نود أن نشكر السيدة روي تشن للتشريح وصور المورفولوجية الجهاز العصبي المركزي تظهر في الأرقام.

1-معدات ومواد
<ol><li>إعداد المكونات المطلوبة (المذكورة في الجدول للمواد) من تلاعب الكهربية لإجراء تسجيلات القطب شفط المورفولوجية الجهاز العصبي المركزي. ملاحظة: قبل التجريب، من الضروري لبناء دوائر لتشريح المورفولوجية الجهاز العصبي المركزي والتي ستستخدم للاستحمام ganglia ?...

<ol>
	<li>Sparks, T. C., Nauen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IRAC:+Mode+of+action+classification+and+insecticide+resistance+management.">IRAC: Mode of action classification and insecticide resistance management.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 121, 122-128 (2015).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insecticide+resistance-breaking+mosquitocide+targeting+inward+rectifier+potassium+channels+in+vectors+of+Zika+virus+and+malaria.">An insecticide resistance-breaking mosquitocide targeting inward rectifier potassium channels in vectors of Zika virus and malaria.</a> Scientific Reports. 6, 36954 (2016).</li><li>Troczka, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+expression+and+functional+characterisation+of+the+diamondback+moth+ryanodine+receptor+G4946E+variant+conferring+resistance+to+diamide+insecticides.">Stable expression and functional characterisation of the diamondback moth ryanodine receptor G4946E variant conferring resistance to diamide insecticides.</a> Scientific Reports. 5, 14680 (2015).</li><li>Bloomquist, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+KV2+channels+as+new+targets+for+insecticides.">Voltage-sensitive potassium KV2 channels as new targets for insecticides.</a> Biopesticides: State of the Art and Future Opportunities. 1172, 71-81 (2014).</li><li>Jenson, L. J., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+serum+and+ion+channel+block+on+growth+and+hormonally-induced+differentiation+of+Spodoptera+frugiperda+(Sf21)+insect+cells.">Role of serum and ion channel block on growth and hormonally-induced differentiation of Spodoptera frugiperda (Sf21) insect cells.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 90 (3), 131-139 (2015).</li><li>Jenson, L. J., Sun, B., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+channels+expressed+after+20-Hydroxyecdysone+treatment+of+a+mosquito+cell+line.">Voltage-sensitive potassium channels expressed after 20-Hydroxyecdysone treatment of a mosquito cell line.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biolology. 87, 75-80 (2017).</li><li>Chintapalli, V. R., Wang, J., Dow, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+FlyAtlas+to+identify+better+Drosophila+melanogaster+models+of+human+disease.">Using FlyAtlas to identify better Drosophila melanogaster models of human disease.</a> Nature Genetics. 39 (6), 715-720 (2007).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+Drosophila:+a+fly+geneticist's+Swiss+army+knife.">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+Drosophila+melanogaster.">The art and design of genetic screens: Drosophila melanogaster.</a> Nature Reviews Genetics. 3 (3), 176-188 (2002).</li><li>Luan, Z., Li, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+channels+in+Drosophila.">Inwardly rectifying potassium channels in Drosophila.</a> Sheng Li Xue Bao. 64 (5), 515-519 (2012).</li><li>Muenzing, S. E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larvalign:+Aligning+gene+expression+patterns+from+the+larval+brain+of+Drosophila+melanogaster.">Larvalign: Aligning gene expression patterns from the larval brain of Drosophila melanogaster.</a> Neuroinformatics. 16 (1), 65-80 (2017).</li><li>Sprecher, S. G., Reichert, H., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+patterns+in+primary+neuronal+clusters+of+the+Drosophila+embryonic+brain.">Gene expression patterns in primary neuronal clusters of the Drosophila embryonic brain.</a> Gene Expression Patterns. 7 (5), 584-595 (2007).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+toxicogenomics:+Genetic+variation+in+susceptibility+to+heavy+metal+exposure.">A Drosophila model for toxicogenomics: Genetic variation in susceptibility to heavy metal exposure.</a> PLoS Genetics. 13 (7), e1006907 (2017).</li><li>Manev, H., Dimitrijevic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+in+vivo+pharmacological+analgesia+research.">Drosophila model for in vivo pharmacological analgesia research.</a> European Journal of Pharmacology. 491 (2-3), 207-208 (2004).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacological Reviews. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Hekmat-Scafe, D. S., Lundy, M. Y., Ranga, R., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+K+/Cl-+cotransporter+gene+kazachoc+(kcc)+increase+seizure+susceptibility+in+Drosophila.">Mutations in the K+/Cl- cotransporter gene kazachoc (kcc) increase seizure susceptibility in Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 26 (35), 8943-8954 (2006).</li><li>Whitworth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+S-transferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li><li>Watson, M. R., Lagow, R. D., Xu, K., Zhang, B., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+reveals+motor+neuron+damage+by+human+SOD1.">A Drosophila model for amyotrophic lateral sclerosis reveals motor neuron damage by human SOD1.