Name: a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Institutes of Health (bidrag R00-HD068130 att S.V.) och Baltimore Diabetes Research Center: piloter och genomförbarhet Grant (att S.V.).

Här presenterar vi detaljerade protokoll för DHT pellet utarbetande och införande och reproduktiv och metabolisk kontroll. De möss som används i denna studie var en blandad bakgrund (C57/B6, CD1, 129Sv) och underhölls med mat och vatten ad libitum i en 14/10 h ljus/mörk cykel på 24 ° C i Broadway forskning byggnad djuranläggningen vid Johns Hopkins University School of Medicin. Alla förfaranden godkändes av Johns Hopkins University djur vård och användning kommittén.
1. s...

<ol>
	<li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li><li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring.">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li><li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort.">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , (2018).</li><li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+reproductive,+metabolic,+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models.">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li><li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS.">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li><li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine,+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions.">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li><li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins.">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome.">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).</li><li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat:+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease.">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li><li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+phenotypic+presentation,+pathophysiology,+and+the+effects+of+different+interventions.">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li><li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome.">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li><li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice.">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).</li><li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS?.">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?.</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li><li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve.">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li><li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction:+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome?.">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?.</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li><li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis.">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li><li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype.">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li><li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome.">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li><li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women.">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li><li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation:+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome.">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li><li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism.">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction.">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608 (2016).</li><li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms.">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553 (2016).</li><li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice.">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li><li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome:+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function?.">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?.</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice.">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li><li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test,+Measurement+of+Lung+Function,+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes.">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li><li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry.">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li><li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry.">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li><li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats.">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li><li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells.">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li></ol>

Hyperandrogenism är en nyckelfunktion i PCOS. De DHT nivåerna i serum (två gånger högre i DHT möss än hos nr-DHT möss) används i detta protokoll är lägre än de som rapporterats av andra utredare i tidigare studier och är kalibrerade för att proportionellt efterlikna kvinnor med PCOS5,19, 20,21. Till skillnad från andra modeller ändrar inte denna 2-faldig DHT-modell av kroppsvik...

