coloração robusto de neutrófilos fixos de classificação. Quando os neutrófilos ao vivo são mantidos em um estado inativado, o peptídeo de40 MUB é excluído do conteúdo do grânulo, e células não mancha positivas com o marcador. Após a ativação, MUB40 pode vincular a lactoferrina exposta e levar a coloração robusto com o peptídeo. Assim, MUB40 pode ser usado para determinar o estado de ativação de neutrófilos purificados, tornando-se um marcador atraente para seguir o processo infeccioso. A capacidade de se ligar a viver os neutrófilos ativados também permite MUB40 ser usado como uma ferramenta para detectar áreas de inflamação dos neutrófilos em modelos animais vivos (por exemplo, um rato artrite modelo15). Os protocolos detalhadamente este manuscrito como fluorescente etiquetado MUB40 podem ser usados para revelar os neutrófilos em histologia tecidos e como a ensaiar a ativação de neutrófilos purificado ao vivo em vitro.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:895px;" width="894">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">MUB40-Cy5</td>
			<td style="width:123px;">Benoit Marteyn</td>
			<td style="width:344px;">benoit.marteyn@pasteur.fr</td>
			<td style="width:167px;">Fluorescent MUB40 peptide (available with other conjugated fluorophores)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RI-MUB40-Cy5</td>
			<td>Benoit Marteyn</td>
			<td>benoit.marteyn@pasteur.fr</td>
			<td>Retro-inverso fluorescent MUB40 peptide. Synthesized with D-amino acids and resistant to proteases (available with other conjugated fluorophores)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Parformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">16005</td>
			<td>Fixative for histology</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td>Solution used to remove excess PFA</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Optimal Cutting Temperature Compound (OCT)</td>
			<td>Sakura Finetek USA</td>
			<td align="right">4583</td>
			<td>Used to freeze tissue before cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2-Methylbutane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M32631</td>
			<td>Used to freeze tissue before cryostat sectioning</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">1.00974</td>
			<td>Used for dry ice bath to freeze tissue</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leica Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM1520</td>
			<td>Used to section tissues</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass microscopy slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-518-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cover slips</td>
			<td>Thor Labs</td>
			<td>CG15CH</td>
			<td>Hi precision coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dako pen&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z377821</td>
			<td>Used to prevent liquid loss during tissue staining</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">47036</td>
			<td>Used to permeabilize cells for IF staining</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">10236276001</td>
			<td>Stains DNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Alexa fluor 488 Phalloidin&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Binds actin</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Prolong Gold antifade Mountant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Prolongs IF signal and resistance to photobleaching</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fluorescent microscope</td>
			<td>Various</td>
			<td>Various</td>
			<td>Used to image IF slides</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Anoxic Cabinet</td>
			<td>Various</td>
			<td>Various</td>
			<td>Used for the purification of live inactivated neutrophils</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sodium Chloride NaCL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td>Washing buffer component</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MACS BSA buffer</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td>Washing buffer component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4937</td>
			<td>Gradient for neutrophil purification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD235a glycophorin magnetic microbeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-050-501</td>
			<td>Used to remove contaminating RBCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Used in the removal of RBCs from neutrophils</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 without Phenol Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8755</td>
			<td>Used for neutrophil assays</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the mub40 peptide for use in detecting neutrophil-mediated inflammation events

Aqui, nós fornecemos um protocolo que envolve a utilização de MUB40, um peptídeo sintetizado com a capacidade de se ligar a lactoferrina glicosilados armazenada em concentrações elevadas em grânulos específicos e terciários de neutrófilos. Este detalhes de protocolo como MUB40 conjugado diretamente com um fluoróforo pode ser usado para manchar os neutrófilos nos tecidos fixo/permeabilizado, bem como a forma como isso pode ser usado em imagens de viver-pilha a ensaiar para a granulação e ativação de neutrófilos. Métodos de deteção dos neutrófilos são limitados a espécie anticorpos monoclonais, que nem sempre são adequados para determinadas aplicações. MUB40 não penetra a membrana celular e, portanto, é excluído da lactoferrina armazenada em neutrófilos não-ativado/não-permeabilizado. MUB40 tem o benefício adicionado de reconhecer lactoferrina de um leque amplo acolhimento, tornando-se especialmente útil para comparar resultados em estudos envolvendo vários modelos de pesquisa, reduzindo o número de reagentes duplicados e simplificando os protocolos através de coloração de etapa única.

