Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Institutes of Health (tilskud R00-HD068130 til S.W.) og Baltimore Diabetes Research Center: piloter og gennemførlighed Grant (til S.W.).

Vi præsenterer her, detaljerede protokoller for DHT pellet forberedelse og indsættelse, og reproduktive og metaboliske test. Musene brugt i denne undersøgelse var en blandet baggrund (C57/B6, CD1, 129Sv) og blev opretholdt med mad og vand ad libitum i en 14/10 h lys/mørke cyklus på 24 ° C i Broadway forskning bygning dyr facilitet på Johns Hopkins University School of Medicin. Alle procedurer blev godkendt af Johns Hopkins University Animal Care og brug udvalget.
1. Opret PCOS-li...

<ol>
	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

Hyperandrogenism er et centralt element af PCOS. Serum DHT niveauer (to folde højere i DHT mus end i no-DHT mus) anvendes i denne protokol er lavere end dem, der indberettes af andre efterforskere i tidligere undersøgelser og er kalibreret til at efterligne forholdsmæssigt kvinder med PCOS5,19, 20,21. I modsætning til andre modeller, er denne 2-fold DHT model ændrer ikke kropsvægt og hel...

Hyperandrogenism er kendetegnende for polycystisk ovariesyndrom (PCOS) Ifølge NIH kriterier og af Androgen overskydende og PCOS (AE-PCOS) samfund. Kvinder med PCOS har svært ved at blive gravid og har øget risiko for graviditet komplikationer1. Selv hvis de bliver gravid, har deres kvindelige afkom en sundhedsskadelige resultater2,3. Dyremodeller er blevet udviklet ved hjælp af forskellige strategier4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 og udstiller mange funktioner af PCOS (anovulation, og/eller nedsat glukose og insulin tolerance) med øget kropsvægt og fedme forbundet med øget adipocyt vægt og udvidede adipocyt størrelse. Der er to store strategier til at producere dyremodeller, der bruges til at studere PCOS. En er behandling med høje niveauer af androgener direkte (eksogene androgen indsprøjtning/indsættelse) eller indirekte (f.eks. blokering androgen konvertering til østrogen med aromatasehæmmer) efter fødsel13. En anden er af føtal hyperexposure af androgener under drægtigheden14,15 at studere afkommet. For eksempel, udvikle kvindelige afkom fra rhesus abe16,17, får18og gnavere udsat for mandlige androgen intrauterin periode PCOS-lignende træk senere i livet. Disse modeller betydeligt udvidet vores forståelse af forhøjede androgen virkning, og føtal programmering og uterin miljøvirkninger. Men disse modeller har deres egne begrænsninger: 1) dyr udvikler fedme og det er derfor vanskeligt at adskille virkningerne af hyperandrogenemia fra fedme induceret reproduktiv og metabolisk dysfunktion; 2) før graviditeten, kvinder med PCOS udstille allerede høje niveauer af androgen, således oocyter har været udsat for androgen overskydende før befrugtningen; 3) de farmakologiske doser af testosteron (T) eller dihydrotestosteron (DHT) anvendes efter fødslen eller under drægtigheden kan ikke afspejle androgen miljøet af PCOS. Testosteron og DHT niveauer er blevet målt i æggestokkene follikulært væske og/eller serum, og testosteron og DHT niveauer er 1,5 til 3,9 gange højere hos kvinder med PCOS5,19,20,21 ,22,23 sammenlignet med kvinder, upåvirket. Vi skabt en voksen mus model23,24,25 , udvikler reproduktiv og metabolisk dysfunktion senest to uger efter indledningen af kronisk DHT eksponering fra indsættelse af en pellet med 4 mm længde krystal DHT pulver (totallængde pellet er 8mm). Denne model producerer serum DHT niveauer, der er om 2-fold højere (benævnt 2xDHT) end kontrol mus uden DHT behandling. 2xDHT mus, udviser ikke ændringer af basal serum østradiol, testosteron, LH og ikke udvikle fedme, og Vis lignende æggestokkene vægt, serumniveauer af kolesterol, frie fedtsyrer, leptin, TNFα og IL-623,24, 25 forhold til styrer selv op til 3,5 måneder efter DHT Indsættelse23,24,25. Derudover ved parring hundyr, der allerede har udviklet funktioner af PCOS, kan vi studere virkningen af en hyperandrogenic maternel miljø på den metaboliske og reproduktiv sundhed af afkom15.
Dette nye paradigme (relevant for NIH og AE-PCOS samfund kriterier) modeller sygdommen ved at producere forholdsvis ensartede niveauer af androgener til dem af kvinder med PCOS 2 - til 3-fold højere testosteron eller DHT niveauer i forhold til upåvirket kvinder. Men denne model vedligeholdes af løbende eksogene DHT og ikke fra programmeret endogene hyperandrogenism når DHT er trukket tilbage. Det overordnede mål med denne artikel er at fokusere på 1) hvordan man laver DHT pellet; 2) Hvordan til at generere en lean-PCOS som musen model; 3) strategier til at evaluere kvindelige afkom fra disse dæmninger. Andre målinger og vurdering af fænotyper er ikke behandlet i dette manuskript, men kan findes i5,15,23,24,25,26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

