우리는 해 부와 초파리 는 그림에 표시 된 CNS의 이미지에 대 한 양 루이 첸을 감사 하 고 싶습니다.

1. 장비 및 재료
<ol><li>전기 생리학 장비 초파리 CNS의 흡입 전극 녹음을 수행의 필수 구성 요소 ( 재료의 테이블에에서 나열 된)를 준비 합니다. 참고: 이전에 실험, 필요는 초파리 CNS의 해 부에 대 한 챔버를 구성 하 고 녹음 동안 염 분에 중추를 입욕 하는 데 사용할. 챔버 건설의 단계별 개요는 아래 제공 됩니다.</li>
	<li>애벌레 챔버를 준비 합니다.<ol>
<li>뜨거운 접시?...

<ol>
	<li>Sparks, T. C., Nauen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IRAC:+Mode+of+action+classification+and+insecticide+resistance+management.">IRAC: Mode of action classification and insecticide resistance management.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 121, 122-128 (2015).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insecticide+resistance-breaking+mosquitocide+targeting+inward+rectifier+potassium+channels+in+vectors+of+Zika+virus+and+malaria.">An insecticide resistance-breaking mosquitocide targeting inward rectifier potassium channels in vectors of Zika virus and malaria.</a> Scientific Reports. 6, 36954 (2016).</li><li>Troczka, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+expression+and+functional+characterisation+of+the+diamondback+moth+ryanodine+receptor+G4946E+variant+conferring+resistance+to+diamide+insecticides.">Stable expression and functional characterisation of the diamondback moth ryanodine receptor G4946E variant conferring resistance to diamide insecticides.</a> Scientific Reports. 5, 14680 (2015).</li><li>Bloomquist, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+KV2+channels+as+new+targets+for+insecticides.">Voltage-sensitive potassium KV2 channels as new targets for insecticides.</a> Biopesticides: State of the Art and Future Opportunities. 1172, 71-81 (2014).</li><li>Jenson, L. J., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+serum+and+ion+channel+block+on+growth+and+hormonally-induced+differentiation+of+Spodoptera+frugiperda+(Sf21)+insect+cells.">Role of serum and ion channel block on growth and hormonally-induced differentiation of Spodoptera frugiperda (Sf21) insect cells.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 90 (3), 131-139 (2015).</li><li>Jenson, L. J., Sun, B., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+channels+expressed+after+20-Hydroxyecdysone+treatment+of+a+mosquito+cell+line.">Voltage-sensitive potassium channels expressed after 20-Hydroxyecdysone treatment of a mosquito cell line.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biolology. 87, 75-80 (2017).</li><li>Chintapalli, V. R., Wang, J., Dow, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+FlyAtlas+to+identify+better+Drosophila+melanogaster+models+of+human+disease.">Using FlyAtlas to identify better Drosophila melanogaster models of human disease.</a> Nature Genetics. 39 (6), 715-720 (2007).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+Drosophila:+a+fly+geneticist's+Swiss+army+knife.">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li><li>St Johnston, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+Drosophila+melanogaster.">The art and design of genetic screens: Drosophila melanogaster.</a> Nature Reviews Genetics. 3 (3), 176-188 (2002).</li><li>Luan, Z., Li, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+channels+in+Drosophila.">Inwardly rectifying potassium channels in Drosophila.</a> Sheng Li Xue Bao. 64 (5), 515-519 (2012).</li><li>Muenzing, S. E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larvalign:+Aligning+gene+expression+patterns+from+the+larval+brain+of+Drosophila+melanogaster.">Larvalign: Aligning gene expression patterns from the larval brain of Drosophila melanogaster.</a> Neuroinformatics. 16 (1), 65-80 (2017).</li><li>Sprecher, S. G., Reichert, H., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+patterns+in+primary+neuronal+clusters+of+the+Drosophila+embryonic+brain.">Gene expression patterns in primary neuronal clusters of the Drosophila embryonic brain.</a> Gene Expression Patterns. 7 (5), 584-595 (2007).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+toxicogenomics:+Genetic+variation+in+susceptibility+to+heavy+metal+exposure.">A Drosophila model for toxicogenomics: Genetic variation in susceptibility to heavy metal exposure.</a> PLoS Genetics. 13 (7), e1006907 (2017).</li><li>Manev, H., Dimitrijevic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+model+for+in+vivo+pharmacological+analgesia+research.">Drosophila model for in vivo pharmacological analgesia research.</a> European Journal of Pharmacology. 491 (2-3), 207-208 (2004).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacological Reviews. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Hekmat-Scafe, D. S., Lundy, M. Y., Ranga, R., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+K+/Cl-+cotransporter+gene+kazachoc+(kcc)+increase+seizure+susceptibility+in+Drosophila.">Mutations in the K+/Cl- cotransporter gene kazachoc (kcc) increase seizure susceptibility in Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 26 (35), 8943-8954 (2006).</li><li>Whitworth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+S-transferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li><li>Watson, M. R., Lagow, R. D., Xu, K., Zhang, B., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+reveals+motor+neuron+damage+by+human+SOD1.">A Drosophila model for amyotrophic lateral sclerosis reveals motor neuron damage by human SOD1.