Hyperandrogenism är kännetecknet av polycystiskt ovariesyndrom (PCOS) enligt NIH kriterier och Androgen överskott och PCOS (AE-PCOS) samhälle. Kvinnor med PCOS har svårigheter att bli gravid och har ökad risk för graviditet komplikationer1. Även om de blir gravida, har deras kvinnliga avkommor en negativa hälsoeffekter utfall2,3. Djurmodeller har utvecklats med hjälp av olika strategier4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 och uppvisar många funktioner av PCOS (anovulation, och eller nedsatt glukos och insulin tolerans) med ökad kroppsvikt och fetma som är associerad med utvidgade fettceller storlek och ökad fettceller vikt. Det finns två stora strategier att producera djurmodeller som används för att studera PCOS. En är behandling med höga nivåer av androgener direkt (exogena androgen injektion/insertion) eller indirekt (till exempel blockera androgen konvertering till östrogen med aromatashämmare) efter födelse13. En annan är av fostrets hyperexposure av androgener under dräktigheten14,15 studera avkomman. Till exempel utvecklas kvinnliga avkommor från Rhesusapa16,17, får18och gnagare som utsätts för manliga nivåer av androgen i intrauterin perioden PCOS-liknande drag senare i livet. Dessa modeller förbättrats avsevärt vår förståelse av förhöjda androgena effekter, och fetal programmering, och livmoder miljöeffekter. Dessa modeller har dock sina egna begränsningar: 1) djur utvecklar fetma och det är därför svårt att skilja effekterna av hyperandrogenemia från fetma inducerad reproduktiv och metabolisk dysfunktion; (2) före graviditet, kvinnor med PCOS uppvisar redan höga nivåer av androgen, således oocyter har exponerats för androgen överskott före befruktningen; (3) de farmakologiska doserna av testosteron (T) eller dihydrotestosteron (DHT) användas efter födseln eller under dräktigheten kanske inte återspeglar androgen miljö av PCOS. Testosteron och DHT nivåer har mätts i äggstockarna follikulära vätska och/eller serum, och testosteron och DHT nivåer är 1,5-3,9 gånger högre hos kvinnor med PCOS5,19,20,21 ,22,23 jämfört med opåverkade kvinnor. Vi skapade en vuxen mus modell23,24,25 som utvecklar reproduktiv och metabolisk dysfunktion inom två veckor efter inledandet av kronisk DHT exponering från införandet av en pellet med 4 mm längd Crystal DHT pulver (Totallängd pellet är 8mm). Denna modell producerar DHT-nivåerna i serum som är om 2-faldigt högre (kallad 2xDHT) än för kontroll möss utan DHT behandling. 2xDHT möss inte uppvisar förändringar av basala serum estradiol, testosteron, LH och inte utveckla övervikt och Visa liknande ovarial vikt, serumnivåer av kolesterol, fria fettsyror, leptin, TNFα och IL-623,24, 25 förhållande till styr ända upp till 3,5 månader efter DHT införande23,24,25. Dessutom, genom parning honor som redan har utvecklat funktioner av PCOS, kan vi studera effekterna av en hyperandrogenic maternell miljö på den metabola och reproduktiv hälsan avkommor15.
Detta nya paradigm (relevant för NIH och AE-PCOS samhället kriterier) modeller sjukdomen genom att producera relativt liknande nivåer av androgener till de av kvinnor med PCOS 2 - till 3-faldigt högre testosteron eller DHT nivåer jämfört med opåverkade kvinnor. Men upprätthålls denna modell av ständiga exogena DHT och inte från programmerade endogena hyperandrogenism när DHT dras. Det övergripande målet med denna artikel är att fokusera på 1) hur man gör DHT pelleten; (2) hur man skapar en lean-PCOS som musmodell; (3) strategier för att utvärdera kvinnliga avkommor från dessa dammar. Andra mätningar och bedömning av fenotyper behandlas inte i detta manuskript men kan hittas i5,15,23,24,25,26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:908px;" width="909">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:243px;">Crystalline 5&#945;-DHT powder&#160;</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A8380-1G</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:243px;">Dow Corning Silastic tubing</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11-189-15D</td>
			<td>0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Medical adhesive silicone</td>
			<td style="width:135px;">&#160;Factor II, InC.</td>
			<td style="width:119px;">&#160;A-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Goggles, lab coats, gloves and masks.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;10 &#181;L pipette tips without filter</td>
			<td style="width:135px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11113700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Microscope slide for smear</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-550-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Diff Quik for staining cells</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9979740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160; Lancet</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NC9416572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">3 mL Syring&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Becton, Dickinson and Company (BD),</td>
			<td style="width:119px;">30985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;attached needle: 20G</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Ruler: any length than 10cm with milimeter scale.&#160;</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td>
			<td style="width:119px;">NDC13985-704-10</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Ketamine Hydrochloride</td>
			<td style="width:135px;">Hospira, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0409-2051-05</td>
			<td>100mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">&#160;Surgical staple</td>
			<td style="width:135px;">&#160;AutoClip&#174; System, Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;Insulin syringe</td>
			<td style="width:135px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">329461</td>
			<td>1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">&#160;Trochar&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Innovative Research of America</td>
			<td style="width:119px;">MP-182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Microscope</td>
			<td style="width:135px;">Carl Zeiss Primo Star</td>
			<td style="width:119px;">415500-0010-001</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ear punch</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Testosterone rat/mouse ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">IBL</td>
			<td style="width:119px;">B79174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">DHT ELISA kit</td>
			<td style="width:135px;">Alpha Diagnostic International</td>
			<td style="width:119px;">1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra glucometer</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">One touch ultra test stripes</td>
			<td>Life Scan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Eppendorf tube</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/eppendorf-snap-cap-microcentrifuge-safe-lock-tubes-24/0540218?keyword=true">05-402-18</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blade</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clidox</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td><a href="https://www.fishersci.com/shop/products/clidox-s-base-4x1gal/nc0089321#?keyword=true">NC0089321</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">surgical underpad</td>
			<td style="width:135px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50587953</td>
			<td align="left"><img alt="Supplier Diversity Partner" height="13" src="file:///C:/Users/Tim/AppData/Local/Packages/oice_16_974fa576_32c1d314_e42/AC/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.png" width="25" />
			<table cellpadding="0" cellspacing="0">
				<tbody>
					<tr>
						<td height="21" style="height:21px;width:412px;">Manufacturer:&#160; Andwin Scientific&#160;56616018</td>
					</tr>
				</tbody>
			</table>
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Antiseptic Solution</td>
			<td style="width:135px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td>
			<td style="width:135px;">3M Science. Applied to Life</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Animal tattoo ink paste</td>
			<td style="width:135px;">Ketchum manufacturing Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Brockville, Ontario, Canada</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td style="width:135px;">Ohaus Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HH120D</td>
			<td>Pine Brook, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electronic digital caliper</td>
			<td style="width:135px;">NEIKO Tools USA</td>
			<td style="width:119px;">01407A</td>
			<td>available from Amazon</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a hyperandrogenic mouse model to study polycystic ovary syndrome

