Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

هذا العمل كان يدعمها المعاهد الوطنية للصحة (منح HD068130 R00 إلى جنوب غرب) ومركز أبحاث مرض السكري بالتيمور: الطيارين وجدوى منحة (جنوب غرب).

نقدم هنا، بروتوكولات مفصلة دهت بيليه إعداد والإدراج، والصحة الإنجابية والايض اختبار. الفئران المستخدمة في هذه الدراسة كانت خلفية مختلطة (C57/B6، CD1، 129Sv)، وتواصلت مع الغذاء والمياه libitum الإعلانية في دائرة ضوء/الظلام ح 14/10 في 24 درجة مئوية في برودواي البحوث بناء منشأة الحيوان في كلية جامعة ...

<ol>
	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

هايبراندروجينيسم من سمات رئيسية لمتلازمة تكيس المبايض. مستويات DHT المصل (اثنان إضعاف أعلى في الفئران دهت من الفئران لا دهت) المستخدمة في هذا البروتوكول هي أقل من تلك التي أبلغ عنها بغيرها من المحققين في الدراسات السابقة وهي محسوبة تناسبياً تقليد النساء مع متلازمة تكيس المبايض5</su...

هايبراندروجينيسم هو السمة المميزة لمتلازمة تكيس المبيض (بكس) وفقا لمعايير المعهد الوطني للصحة والاندروجين الزائد والمجتمع بكس (AE-متلازمة تكيس المبايض). المرأة مع متلازمة تكيس المبايض يجدون صعوبة في الحصول على الحوامل، وزادت من خطر مضاعفات الحمل1. حتى لو أنها تحصل على الحوامل، قد ذريتهم الإناث نتائج ضارة بصحة2،3. وقد وضعت نماذج حيوانية باستخدام مختلف استراتيجيات4،5،،من67،،من89،10،11 , 12 ونستعرض العديد من الميزات لمتلازمة تكيس المبايض (anovulation و/أو ضعف التسامح الجلوكوز والإنسولين) مع زيادة وزن الجسم والسمنة المرتبطة بحجم adipocyte تضخم وزيادة الوزن adipocyte. هناك اثنين من الاستراتيجيات الرئيسية لإنتاج النماذج الحيوانية المستخدمة لدراسة متلازمة تكيس المبايض. واحد هو العلاج مع مستويات عالية من الاندروجين مباشرة (حقن الاندروجين الخارجية/الإدراج) أو غير مباشر (مثل حظر تحويل الاندروجين إلى الإستروجين مع مثبط aromatase) بعد الولادة13. آخر طريق هايبريكسبوسوري الجنين من الاندروجين أثناء الحمل14،15 لدراسة الأبناء. على سبيل المثال، وضع الإناث ذرية من القرد الريسوسي16،17والأغنام18والقوارض المعرضين لمستويات الاندروجين الذكور خلال فترة داخل الرحم الصفات مثل متلازمة تكيس المبايض لاحقاً في الحياة. هذه النماذج إلى حد كبير تعزيز فهمنا للآثار الاندروجين مرتفعة، وبرمجة الجنين والرحم من الآثار البيئية. ومع ذلك، قد هذه النماذج القيود الخاصة بها: 1) الحيوانات وضع السمنة وذلك فمن الصعب فصل آثار هايبراندروجينيميا من السمنة الناجمة عن الصحة الإنجابية والخلل في التمثيل الغذائي؛ 2) قبل الحمل، تظهر النساء مع متلازمة تكيس المبايض الفعل مستويات عالية من الاندروجين، وهكذا تعرضت بويضات الاندروجين الزائد قبل الإخصاب؛ 3) الجرعات الدوائية التستوستيرون (T) أو ديهدروتستوسترون (دهت) تستخدم بعد الولادة أو خلال فترة الحمل قد لا تعكس بيئة الاندروجين متلازمة تكيس المبايض. تم قياس مستويات هرمون التستوستيرون و DHT في سائل جرابي المبيض و/أو المصل، والتستوستيرون ومستويات DHT 1.5 إلى 3.9 إضعاف أعلى بين النساء مع متلازمة تكيس المبايض5،،من1920،21 ،،من2223 مقارنة بالمرأة التي لم تتأثر. لقد أنشأنا ماوس الكبار نموذجي23،24،25 أن يتطور الإنجابية والايض الخلل في خلال أسبوعين بدء التعرض المزمن دهت من الإدراج بيليه بطول 4 مم كريستال مسحوق دهت (الطول الكلي لبيليه 8 ملم). ينتج هذا النموذج مستويات DHT المصل التي على وشك 2-fold أعلى (يشار إليها على أنها 2xDHT) مقارنة بالفئران التحكم دون علاج دهت. الفئران 2xDHT لا يحمل التعديلات من استراديول المصل القاعدي، التستوستيرون، LH، وهل عدم وضع السمنة، وإظهار وزن المبيض مماثلة، مصل مستويات الكولسترول، والأحماض الدهنية الحرة، اللبتين، TNFα وايل-623،24، 25 نسبة إلى عناصر التحكم حتى يصل إلى 3.5 شهور بعد دهت الإدراج23،،من2425. بالإضافة إلى ذلك، بالتزاوج الإناث التي وضعت بالفعل ملامح متلازمة تكيس المبايض، علينا دراسة أثر بيئة الأمهات هايبراندروجينيك عن الصحة الإنجابية والأيضية ل ذرية15.
هذا النموذج الجديد (ذات الصلة بمعايير المعاهد الوطنية للصحة والمجتمع عبد اللطيف-متلازمة تكيس المبايض) نماذج المرض بإنتاج مماثلة نسبيا مستويات الاندروجين إلى أولئك النساء مع "متلازمة تكيس المبايض" 2-3-fold التستوستيرون أعلى أو مستويات DHT مقارنة بالمرأة التي لم تتأثر. ومع ذلك، يتم الاحتفاظ هذا النموذج دهت الخارجية المستمرة وليس من هايبراندروجينيسم الذاتية مبرمجة حالما يتم سحب دهت. والهدف العام لهذه المادة هو التركيز على 1) كيفية جعل بيليه دهت؛ 2) كيفية توليد العجاف-متلازمة تكيس المبايض مثل الماوس النموذجي؛ 3) استراتيجيات تقييم ذرية الإناث من هذه السدود. القياسات والتقييم تعمل الأخرى لم تعالج في هذه المخطوطة ولكن يمكن العثور عليها في5،15،،من2324،،من2526.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

