郭清とショウジョウバエの図に示す中枢神経系の画像陳瑞さんに感謝したいと思います。

1. 装置および材料
<ol><li>ショウジョウバエ中枢神経系の吸引電極録音を実行する電気生理学のリグの必要なコンポーネント (テーブルの材料に表示) を準備します。 注: 実験前に必要はショウジョウバエ中枢神経系の解剖室を構築して録音中に生理食塩水で神経節を入浴に使用します。商工会議所建設の手順の概要を以下に示します。</li>
	<li>幼虫の部屋を準備し...

<ol>
	<li>Sparks, T. C., Nauen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IRAC:+Mode+of+action+classification+and+insecticide+resistance+management.">IRAC: Mode of action classification and insecticide resistance management.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 121, 122-128 (2015).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insecticide+resistance-breaking+mosquitocide+targeting+inward+rectifier+potassium+channels+in+vectors+of+Zika+virus+and+malaria.">An insecticide resistance-breaking mosquitocide targeting inward rectifier potassium channels in vectors of Zika virus and malaria.</a> Scientific Reports. 6, 36954 (2016).</li><li>Troczka, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+expression+and+functional+characterisation+of+the+diamondback+moth+ryanodine+receptor+G4946E+variant+conferring+resistance+to+diamide+insecticides.">Stable expression and functional characterisation of the diamondback moth ryanodine receptor G4946E variant conferring resistance to diamide insecticides.</a> Scientific Reports. 5, 14680 (2015).</li><li>Bloomquist, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+KV2+channels+as+new+targets+for+insecticides.">Voltage-sensitive potassium KV2 channels as new targets for insecticides.</a> Biopesticides: State of the Art and Future Opportunities. 1172, 71-81 (2014).</li><li>Jenson, L. J., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+serum+and+ion+channel+block+on+growth+and+hormonally-induced+differentiation+of+Spodoptera+frugiperda+(Sf21)+insect+cells.">Role of serum and ion channel block on growth and hormonally-induced differentiation of Spodoptera frugiperda (Sf21) insect cells.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 90 (3), 131-139 (2015).</li><li>Jenson, L. J., Sun, B., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+channels+expressed+after+20-Hydroxyecdysone+treatment+of+a+mosquito+cell+line.">Voltage-sensitive potassium channels expressed after 20-Hydroxyecdysone treatment of a mosquito cell line.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biolology. 87, 75-80 (2017).</li><li>Chintapalli, V. R., Wang, J., Dow, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+FlyAtlas+to+identify+better+Drosophila+melanogaster+models+of+human+disease.">Using FlyAtlas to identify better Drosophila melanogaster models of human disease.</a> Nature Genetics. 39 (6), 715-720 (2007).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+Drosophila:+a+fly+geneticist's+Swiss+army+knife.">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+Drosophila+melanogaster.">The art and design of genetic screens: Drosophila melanogaster.</a> Nature Reviews Genetics. 3 (3), 176-188 (2002).</li><li>Luan, Z., Li, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+channels+in+Drosophila.">Inwardly rectifying potassium channels in Drosophila.</a> Sheng Li Xue Bao. 64 (5), 515-519 (2012).</li><li>Muenzing, S. E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larvalign:+Aligning+gene+expression+patterns+from+the+larval+brain+of+Drosophila+melanogaster.">Larvalign: Aligning gene expression patterns from the larval brain of Drosophila melanogaster.</a> Neuroinformatics. 16 (1), 65-80 (2017).</li><li>Sprecher, S. G., Reichert, H., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+patterns+in+primary+neuronal+clusters+of+the+Drosophila+embryonic+brain.">Gene expression patterns in primary neuronal clusters of the Drosophila embryonic brain.</a> Gene Expression Patterns. 7 (5), 584-595 (2007).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+toxicogenomics:+Genetic+variation+in+susceptibility+to+heavy+metal+exposure.">A Drosophila model for toxicogenomics: Genetic variation in susceptibility to heavy metal exposure.</a> PLoS Genetics. 13 (7), e1006907 (2017).</li><li>Manev, H., Dimitrijevic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+in+vivo+pharmacological+analgesia+research.">Drosophila model for in vivo pharmacological analgesia research.</a> European Journal of Pharmacology. 491 (2-3), 207-208 (2004).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacological Reviews. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Hekmat-Scafe, D. S., Lundy, M. Y., Ranga, R., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+K+/Cl-+cotransporter+gene+kazachoc+(kcc)+increase+seizure+susceptibility+in+Drosophila.">Mutations in the K+/Cl- cotransporter gene kazachoc (kcc) increase seizure susceptibility in Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 26 (35), 8943-8954 (2006).</li><li>Whitworth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+S-transferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li><li>Watson, M. R., Lagow, R. D., Xu, K., Zhang, B., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+reveals+motor+neuron+damage+by+human+SOD1.">A Drosophila model for amyotrophic lateral sclerosis reveals motor neuron damage by human SOD1.