Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt durch die National Institutes of Health (Zuschüsse R00-HD068130, S.W) und dem Baltimore Diabetes Research Center: Piloten und Machbarkeit Stipendium (S.W).

Hier präsentieren wir Ihnen detaillierte Protokolle für DHT Pellet Vorbereitung und Eingliederung "und" für reproduktive und metabolischen Tests. Die Mäuse, die in dieser Studie verwendeten waren eine gemischte Hintergrund (C57/B6, CD1, 129Sv) und waren gepflegt mit Nahrung und Wasser Ad Libitum in einem 14/10 h-Hell-Dunkel-Zyklus bei 24 ° C in der Broadway-Forschungsgebäude Tierhaus an der Johns Hopkins University School of Medizin. Alle Verfahren wurden von der Johns Hopkins University Animal Care und Us...

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	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

Hyperandrogenism ist ein wesentliches Merkmal des PCOS. Das Serum DHT-Spiegel (zwei Falten höher in DHT Mäuse als bei keine-DHT Mäusen) verwendet in diesem Protokoll sind niedriger als die von anderen Forschern in früheren Studien gemeldet und sind so kalibriert, dass um Frauen mit PCOS5,19proportional zu imitieren, 20,21. Im Gegensatz zu anderen Modellen ändert dieses 2-fold DHT-Modell n...

Hyperandrogenism ist das Markenzeichen von PCO-Syndrom (PCOS) nach NIH-Kriterien und der überschüssige Androgen und PCOS (AE-PCOS) Gesellschaft. Frauen mit PCOS haben Schwierigkeiten, schwanger und haben ein erhöhtes Risiko von Schwangerschaft Komplikationen1. Selbst wenn sie schwanger werden, haben ihre weiblichen Nachkommen eines negativen gesundheitlichen Ergebnisse2,3. Tiermodelle sind entwickelt worden, mit verschiedenen Strategien4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 und viele Funktionen von PCOS (Anovulation und oder wertgemindert Glukose und Insulin Toleranz) mit erhöhtem Körpergewicht und Adipositas verbunden mit erweiterten Adipocyte Größe und Gewicht erhöhte Adipocyte ausstellen. Es gibt zwei Hauptstrategien, Tiermodellen zu produzieren, die verwendet werden, um PCOS zu studieren. Behandlung mit einem hohen Grad von Androgenen direkt (exogene Androgen Injektion/einstecken) oder indirekt (z. B. Sperrung Androgen-Umwandlung zu Östrogen mit Aromatase-Hemmer) ist nach der Geburt13. Ein weiterer ist von fetalen Hyperexposure von Androgenen während Schwangerschaft14,15 , die Nachkommen zu studieren. Zum Beispiel entwickeln weibliche Nachkommen von Rhesus-Affen16,17, Schafe18und Nagetiere ausgesetzt männliche Androgen während der intrauterinen Zeit PCOS-ähnliche Züge später im Leben. Diese Modelle deutlich erweitert unser Verständnis von erhöhten Androgen Effekte und fetale Programmierung und uterine Auswirkungen auf die Umwelt. Diese Modelle haben jedoch ihre eigenen Grenzen: 1) Tiere entwickeln Korpulenz und daher ist es schwierig, die Auswirkungen der Hyperandrogenemia von Adipositas verursachten Fortpflanzungs- und Stoffwechselstörungen; zu trennen (2) vor der Schwangerschaft Frauen mit PCOS weisen bereits hohe Androgen, somit Eizellen Androgen überschüssige vor der Befruchtung ausgesetzt worden; (3) die pharmakologischen Dosen von Testosteron (T) oder Dihydrotestosteron (DHT) verwendet, nach der Geburt oder während der Schwangerschaft können die Androgen-Umgebung von PCOS nicht wider. Testosteron und DHT Niveaus im Eierstock follikelflüssigkeit und/oder Serum gemessen wurden, und Testosteron und DHT-Spiegel sind 1,5 bis 3,9 fache höher bei Frauen mit PCOS5,19,20,21 ,22,23 im Vergleich zu Frauen unberührt. Wir haben einen Erwachsenen Maus Modell23,24,25 , die innerhalb von zwei Wochen über die Einleitung einer chronischen DHT aus Einfügung eines Pellet-mit 4 mm Länge des reproduktiven und metabolische Dysfunktion entwickelt Kristallpulver DHT (Gesamtlänge der Pellets beträgt 8mm). Dieses Modell produziert Serum-DHT-Spiegel, die über 2-fach höher (als 2xDHT bezeichnet) sind als die Kontroll-Mäusen ohne DHT Behandlung. Die 2xDHT Mäuse weisen nicht auf Veränderungen der basalen Serum Östradiol, Testosteron, LH und tun nicht Adipositas zu entwickeln, und zeigen ähnliches Eierstockkrebs Gewicht, Serumspiegel von Cholesterin, freie Fettsäuren, Leptin, TNF und IL-623,24, 25 gegenüber steuert sogar bis zu 3,5 Monate nach DHT Einfügung23,24,25. Bei der Paarung von Weibchen, die bereits Funktionen von PCOS entwickelt haben, können wir darüber hinaus die Auswirkungen einer Hyperandrogenic mütterlichen Umgebung auf die metabolischen und reproduktive Gesundheit der Nachkommen15studieren.
Dieses neue Paradigma (NIH und AE-PCOS Gesellschaft Kriterien relevant) Modelle die Krankheit durch die Produktion relativ ähnliche Niveaus der Androgene, die von Frauen mit PCOS 2 - 3-fold höhere Testosteron oder DHT-Spiegel im Vergleich zu Frauen unberührt. Dieses Modell wird jedoch beibehalten durch ständige exogene DHT und nicht von programmierten endogene Hyperandrogenism, sobald DHT entzogen wird. Das übergeordnete Ziel dieses Artikels ist es, Schwerpunkt 1) wie man das DHT Pellet; (2) wie ein Lean-PCOS wie Mausmodell zu generieren; (3) Strategien zur weibliche Nachkommen aus dieser Dämme zu bewerten. Andere Messungen und Bewertung der Phänotypen in dieser Handschrift nicht behandelt, aber können in5,15,23,24,25,26gefunden werden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