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (36), 24972-24981 (2008).</li><li>Rajendra, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+melanogaster+model+of+spinal+muscular+atrophy+reveals+a+function+for+SMN+in+striated+muscle.">A Drosophila melanogaster model of spinal muscular atrophy reveals a function for SMN in striated muscle.</a> Journal of Cell Biology. 176 (6), 831-841 (2007).</li><li>Chan, H. Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+human+neurodegenerative+disease.">Drosophila models of human neurodegenerative disease.</a> Cell Death and Differentiation. 7 (11), 1075-1080 (2000).</li><li>Limmer, S., Weiler, A., Volkenhoff, A., Babatz, F., Klambt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+blood-brain+barrier:+development+and+function+of+a+glial+endothelium.">The Drosophila blood-brain barrier: development and function of a glial endothelium.</a> Frontiers in Neuroscience. 8, 365 (2014).</li><li>Rickert, C., Kunz, T., Harris, K. L., Whitington, P. M., Technau, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+characterization+of+the+entire+interneuron+population+reveals+principles+of+neuromere+organization+in+the+ventral+nerve+cord+of+Drosophila.">Morphological characterization of the entire interneuron population reveals principles of neuromere organization in the ventral nerve cord of Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 31 (44), 15870-15883 (2011).</li><li>Schwabe, T., Li, X., Gaul, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+the+mesenchymal-epithelial+transition+of+blood-brain+barrier+forming+glia+in+Drosophila.">Dynamic analysis of the mesenchymal-epithelial transition of blood-brain barrier forming glia in Drosophila.</a> Biology Open. 6 (2), 232-243 (2017).</li><li>Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-endothelial+interactions+at+the+blood-brain+barrier.">Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (1), 41-53 (2006).</li><li>Abbott, N. J., Dolman, D. E., Patabendige, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+to+predict+drug+permeation+across+the+blood-brain+barrier,+and+distribution+to+brain.">Assays to predict drug permeation across the blood-brain barrier, and distribution to brain.</a> Current Drug Metabolism. 9 (9), 901-910 (2008).</li><li>Swale, D. R., Sun, B., Tong, F., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+and+mode+of+action+of+N,+N-diethyl-meta-toluamide+(DEET).">Neurotoxicity and mode of action of N, N-diethyl-meta-toluamide (DEET).</a> PLoS One. 9 (8), e103713 (2014).</li><li>Hafer, N., Schedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+larval+CNS+in+Drosophila+melanogaster.">Dissection of larval CNS in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (1), 85 (2006).</li><li>Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mode+of+action+of+atracotoxin+at+central+and+peripheral+synapses+of+insects.">Mode of action of atracotoxin at central and peripheral synapses of insects.</a> Invertebrate Neuroscience. 5 (1), 45-50 (2003).</li><li>Bloomquist, J. R., Roush, R. T., ffrench-Constant, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+neuronal+sensitivity+to+dieldrin+and+picrotoxinin+in+a+cyclodiene-resistant+strain+of+Drosophila+melanogaster+(Meigen).">Reduced neuronal sensitivity to dieldrin and picrotoxinin in a cyclodiene-resistant strain of Drosophila melanogaster (Meigen).</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 19 (1), 17-25 (1992).</li><li>Mutunga, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicology+of+bis(n)-tacrines+on+Blattella+germanica+and+Drosophila+melanogaster+acetylcholinesterase.">Neurotoxicology of bis(n)-tacrines on Blattella germanica and Drosophila melanogaster acetylcholinesterase.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 83 (4), 180-194 (2013).</li><li>Chen, R., Swale, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inwardly+rectifying+potassium+(Kir)+channels+represent+a+critical+ion+conductance+pathway+in+the+nervous+systems+of+insects.">Inwardly rectifying potassium (Kir) channels represent a critical ion conductance pathway in the nervous systems of insects.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1617 (2018).</li><li>Francis, S. A., Taylor-Wells, J., Gross, A. D., Bloomquist, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+physiological+actions+of+carbonic+anhydrase+inhibitors+to+Aedes+aegypti+and+Drosophila+melanogaster.">Toxicity and physiological actions of carbonic anhydrase inhibitors to Aedes aegypti and Drosophila melanogaster.</a> Insects. 8 (1), 2 (2016).</li><li>Swale, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitor+profile+of+bis(n)-tacrines+and+N-methylcarbamates+on+acetylcholinesterase+from+Rhipicephalus+(Boophilus)+microplus+and+Phlebotomus+papatasi.">Inhibitor profile of bis(n)-tacrines and N-methylcarbamates on acetylcholinesterase from Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Phlebotomus papatasi.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 106 (3), 85-92 (2013).</li><li>Corbel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+inhibition+of+cholinesterases+in+insect+and+mammalian+nervous+systems+by+the+insect+repellent+deet.">Evidence for inhibition of cholinesterases in insect and mammalian nervous systems by the insect repellent deet.</a> BMC Biology. 7, 47 (2009).</li></ol>