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (36), 24972-24981 (2008).</li><li>Rajendra, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+melanogaster+model+of+spinal+muscular+atrophy+reveals+a+function+for+SMN+in+striated+muscle.">A Drosophila melanogaster model of spinal muscular atrophy reveals a function for SMN in striated muscle.</a> Journal of Cell Biology. 176 (6), 831-841 (2007).</li><li>Chan, H. Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+human+neurodegenerative+disease.">Drosophila models of human neurodegenerative disease.</a> Cell Death and Differentiation. 7 (11), 1075-1080 (2000).</li><li>Limmer, S., Weiler, A., Volkenhoff, A., Babatz, F., Klambt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+blood-brain+barrier:+development+and+function+of+a+glial+endothelium.">The Drosophila blood-brain barrier: development and function of a glial endothelium.</a> Frontiers in Neuroscience. 8, 365 (2014).</li><li>Rickert, C., Kunz, T., Harris, K. L., Whitington, P. M., Technau, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+characterization+of+the+entire+interneuron+population+reveals+principles+of+neuromere+organization+in+the+ventral+nerve+cord+of+Drosophila.">Morphological characterization of the entire interneuron population reveals principles of neuromere organization in the ventral nerve cord of Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 31 (44), 15870-15883 (2011).</li><li>Schwabe, T., Li, X., Gaul, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+the+mesenchymal-epithelial+transition+of+blood-brain+barrier+forming+glia+in+Drosophila.">Dynamic analysis of the mesenchymal-epithelial transition of blood-brain barrier forming glia in Drosophila.</a> Biology Open. 6 (2), 232-243 (2017).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (1), 41-53 (2006).</li><li>Abbott, N. J., Dolman, D. E., Patabendige, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+to+predict+drug+permeation+across+the+blood-brain+barrier,+and+distribution+to+brain.">Assays to predict drug permeation across the blood-brain barrier, and distribution to brain.</a> Current Drug Metabolism. 9 (9), 901-910 (2008).</li><li>Swale, D. R., Sun, B., Tong, F., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+and+mode+of+action+of+N,+N-diethyl-meta-toluamide+(DEET).">Neurotoxicity and mode of action of N, N-diethyl-meta-toluamide (DEET).</a> PLoS One. 9 (8), e103713 (2014).</li><li>Hafer, N., Schedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+larval+CNS+in+Drosophila+melanogaster.">Dissection of larval CNS in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (1), 85 (2006).</li><li>Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mode+of+action+of+atracotoxin+at+central+and+peripheral+synapses+of+insects.">Mode of action of atracotoxin at central and peripheral synapses of insects.</a> Invertebrate Neuroscience. 5 (1), 45-50 (2003).</li><li>Bloomquist, J. R., Roush, R. T., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+neuronal+sensitivity+to+dieldrin+and+picrotoxinin+in+a+cyclodiene-resistant+strain+of+Drosophila+melanogaster+(Meigen).">Reduced neuronal sensitivity to dieldrin and picrotoxinin in a cyclodiene-resistant strain of Drosophila melanogaster (Meigen).</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 19 (1), 17-25 (1992).</li><li>Mutunga, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicology+of+bis(n)-tacrines+on+Blattella+germanica+and+Drosophila+melanogaster+acetylcholinesterase.">Neurotoxicology of bis(n)-tacrines on Blattella germanica and Drosophila melanogaster acetylcholinesterase.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 83 (4), 180-194 (2013).</li><li>Chen, R., Swale, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+(Kir)+channels+represent+a+critical+ion+conductance+pathway+in+the+nervous+systems+of+insects.">Inwardly rectifying potassium (Kir) channels represent a critical ion conductance pathway in the nervous systems of insects.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1617 (2018).</li><li>Francis, S. A., Taylor-Wells, J., Gross, A. D., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+physiological+actions+of+carbonic+anhydrase+inhibitors+to+Aedes+aegypti+and+Drosophila+melanogaster.">Toxicity and physiological actions of carbonic anhydrase inhibitors to Aedes aegypti and Drosophila melanogaster.</a> Insects. 8 (1), 2 (2016).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitor+profile+of+bis(n)-tacrines+and+N-methylcarbamates+on+acetylcholinesterase+from+Rhipicephalus+(Boophilus)+microplus+and+Phlebotomus+papatasi.">Inhibitor profile of bis(n)-tacrines and N-methylcarbamates on acetylcholinesterase from Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Phlebotomus papatasi.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 106 (3), 85-92 (2013).</li><li>Corbel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+inhibition+of+cholinesterases+in+insect+and+mammalian+nervous+systems+by+the+insect+repellent+deet.">Evidence for inhibition of cholinesterases in insect and mammalian nervous systems by the insect repellent deet.</a> BMC Biology. 7, 47 (2009).</li></ol>