Hyperandrogenemia spielt eine entscheidende Rolle in der reproduktiven und metabolische Funktion bei Frauen und ist das Markenzeichen der PCO-Syndrom. Entwicklung eines schlanken PCOS-wie Maus-Modells, das Frauen mit PCOS imitiert ist klinisch relevant. In diesem Protokoll beschreiben wir ein solches Modell. Durch das Einfügen einer Länge von DHT (Dihydrotestosteron) Crystal Pulver Pellets 4 mm (Gesamtlänge der Pellets beträgt 8 mm), und monatlich zu ersetzen, können wir eine PCOS-wie Maus-Modell mit Serum DHT Level 2 fache höher als Mäuse nicht implantiert mit DHT (keine-DHT) zu produzieren. Wir beobachteten reproduktive und metabolische Dysfunktion ohne Gewicht und Körperzusammensetzung zu ändern. Während ein hohes Maß an Unfruchtbarkeit ausstellen, eine kleine Teilmenge dieser PCOS-wie weibliche Mäuse schwanger kann und ihre Nachkommen verzögerte Pubertät und erhöhte Testosteron als Erwachsene zeigen. Diese PCOS-wie schlanke Maus-Modell ist ein nützliches Tool um die Pathophysiologie von PCOS und die Nachkommen aus diesen PCOS-wie Dämme zu studieren.

Serum-DHT-Spiegel und Glukose-Toleranz-test
DHT-Spiegel wurden aus gesammelten Serum durch beide ELISA und LC-MS gemessen nach Protokoll 1,24 – 1,25, und 2,9, 3.0. Die DHT Absolutwerte unterscheiden sich zwischen Massenspektrometrie und ELISA, jedoch die relative Falte, die von DHT Vs keine-DHT einsetzen ist ähnlich von beiden Assays und über Experimente15,23,</sup...

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A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Wir beschreiben die Entwicklung von einem schlanken PCOS-wie Maus-Modell mit Pellet-Dihydrotestosteron, die Pathophysiologie der PCOS und die Nachkommen aus diesen PCOS-wie Dämme zu studieren.

