Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Institutes of Health (tilskudd R00-HD068130 til S.W.) og Baltimore Diabetes Research Center: piloter og gjennomførbarhet Grant (til S.W.).

Her presenterer vi detaljerte protokoller for DHT pellet forberedelse og innsetting og reproduktiv og metabolske testing. Musene som brukes i denne studien var en blandet bakgrunn (C57/B6, CD1, 129Sv) og ble opprettholdt med mat og vann annonse libitum i en 14/10 h lys/mørke syklus på 24 ° C i Broadway forskning bygningen dyr anlegget ved Johns Hopkins University School of Medisin. Alle prosedyrer ble godkjent av Johns Hopkins University Animal Care og bruk komiteen.
1. Opprett PCOS-...

<ol>
	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

Hyperandrogenism er et viktig trekk ved PCOS. De serum DHT nivåene (to fold høyere i DHT mus enn i no-DHT mus) brukes i denne protokollen er lavere enn de som rapporteres av andre etterforskere i tidligere studier og er kalibrert for å etterligne proporsjonalt kvinner med PCOS5,19, 20,21. I motsetning til andre modeller endrer ikke denne 2-fold DHT modellen kroppsvekt og hele kroppssammense...

Hyperandrogenism er kjennetegnet av polycystisk ovariesyndrom (PCOS) i henhold til NIH kriterier og av Androgen overflødig og PCOS (AE-PCOS) samfunnet. Kvinner med PCOS har problemer med å bli gravid og har økt risiko for graviditet komplikasjoner1. Selv om de bli gravid, har deres kvinnelige avkom en uønskede helse utfall2,3. Dyr modeller er utviklet ved hjelp av ulike strategier4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 og viser mange funksjoner i PCOS (anovulasjon og eller svekket glukose og insulin toleranse) med økt kroppsvekt og fedme forbundet med forstørret adipocyte og økt adipocyte. Det er to viktige strategier for å produsere dyr modeller som brukes til å studere PCOS. En er behandling med høye nivåer av androgener direkte (eksogene androgen injeksjon/innsetting) eller indirekte (som blokkerer androgen konvertering til østrogen med aromatase hemmere) etter fødselen13. En annen er av fetal hyperexposure av androgener under svangerskapet14,15 å studere avkom. For eksempel utvikle kvinnelige avkom fra rhesus monkey16,17, sauer18og gnagere utsatt for mannlige nivåer av androgen under intrauterine perioden PCOS-lignende egenskaper senere i livet. Disse modellene betydelig forbedret vår forståelse av opphøyet androgen effekter, og fosterets programmering og livmor miljømessige effekter. Men disse modellene har sine egne begrensninger: 1) dyr utvikle fedme og det er derfor vanskelig å skille effekten av hyperandrogenemia fra fedme indusert reproduktiv og metabolske dysfunksjon; 2) før svangerskapet, kvinner med PCOS viser allerede høye nivåer av androgen, dermed oocytes har vært utsatt for androgen overflødig før befruktning; 3) den farmakologiske doser av testosteron (T) eller dihydrotestosteron (DHT) etter fødsel eller under svangerskapet kan ikke gjenspeile androgen miljøet av PCOS. Testosteron og DHT nivåer har vært målt i eggstokkreft follikulær væske og/eller serum og testosteron og DHT nivåer er 1.5 til 3,9 ganger høyere hos kvinner med PCOS5,19,20,21 ,22,23 sammenlignet med upåvirket kvinner. Vi laget en voksen mus modell23,24,25 som utvikler reproduktive og metabolske dysfunksjon innen to uker etter initiering av kronisk DHT eksponering fra innsetting av pellets med 4 mm lengde Crystal DHT pulver (totale lengden av pellets er 8mm). Denne modellen gir serum DHT nivåer som om 2-fold høyere (referert til som 2xDHT) enn kontroll mus uten DHT behandling. 2xDHT mus ikke vise endringer av basale serum østradiol, testosteron, LH og gjøre ikke utvikle fedme og Vis lignende ovarian vekt, serum nivåer av kolesterol, frie fettsyrer, leptin, TNFα og IL-623,24, 25 forhold til kontroller med opp til 3,5 måneder etter DHT innsetting23,24,25. I tillegg av mating kvinner som allerede har utviklet funksjonene i PCOS, kan vi studere virkningen av hyperandrogenic mors miljø på metabolske og reproduktive helsen av avkom15.
Denne nye paradigmet (relevant for NIH og AE-PCOS samfunn) modeller sykdommen ved å produsere relativt samme nivå androgener de kvinner med PCOS 2 - til 3 ganger høyere testosteron eller DHT nivåer sammenlignet med upåvirket kvinner. Men er denne modellen vedlikeholdt av kontinuerlig eksogene DHT og ikke fra programmert endogene hyperandrogenism når DHT trekkes. Det overordnede målet med denne artikkelen er å fokusere på 1) Hvordan lage DHT pellet; 2) hvordan å generere en lean-PCOS som musemodell; 3) strategier for å evaluere kvinnelige avkom fra disse dammer. Andre målinger og vurdering av fenotyper nevnes ikke i dette manuskriptet, men finnes i5,,15,,23,,24,,25,,26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