詳細については関連のビデオで解説し、本文アクティビティとスパイクを記録するために重要なステップは放電前のヴィヴォショウジョウバエ中枢神経系の周波数を提供しています。短いまたは数降順ニューロン発火率レプリケートの大きな差異に起因するベースラインが減りますので、郭清の有効性はメソッドの最も重要な側面です。ただし、一度解剖技術を習得すると、こ?...

このアプローチの全体的な目標は、キイロショウジョウバエモデル昆虫の中枢神経系 (CNS) のハクスリーをすばやく計測する研究者を有効にするのには。このメソッドは、信頼性の高い、迅速、かつコスト効率的生理学的及び毒性学的実験.を実行するには中枢神経系は、適切な神経機能は理解または神経機能を変更するために広範囲にわたって検討されている生活とそのため、重要な生理学的な細道のために不可欠です。節足動物の中枢神経系内の信号経路の特性評価は、オフのターゲットの結果を制限しながら死亡を誘発する無脊椎動物の神経機能を混乱させる殺虫剤の化学の授業をいくつかの検出を可能にしました。したがって、昆虫の神経活動を測定する能力は昆虫毒物学および生理学の分野に大きな関心神経システムは配置された殺虫剤1の大多数のターゲット組織なので。昆虫の神経系に関する基礎・応用知識の成長可能性に限られているので現在の技術は労働集約的、高い費用を必要とする高度な神経生理学的手法が必要ですまだ、続けて昆虫神経細胞が限られているおよび/またはほとんどの節足動物の中央のシナプスへのアクセス制限があります。現在、ほとんどの昆虫神経蛋白の性状解析は昆虫内部整流器のカリウム チャネル2 について説明されたように、クローンとクローンの表現されたその後創と電気生理学的記録をで目標を必要とします。、昆虫のリアノジン受容体3、蚊電圧敏感な K+チャンネル4、および他の人。異種発現の要件や低機能発現の可能性を軽減するには、・ ブルームクイストと同僚の神経表現型を誘発することを目的と培養ハスモンヨトウ frugiperda (Sf21) 細胞の手法として殺虫剤検出5,6。これらのメソッドは新しい化学の開発のための有効なアプローチを提供まだ彼らはしばしば薬剤、殺虫剤抵抗性と評価の仕組み特定の特性のための乗り越えられないボトルネックを作成根本的な生理学的な原則。ここでは、可鍛遺伝学7,8,9があるモデル虫から電気的活動の記録及び神経の正常発現パターンができる前のヴィヴォ手法について述べる錯体10、11,12神経、新しく開発された薬の作用のモードや他の毒性学的研究のレベルでの抵抗機構の評価を有効にします。
ショウジョウバエ、キイロショウジョウバエ、昆虫の神経系または殺虫剤の作用機構を定義するための一般的なモデル有機体し、14 毒性13、薬理学的研究の最適モデル有機体として確立しています。 ,15、16神経生理学的および病態生理学的17,18,19,20脊椎動物のプロセス。D.melanogasterは、生殖の大人の段階に達する前に幼虫と蛹の段階を含む、完全な変貌を実行大人形昆虫です。発達過程を通して神経系が異なるライフ ステージで大幅な改造を受けるが、幼虫の中枢神経系は、この方法論の焦点になります。完全に開発された幼虫中枢神経系は解剖学的胸部および腹部のセグメントが融合し、繰り返されるとほぼ同じ neuromeric ユニット21,22の配列を表す腹側神経節を形成すると簡単です。運動神経を降順蚕食大脳核の尾側に属します、体壁の筋肉と幼虫の内臓器官を支配するのに至ります。図 1では、幼虫のショウジョウバエ中枢神経系の解剖について説明します。
ショウジョウバエ血液脳関門 (BBB) は、胚発生の終わりに開発し、subperineurial グリア細胞 (SPG)21によって形成されます。SPG 細胞全体のショウジョウバエ中枢神経系23をカバーする連続した、非常に平らな、内皮のようなシートを確立する広がる多数の糸状のようなプロセスを形成します。ショウジョウバエBBB が CNS21に栄養素や薬物動態のエントリを制御することにより神経の微小環境の恒常性を維持を含む脊椎動物の BBB との類似点です。BBB によって中枢神経系の保護を制限可能性を紹介その他薬物動態24,25ほとんどペプチド合成麻薬の浸透はまだ、これは信頼性の高い神経伝達と機能のための前提条件小分子のポーテンシーを特性評価する際の問題。メソッドは、この障壁を混乱させると中央のシナプスへの薬理学的アクセスを提供する単純な断裂を使用します。 説明の方法論の最大の強みは、シンプルさ、再現性、および比較的高スループット容量このシステムに固有のものです。プロトコルは比較的簡単にマスター、セットアップは小さなスペースを必要とし、初期金融入力だけは必要な検査試薬や消耗を抑えるは。さらに、この方法はイエバエ、イエバエ26.の中央の降順の神経活動を記録する完全に除去

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster (strain OR)</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>2376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibration isolation table</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>9200 series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope on a Boom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800N</td>
			<td>Multiple scopes can be used; boom stand is critical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC/DC differential amplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3000H</td>
			<td>The model 1700 can be used instead of the model 3000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>audio monitor</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hum Bug Noise Eliminator</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>726300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition System (PowerLab)</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>PL3504</td>
			<td>Multiple PowerLab models can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart Pro Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>N/A - Online Download</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Lights</td>
			<td>Edmund Optics</td>
			<td>89-740</td>
			<td>Different light sources can be used, but fiber optics are the most adaptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Holder</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MEH715</td>
			<td>Different models are acceptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>multiple based on size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PG52151-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-1000</td>
			<td>Also can use Narashige PC-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>974228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-coated insect pins, size #2</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1208S2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fince Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophysiological recording of the central nervous system activity of third-instar drosophila melanogaster