هايبراندروجينيميا يلعب دوراً حاسما في الوظيفة الإنجابية والايض لدى الإناث، وهي السمة المميزة لمتلازمة تكيس المبيض. وضع نموذج ماوس مثل متلازمة تكيس المبايض الهزيل الذي يحاكي النساء مع متلازمة تكيس المبايض مجدية سريرياً. في هذا البروتوكول، يصف لنا نموذج من هذا القبيل. عن طريق إدراج بطول 4 ملم من دهت (ديهدروتستوسترون) كريستال مسحوق بيليه (الطول الكلي لبيليه 8 ملم)، واستبدال شهريا، نحن قادرون على إنتاج نموذج ماوس مثل متلازمة تكيس المبايض مع المصل دهت مستويات 2 إضعاف أعلى من الفئران غير مزروع مع دهت (لا-DHT). لاحظنا الخلل في الصحة الإنجابية والتمثيل الغذائي دون تغيير وزن الجسم وتكوين الجسم. وفي حين نستعرض بدرجة عالية من العقم، مجموعة فرعية صغيرة من هذه الفئران الإناث مثل متلازمة تكيس المبايض يمكن الحصول على الحوامل وذريتهم إظهار تأخر سن البلوغ وزيادة التستوستيرون كبالغين. هذا النموذج مثل متلازمة تكيس المبايض العجاف الماوس أداة مفيدة لدراسة الفسيولوجيا المرضية لمتلازمة تكيس المبايض والذرية من هذه السدود مثل متلازمة تكيس المبايض.

مصل مستويات DHT واختبار تحمل الجلوكوز
قيست مستويات DHT من مصل الدم التي جمعت كلا أليسا، ومرض التصلب العصبي المتعدد-LC وفقا للبروتوكول 1.24 – 1.25، و 2.9 من 3.0. القيم المطلقة دهت تختلف بين الطيف الكتلي وإليزا، مع ذلك، حظيرة النسبي (نحو إضعاف) مقابل دهت...

Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

يصف لنا تطوير نموذج الماوس مثل متلازمة تكيس المبايض العجاف مع بيليه ديهدروتستوسترون لدراسة الفسيولوجيا المرضية لمتلازمة تكيس المبايض والذرية من هذه السدود مثل متلازمة تكيس المبايض.