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (36), 24972-24981 (2008).</li><li>Rajendra, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+melanogaster+model+of+spinal+muscular+atrophy+reveals+a+function+for+SMN+in+striated+muscle.">A Drosophila melanogaster model of spinal muscular atrophy reveals a function for SMN in striated muscle.</a> Journal of Cell Biology. 176 (6), 831-841 (2007).</li><li>Chan, H. Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+human+neurodegenerative+disease.">Drosophila models of human neurodegenerative disease.</a> Cell Death and Differentiation. 7 (11), 1075-1080 (2000).</li><li>Limmer, S., Weiler, A., Volkenhoff, A., Babatz, F., Klambt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+blood-brain+barrier:+development+and+function+of+a+glial+endothelium.">The Drosophila blood-brain barrier: development and function of a glial endothelium.</a> Frontiers in Neuroscience. 8, 365 (2014).</li><li>Rickert, C., Kunz, T., Harris, K. L., Whitington, P. M., Technau, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+characterization+of+the+entire+interneuron+population+reveals+principles+of+neuromere+organization+in+the+ventral+nerve+cord+of+Drosophila.">Morphological characterization of the entire interneuron population reveals principles of neuromere organization in the ventral nerve cord of Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 31 (44), 15870-15883 (2011).</li><li>Schwabe, T., Li, X., Gaul, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+the+mesenchymal-epithelial+transition+of+blood-brain+barrier+forming+glia+in+Drosophila.">Dynamic analysis of the mesenchymal-epithelial transition of blood-brain barrier forming glia in Drosophila.</a> Biology Open. 6 (2), 232-243 (2017).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (1), 41-53 (2006).</li><li>Abbott, N. J., Dolman, D. E., Patabendige, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+to+predict+drug+permeation+across+the+blood-brain+barrier,+and+distribution+to+brain.">Assays to predict drug permeation across the blood-brain barrier, and distribution to brain.</a> Current Drug Metabolism. 9 (9), 901-910 (2008).</li><li>Swale, D. R., Sun, B., Tong, F., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+and+mode+of+action+of+N,+N-diethyl-meta-toluamide+(DEET).">Neurotoxicity and mode of action of N, N-diethyl-meta-toluamide (DEET).</a> PLoS One. 9 (8), e103713 (2014).</li><li>Hafer, N., Schedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+larval+CNS+in+Drosophila+melanogaster.">Dissection of larval CNS in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (1), 85 (2006).</li><li>Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mode+of+action+of+atracotoxin+at+central+and+peripheral+synapses+of+insects.">Mode of action of atracotoxin at central and peripheral synapses of insects.</a> Invertebrate Neuroscience. 5 (1), 45-50 (2003).</li><li>Bloomquist, J. R., Roush, R. T., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+neuronal+sensitivity+to+dieldrin+and+picrotoxinin+in+a+cyclodiene-resistant+strain+of+Drosophila+melanogaster+(Meigen).">Reduced neuronal sensitivity to dieldrin and picrotoxinin in a cyclodiene-resistant strain of Drosophila melanogaster (Meigen).</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 19 (1), 17-25 (1992).</li><li>Mutunga, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicology+of+bis(n)-tacrines+on+Blattella+germanica+and+Drosophila+melanogaster+acetylcholinesterase.">Neurotoxicology of bis(n)-tacrines on Blattella germanica and Drosophila melanogaster acetylcholinesterase.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 83 (4), 180-194 (2013).</li><li>Chen, R., Swale, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+(Kir)+channels+represent+a+critical+ion+conductance+pathway+in+the+nervous+systems+of+insects.">Inwardly rectifying potassium (Kir) channels represent a critical ion conductance pathway in the nervous systems of insects.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1617 (2018).</li><li>Francis, S. A., Taylor-Wells, J., Gross, A. D., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+physiological+actions+of+carbonic+anhydrase+inhibitors+to+Aedes+aegypti+and+Drosophila+melanogaster.">Toxicity and physiological actions of carbonic anhydrase inhibitors to Aedes aegypti and Drosophila melanogaster.</a> Insects. 8 (1), 2 (2016).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitor+profile+of+bis(n)-tacrines+and+N-methylcarbamates+on+acetylcholinesterase+from+Rhipicephalus+(Boophilus)+microplus+and+Phlebotomus+papatasi.">Inhibitor profile of bis(n)-tacrines and N-methylcarbamates on acetylcholinesterase from Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Phlebotomus papatasi.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 106 (3), 85-92 (2013).</li><li>Corbel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+inhibition+of+cholinesterases+in+insect+and+mammalian+nervous+systems+by+the+insect+repellent+deet.">Evidence for inhibition of cholinesterases in insect and mammalian nervous systems by the insect repellent deet.</a> BMC Biology. 7, 47 (2009).</li></ol>