관련된 비디오에 세부 사항을 제공 하 고 활동 및 스파이크를 기록 하기 위해 주요 단계 방전 주파수 비보 전 초파리 CNS의 텍스트를 제공. 해 부 효능은 짧은 또는 몇 하강 신경 초기 발사 속도 큰 차이 복제를 줄일 것입니다 때문에 방법의 가장 중요 한 측면 이다. 그러나, 일단 절 개 기술을 마스터 되었습니다,이 분석 결과와 수집 된 데이터는 매우 재현 가능 하 고 다양 한 분야에 대...

이 방법의 전반적인 목표는 신속 하 게 모델 곤충, 초파리 melanogaster에서 중앙 신경 조직 (CNS)의 electrogenesis를 측정 하는 연구자 수 있도록입니다. 이 메서드는 신뢰할 수 있는, 빠르고, 비용 효율적인 생리 및 독성에 관한 실험. 을 수행 하 CNS 신경 기능 이해 하거나 신경 기능을 수정 하기 위해에서 광범위 하 게 탐험 되어 대 한 삶과 중요 한 생리 적 경로 따라서,에 대 한 필수적입니다. Arthropod CNS 내의 신호 통로의 특성은 오프 대상 결과 제한 하는 동안 사망을 유발 하는 무척 추 동물 신경 기능을 방해 하는 살충제의 여러 화학 클래스의 검색을 활성화 하 고 있다. 따라서, 신 경계 이기 때문에 대상 조직 배포 된 살충제1의 대부분의 곤충 독성 학 그리고 생리학의 분야에 상당한 관심의 곤충의 신경 활동을 측정 하는 능력이 이다. 그러나, 곤충 신 경계에 관한 기본 지식과 적용된의 성장 필요 때문에 현재 기술 노동 집약 높은 비용을 요구 타당성에서 제한 된 고급 신경 생리학 기술을 계속 곤충 신경 세포는 제한, 및/또는 대부분 절지동물의 중앙 시 냅 스에 대 한 제한 된 액세스입니다. 현재, 대부분 곤충 신경 단백질의 특성 필요 해야 복제 및 heterologously에 대 한 표현 후속 약물 발견 및 electrophysiological 녹음, 곤충 안으로 정류기 칼륨 채널2 설명 했다 대상 , 곤충 ryanodine 수용 체3, 모기 전압에 민감한 K+ 채널4, 그리고 다른 사람. 분리 식에 대 한 요구와 낮은 기능 식에 대 한 가능성을 완화 하기 위해 Bloomquist와 동료에 신경 표현 형을 유도 하는 목적으로 경작 Spodoptera frugiperda (Sf21) 셀에 대 한 새로운 방법으로 살충제 발견5,6. 새로운 화학의 발전에 대 한 유효한 접근을 제공 하는 이러한 방법은 아직 그들은 자주 약리학 대리인, 살충제 저항, 및 특성의 메커니즘을 식별 특성에 대 한 극복 병목을 만들 기본적인 생리 적 원리. 여기, ex vivo 메서드는 전성 유전학7,,89 모델 곤충에서 전기 활동의 기록 및 신경의 알려진된 식 패턴 설명 단지10,,1112 신경, 새로 개발된 된 약물의 행동의 모드 및 기타 독성 학적 연구의 수준에서 저항 메커니즘의 특성을 사용 하도록.
과일 파리 D. melanogaster, 곤충의 신경 시스템 또는 행동의 살충제 메커니즘을 정의 하기 위한 일반적인 모델 유기 체 이며14 독물학13, 약리학의 연구에 대 한 적절 한 모델 생물으로 설립 되었습니다. ,15, 신경 생리학16및 척추 동물의 병 태 생리17,18,19,20 프로세스. D.melanogaster 는 완전 변 태, 애벌레 및 번데기 단계를 포함 하 여 생식 성인 무대에 도달 하기 전에 수행 하는 holometabolous 곤충. 발달 과정을 통해 신 경계 다른 생활 단계에서 중요 한 개장 겪 습 하지만 애벌레 CNS이이 방법론의 초점이 될 것입니다. 완전 개발된 애벌레 CNS와 융합 되 고 반복 하 고 거의 동일한 neuromeric 단위21,22의 배열을 나타내는 복 부 신경 절을 형성 하는 흉부와 복 부 세그먼트 해부학 간단 하다. 하강 하는 모터 신경 subesophageal 신경의 꼬리 끝에서 시작 하 고 몸 벽 근육과 내장 기관 애벌레의 자극 하. 그림 1 에서는 애벌레 초파리 CNS의 심한 해부학을 설명합니다.
Drosophila 혈액-뇌 장벽 (BBB) embryogenesis의 끝에 발전 하 고 subperineurial glial 세포 (SPG)21에 의해 형성 된다. SPG 셀 전체 초파리 CNS23를 포함 하는 연속, 단조로운, 내 피 같은 시트를 확립을 밖으로 확산 하는 수많은 filopodia 같은 프로세스를 형성 합니다. Drosophila BBB CNS21에 영양분과 xenobiotics의 항목을 조절 하 여 신경 microenvironment의 항상성 유지 포함 척추 BBB에 유사점이 있다. 이것은 신뢰할 수 있는 신경 전송 및 기능에 대 한 필수 아직 합성 마약, 대부분 펩 티 드, 그리고 다른 xenobiotics24,25, 소개 하는 잠재력의 침투를 제한 하는 BBB로 CNS의 보호 potencies 작은 분자 변조기를 특성화 하는 때 문제. 메서드를 사용 하 여 간단한 transection이이 장벽이 고 준비 약리 액세스 중앙 시 냅 스를 제공. 설명된 하는 방법론의 가장 큰 힘은 단순, 재현성, 및이 시스템에 내재 된 상대적으로 높은 처리 능력. 프로토콜은 상대적으로 마스터 하 게 쉬운, 설치 작은 공간을 필요로 하 고 초기 금융 입력만 필요는 시 약 및 소모품을 줄일 수 있다. 또한, 설명 방법은 완전히 집 파리, 파리 자리 부채26. 의 중앙 하강 신경 활동을 기록 하는 amendable

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster (strain OR)</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>2376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibration isolation table</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>9200 series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Kinetic Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope on a Boom</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800N</td>
			<td>Multiple scopes can be used; boom stand is critical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC/DC differential amplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3000H</td>
			<td>The model 1700 can be used instead of the model 3000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>audio monitor</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>AM3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hum Bug Noise Eliminator</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>726300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition System (PowerLab)</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>PL3504</td>
			<td>Multiple PowerLab models can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart Pro Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>N/A - Online Download</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Lights</td>
			<td>Edmund Optics</td>
			<td>89-740</td>
			<td>Different light sources can be used, but fiber optics are the most adaptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Holder</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MEH715</td>
			<td>Different models are acceptable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>multiple based on size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>PG52151-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-1000</td>
			<td>Also can use Narashige PC-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Wax</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>974228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-coated insect pins, size #2</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>1208S2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fince Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophysiological recording of the central nervous system activity of third-instar drosophila melanogaster

