Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
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Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (subventions R00-HD068130 à S.W.) et le centre de recherches de diabète Baltimore : pilotes et subvention de faisabilité (à S.W.).

Nous présentons ici des protocoles détaillés pour une insertion et préparation de boulette DHT et pour tester les reproducteurs et métaboliques. Les souris utilisées dans cette étude ont un fond mixte (C57/B6, CD1, 129Sv) et ont été maintenues avec de la nourriture et eau ad libitum dans un cycle lumière/obscurité de 14/10 h à 24 ° C dans l’animalerie de Broadway Research Building à la Johns Hopkins University School of Médecine. Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité de l?...

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	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

Hyperandrogénie est une caractéristique essentielle du SOPK. Les niveaux DHT de sérum (deux fois supérieur chez les souris de la DHT que chez les souris no-DHT) utilisés dans le présent protocole sont inférieurs à ceux rapportés par d’autres chercheurs dans des études antérieures et sont étalonnés pour imiter proportionnellement les femmes atteintes de SOPK5,19, 20,21. Contraire...

Hyperandrogénie est la marque distinctive du syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) selon des critères de NIH et de la société SOPK (AE-SOPK) et de l’excès d’androgènes. Les femmes atteintes de SOPK ont du mal à tomber enceinte et ont augmenté le risque de complications de grossesse1. Même si elles tombent enceintes, leur progéniture femelle aurait une santé résultats2,3. Des modèles animaux ont été développés en utilisant diverses stratégies4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 et présentant de nombreuses caractéristiques de PCOS (anovulation, et/ou intolérance au glucose et d’insuline) avec augmentent du poids corporel et de l’obésité lié avec la taille de l’adipocyte élargie et une augmentation du poids adipocytaire. Il y a deux grandes stratégies pour produire des modèles animaux qui servent à étudier le SOPK. L’un est un traitement avec des niveaux élevés d’androgènes directement (androgènes exogènes injection/insertion) ou indirectement (par exemple de bloquer la conversion des androgènes en œstrogènes avec inhibiteur de l’aromatase) après naissance13. Une autre est de hyperexposure fœtale des androgènes au cours de la gestation14,15 pour étudier la descendance. Par exemple, la progéniture femelle de singe rhésus16,17, mouton18et les rongeurs exposés à des niveaux masculins d’androgène au cours de la période intra-utérine développer des traits de SOPK-comme plus tard dans la vie. Ces modèles a considérablement accru notre compréhension des effets élevés d’androgènes et programmation fœtale et effets sur l’environnement utérins. Cependant, ces modèles ont leurs propres limitations : 1) les animaux développent l’obésité et il est donc difficile de séparer les effets de l’hyperandrogénie de l’obésité induite par la reproduction et dysfonctionnement métabolique ; 2) avant la grossesse, les femmes atteintes de SOPK présentent déjà des niveaux élevés d’androgène, donc des ovocytes ont été exposés aux androgènes excès avant la fécondation ; 3) aux doses pharmacologiques de testostérone (T) ou de la dihydrotestostérone (DHT) utilisé après la naissance ou pendant la gestation peuvent ne pas refléter l’environnement androgènes du SOPK. Testostérone et DHT ont été mesurées dans le liquide folliculaire ovarien et/ou de sérum et de testostérone et les niveaux DHT sont 1,5 à 3,9 fois plus élevée chez les femmes atteintes de SOPK5,19,20,21 ,22,23 , comparée aux femmes affectées. Nous avons créé une souris adulte modèle23,24,25 qui développe des dysfonctions métaboliques et reproduction dans les deux semaines de l’ouverture d’une exposition chronique de DHT d’insertion d’une pastille de 4 mm de longueur de poudre DHT de cristal (longueur totale du pellet est 8mm). Ce modèle produit sériques DHT qui sont environ 2 fois plus élevé (appelés 2xDHT) que celle des souris témoins sans traitement de DHT. Les souris 2xDHT ne présentent pas d’altérations de l’estradiol sérique basale, testostérone, LH et do ne pas développer l’obésité et indique similaire poids ovarienne, les taux sériques de cholestérol, acides gras libres, leptine, TNFα et IL-623,24, 25 relatif à contrôle même jusqu'à 3,5 mois après insertion de DHT23,24,25. En outre, en s’accouplant les femelles qui ont déjà développé des caractéristiques du SOPK, nous pouvons étudier l’impact d’un environnement maternel de hyperandrogenic sur la santé génésique et métabolique de la progéniture15.
Ce nouveau paradigme (pertinent pour les critères de NIH et de la société AE-SOPK) modèles de la maladie en produisant des niveaux relativement similaires d’androgènes à ceux des femmes avec SOPK 2 - à 3 fois plus élevé de testostérone ou DHT comparée aux femmes affectées. Cependant, ce modèle est maintenu par la DHT exogène continuelle et non d’hyperandrogénie endogène programmé une fois que la DHT est retirée. L’objectif général du présent article est de mettre l’accent sur la 1) Comment faire pour que le diabolo DHT ; 2) Comment générer un maigre-SOPK comme modèle de souris ; 3) stratégies pour évaluer la progéniture femelle de ces barrages. Autres mesures et évaluation des phénotypes ne sont pas abordées dans ce manuscrit, mais peuvent être trouvées en5,15,23,24,25,26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