التفاصيل المقدمة في الفيديو المرتبطة بها وقدمت نص أداء الخطوات الرئيسية من أجل تسجيل النشاط وارتفاع تواتر المورفولوجية CNS السابقين فيفو. نجاعة التشريح هو الجانب الأكثر أهمية من الأسلوب لأنه سيقلل قصيرة أو عدد قليل من الخلايا العصبية تنازلي خط الأساس إطلاق معدل سوف تؤدي إلى الفر...

والهدف العام لهذا النهج أن تمكن الباحثين من قياس سرعة اليكتروجينيسيس النظام العصبي المركزي (CNS) في الحشرة النموذجية، melanogaster المورفولوجية. هذا الأسلوب موثوق بها وسريعة وفعالة من حيث التكلفة لإجراء التجارب الفسيولوجية والسمية. الجهاز العصبي المركزي أمر ضروري للحياة، ومن ثم، الفسيولوجية المسارات الحرجة لتم استكشاف الوظيفة العصبية المناسبة على نطاق واسع في محاولة لفهم أو تعديل الوظيفة العصبية. توصيف لمسارات الإشارات داخل CNS المفصلية مكن اكتشاف عدة فئات المواد الكيميائية من مبيدات الحشرات التي تعطل وظيفة العصبية اللافقاريات للحث على معدل الوفيات مع الحد من عواقب خارج الهدف. وهكذا، القدرة على قياس النشاط العصبي للحشرات أهمية كبيرة في ميدان علم السموم الحشرات وعلم وظائف الأعضاء منذ العصبي هو النسيج المستهدف الأغلبية من مبيدات الحشرات المنتشرة1. حتى الآن، استمر نمو المعرفة الأساسية والتطبيقية المتعلقة بالحشرات الجهاز العصبي يتطلب تقنيات متقدمة العصبية التي تقتصر في جدوى، نظراً للتقنيات الحالية هي كثيفة العمالة، وتتطلب من نفقات عالية، الحشرات خطوط الخلايا العصبية محدودة، و/أو محدودية الوصول إلى نهايات المركزية معظم المفصليات. حاليا، يتطلب توصيف معظم البروتينات العصبية الحشرات المستهدفة لتكون المخدرات اللاحقة المستنسخة، وأعربت عن هيتيرولوجوسلي لاكتشاف والتسجيلات الكهربية، كما وصفت لقنوات البوتاسيوم مقومة الحشرات إلى الداخل2 ، ريانوديني الحشرات مستقبلات3، والبعوض حساسة للجهد ك+ قنوات4وغيرها. للتخفيف من الحاجة إلى تعبير مغايرة وإمكانيات التعبير الوظيفي المنخفض، مثقف بلومكويست والزملاء يهدف إلى الحث النمط الظاهري الخلايا العصبية في الخلايا فروجيبيردا سبودوبتيرا (Sf21) كطريقة مبتكرة مبيد حشري اكتشاف5،6. هذه الأساليب توفر نهجاً سليما لتطوير الكيمياء الجديدة، إلا أنها تخلق في كثير من الأحيان اختناق لا يمكن التغلب عليها لوصف العوامل الدوائية، تحديد آليات لمقاومة المبيدات الحشرية، وتوصيف المبادئ الفسيولوجية الأساسية. هنا، يمكننا وصف السابقين فيفو أسلوب الذي يتيح تسجيل النشاط الكهربائي من الحشرات نموذج يحتوي على علم الوراثة طيع7،،من89 وأنماط التعبير المعروفة من العصبية المجمعات11،،من1012 لتمكين توصيف آليات المقاومة على مستوى العصب وطريقة عمل الأدوية المطورة حديثا وغيرها من الدراسات السمية.
ذبابة الفاكهة، ميلانوجاستير دال، هو كائن نموذج مشترك لتعريف النظم العصبية الحشرات أو مبيد حشري إليه العمل وقد أنشئت ككائن نموذج مناسبة تماما لدراسة سمية13، الدوائي14 ،15و العصبية16و الفيزيولوجية المرضية17،،من1819،20 العمليات من الفقاريات. D.melanogaster هو الحشرات هولوميتابولوس الذي يقوم بمسخ كاملة، بما في ذلك مرحلة اليرقات والخوادر قبل الوصول إلى مرحلة الكبار الإنجابية. طوال عملية إنمائية، العصبي يخضع لإعادة عرض كبير في مراحل مختلفة من الحياة، ولكن CNS اليرقات ستتركز على هذه المنهجية. CNS اليرقات المتقدمة تماما بسيطة تشريحيا مع أجزاء الصدر والبطن التي تنصهر فيها، وتشكيل العقدة البطني، الذي يمثل مجموعة من الوحدات نيوروميريك متكررة ومتطابقة تقريبا21،22. الأعصاب الحركية تنازلي تنبع من نهاية العقد سوبيسوفاجيل والذيلية والنزول إلى يعصب عضلات جدار الجسم وأجهزة اليرقات الحشوي. ويصف الشكل 1 تشريح الإجمالي لليرقات المورفولوجية الجهاز العصبي المركزي.