現在利用可能な殺虫剤の大半は神経系をターゲットし、無脊椎動物神経蛋白質の遺伝の突然変異はしばしば有害な結果は、まだ個々 の神経系の活動を記録するための現在の方法をもたらす動物は高価で手間のかかるです。この吸引ショウジョウバエ、 3 齢幼虫中枢神経系の電極作製は多様な神経の生理学的役割を決定する生理エージェントの生理効果をテストするため扱いやすいシステム神経機能の遺伝的変異の影響と同様、中枢神経系活動への経路。この前のヴィヴォ準備では、唯一の適度なスキルと電気生理学的専門知識を解剖昆虫の神経活動を再現可能な記録を生成する必要があります。さまざまなペプチドを含む化学物質の変調器は、中枢神経系活動に及ぼす影響を測定するための生理食塩水による溶液中の神経システムに直接適用できます。GAL4/UAS システムなど、さらに、遺伝の技術は、単独に又は特定のイオン チャネルやトランスポーター、節足動物の中枢神経系機能に受容体の役割を決定する薬理学的エージェントと並行に適用できます。このコンテキストの記載法、毒物殺虫剤、昆虫生理学者、キイロショウジョウバエ確立されたモデル有機体の発達生物学者に重要な関心です。このプロトコルの目的は科学の多様性をテストするために有用であるショウジョウバエ、モデル昆虫の中枢神経系の電気発生の測定を有効にする電気生理学的手法、します。仮説。

ショウジョウバエ中枢神経系から生じる降順末梢神経の自発活動は、一貫性のある再現性細胞外吸引電極を使用して記録できます。切除や切断ショウジョウバエ中枢神経の自発活動がはち切れんばかり、約 1 焼成の 1-2 秒の循環的なパターンを生成する s の近くの地震活動静穏化。たとえば、中枢神経系は 0.5 - 1 (1-2 Hz) の静止に近い s、続いて約 1 s、お?...

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Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar  Drosophila Melanogaster

このプロトコルは、コスト効率的かつ便利な神経蛋白質の遺伝の突然変異の薬理学的エージェントのテストを有効にするショウジョウバエ中枢神経系の降下の電気的活動を記録する方法をについて説明しますや未踏の生理学的経路の役割。

第三令キイロショウジョウバエの中枢神経活動の電気生理学的記録

The majority of the currently available insecticides target the nervous system and genetic mutations of invertebrate neural proteins oftentimes yield ...