نموذج الماوس هايبراندروجينيك لدراسة متلازمة تكيس المبيض

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الاستنساخ. والغدد الصماء. وتنطبق على دراسة متلازمة المبيض المتعدد الكيسات أو متلازمة تكيس المبايض وفرط الاندروجين.وميزة هذا technic هو أنه يسهل متسقة, موحد, الإفراج عن المدى الطويل من الهرمونات بطريقة فعالة مكلفة. JHUs علاج الإجراء سيكون بينغ شيويه ، وهو فني من مختبري. لإعداد ديهدروتستوسترون أو دهت بيليه، استخدم شفرة حلاقة لقطع قطعة 15 ملليمتر من أنابيب السيليكون.واستخدم حقنة ثلاثية المليلتر مجهزة بإبرة قياس حادة 20 لحقن السيليكون اللاصق الطبي من 2 إلى 5 ملليمترات في نهاية واحدة من الأنبوب. السماح لتجفيف الأنابيب بين عشية وضحاها. وتحقق من فقاعات الهواء على نهاية مختومة.ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة صب مسحوق DHT في زورق من البلاستيك في flowhood. اعجاب فتح نهاية لاصقة توج أنبوب في مسحوق. باستخدام مشبك ورق مُستقيم كبير، قم بتقبيد المسحوق إلى أسفل الأنبوب، حتى يصل DHT إلى العمق التجريبي المناسب.ثم ختم الجانب المفتوح من الأنبوب مع السيليكون بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، وقطع كل جانب مختومة للحصول على طول اثنين ملليمتر من السيليكون على جانبي DHT ولا الكريات التحكم DHT. ثم تخزين الكريات في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر ملفوفة مع احباط في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر.ل PCOS نموذج الماوس جيل موازين تصل إلى 20 دهت أو الكريات التحكم في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر منفصلة تحتوي على 30 ملليلتر من 0.9 في المئة ملحي لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية. في اليوم التالي، تأكيد عدم الاستجابة لقرصة إصبع في تخدير شهرين فأر أنثى من العمر واستخدام الشاش العقيم لإدارة التتابع Povidone-اليود و 70 في المئة الإيثينول الدعك إلى منطقة الجراحة. بعد ذلك، قم بعمل شق من خمسة ملليمترات من خلال الجلد بالقرب من الرقبة.واستخدم 10 مقياس trocar لجعل نفق 15 ملليمتر في الاتجاه الرسترال. استخدام trocar لإدخال بيليه dorsally في النفق وختم شق مع لاصق الجراحية. يدويا تقريب حواف الجرح مع ملقط واستخدام ضربات بالفرشاة لطيف لتطبيق ثلاث طبقات رقيقة من لاصق السائل إلى سنتيمتر واحد من كل جانب من حواف الجرح معارضة.ثم ضع الفأرة وحدها في قفص على وسادة الحرارة مع مراقبة حتى إعادة شغل كامل. استبدال بيليه كل أربعة أسابيع للحفاظ على مستوى ثابت من التعرض للاندروجين. بعد ثلاثة أيام من إدخال بيليه، استخدم ماصة P10 لبخ عشرة ميكرولترات من المالحة العقيمة في تجويف المهبل واستخدام طرف ماصة لاسترداد الملحية على الفور.انشر عينة الخلية الملوحة المهبلية على شريحة مسمّاة. والسماح للملوحة لتجف في درجة حرارة الغرفة. إصلاح الشرائح المجففة في حاوية من 100 في المئة ethynol لمدة خمس دقائق على الأقل.ثم وصمة عار الشرائح لمدة دقيقة واحدة كل في المخزن المؤقت B وC العازلة من مجموعة تلوين dif سريعة. في نهاية حضانة C العازلة غسل الشرائح مع مياه الصنبور لمدة ثلاث ثوان وتجفيفها في درجة حرارة الغرفة. لتحديد estrous عرض دوري الشرائح تحت الهدف عشر مرات من المجهر الخفيف.حساب الأيام في كل مرحلة والقسمة على إجمالي عدد الأيام لحساب النسبة المئوية للوقت في كل مرحلة. لاختبار تحمل الجلوكوز، 20 يوما DHT الإدراج، صيام الفئران بين عشية وضحاها. وزن الفئران في صباح اليوم التالي، واستخدام glucometer وشرائط اختبار لقياس مستوى السكر في الدم في الوريد الذيل.حقن الفئران مع غرامين لكل كيلوغرام من وزن الجسم 20 في المئة دكستروز. ثم قياس مستوى الجلوكوز من العينات الدم الذيل الوريدي في 15, 30, 60, 90, 120 دقيقة بعد إدارة دكستروز. للحصول على ذرية أنثى من DHT إدراج السيدات، حرك الماوس الإناث لاختبارها في القفص مع ذكر الخصبة ثبت في اليوم 15، بعد إدخال بيليه.