يتطور في نهاية embryogenesis المورفولوجية حاجز الدم في الدماغ (BBB) ويتكون من سوببيرينيوريال الخلايا الدبقية (SPG)21. وتشكل الخلايا SPG العديد من عمليات مثل فيلوبوديا التي انتشرت بإنشاء ورقة عمل متجاورة، مسطحة للغاية، مثل بطانية يغطي المورفولوجية CNS كامل23. وقد المورفولوجية BBB أوجه التشابه مع BBB الفقارية، التي تشمل الحفاظ على التوازن المكروية العصبية بمراقبة دخول المواد الغذائية و xenobiotics إلى الجهاز العصبي المركزي21. هذا شرط مسبق للإرسال العصبية موثوقة ومهمة، حتى الآن حماية الجهاز العصبي المركزي واسطة BBB يقيد تخلل للعقاقير الاصطناعية ومعظم الببتيدات الأخرى xenobiotics24،25، الذي يقدم إمكانات مشاكل عند وصف مقايسات المغيرون جزيء صغير. يستخدم الأسلوب ترانسيكتيون بسيطة لتعطيل هذا الحاجز وتوفير وصول الدوائية جاهزة للاشتباكات العصبية المركزية. هو أكبر قوة للمنهجية الموصوفة البساطة وإمكانية تكرار نتائج نسبيا الفائق القدرات الكامنة لهذا النظام. البروتوكول نسبيا سهلة الماجستير، يتطلب برنامج الإعداد مساحة صغيرة، وضروري فقط مدخلات مالية أولية التي ينخفض إلى الكواشف والمواد الاستهلاكية. علاوة على ذلك، طريقة وصف التعديل الكامل لتسجيل نشاط العصب المركزي تنازلي ذبابة المنزل، مستأنسة الذبابة26.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster (strain OR)</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>2376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibration isolation table</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>9200 series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope on a Boom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800N</td>
			<td>Multiple scopes can be used; boom stand is critical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC/DC differential amplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3000H</td>
			<td>The model 1700 can be used instead of the model 3000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>audio monitor</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hum Bug Noise Eliminator</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>726300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition System (PowerLab)</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>PL3504</td>
			<td>Multiple PowerLab models can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart Pro Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>N/A - Online Download</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Lights</td>
			<td>Edmund Optics</td>
			<td>89-740</td>
			<td>Different light sources can be used, but fiber optics are the most adaptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Holder</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MEH715</td>
			<td>Different models are acceptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>multiple based on size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PG52151-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-1000</td>
			<td>Also can use Narashige PC-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>974228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-coated insect pins, size #2</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1208S2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fince Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophysiological recording of the central nervous system activity of third-instar drosophila melanogaster