この方法は、ショウジョウバエメラノガスター中枢神経系の電気発生を測定することによって、昆虫毒物学および昆虫生理学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。これにより、幅広い科学的仮説をテストし、新しい殺虫剤モードの発見を支援することができます。この技術の主な利点は、ショウジョウバエの神経系を研究するための最小限の財務入力で、シンプルで再現性の高い、比較的高スループットなシステムを提供することです。開始するには、取得/解析ソフトウェアを開きます。メイン ツールバーの [設定] をクリックし、[チャネル設定] を選択すると、ダイアログ ボックスが開きます。合計チャネル数を 3 に減らします。チャンネル1は、100ミリボルトの範囲でアンプからの生信号を記録します。チャネル 2 は、指定されたしきい値を超えるチャネル 1 からのイベント数をカウントするために使用されます。この場合は、[計算]タブをクリックして、チャンネル2のドロップダウンメニューを開きます。2 番目のダイアログ ボックスを開く[周期的測定]を選択します。ソースとしてチャネル 1 を選択します。次に、ドロップダウン メニューの測定で、[イベントでのユニット スパイク] を選択します。最後に、検出設定領域のドロップダウン メニューから[単純なしきい値]を選択します。閾値レベルは、バックグラウンドノイズの上に設定される検出調整ウィンドウに入力されます。電気的活動をヘルツで表現されたレートプロットに変換するには、3番目のチャンネルで[算術]を選択します。新しいウィンドウで、1000 回の smoothsec を入力し、括弧チャネル 2 つのコンマ 2。次に、単位ドロップダウンメニューで周波数単位ヘルツを選択します。ダイアログ ボックスを閉じて、メイン画面に戻ります。チャネル 3 の y 軸は、ヘルツと X 軸で時間単位で表す必要があります。幼虫ショウジョウバエCNSを分解し、まず培養バイアルからさまよう第3インスターショウジョウバエメラノガスターを同定して抽出し、生理食塩水の200マイクロリットルに入れる。次に、一対の細い鉗子で口のフックをつかみ、軽い圧力でウジの腹部を軽い圧力でつかみ、細いカチクラ層を引き裂かないようにする。口のフックと腹部を異なる方向にそっと引っ張り、ウジの尾端を頭の領域から分離し、ウジの内臓を露出させます。CNSは気管および消化管と絡み合う。消化管からCNSをいじめ、鉗子で気管を出します。ウジからのショウジョウバエ中枢神経系の解剖は、成功のための重要なステップです。解剖された神経節は、下降運動神経に大きな損傷を与えることなく、そのままでなければなりません。神経節に付着する運動神経の数が多いほど、ベースライン発火頻度が増加します。必要に応じて、VANNASスプリングハサミで脳ローブにCNS後部を手動でトランセクトすることによって、血液脳関門を破壊する。トランセクションは、使用されている化学物質の物理化学的特性に基づいて行われるべきです.赤い線は、提案された切除点と、ここに示す無傷の下降末梢神経幹を有するトランセクトCNSである。まず、まず、ガラスピペット電極をホウケイ酸ガラス毛細血管から5~15メガオームの抵抗に引き出します。200マイクロリットルの生理食塩水を含むワックスチャンバにトランセクトされたCNSを挿入します。コーティングされていない昆虫ピンを、アース線にはんだ付けしたワニクリップでクランプし、そのピンを生理音に挿入して回路を完成させます。マイクロマニピュレータを使用して、電極をトランセクトされたCNSの尾端に向けます。末梢神経幹を接続する前に、取得/解析ソフトウェアの閾値レベルを調整して、バックグラウンドノイズを除去します。注射器にわずかな負圧を加え、末梢神経を吸引電極に引き込む。データ取得ソフトウェアで記録を開始し、ベースライン発射速度を5分間平衡化してから、ベースライン発射率データを収集します。