Resultados de MUB40-tecidos manchados de slides histopatologia tipicamente revelam células individuais espalhadas por todo o tecido. MUB40 manchas de lactoferrina, que está presente nos grânulos neutrófilos e compartimentada. Assim, tipicamente vistos são punctate manchas ou vários grandes áreas separadas do sinal vindo de neutrófilos individuais (Figura 1). É útil adicionar um segundo marcador de célula como DAPI para ajudar ...

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The MUB40 Peptide for Use in Detecting Neutrophil-Mediated Inflammation Events

Aqui, apresentamos um protocolo para detectar a presença de neutrófilos em seções fixas/permeabilizado histologia e avaliar o estado de ativação de neutrófilos purificados ao vivo. Em particular, o peptídeo de40 MUB vincula lactoferrina presente nos grânulos neutrófilos específicos e terciários. Exposição do conteúdo do grânulo através de permeabilização ou ativação de neutrófilos permite a marcação de neutrófilos.

O peptídeo de40 MUB para uso na detecção de eventos inflamação mediada por neutrófilos

Here, we provide a protocol involving the use of MUB40, a synthesized peptide with the ability to bind glycosylated lactoferrin stored at high ...

MUB40 é um novo marcador de neutrófilo, que se liga à lactoferrina e permite uma detecção específica em humanos e em todas as amostras de tecido de mamíferos testadas até agora. Rotular neutrófilos com MUB40 é fácil, rápido e específico. Agora é amplamente utilizado em nosso laboratório e a implicação dessa técnica se estende para o diagnóstico de doenças inflamatórias.Para começar, prepare as soluções um, dois e três de acordo com o protocolo de texto, e coloque-as em um gabinete anoxico durante a noite. Em seguida, centrifugar os tubos de sangue coletado a 650 g por 20 minutos para separar as células da fração de plasma. Sem perturbar o sangue separado, transfira os tubos para o armário anoxico e transfira as frações de plasma para um tubo cônico de 50 mililitros.Depois disso, remova o tubo de plasma do armário anoxico e centrífuga-o a 2900 g por 20 minutos. Tomando cuidado para não interromper as plaquetas pelleted, transferir o tubo para o armário anoxico e pipeta o plasma pobre plaqueta em um tubo fresco de 50 mililitros. Usando os tubos de coleta de sangue, combine os glóbulos vermelhos em um tubo cônico de 50 mililitros.Em seguida, adicione 0,9% de solução de cloreto de sódio até que o volume total atinja 44 mililitros e adicione seis mililitros de 6% de dextran. Inverta o tubo 10 a 20 vezes para misturar suavemente a mistura de sangue e dextran, e deixe o tubo sedimentar por pelo menos 30 minutos. Enquanto os sedimentos do tubo, prepare um gradiente percoll adicionando 4,2 mililitros de solução Percoll a 5,8 mililitros de plasma, e inverta o tubo para misturar.Em seguida, colete o neutrófilo contendo fração superior do dextran, tomando cuidado para não pipetizar glóbulos vermelhos. Aperte a tampa do parafuso, retire o tubo dextran do armário anoxico e centrífugue o tubo a 300 g por 10 minutos. Tomando cuidado para não perturbar as células pelleted, colocar o tubo de volta no armário anoxic.Em seguida, remova o líquido por pipetação. Levemente resuspensar a pelota em um mililitro de plasma. Adicione lentamente as células resuspended aos topos da solução Percoll.Remova cuidadosamente o tubo de solução Percoll do armário anoxico e centrífuga-o a 800 g por 20 minutos para separar os PBMCs dos neutrófilos. Em seguida, prepare 14 mililitros de solução de tampão de lavagem de acordo com o protocolo de texto. Em seguida, coloque o tubo Percoll no armário anoxico.Use uma pipeta para remover os Percoll e PBMCs e resuspenque o neutrófilo contendo pelota em um mililitro de solução tampão de lavagem. Em seguida, adicione 200 microliters de contas magnéticas às células resuspended. Misture suavemente e incuba as células e as contas por pelo menos 15 minutos.Depois disso, lave duas vezes uma coluna de separação, com dois mililitros de tampão de lavagem. Enquanto segura um novo tubo cônico de 15 mililitros sob a coluna, pipeta lentamente a mistura de glóbulos vermelhos neutrófilos através da coluna. O fluxo da coluna deve ser nublado e perder sua cor vermelha, confirmando a separação total dos neutrófilos dos glóbulos vermelhos restantes.Adicione dois mililitros de tampão de lavagem na parte superior da coluna e colete o fluxo através no mesmo tubo. Até o final desta lavagem, o fluxo deve ser claro. Misture suavemente o tubo de coleta para garantir que os neutrófilos sejam distribuídos uniformemente.Em seguida, coletou 10 microliters do fluxo através da contagem celular. Depois disso, remova o tubo de neutrófilo do armário anoxico e centrífuga o tubo a 300 g por 20 minutos. Coloque os neutrófilos sedimentados de volta no armário anoxico e remova o tampão de lavagem através de pipet.Então, resuspense a pelota no plasma. Adicione um microliter de RI-MUB40-Cy5 a um mililitro de meio RPMI-1640, sem vermelho fenol, e misture através de pipetagem. Em seguida, adicione um microliter de solução FMLP e pipeta para misturar.Transfira a mistura para um prato de microscopia de fundo de vidro. Em seguida, adicione um volume apropriado de células purificadas ao prato. Por fim, coloque o prato em um microscópio fluorescente invertido e inicie a aquisição de imagens.Neste protocolo, o MUB40 foi usado em células vivas para detectar secreção de neutrófilos após simulação com FMLP. A dinâmica do lançamento do conteúdo do grânulo, incluindo lactoferrina, pode ser visualizada ao longo do tempo, aqui em magenta. MUB40 pode ser usado adicionalmente em neutrófilos fixos.Aqui, phagocytizando contas fluorescentes em uma série cronometrado. O conteúdo do grânulo de neutrófilo é rotulado aqui em azul. Os neutrófilos mostraram pouca ou nenhuma coloração celular nos primeiros pontos de tempo e gradualmente, a rotulagem RI-MUB40 aumentou ao longo do tempo, tanto na membrana plasmática quanto na superfície das contas.MUB40 também pode ser usado em tecidos inflamatórios fixos para detectar neutrófilos especificamente, como mostrado nas figuras de texto. Descrevemos aqui o procedimento de purificação de neutrófilos, aplicado rotineiramente em nosso laboratório. Qualquer outro método é adequado, a rotulagem MUB40-Cy5 ainda funcionará.O neutrófilo pode ser especificamente rotulado com MUB40 após a purificação, ou diretamente em tecido inflamado de pacientes ou modelos animais. Vários derivados MUB40 foram projetados para ampliar seu uso. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para o pesquisador no campo da inflamação, explorar o recrutamento neutrófilo e a ativação em doenças inflamatórias.