Hyperandrogenemia spiller en avgjørende rolle i reproduktiv og metabolske funksjon hos kvinner og er kjennetegnet av polycystisk eggstokk-syndrom. Utvikle en mager PCOS-lignende musemodell som etterligner kvinner med PCOS er klinisk meningsfull. I denne protokollen beskriver vi slik modell. Ved å sette inn en 4 mm lengde av DHT (dihydrotestosteron) krystall pulver pellet (totale lengden av pellets er 8 mm), og erstatte den månedlig, er vi i stand til å produsere en PCOS-lignende musemodell med serum DHT nivåer 2 ganger høyere enn mus ikke implantert med DHT (no-DHT). Vi observerte reproduktive og metabolske dysfunksjon uten å endre kroppsvekt og kroppssammensetning. Mens viser en høy grad av ufruktbarhet, en undergruppe av disse PCOS-lignende kvinnelige mus kan bli gravid og deres avkom Vis forsinket puberteten og økt testosteron som voksne. Denne PCOS-lignende mager musemodell er en nyttig verktøyet å studere i Patofysiologien ved PCOS og avkom fra disse PCOS-lignende dammer.

Serum DHT nivåer og glukose toleranse test
DHT nivåer ble målt fra samlet serum ved begge ELISA og LC-MS etter protokollen 1.24-1.25, og 2.9, 3.0. DHT absoluttverdier er forskjellige mellom massespektrometri og ELISA, men relative fold (rundt 2-fold) av DHT vs ikke-DHT innsetting ligner fra begge analyser og over eksperimenter15,23,24 (...

Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Vi beskrive utviklingen av en mager PCOS-lignende musemodell med dihydrotestosteron pellet å studere i Patofysiologien ved PCOS og avkom fra disse PCOS-lignende dammer.