Hyperandrogenemia spiller en afgørende rolle i reproduktiv og metabolisk funktion hos kvinder og er kendetegnende for polycystisk ovariesyndrom. Udvikle en lean PCOS-lignende musemodel, der efterligner kvinder med PCOS er klinisk meningsfulde. I denne protokol beskriver vi sådan en model. Ved at indsætte en 4 mm længde af DHT (dihydrotestosteron) krystal pulver pellet (totallængde pellet er 8 mm), og erstatte det månedlige, vi er i stand til at producere en PCOS-lignende musemodel med serum DHT niveauer 2 gange højere end mus ikke implanteret med DHT (no-DHT). Vi observerede reproduktiv og metabolisk dysfunktion uden at ændre kropsvægt og kropssammensætning. Mens udviser en høj grad af infertilitet, en lille delmængde af disse PCOS-lignende hunmus kan blive gravide og deres afkom Vis forsinket pubertet og øget testosteron som voksne. Denne PCOS-lignende musemodel for lean er et nyttigt værktøj til at studere Patofysiologi af PCOS og afkom fra disse PCOS-lignende dæmninger.

Serum DHT niveauer og glukose tolerance test
DHT niveauer blev målt fra indsamlede serum ved både ELISA og LC-MS ifølge protokollen 1,24 – 1,25, og 2,9, 3.0. DHT absolutte værdier er forskellige mellem massespektrometri og ELISA, men den relative fold (omkring 2-fold) af DHT vs no-DHT Indsættelse svarer fra begge assays og på tværs af eksperimenter15,23,...

Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Vi beskriver udviklingen af et lean PCOS-lignende musemodel med dihydrotestosteron pellet at studere Patofysiologi af PCOS og afkom fra disse PCOS-lignende dæmninger.