Research

JoVE Journal

Biology

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Mutagênese e Análise Funcional de canais iônicos Heterologously Expresso em células de mamíferos

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

FRET Microscopia para Monitoramento em Tempo Real de eventos de sinalização em células vivas utilizando biossensores unimolecular

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

O Uso de quimiostatos em Microbial Biologia de Sistemas

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Imagens de células vivas dos primeiros autofagia Eventos: Omegasomes and Beyond

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

A identificação da proteína-proteína Locais de interacção Usando Peptide Arrays

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...

Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

Análise espacial e temporal da Cytokinetic Eventos na levedura de fissão

Cytokinesis, the final step in cell division is critical for maintaining genome integrity. Proper cytokinesis is important for cell differentiation and ...

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

Caracterização de calcificação eventos usando o Live Óptica e Microscopia Eletrônica de técnicas em um tubeworm Marinha

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...

Detecting Estrogenic Ligands in Personal Care Products using a Yeast Estrogen Screen Optimized for the Undergraduate Teaching Laboratory

Detecção de ligantes estrogênicos em produtos de cuidados pessoal usando uma tela de estrogênio de levedura otimizada para o laboratório de ensino de graduação

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine ...

Detecting the Lyme Disease Spirochete, Borrelia Burgdorferi, in Ticks Using Nested PCR

Detecting the Lyme Disease Spirochete, Borrelia Burgdorferi, in Ticks Using Nested PCR

Detectando a doença de Lyme espiroqueta, a Borrelia Burgdorferi, em carrapatos usando PCR aninhado

Lyme disease is a serious vector-borne infection that is caused by the Borrelia burgdorferi sensu lato family of spirochetes, which are transmitted to ...