En Hyperandrogenic mus modell å studere polycystisk ovariesyndrom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen reproduksjon. Og endokrinologien. Og gjelder for studiet av polycystisk ovariesyndrom eller PCOS og hyperandrogenisme.Fordelen med denne technic er at det letter en konsekvent, ensartet, langsiktig frigjøring av hormoner på en kostbar effektiv måte. JHUs behandler prosedyren vil være Ping Xue, en tekniker fra laboratoriet mitt. For dihydrotestosteron eller DHT pellet forberedelse, bruk et barberblad for å kutte en 15 millimeter stykke silikon rør.Og bruk en tre milliliter sprøyte utstyrt med en stump 20 gauge nål for å injisere to til fem millimeter medisinsk lim silikon i den ene enden av røret. La slangen tørke over natten. Og se etter luftbobler på den forseglede enden.Bruk av passende personlig verneutstyr hell DHT pulver i en plastveibåt i flytskapet. Imponer den åpnede enden av det selvklebende avkortet røret inn i pulveret. Bruk en stor rettet binders, tamp pulveret ned i slangen, til DHT når riktig eksperimentell dybde.Tet deretter den åpne siden av røret med silikon over natten. Neste morgen, kutt hver forseglet side for å få en to millimeter lengde silikon på begge sider av DHT og ingen DHT kontroll pellets. Oppbevar deretter pellets i 50 milliliter konisk rør innpakket med folie ved romtemperatur i opptil tre måneder.For PCOS mus modell generasjon likevekt opp til 20 DHT eller kontroll pellets i separate 50 milliliter koniske rør som inneholder 30 milliliter på 0,9 prosent saltvann i 24 timer ved 37 grader Celsius. Neste dag, bekrefter mangel på respons på tå klemme i en bedøvet to måneder gammel kvinnelig mus og bruke steril gasbind til å administrere sekvensiell Povidone-jod og 70 prosent ethynol scrubs til kirurgisk område. Deretter gjør en fem millimeter snitt gjennom huden nær nakken.Og bruk en ti gauge trocar for å lage en 15 millimeter tunnel i rostral retning. Bruk trokaren til å sette inn en pellet dorsally inn i tunnelen og forsegle snittet med kirurgisk lim. Tilnærmet sårkantene manuelt med tang og bruk milde pusseslag for å påføre tre tynne filmlag med flytende lim til en centimeter ut fra hver side av de motsatte sårkantene.Plasser deretter musen alene i et bur på en varmepute med overvåking til full recumbency. Erstatte pellet hver fjerde uke for å opprettholde et konstant nivå av androgen eksponering. Tre dager etter pellet innsetting, bruk en p10 pipette til å sprute ti mikroliter steril saltvann inn i vaginalhulen og bruk pipettespissen til å umiddelbart gjenopprette saltvannet.Spre vaginal celle saltvann prøven på en merket lysbilde. Og la saltvannet tørke ved romtemperatur. Fest de tørkede lysbildene i en beholder på 100 prosent ethynol i minst fem minutter.Deretter flekker lysbildene i ett minutt hver i buffer B og buffer C fra en dif-rask farging kit. På slutten av bufferen C inkubasjon vaske lysbildene med vann fra springen i tre sekunder og tørke dem ved romtemperatur. For å bestemme estrous syklisk visning lysbildene under ti ganger målet for et lys mikroskop.Telle dagene i hvert trinn og dividere med totalt antall dager for å beregne prosenttid på hvert trinn. For å teste glukosetoleransen, 20 dager DHT innsetting, rask musene over natten. Vei musene neste morgen, og bruk et glukometer og teststrimler for å måle basilikumglukosenivået av haleveneblod.Injiser musene med to gram per kilo kroppsvekt på 20 prosent dekstrose. Mål deretter glukosenivået av haleveneblodprøver ved administrering av 15, 30, 60, 90, 120 minutter etter administrering av dekstrose. For å skaffe kvinnelige avkom fra DHT innsatte damer, flytt den kvinnelige musen til testet i buret med en bevist fruktbar mann på dag 15, etter pellet innsetting.Dokumenter dames kroppsvekt hver uke for å finne ut om musen er gravid. På postnatal dag syv, dypp en lansett tips i tatovering lim og markere hver valp med en tatovering på tåen. Vei de merkede musene hver sjuende dag til 70 dager.Mellom postnatal dato 12 til 16 slår øret musene for å nummerere dem i henhold til systemet som illustrert i figuren. For å skille mellom kjønn, undersøk ventral side av hver kodede mus. Hunnene vil ha synlige brystvorter.For å samle blodprøver for ulike nedstrøms analyser, bruk en lansett for å samle det omtrentlige eksperimentelle volumet av blod mellom ni og ti am ved submandibulær veneblødning. Og sentrifuger prøvene for å tillate seruminnsamling. Oppbevar deretter serumprøvene i 1,5 milliliter mikrosentride rør ved minus 80 grader Celsius til analysen.For å vurdere puberteten i DHT kvinnelige avkom, hver dag etter avvenning på postnatal dag 21, sjekk vaginalåpningen ved visuell inspeksjon. Og bruk kaliber for å måle ano-genital avstand. Selv om de absolutte verdiene av serum DHT er forskjellige mellom massespektrometri og Elisa-analyse, er den relative folkeendringen av DHT versus ingen DHT-innsetting lik fra både analyser og på tvers av eksperimenter.DHT nivåer er betydelig økt fra pre-unnfangelse gjennom graviditet i både DHT og ingen DHT mus. DHT-nivåene er imidlertid to ganger høyere hos DHT-mus sammenlignet med ingen DHT-mus på både pre-conceptional og svangerskapstidspunkter. Voksne DHT-døtre viser forskjeller i reproduktiv funksjon.For eksempel, forstyrret eestrous syklisk sammenlignet med voksne ingen DHT døtre opplever betydelig lengre ganger i metestrus diestrus og mindre tid i pro-esterous og esterous. Mens du prøver denne prosedyren er det viktig å huske å inkubere pellets for 24 timer før de brukes til jevn frigjøring av hormonet. Etter denne prosedyren kan de reproduktive og metabolske konsekvensene av DHT-eksponering også undersøkes.Etter utviklingen banet denne technic veien for forskere innen endrokronologi og mors fosterinteraksjoner for å studere PCOS og virkningen av lavt nivå hyperandrogenisme hos kvinnelige mus. Ikke glem at arbeid med DHT kan være ekstremt farlig og forholdsregler som å bruke hansker og en maske og vernebriller, og arbeider i en bio-sikkerhet hette, bør alltid tas mens du utfører denne prosedyren.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Generering CRISPR / Cas9 mediert Monoallelic Slett å studere Enhancer funksjon i mus embryonale stamceller

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolering og karakterisering av primære rotte ventil interstitielle cellene: en ny modell å studere Aortaklaff forkalkninger

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Hele-mount AC Confocal mikroskopi for voksen øre hud: et modellsystem Nevro-vaskulær Branching Morphogenesis og immun celle distribusjon

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic kultur metoden å studere utviklingen av embryonale kylling vev

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Ovarian vev kultur visualisere fenomener i musen eggstokk

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

En mus distraksjon Osteogenesis modell

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Bruk av blodkreft stamcelletransplantasjon å vurdere opprinnelsen til AML

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro -modell av en parallell-Plate perfusjon System å studere bakteriell tilslutning å pode vev

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

En i Vivo -metode for å studere musen blod-testikkel barriere integritet

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Voksen mus siffer amputasjon og regenerering: en enkel modell for å undersøke pattedyr blastema formasjon og Intramembranous forbening

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...