Hyperandrogénie joue un rôle essentiel dans la fonction de reproduction et le métabolisme chez les femmes et est le signe distinctif du syndrome des ovaires polykystiques. Élaboration d’un modèle de souris de SOPK type maigre qui imite les femmes atteintes de SOPK est cliniquement significative. Dans ce protocole, nous décrivons un tel modèle. En insérant une longueur de 4 mm de pastille de poudre cristal DHT (dihydrotestostérone) (longueur totale de pellet est 8 mm), et remplacer tous les mois, nous sommes en mesure de produire un modèle de souris de SOPK type avec pli de niveaux 2 de DHT sérique plus élevé que les souris ne pas implantés avec DHT (no-DHT). Nous avons observé des dysfonctions métaboliques et reproduction sans changer le poids corporel et la composition corporelle. Bien que présentant un degré élevé de l’infertilité, un petit sous-ensemble de ces souris femelles de type SOPK peut tomber enceinte et leur progéniture montre la puberté retardée et une augmentation de testostérone en tant qu’adultes. Ce modèle de souris maigre SOPK-like est un outil utile pour étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.

Sérique de la DHT et test de tolérance au Glucose
Les niveaux de DHT sont mesurées de sérum prélevé par les deux ELISA et par LC-MS selon protocole 1,24 – 1,25 et 2.9, 3.0. Les valeurs absolues DHT sont différents entre la spectrométrie de masse et ELISA, cependant, le pli relative (environ 2 fois) de DHT vs insertion no-DHT est similaire de deux essais et à travers des expériences15,<...

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A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Les auteurs décrivent le développement d’un modèle de souris SOPK type maigre avec une boulette de dihydrotestostérone afin d’étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.

Un modèle de souris Hyperandrogenic d’étudier le Syndrome des ovaires polykystiques