5分後、200マイクロリットルの生理食塩水と車両を加え、チャンバーの総容積を400マイクロリットルに引き上げ、制御焼成率の記録を開始します。制御処理の焼成のパターンが、ここで示した例と類似しない場合は、調製および記録を廃棄する。3~5分間の記録後にベースラインが確立されたら、200マイクロリットルの生理食塩水を引き出し、生理食塩水に可溶化した実験剤の200マイクロリットルを添加する。薬と最終濃度を含むコメントを含めることによって取得/分析ソフトウェアで薬物アプリケーションのこの時点をラベル付け.ここに示されている代表的な神経排出トレース DMSO への曝露前後.矢印は、アプリケーションの時間を示します。DMSO に対する応答が制限されています。プロポククサウルスの増加用量は、血中切除ショウジョウバエCNSのスパイク放電頻度を濃度依存的に増幅し、一方、神経抑制剤GABAは濃度依存的にスパイク放電頻度を減少させた。この手順を試みる間、それはex vivo実験であり、したがって、pHや温度などの生理食物の条件は、中枢神経系の準備の長期活動のために重要であることを覚えておくことが重要です。同様に、無関係な電気的活動の欠如、効果的なファラデーケージ、および60ヘルツノイズの低減は、このアッセイの成功にとって重要です。このアッセイを通じて収集されたデータは、殺虫剤の特定の作用様式を特定するのに役立ちます。電圧クランプ電気生理学、生化学的分析、追加の薬理アッセイなどの他の方法を通じてこれらのデータのその後の検証を行うことができます。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar Drosophila Melanogaster

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

ホールマウントの胎児神経系の可視化ショウジョウバエ胚

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

マウスの中枢神経系における幹細胞注入のマルチモーダルイメージング

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

中枢神経系から細胞を変換するためのレンチウイルスベクターの生産

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

の中枢神経系における単一細胞のラベリング<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

中枢神経系の修復を調査するために傷害パラダイム<em&gt;ショウジョウバエ</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

齧歯中枢神経系への薬物の直接脳室内デリバリー

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

から電気生理学的記録<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt; Labellar味感覚器

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

における自発運動量の測定<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

齧歯類の中枢神経系の生体光遺伝学的刺激

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

パッシブCLARITYを使用したマウス中枢神経系の光学クリア

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...