Hyperandrogenemia spelar en avgörande roll i reproduktiv och metabola funktion hos kvinnor och är kännetecknande för polycystiskt ovariesyndrom. Utveckla en lean PCOS-liknande musmodell som härmar kvinnor med PCOS är kliniskt betydelsefull. I detta protokoll beskriver vi en sådan modell. Genom att sätta in en 4 mm längd av DHT (dihydrotestosteron) kristall pulver pellet (Totallängd pellet är 8 mm), och ersätta det varje månad, har vi möjlighet att producera en PCOS-liknande musmodell med serum DHT nivåer 2 gånger högre än möss inte implanteras med DHT (nr-DHT). Vi observerade reproduktiv och metabolisk dysfunktion utan att ändra kroppsvikt och kroppssammansättning. Samtidigt uppvisar en hög grad av infertilitet, en liten delmängd av dessa PCOS-liknande honmöss kan bli gravid och deras avkomma Visa försenad pubertet och ökad testosteron som vuxna. Detta PCOS-liknande musmodell för lean är ett användbart verktyg att studera patofysiologin av PCOS och avkomman från dessa PCOS-liknande dammar.

DHT-nivåerna i serum och glukostoleranstest
DHT nivåerna mättes från insamlade serum genom båda ELISA och LC-MS enligt protokollet 1,24 – 1,25, och 2,9, 3.0. DHT absolutvärdena skiljer mellan masspektrometri och ELISA, dock relativa luckan (cirka 2-faldig) av DHT vs no-DHT införande är liknande från båda analyser och över experiment15,23,<sup class="...

Watch this Scientific Journal Video about A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome at JoVE.com

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Vi beskriver utvecklingen av en lean PCOS-liknande musmodell med dihydrotestosteron pellets att studera patofysiologin av PCOS och avkomman från dessa PCOS-liknande dammar.