تستهدف معظم المبيدات الحشرية المتوفرة حاليا في الجهاز العصبي والطفرات الوراثية من اللافقاريات البروتينات العصبية في كثير من الأحيان تسفر عن عواقب وخيمة، ولكن الأساليب الحالية لتسجيل النشاط العصبي للفرد الحيوان مكلفة وشاقة. هذا الشفط الكهربائي إعداد النظام العصبي المركزي اليرقات الطور الثالث من melanogaster المورفولوجية، نظام المرونة لاختبار الآثار الفسيولوجية لوكلاء نيورواكتيفي، تحديد دور مختلف العصبية الفسيولوجية مسارات لنشاط الجهاز العصبي المركزي، فضلا عن تأثير الطفرات الوراثية للوظيفة العصبية. يتطلب هذا الإعداد السابقين فيفو معتدلة فقط تشريح المهارة والخبرة الكهربية لتوليد تسجيلات استنساخه من الحشرات نشاط الخلايا العصبية. يمكن تطبيق مجموعة متنوعة واسعة من المغيرون الكيميائية، بما في ذلك الببتيدات، ثم مباشرة إلى الجهاز العصبي في الحل مع المحلول الملحي الفسيولوجي لقياس تأثير على نشاط الجهاز العصبي المركزي. ويمكن تطبيق التكنولوجيات الوراثية، وأخرى، مثل نظام GAL4/UAS، بشكل مستقل، أو بالترادف مع وكلاء الدوائية لتحديد دور قنوات أيون معين أو الناقلين أو مستقبلات لوظيفة الجهاز العصبي المركزي المفصلية. وفي هذا السياق، الاختبارات المبينة في هذا التقرير من اهتمام كبير للسميات المبيدات الحشرية وفسيولوجي الحشرات، وعلماء الأحياء التنموية التي ميلانوجاستير دال- كائن حي نموذجية المتبعة. والهدف من هذا البروتوكول لوصف أسلوب الكهربية لتمكين قياس اليكتروجينيسيس للجهاز العصبي المركزي في الحشرة النموذجية، melanogaster المورفولوجية، ومفيدة لاختبار مجموعة متنوعة من العلمية فرضيات.

يمكن تسجيل النشاط العفوي للأعصاب المحيطية تنازلي الناشئة عن النظام العصبي المركزي المورفولوجية استخدام أقطاب شفط خارج الخلية مع إمكانية تكرار نتائج متسقة. النشاط العفوي لقصت وبحف المورفولوجية CNS ينتج نمط دورية من الانفجار مع 1-2 s لإطلاق النار مع حوالي 1 s من الق?...

Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar  Drosophila Melanogaster at JoVE.com

Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar  Drosophila Melanogaster

ويصف هذا البروتوكول وسيلة لتسجيل النشاط الكهربائي تنازلي للنظام العصبي المركزي melanogaster المورفولوجية لتمكين فعالة من حيث التكلفة ومريحة لاختبار وكلاء الدوائية، الطفرات الوراثية للبروتينات العصبية، و/أو دور مسارات الفيزيولوجية غير مستكشفة.