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la reproduction. Et l’endocrinologie. Et sont applicables à l’étude du syndrome des ovaires polykystiques ou pcos et hyperandrogénie.L’avantage de cette technique est qu’elle facilite une libération cohérente, uniforme et à long terme des hormones d’une manière efficace coûteuse. JHUs traitant la procédure sera Ping Xue, un technicien de mon laboratoire. Pour la préparation de granulés de dihydrotestostérone ou de DHT, utilisez une lame de rasoir pour couper un morceau de tube de silicone de 15 millimètres.Et utilisez une seringue de trois millilitres équipée d’une aiguille émoussée de calibre 20 pour injecter du silicone adhésif médical de deux à cinq millimètres dans une extrémité du tube. Laisser sécher le tube toute la nuit. Et vérifiez s’il y a des bulles d’air à l’extrémité scellée.Le port de l’équipement de protection individuelle approprié verser la poudre DHT dans un bateau de chemin en plastique dans le flowhood. Impressionnez l’extrémité ouverte du tube plafonné adhésif dans la poudre. À l’aide d’un grand trombone redressé, remamez la poudre dans le tube, jusqu’à ce que la DHT atteigne la profondeur expérimentale appropriée.Ensuite, sceller le côté ouvert du tube avec du silicone pendant la nuit. Le lendemain matin, couper chaque côté scellé pour obtenir une longueur de deux millimètres de silicone des deux côtés de la DHT et pas de granulés de contrôle DHT. Conservez ensuite les granulés dans le tube conique de 50 millilitres enveloppé de papier d’aluminium à température ambiante jusqu’à trois mois.Pour la génération de modèles de souris PCOS, équilibrer jusqu’à 20 DHT ou contrôler les granulés dans des tubes coniques distincts de 50 millilitres contenant 30 millilitres de salin de 0,9 % pendant 24 heures à 37 degrés Celsius. Le lendemain, confirmer l’absence de réponse au pincement des orteils chez une souris femelle anesthésiée de deux mois et utiliser de la gaze stérile pour administrer l’iode séquentiel povidone et 70 pour cent de gommages d’éthynol à la zone chirurgicale. Ensuite, faire une incision de cinq millimètres à travers la peau près du cou.Et utilisez un trocar de dix jauges pour faire un tunnel de 15 millimètres dans la direction rostrale. Utilisez le trocart pour insérer une pastille dorsalement dans le tunnel et sceller l’incision avec l’adhésif chirurgical. Rapprochez manuellement les bords de la plaie avec des forceps et utilisez des coups de brossage doux pour appliquer trois couches minces de film d’adhésif liquide à un centimètre de chaque côté des bords de la plaie opposés.Placez ensuite la souris seule dans une cage sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce que la charge complète. Remplacement de la pastille toutes les quatre semaines pour maintenir un niveau constant d’exposition aux androgènes. Trois jours après l’insertion de granulés, utilisez une pipette p10 pour gicler dix microlitres de solution saline stérile dans la cavité vaginale et utiliser la pointe pipette pour récupérer immédiatement la solution saline.Étendre l’échantillon salin des cellules vaginales sur une lame étiquetée. Et laisser sécher la solution saline à température ambiante. Fixer les glissières séchées dans un contenant de 100 pour cent d’éthynol pendant au moins cinq minutes.Ensuite, tacher les diapositives pendant une minute chacune dans le tampon B et tampon C à partir d’un kit de coloration dif-rapide. À la fin de l’incubation tampon C, laver les glissières avec de l’eau du robinet pendant trois secondes et les sécher à température ambiante. Pour déterminer la cyclicité estrous voir les diapositives sous l’objectif dix fois d’un microscope léger.Comptez les jours dans chaque étape et divisez par le nombre total de jours pour calculer le temps de pourcentage à chaque étape. Pour tester la tolérance au glucose, 20 jours d’insertion DHT, jeûner les souris pendant la nuit. Pesez les souris le lendemain matin, et utilisez un glucomètre et des bandes d’essai pour mesurer le taux de glucose basilic du sang de veine de queue.Injecter aux souris deux grammes par kilogramme de poids corporel de 20 pour cent de dextrose. Mesurez ensuite le taux de glucose des échantillons de sang de veine de queue à 15, 30, 60, 90, 120 minutes après administration de dextrose. Pour acquérir la progéniture femelle des dames insérées de DHT, déplacez la souris femelle à l’essai dans la cage avec un mâle fertile prouvé au jour 15, suivant l’insertion de granulés.Documentez le poids corporel des dames chaque semaine pour déterminer si la souris est enceinte. Le septième jour postnatal, tremper une pointe de lancette dans la pâte de tatouage et marquer chaque chiot avec un tatouage sur l’orteil. Peser les souris marquées tous les sept jours jusqu’à l’âge de 70 jours.Entre la date postnatale 12 à 16, l’oreille poinçonner les souris pour les numéroter selon le système comme illustré dans la figure. Pour distinguer le sexe, examinez le côté ventral de chaque souris marquée. Les femelles auront des mamelons visibles.Pour recueillir des échantillons de sang pour diverses analyses en aval utiliser une lancette pour recueillir le volume expérimental approximatif de sang entre neuf et dix heures par saignement de veine submandibulaire. Et centrifuger les échantillons pour permettre la collecte du sérum. Rangez ensuite les échantillons de sérums dans des tubes de micro-centrifugeuse de 1,5 millilitre à moins 80 degrés Celsius jusqu’à leur analyse.Pour évaluer la puberté chez la progéniture femelle DHT, tous les jours après le sevrage au jour post-natal 21, vérifiez l’ouverture vaginale par inspection visuelle. Et utiliser des calibres pour mesurer la distance ano-génitale. Bien que les valeurs absolues du sérum DHT soient différentes entre la spectrométrie de masse et l’analyse Elisa, le changement folklorique relatif de la DHT par rapport à l’insertion sans DHT est similaire à la fois des analyses et des expériences.Les niveaux de DHT sont sensiblement augmentés de la pré-conception par la grossesse dans les souris de DHT et aucune souris de DHT. Cependant, les niveaux de DHT sont deux fois plus élevés chez les souris DHT par rapport à aucune souris DHT à la fois aux points de temps pré-conceptionnel et gestationnel. Les filles adultes de DHT montrent des différences dans la fonction reproductrice.Par exemple, la cyclicité eestrous perturbée comparée à l’adulte aucune fille de DHT éprouvant des temps sensiblement plus longs dans metestrus diestrus et moins de temps dans pro-esterous et esterous. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler d’incuber les granulés pendant 24 heures avant qu’ils ne soient utilisés pour la libération uniforme de l’hormone. Après cette procédure, les conséquences reproductives et métaboliques de l’exposition au DHT peuvent également être examinées.Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans le domaine de l’endrochronologie et des interactions fœtales maternelles pour étudier le SOPK et l’impact de l’hyperandrogénie de bas niveau chez les souris femelles. N’oubliez pas que le travail avec DHT peut être extrêmement dangereux et les précautions telles que le port de gants et d’un masque et lunettes, et le travail dans une hotte de bio-sécurité, doit toujours être prise lors de l’exécution de cette procédure.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

CRISPR Génération / cas9 Mediated monoallélique Suppressions pour étudier la fonction Enhancer dans souris cellules souches embryonnaires

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Recherche

Biologie du développement

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolement et caractérisation des primaires de Rat vanne cellules interstitielles : un nouveau modèle pour étudier la Calcification de la Valve aortique

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Entier-Montez la microscopie confocale pour la peau de l’oreille d’adulte : un système modèle pour étudier la morphogenèse ramification Neuro-vasculaire et la Distribution de cellules immunitaires

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Culture de tissus ovariens pour visualiser les phénomènes dans les ovaires de souris

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

Un modèle murin d’ostéogenèse Distraction

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