현재 사용할 수 있는 살충제의 대부분 신 경계 대상 고 무척 추 동물 신경 단백질의 유전자 변이 자주 해로운 결과, 아직 개인의 신경 활동을 기록에 대 한 현재 메서드 동물 비용과 힘 드는입니다. 이 흡입 초파리 melanogaster 의 제 3 탈피 애벌레 중앙 신경의 전극 준비는 neuroactive 에이전트, 다양 한 신경의 생리 적 역할을 결정의 생리 적 효과 테스트 하기 위한 세공 시스템 신경 기능을 유전자 변이의 영향으로 CNS 활동 경로 이 비보 전 준비 필요 생성 곤충 신경 활동의 재현 녹음 하만 보통을 electrophysiological 지식과 기술 해 부 합니다. 다양 한 화학 변조기, 펩 티 드를 포함 하 여 다음 CNS 활동에 영향을 측정 하기 위해 생리 식 염 수 솔루션의 신 경계에 직접 적용할 수 있습니다. GAL4/UAS 시스템 등 추가, 유전자 기술, 독립적으로 또는 특정 이온 채널, 전송기, 또는 arthropod CNS 기능 수용 체의 역할을 결정 하기 위해 약리 작용에 적용할 수 있습니다. 이러한 맥락에서 여기에 설명 된 분석 실험 살충제 독물학, 곤충 생리학, 발달 생물학자는 D. melanogaster 설립된 모델 유기 체는 중요 한 관심입니다. 이 프로토콜의 목표는 다양 한 과학적 테스트를 위한 유용한 모델 곤충, 초파리 melanogaster에서 중앙 신경 시스템의 electrogenesis의 측정 수 있도록 electrophysiological 메서드를 설명 하는 가설입니다.

일관 된 재현성 extracellular 흡입 전극을 사용 하 여 초파리 중추 신 경계에서에서 발생 하는 하강 주변 신경의 자발적인 활동을 기록할 수 있습니다. 삭제 및 transected 초파리 CNS의 자발적인 활동 생산 발사의 약 1 1-2 s와 붕괴의 주기적 패턴 무부하 활동 근처의 s. 예를 들어 CNS는 무부하 (1 ~ 2 Hz) 0.5-1 근처 뒤 약 1 s, 그리고 근처 무부하 상태 (1 ~ 2 Hz) 다음 반환에 ?...

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Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar  Drosophila Melanogaster

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

The majority of the currently available insecticides target the nervous system and genetic mutations of invertebrate neural proteins oftentimes yield ...