تسجيل الكهربية لنشاط الجهاز العصبي المركزي للطور الثالث Melanogaster المورفولوجية

The majority of the currently available insecticides target the nervous system and genetic mutations of invertebrate neural proteins oftentimes yield ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات علم السموم الحشرية وعلم وظائف الأعضاء الحشرية من خلال قياس التشكل الكهربائي للجهاز العصبي المركزي Drosophila melanogaster. وهذا يسمح للمرء باختبار مجموعة واسعة من الفرضيات العلمية والمساعدة في اكتشاف أساليب جديدة للعمل في مجال المبيدات الحشرية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نظام بسيط، قابل للتكرار، وعالية الإنتاجية نسبيا مع الحد الأدنى من المدخلات المالية لدراسة الجهاز العصبي من Drosophila.للبدء، افتح برنامج الاكتساب/التحليل. انقر فوق الإعداد في شريط الأدوات الرئيسي، وحدد إعدادات القناة، التي ستفتح مربع حوار. تقليل عدد القنوات الإجمالية إلى ثلاثة.القناة الأولى ستسجل الإشارة الخام من مكبر الصوت مع مجموعة من 100 ملليفولت. سيتم استخدام القناة الثانية لحساب عدد الأحداث من القناة الأولى التي تتجاوز عتبة معينة. لهذا، انقر فوق علامة التبويب الحساب لفتح قائمة منسدلة للقناة الثانية.حدد قياسات دورية، والتي ستفتح مربع حوار ثاني. حدد القناة الأولى كمصدر. ثم، في قياس القائمة المنسدلة، حدد "سبايك الوحدة" في الأحداث.وأخيراً، في منطقة إعدادات الكشف، من القائمة المنسدلة، حدد عتبة بسيطة. مستوى العتبة هو الإدخال في نافذة ضبط الكشف ليتم تعيينها فوق ضجيج الخلفية. لتحويل النشاط الكهربائي إلى رسم معدل مُعبر عنه في هرتز، حدد حسابي على القناة الثالثة.على الإطار الجديد، إدخال 1000 مرة smoothsec، أقواس قناة اثنين الفاصلة الثانية. ثم، حدد في القائمة المنسدلة وحدات وحدة التردد هرتز. أغلق مربعات الحوار للعودة إلى الشاشة الرئيسية.يجب التعبير عن المحور ص من القناة الثالثة في هرتز والمحور س في الوقت المناسب. تشريح اليرقات Drosophila CNS عن طريق تحديد واستخراج تجول في الثالث في Drosophila melanogaster من قارورة الثقافة ووضعها في 200 ميكرولترات من المالحة. ثم، فهم الفم السنانير مع زوج من ملقط غرامة، والاستيلاء على البطن من اليرقات مع زوج الثاني من ملقط، مع ضغط خفيف، لتجنب تمزيق طبقة جميلة رقيقة.سحب بلطف الفم السنانير والبطن في اتجاهات مختلفة لفصل نهاية السد من اليرقات من منطقة الرأس وفضح الأحشاء من اليرقات. سيتشابك الجهاز العصبي المركزي مع القصبة الهوائية والجهاز الهضمي. ندف الجهاز العصبي المركزي من الجهاز الهضمي والقصبة الهوائية مع ملقط.تشريح الجهاز العصبي المركزي Drosophila من اليرقات هو خطوة حاسمة للنجاح. يجب أن تكون العصابات تشريح سليمة، دون أي ضرر كبير لأعصاب السيارات التنازلية. زيادة عدد أكبر من الأعصاب الحركية تعلق على ganglia ترددات اطلاق خط الأساس.إذا لزم الأمر، تعطيل حاجز الدم في الدماغ عن طريق تحويل يدويا الجهاز العصبي المركزي الخلفي إلى الفصوص الدماغية مع مقص الربيع فاناس. وينبغي أن يتم النقل على أساس الخصائص الفيزيائية الكيميائية للمواد الكيميائية المستخدمة. الخط الأحمر هو نقطة النقل المقترحة وNS مقطّع مع جذوع العصب المحيطي التنازلي سليمة هو مبين هنا.للبدء ، أولا سحب قطب الماصات الزجاجية من الشعيرات الدموية الزجاجية borosilicate إلى مقاومة من خمسة إلى 15 megaohms. أدخل الجهاز المركزي العصبي المركزي المُحولي في حجرة شمعية تحتوي على 200 ميكرولترات من الملح الملحي. المشبك دبوس حشرة غير المصقول مع مقطع التمساح مُلهم إلى السلك الأرضي، وإدراج دبوس في المالحة لإكمال الدائرة.