En Hyperandrogenic musen Model til at studere polycystisk ovariesyndrom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare vigtige spørgsmål inden for reproduktion. Og endokrinologien. Og gælder for studiet af polycystisk ovariesyndrom eller PCOS og hyperandrogenism.Fordelen ved denne teknik er, at det letter en konsekvent, ensartet, langsigtet frigivelse af hormoner på en dyr effektiv måde. JHUs behandle proceduren vil være Ping Xue, en tekniker fra mit laboratorium. For dihydrotestosterone eller DHT pellet forberedelse, bruge et barberblad til at skære en 15 millimeter stykke silikone slanger.Og brug en tre milliliter sprøjte udstyret med en stumpet 20 gauge nål til at injicere to til fem millimeter medicinsk klæbende silikone i den ene ende af røret. Lad slangen tørre natten over. Og tjek for luftbobler på den forseglede ende.Iført passende personlige værnemidler hæld DHT pulver i en plastik wayboat i flowhood. Imponer den åbnede ende af det klæbende rør i pulveret. Ved hjælp af en stor glatpapirclips, tamp pulveret ned i slangen, indtil DHT når den relevante eksperimentelle dybde.Derefter forsegle den åbnede side af røret med silikone natten over. Den næste morgen, skæres hver forseglet side for at opnå en to millimeter længde af silikone på begge sider af DHT og ingen DHT kontrol pellets. Opbevar derefter pellets i det 50 milliliter koniske rør pakket med folie ved stuetemperatur i op til tre måneder.For PCOS musemodel generation ækvilibrer op til 20 DHT eller kontrol pellets i separate 50 milliliter koniske rør, der indeholder 30 milliliter 0,9 procent saltvand i 24 timer ved 37 grader Celsius. Den næste dag, bekræfte manglende reaktion på tå knivspids i en bedøvet to måneder gammel kvindelig mus og bruge sterile gaze til at administrere sekventiel Povidone-jod og 70 procent ethynol scrubs til det kirurgiske område. Dernæst lave en fem millimeter snit gennem huden nær halsen.Og brug en ti gauge trokar til at lave en 15 millimeter tunnel i rostral retning. Brug trokaren til at indsætte en pellet dorsally i tunnelen og forsegle snittet med det kirurgiske klæbemiddel. Manuelt tilnærme sårkanter med sceægter og bruge blide børstning slagtilfælde til at anvende tre tynde film lag af flydende lim til en centimeter ud fra hver side af de modsatte sårkanter.Derefter placere musen alene i et bur på en varmepude med overvågning, indtil fuld recumbency. Udskiftning af pellet hver fjerde uge for at opretholde et konstant niveau af androgen eksponering. Tre dage efter pellet indsættelse, bruge en p10 pipette til at sprøjte ti mikroliter af sterilt saltvand ind i vaginal hulrum og bruge pipette spidsen til straks at inddrive saltvand.Spred den vaginale celle saltvandsprøve på et mærket dias. Og lad saltvandet tørre ved stuetemperatur. Fix de tørrede dias i en beholder med 100 procent ethynol i mindst fem minutter.Derefter plette dias i et minut hver i buffer B og buffer C fra en dif-hurtig farvning kit. Ved udgangen af bufferen C inkubation vaskes rutsjebanerne med vand fra hanen i tre sekunder og tørres ved stuetemperatur. For at bestemme estrous cyclicity se dias under de ti gange mål for et lys mikroskop.Tæl dagene i hver fase, og divider med det samlede antal dage for at beregne procenttiden på hvert trin. For at teste glukosetolerance, 20 dage DHT indsættelse, hurtig musene natten over. Vej musene næste morgen, og bruge en glucometer og test strimler til at måle basilikum glukose niveau af hale vene blod.Injicer musene med to gram pr kg kropsvægt på 20 procent dextrose. Derefter måle glukoseniveauet af hale vene blodprøver på 15, 30, 60, 90, 120 minutter efter dextrose administration. For at erhverve kvindelige afkom fra DHT indsat dames, flytte den kvindelige mus til testet i buret med en gennemprøvet frugtbar mand på dag 15, efter pellet indsættelse.Dokumentere dames kropsvægt hver uge for at afgøre, om musen er gravid. På post-natal dag syv, dyppe en lancet tip i tatovering pasta og markere hver hvalp med en tatovering på tåen. De mærkede mus afvejes hver syvende dag indtil 70 dage.Mellem postnatal dato 12 til 16, øre punch musene til at nummerere dem i henhold til systemet som vist i figuren. For at skelne køn, undersøge ventrale side af hver mærket mus. Hunnerne vil have synlige brystvorter.At indsamle blodprøver til forskellige downstream analyser bruge en lancet til at indsamle den omtrentlige eksperimentelle volumen af blod mellem ni og ti am ved submandibulære vene blødning. Og centrifuge prøverne til at tillade serum indsamling. Derefter opbevares serumprøverne i 1,5 milliliter mikrocentrifugerør ved minus 80 grader Celsius, indtil de analyseres.At vurdere puberteten i DHT kvindelige afkom, hver dag efter fravænning på postnatal dag 21, kontrollere vaginal åbning ved visuel inspektion. Og bruge kalibre til at måle ano-genital afstand. Selv om de absolutte værdier af serum DHT er forskellige mellem massespektrometri og Elisa analyse, den relative folkemusik ændring af DHT versus no-DHT indsættelse er ens fra både analyser og på tværs af eksperimenter.DHT niveauer er signifikant øget fra præ-undfangelse gennem graviditet i både DHT og ingen DHT mus. Men, DHT niveauer er dobbelt højere i DHT mus i forhold til ingen DHT mus på både præ-conceptional og svangerskabstidspunkter. Voksne DHT døtre udviser forskelle i reproduktiv funktion.For eksempel, forstyrret eestrous cyclicity sammenlignet med voksne ingen DHT døtre oplever betydeligt længere gange i metestrus diestrus og mindre tid i pro-esterous og esterous. Mens du forsøger denne procedure er det vigtigt at huske at inkubere pellets i 24 timer, før de bruges til ensartet frigivelse af hormonet. Efter denne procedure, de reproduktive og metaboliske konsekvenser af DHT eksponering kan også undersøges.Efter det udvikling, denne teknik banede vejen for forskere inden for endrochronologi og moderens føtale interaktioner til at studere PCOS og virkningen af lavt niveau hyperandrogenism i kvindelige mus. Glem ikke, at arbejde med DHT kan være yderst farligt, og de forholdsregler, såsom at bære handsker og en maske og beskyttelsesbriller, og arbejder i en bio-sikkerhed hætte, bør altid tages, mens du udfører denne procedure.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Generering CRISPR / Cas9 Mediated monoallelisk Sletninger til Studieinformationen Enhancer funktion i mus embryonale stamceller

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolering og karakterisering af primære rotte ventil interstitielle celler: en ny Model til at studere aortaklappen forkalkning

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Hele-mount Konfokal mikroskopi for voksne øre hud: et modelsystem til at studere Neuro-kar forgrening morfogenese og immun celle Distribution

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic kultur metode til at studere udviklingen af embryonale kylling væv

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Æggestokkene væv kultur at visualisere fænomener i mus æggestok

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

En mus distraktion Osteogenesis Model

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Brug af hæmatopoietisk stamcelletransplantation at vurdere oprindelsen af myelodysplastisk syndrom

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro Model af en Parallel-plade Perfusion System at studere bakteriel tilslutning til at pode væv

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

En In Vivo -metode til at studere mus blod-Testis barriere integritet

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Amputation og regenerering af voksent muse ciffer: en simpel model til undersøgelse af dannelsen af pattedyrs blastema og Intramembranøs ossifikation

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...