이 방법은 Drosophila 멜라노가스터 중추 신경계의 전기 발생을 측정하여 곤충 독성학 및 곤충 생리학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이것은 1개의 과학적인 가설의 넓은 범위를 시험하고 행동의 새로운 살충제 모드의 발견에 원조하는 것을 허용합니다. 이 기술의 주요 장점은 Drosophila의 신경계를 연구하기 위해 최소한의 재정적 입력으로 간단하고 재현 가능하며 상대적으로 높은 처리량 시스템을 제공한다는 것입니다.시작하려면 수집/분석 소프트웨어를 엽니다. 기본 도구 모음에서 설정을 클릭하고 대화 상자가 열리는 채널 설정을 선택합니다. 총 채널 수를 3개로 줄입니다.채널 1은 앰프의 범위100 밀리볼트로 원시 신호를 기록합니다. 채널 2는 지정된 임계값보다 높은 채널 1의 이벤트 수를 계산하는 데 사용됩니다. 이를 위해 계산 탭을 클릭하여 채널 2의 드롭다운 메뉴를 엽니다.두 번째 대화 상자를 여는 순환 측정값을 선택합니다. 채널 하나를 소스로 선택합니다. 그런 다음 드롭다운 메뉴 측정에서 이벤트에서 단위 스파이크를 선택합니다.마지막으로 드롭다운 메뉴에서 검색 설정 영역에서 간단한 임계값을 선택합니다. 임계값 수준은 배경 노이즈 위에 설정될 감지 조정 창에 입력됩니다. 전기 활동을 헤르츠에 표현된 속도 플롯으로 변환하려면 세 번째 채널에서 산술을 선택합니다.새 창에서 입력 1000 배 smoothsec, 괄호 채널 2 쉼표 2. 그런 다음 단위 드롭다운 메뉴에서 주파수 단위 hertz를 선택합니다. 대화 상자를 닫고 메인 화면으로 돌아갑니다.채널 3의 y축은 헤르츠와 x축으로 제 시간에 표현되어야 합니다. 처음 식별하고 문화 유리병에서 방황 세 번째 별 Drosophila 멜라노가스터를 추출하여 애벌레 Drosophila CNS를 해부하고 식염수의 200 마이크로 리터에 배치. 그런 다음, 미세 한 개의 포셉으로 입 후크를 잡고, 얇은 큐티큘러 층을 찢어 방지하기 위해, 가벼운 압력, 집게의 두 번째 쌍으로 구더기의 복부를 잡아.구더기의 코달 끝을 머리 부위에서 분리하고 구더기의 내장을 노출하기 위해 입 후크와 복부를 다른 방향으로 부드럽게 당깁니다. CNS는 기관및 소화관과 얽혀있을 것입니다. 분개로 소화관과 기관에서 CNS를 애타게합니다.구더기에서 드로소필라 중추 신경계의 해부는 성공을위한 중요한 단계입니다. 해부된 신경은 내림차순 모터 신경에 큰 손상없이 그대로해야합니다. 신경리에 부착 된 모터 신경의 큰 숫자는 기준선 발사 주파수를 증가시킬 것이다.필요한 경우, 수동으로 반나스 봄 가위로 뇌 엽에 CNS 후방을 위장하여 혈액 뇌 장벽을 중단. 편절제술은 사용되는 화학 물질의 생리적 특성에 기초하여 수행되어야한다. 레드 라인은 제안된 트랜섹션 포인트와 여기에 표시된 말초 신경 트렁크가 있는 방제 된 CNS입니다.먼저 유리 파이펫 전극을 보로실리케이트 유리 모세혈관에서 5~15메가옴의 저항성으로 끌어당깁니다. 200 마이크로리터의 식염수를 포함하는 왁스 챔버에 간질 CNS를 삽입합니다. 코팅되지 않은 곤충 핀을 접지 와이어로 납땜한 악어 클립으로 고정하고 핀을 식염수에 삽입하여 회로를 완성합니다.마이크로 조작기를 사용하여, 전극을 과기 CNS의 caudal 끝으로 방향을 지정합니다. 주변 신경 트렁크를 연결하기 전에 획득/분석 소프트웨어의 임계값 수준을 조정하여 배경 잡음제거합니다. 흡입 전극에 말초 신경을 그리려면 주사기에 약간의 음압을 가하십시오.데이터 수집 소프트웨어에서 레코딩을 시작하고 기준 발사 속도는 기준 발사 속도 데이터를 수집하기 전에 5분 동안 평형화합니다. 