باستخدام ميكرومانيبولاتورس، توجيه القطب إلى نهاية السد من الجهاز العصبي المركزي المُحولية. القضاء على الضوضاء الخلفية عن طريق ضبط مستوى العتبة في اقتناء / تحليل البرمجيات قبل توصيل جذوع الأعصاب الطرفية. تطبيق ضغط سلبي طفيف على حقنة لرسم الأعصاب الطرفية في القطب شفط.بدء التسجيل على برنامج الحصول على البيانات، ومعدل إطلاق خط الأساس لتكبيل لمدة خمس دقائق قبل جمع بيانات معدل إطلاق خط الأساس. بعد خمس دقائق، إضافة 200 ميكرولترات من المالحة والمركبات لتحقيق الحجم الإجمالي للغرفة إلى 400 ميكرولترات لبدء تسجيل معدلات إطلاق النار السيطرة. تجاهل الإعداد والتسجيل إذا كان نمط إطلاق العلاج بالتحكم لا يشبه المثال الموضح هنا.عندما تم تحديد خط الأساس بعد ثلاث إلى خمس دقائق من التسجيل، سحب 200 ميكرولترات من المالحة وإضافة 200 ميكرولترات من العامل التجريبي solubilized في المالحة. تسمية هذه النقطة الزمنية من تطبيق المخدرات في اقتناء / تحليل البرمجيات بما في ذلك التعليق الذي يتضمن المخدرات والتركيز النهائي. يظهر هنا هو تتبع إفرازات عصبية تمثيلية قبل وبعد التعرض لـ DMSO.يشير السهم إلى وقت التطبيق. ويُرى وجود استجابة محدودة لمعالجة هذا الأمر. جرعات متزايدة من propoxur تضخيم ارتفاع وتيرة التفريغ من DRosophila الجهاز العصبي المركزي عبر مُنَزَعِبِجِيَة بطريقة تعتمد على التركيز، في حين أن GABA العصبية خفضت تردد التفريغ الارتفاعات بطريقة تعتمد على التركيز.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أنه تجربة vivo السابقين ، وبالتالي فإن ظروف المالحة ، مثل درجة الحرارة ودرجة الحرارة ، أمر بالغ الأهمية للنشاط المطول لإعداد الجهاز العصبي المركزي. وبالمثل، فإن عدم وجود نشاط كهربائي خارجي، وكقف فاراداي فعال، وتخفيض ضوضاء 60 هرتز أمر بالغ الأهمية لنجاح هذه الأقوال. ويمكن للبيانات التي يتم جمعها من خلال هذا الفحص أن تساعد في تحديد طريقة عمل مبيدات الحشرات.ويمكن إجراء التحقق اللاحق من هذه البيانات من خلال أساليب أخرى مثل الفيزيولوجيا الكهربائية الجهد- المشبك، والتحليلات الكيميائية الحيوية، والتحاليل الدوائية إضافية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar Drosophila Melanogaster

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

التصور الجهاز العصبي الجنينية في جبل لالجامع ذبابة الفاكهة الأجنة

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

التصوير المتعدد الوسائط من زرع الخلايا الجذعية في الجهاز العصبي المركزي من الفئران

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

انتاج ناقلات Lentiviral للخلايا Transducing من الجهاز العصبي المركزي

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

وضع العلامات واحدة من الخلايا في الجهاز العصبي المركزي<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

والنموذج الإصابات المعنية بالتحقيق في وسط الجهاز العصبي في إصلاح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

مباشرة داخل البطين تسليم المخدرات الى القوارض الجهاز العصبي المركزي

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; Labellar طعم الشعيرات

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

تحديد العفوي الحركي آخر في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

في الجسم الحي Optogenetic تحفيز الجهاز العصبي المركزي القوارض

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

المقاصة البصري للنظام العصبي المركزي الماوس عن طريق وضوح السلبي

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...