Ein Hyperandrogenic Mausmodell, PCO-Syndrom zu studieren

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Reproduktion zu beantworten. Und die Endokrinologie. Und gelten für die Studie des Polyzystischen Ovar-Syndroms oder PCOS und Hyperandrogenismus.Der Vorteil dieser Technik ist, dass sie eine konsistente, einheitliche, langfristige Freisetzung von Hormonen auf kostspielige effektive Weise ermöglicht. JHUs, die das Verfahren behandeln, werden Ping Xue, ein Techniker aus meinem Labor sein. Für Dihydrotestosteron oder DHT-Pellet-Vorbereitung, verwenden Sie eine Rasierklinge, um ein 15-Millimeter-Stück Silikonschläuche zu schneiden.Und verwenden Sie eine Drei-Milliliter-Spritze mit einer abgestumpften 20-Spur-Nadel, um zwei bis fünf Millimeter medizinisches Klebstoffsilikon in ein Ende des Rohres zu injizieren. Lassen Sie die Schläuche über Nacht trocknen. Und überprüfen Sie auf Luftblasen am versiegelten Ende.Das Tragen der entsprechenden persönlichen Schutzausrüstung gießt DHT-Pulver in ein Plastik-Wegboot in der Fließhaube. Beeindrucken Sie das geöffnete Ende des klebebedeckten Rohres in das Pulver. Mit einer großen begradigten Büroklammer das Pulver in den Schlauch stampfen, bis das DHT die entsprechende experimentelle Tiefe erreicht.Dann versiegeln Sie die geöffnete Seite des Rohres über Nacht mit Silikon. Am nächsten Morgen schneiden Sie jede versiegelte Seite, um eine zwei Millimeter lange Silikonlänge auf beiden Seiten des DHT und keine DHT-Kontrollpellets zu erhalten. Dann die Pellets in dem 50 Milliliter konischen Rohr mit Folie bei Raumtemperatur für bis zu drei Monate verpackt lagern.Für pcOS Mausmodellgeneration Equilibrate bis zu 20 DHT oder Steuerpellets in separaten 50 Milliliter konische Röhren mit 30 Milliliter n.0,9 Prozent Saline für 24 Stunden bei 37 Grad Celsius. Am nächsten Tag bestätigen Sie die fehlende Reaktion auf Zehenkneifen in einer zwei Monate alten weiblichen Maus und verwenden Sie sterile Gaze, um sequenzielle povidone-Jod und 70 Prozent Ethynolpeelings in den chirurgischen Bereich zu verabreichen. Als nächstes machen Sie einen fünf Millimeter Schnitt durch die Haut in der Nähe des Halses.Und verwenden Sie einen zehnSpurwagen, um einen 15-Millimeter-Tunnel in rostraler Richtung zu bauen. Verwenden Sie den Trokar, um ein Pellet dorsal in den Tunnel einzufügen und den Schnitt mit dem chirurgischen Klebstoff zu versiegeln. Die Wundkanten mit Zangen manuell annähern und mit sanften Bürstenschlägen drei dünnschichtige Schichten flüssigen Klebstoffs auf einen Zentimeter von jeder Seite der entgegengesetzten Wundkanten auftragen.Dann legen Sie die Maus allein in einem Käfig auf einem Heatpad mit Überwachung bis zur vollen Recumbency. Ersetzen sie das Pellet alle vier Wochen, um ein konstantes Androgen-Expositionsniveau aufrechtzuerhalten. Drei Tage nach dem Einsetzen von Pellets verwenden Sie eine p10-Pipette, um zehn Mikroliter steriler Saline in die Vaginalhöhle zu spritzen und die Pipettespitze zu verwenden, um die Saline sofort wiederherzustellen.Verteilen Sie die vaginale Zell-Saline-Probe auf eine beschriftete Folie. Und lassen Sie die Saline bei Raumtemperatur trocknen. Fixieren Sie die getrockneten Dias in einem Behälter von 100 Prozent Ethynol für mindestens fünf Minuten.Dann färben Sie die Dias für jeweils eine Minute in Puffer B und Puffer C aus einem dif-schnellen Färbekit. Am Ende des Puffers C inkubieren Sie die Dias drei Sekunden lang mit Leitungswasser waschen und bei Raumtemperatur trocknen. Um die estre Zyklizität zu bestimmen, betrachten Sie die Dias unter dem zehnfachen Ziel eines Lichtmikroskops.Zählen Sie die Tage in jeder Phase und dividieren Sie durch die Gesamtzahl der Tage, um die Prozentzeit in jeder Phase zu berechnen. Um die Glukosetoleranz zu testen, 20 Tage DHT-Einfügung, fasten Sie die Mäuse über Nacht. Wiegen Sie die Mäuse am nächsten Morgen, und verwenden Sie ein Glukometer und Teststreifen, um Basilikum Glukosespiegel der Schwanzvene Blut zu messen.Injizieren Sie die Mäuse mit zwei Gramm pro Kilogramm Körpergewicht von 20 Prozent Dextrose. Dann messen Sie den Glukosespiegel der Schwanzvenenblutproben bei 15, 30, 60, 90, 120 Minuten nach dextrose Verabreichung. Um weibliche Nachkommen von DHT eingesetzten Damen zu erwerben, bewegen Sie die weibliche Maus, um im Käfig mit einem nachgewiesenen