5분 후, 식염수와 차량의 200 마이크로리터를 추가하여 챔버의 총 부피를 400 마이크로리터에 가져와 제어 발사 속도를 기록합니다. 대조군 처리의 발사 패턴이 여기에 표시된 예와 유사하지 않은 경우 준비 및 기록을 폐기한다.3~5분 동안 기준선이 설정된 경우 식염수 200마이크로리터를 인출하고 식염수로 용해된 실험제의 마이크로리터 200을 추가합니다. 약물 및 최종 농도를 포함하는 코멘트를 포함시킴으로써 취득/분석 소프트웨어에서 약물 응용의 이 시간 지점에 레이블을 지정합니다. 여기에 DMSO에 노출되기 전과 후에 대표적인 신경 방출 흔적이 있습니다.화살표는 응용 프로그램의 시간을 나타냅니다. DMSO에 대한 제한된 응답이 보입니다. 프로톡소르의 투여량이 증가함에 따라 주사된 드로소필라 CNS의 스파이크 배출 빈도가 농도 의존적인 방식으로 증폭되는 반면, 신경우울제 GABA는 농도 의존적 방식으로 스파이크 배출 빈도를 감소시켰다.이 절차를 시도하는 동안, 그것은 전 생체 내 실험임을 기억하는 것이 중요합니다, 따라서 pH와 온도와 같은 식염수의 조건은 중추 신경계 준비의 장기간 된 활동에 중요하다. 마찬가지로, 외부 전기 활동의 부족, 효과적인 패러데이 케이지, 그리고 60 헤르츠 소음의 감소는이 분석의 성공에 매우 중요합니다. 이 분석서를 통해 수집된 데이터는 살충제의 특정 행동 모드를 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다.전압 클램프 전기생리학, 생화학 분석 및 추가 약리학적 분석과 같은 다른 방법을 통해 이러한 데이터의 후속 검증을 수행할 수 있다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophysiological Recording of The Central Nervous System Activity of Third-Instar Drosophila Melanogaster

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

전체 마운트의 배아 신경 계통의 시각화 Drosophila 태아

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

연구

신경과학

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

마우스의 중추 신경계에서 줄기 세포 주입의 Multimodal 이미징

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

중추 신경계에서 Transducing 전지 Lentiviral 벡터 제작

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

의 중추 신경계에 단일 세포의 라벨<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

에 중추 신경 시스템 복구를 조사하기 위해 상해 패러다임<em&gt; Drosophila</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; Labellar는 Sensilla 맛

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계의 생체 Optogenetic 자극

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

수동 CLARITY를 사용하여 마우스 중추 신경계의 광학 지우기

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...