توثيق وزن الجسم dames كل أسبوع لتحديد ما إذا كان الماوس هو حامل. في اليوم التالي للولادة سبعة، تراجع تلميح lancet في لصق الوشم ووضع علامة كل الجرو مع وشم على إصبع الاصبع. وزن الفئران ملحوظ كل سبعة أيام حتى 70 يوما من العمر.بين تاريخ ما بعد الولادة 12 إلى 16، الأذن لكمة الفئران لترقيمها وفقا للنظام كما هو موضح في الشكل. لتمييز الجنس، قم بفحص الجانب البطني لكل فأرة ذات علامات. سيكون لدى الإناث حلمات مرئية.لجمع عينات الدم لمختلف التحليلات المصب استخدام لانسيت لجمع حجم التجريبية التقريبية من الدم بين تسعة وعشرة صباحا عن طريق نزيف الوريد تحت المنازل. وطاردة مركزية العينات للسماح بجمع المصل. ثم تخزين عينات الأمصال في أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغرى 1.5 ملليلتر في ناقص 80 درجة مئوية حتى تحليلها.لتقييم سن البلوغ في النسل الأنثوي DHT ، كل يوم بعد الفوم في يوم 21 بعد الولادة ، تحقق من الفتحة المهبلية عن طريق الفحص البصري. واستخدام الكوادر لقياس المسافة التناسلية للأنو. على الرغم من أن القيم المطلقة لمصل DHT تختلف بين قياس الطيف الشامل وتحليل إليسا، فإن التغيير الشعبي النسبي لـ DHT مقابل الإدراج غير DHT مشابه من كل من المقايسات وعبر التجارب.يتم زيادة مستويات DHT بشكل كبير من مرحلة ما قبل الحمل من خلال الحمل في كل من DHT ولا الفئران DHT. ومع ذلك، مستويات DHT هي مزدوجة أعلى في الفئران DHT مقارنة مع عدم وجود الفئران DHT في كل من نقاط الوقت قبل الحمل والحملي. تظهر بنات DHT الكبار اختلافات في الوظيفة الإنجابية.على سبيل المثال ، تعطلت دوري eestrous بالمقارنة مع الكبار لا بنات DHT تعاني من أوقات أطول بكثير في ميتستروس يموت وأقل من الوقت في الموالية esterous وestrous. أثناء محاولة هذا الإجراء من المهم أن نتذكر لاحتضان الكريات لمدة 24 ساعة قبل أن يتم استخدامها للإفراج عن هرمون موحد. بعد هذا الإجراء، يمكن أيضا فحص العواقب الإنجابية والأيضية للتعرض DHT.بعد تطورها ، مهد هذا التقني الطريق للباحثين في مجال علم الغدد التناسلية وتفاعلات الجنين الأم لدراسة متلازمة تكيس المُتَسَنّى وتأثير فرط الاندروجين المنخفض في الفئران الأنثوية. لا تنس أن العمل مع DHT يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات مثل ارتداء القفازات وقناع ونظارات واقية، والعمل في غطاء واقية من السلامة الحيوية، وينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

توليد كريسبر / Cas9 ساطة Monoallelic الحذف لدراسة وظيفة محسن في الخلايا الجذعية الجنينية الماوس

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

صمام عزل وتوصيف للفئران الابتدائي الخلايا الخلالي: نموذج جديد لدراسة تكلس الصمام الابهري

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

الجامعة-جبل [كنفوكل] الفحص المجهري للجلد الإذن الكبار: نظام نموذجي لدراسة Morphogenesis المتفرعة العصبية والأوعية الدموية وتوزيع الخلايا المناعية

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

زراعة أنسجة المبيض تصور الظواهر في المبيض الماوس

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

نموذج تكون العظم الهاء الماوس

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

استخدام زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم لتقييم أصل متلازمة ميلوديسبلاستيك

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

نموذج في المختبر نظام التروية التوازي-لوحة لدراسة البكتيريا التمسك Graft الأنسجة

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

أسلوب في فيفو لدراسة سلامة حاجز الدم-الخصية الماوس

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

الكبار الماوس أرقام بتر وتجديد: نموذج بسيط للتحقيق في تكوين بلاسيما الثدييات والتحجر intramembranous

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...