fruchtbaren Männchen an Tag 15 getestet, nach Pellet-Einfügung.Dokumentieren Sie das Körpergewicht der Dame jede Woche, um festzustellen, ob die Maus schwanger ist. Tauchen Sie am siebten Tag eine Lanzenspitze in Tattoopaste und markieren Sie jeden Welpen mit einem Tattoo auf der Zeh. Wiegen Sie die markierten Mäuse alle sieben Tage bis zum 70. Lebensjahr.Zwischen dem postnatalen Datum 12 bis 16, Ohr schlagen die Mäuse, um sie nach dem System zu nummerieren, wie in der Abbildung dargestellt. Um das Geschlecht zu unterscheiden, untersuchen Sie die ventrale Seite jeder markierten Maus. Die Weibchen werden sichtbare Brustwarzen haben.Um Blutproben für verschiedene nachgeschaltete Analysen zu sammeln, verwenden Sie eine Lanze, um das ungefähre experimentelle Blutvolumen zwischen neun und zehn Uhr durch submandibuläre Venenblutungen zu sammeln. Und zentrifugieren Sie die Proben, um serum sammlung zu ermöglichen. Dann lagern Sie die Serenproben in 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenröhren bei minus 80 Grad Celsius bis zu ihrer Analyse.Um die Pubertät in den weiblichen Nachkommen des DHT zu beurteilen, überprüfen Sie jeden Tag nach der Entwöhnung am 21. Tag die vaginale Öffnung durch visuelle Inspektion. Und verwenden Sie Kaliber, um den anogenitalen Abstand zu messen. Obwohl die absoluten Werte des Serums DHT zwischen Massenspektrometrie und Elisa-Analyse unterschiedlich sind, ist die relative Volksveränderung von DHT im Vergleich zur No-DHT-Einfügung sowohl von Assays als auch von Experimenten hinweg ähnlich.DHT-Spiegel sind von der Vorkonzeption bis zur Schwangerschaft sowohl bei DHT- als auch bei keinen DHT-Mäusen signifikant erhöht. Allerdings sind die DHT-Spiegel bei DHT-Mäusen doppelt höher als bei keinen DHT-Mäusen sowohl bei präkonzeptionalen als auch bei gestationalen Zeitpunkten. Erwachsene DHT-Töchter weisen Unterschiede in der Fortpflanzungsfunktion auf.Zum Beispiel, gestörte esestrous Zyklizität im Vergleich zu erwachsenen keine DHT-Töchter erleben deutlich längere Zeiten in Metestrus Diestrus und weniger Zeit in pro-esterous und esterous. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, die Pellets für 24 Stunden zu inkubieren, bevor sie für die gleichmäßige Freisetzung des Hormons verwendet werden. Nach diesem Verfahren können auch die reproduktiven und metabolischen Folgen einer DHT-Exposition untersucht werden.Nach seiner Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Endrochronologie und mütterlichen fetalen Interaktionen, um PCOS und die Auswirkungen von Hyperandrogenismus auf niedrigem Niveau bei weiblichen Mäusen zu untersuchen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit DHT extrem gefährlich sein kann und die Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Handschuhen und einer Maske und Einer Brille sowie das Arbeiten in einer Biosicherheitshaube immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Generieren von CRISPR / Cas9 Mediated monoallelic Löschungen Enhancer-Funktion in embryonalen Stammzellen der Maus zu studieren

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolierung und Charakterisierung von primären Ratte Ventil interstitielle Zellen: ein neues Modell zur Verkalkung der Aortenklappe

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Vollständig-hängen konfokalen Mikroskopie für Erwachsene Ohr Haut: ein Modellsystem, Neuro-vaskuläre Verzweigung Morphogenese und Immunzelle Verteilung zu studieren

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypischen Kultur-Methode, die Entwicklung der embryonalen Gewebe zu studieren

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Ovarian Tissue Culture Phänomene in der Maus Eierstock zu visualisieren

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

Ein Mausmodell Ablenkung Osteogenesis

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Einsatz von hämatopoetischen Stammzelltransplantation zu beurteilen, den Ursprung des myelodysplastischen Syndroms

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

Ein In-vitro- Modell eines Systems Parallel-Platte Perfusion, bakteriellen Einhaltung der Gewebe Transplantat zu studieren

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

Eine In-Vivo -Methode, um die Maus Blut-Hoden-Schranke Integrität zu studieren

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...