En Hyperandrogenic musmodell att studera polycystiskt ovariesyndrom

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom området för reproduktion. Och endokrinologin. Och är tillämpliga på studiet av polycystiskt ovariesyndrom eller PCOS och hyperandrogenism.Fördelen med denna technic är att det underlättar en konsekvent, enhetlig, långsiktig frisättning av hormoner på ett kostnadseffektivt sätt. JHUs behandla förfarandet kommer att Ping Xue, en tekniker från mitt laboratorium. För dihydrotestosteron eller DHT pelletsberedning, använd ett rakblad för att skära en 15 millimeter bit silikonrör.Och använd en tre milliliter spruta utrustad med en avtrubbad 20 gauge nål för att injicera två till fem millimeter medicinsk självhäftande silikon i ena änden av röret. Låt slangen torka över natten. Och kolla efter luftbubblor på den förseglade änden.Bär lämplig personlig skyddsutrustning häll DHT pulver i en plast vägbåt i flödesbildningen. Imponera på den öppna änden av den självhäftande röret i pulvret. Med hjälp av ett stort uträtat gem, tamp pulvret ner i slangen, tills DHT når lämpligt experimentellt djup.Sedan försegla den öppnade sidan av röret med silikon över natten. Nästa morgon, skär varje förseglad sida för att få en två millimeters längd av silikon på båda sidor av DHT och ingen DHT kontroll pellets. Förvara sedan pelletsen i det koniska röret på 50 milliliter inlindat med folie i rumstemperatur i upp till tre månader.För PCOS musmodell generation jämvikt upp till 20 DHT eller kontroll pellets i separata 50 milliliter koniska rör som innehåller 30 milliliter på 0,9 procent saltlösning i 24 timmar vid 37 grader Celsius. Nästa dag, bekräfta brist på svar på tå nypa i en sövd två månader gammal kvinnliga mus och använda steril gasväv för att administrera sekventiella Povidone-jod och 70 procent ethynol scrubs till det kirurgiska området. Därefter gör en fem millimeter snitt genom huden nära halsen.Och använd en tio gauge trocar att göra en 15 millimeters tunnel i rostral riktning. Använd troakaren för att föra in en pellet dorsalt i tunneln och täta snittet med det kirurgiska limmet. Manuellt approximera sårkanterna med tlyck och använd skonsamma penseldrag för att applicera tre tunna filmlager av flytande lim för att en centimeter ut från var sida av de motsatta sårkanterna.Placera sedan musen ensam i en bur på en värmedyna med övervakning tills full recumbency. Byta pelleten var fjärde vecka för att upprätthålla en konstant nivå av androgen exponering. Tre dagar efter pelletinsättning, använd en p10 pipettering för att spruta tio mikroliter av steril koksaltlösning i vaginalhålan och använd pipettspetsen för att omedelbart återvinna koksaltlösningen.Sprid vaginalcellen saltlösning provet på en märkt bild. Och låt koksaltlösningen torka i rumstemperatur. Fixera de torkade rutschbanorna i en behållare på 100 procent ethynol i minst fem minuter.Färga sedan in rutschkanorna i en minut vardera i buffert B och buffert C från en dif-snabb infärgningssats. Vid slutet av buffert C inkubering tvätta diabilderna med kranvatten i tre sekunder och torka dem i rumstemperatur. För att bestämma estrous cyklicitet visa bilderna under tio gånger målet för ett ljus mikroskop.Räkna dagarna i varje etapp och dividera med det totala antalet dagar för att beräkna procenttid i varje fas. För att testa glukostolerans, 20 dagar DHT insättning, snabb mössen över natten. Väg mössen nästa morgon, och använd en glukometer och testremsor för att mäta basilikaglukosnivå av svansvenen blod.Injicera mössen med två gram per kilo kroppsvikt på 20 procent dextros. Mät sedan glukosnivån i svansvenen blodprov på 15, 30, 60, 90, 120 minuter efter dextros administration. Att förvärva kvinnliga avkommor från DHT insatt damer, flytta den kvinnliga musen för att testas i buren med en beprövad fertil hane på dag 15, efter pellet insättning.Dokumentera damernas kroppsvikt varje vecka för att avgöra om musen är gravid. På postnatal dag sju, doppa en lancet spets i tatuering pasta och märke varje pup med en tatuering på tå. Väg de markerade mössen var sjunde dag till 70 dagars ålder.Mellan postnatalt datum 12 till 16, öra punsch mössen att numrera dem enligt systemet som illustreras i figuren. För att skilja könet, undersöka den ventrala sidan av varje märkta musen. Honorna kommer att ha synliga bröstvårtor.För att samla in blodprov för olika nedströms analyser använder en lansett för att samla den ungefärliga experimentella volymen av blod mellan nio och tio am genom submandibular ven blödning. Och centrifug proverna för att möjliggöra serum insamling. Förvara sedan serumproverna i 1,5 milliliter mikrocentrifugrör vid minus 80 grader Celsius tills deras analys.För att bedöma puberteten i DHT kvinnliga avkomma, varje dag efter avvänjning vid postnatala dag 21, kontrollera vaginal öppning genom visuell inspektion. Och använd kalibrar för att mäta ano-genitalavståndet. Även om de absoluta värdena för serum DHT är olika mellan masspektrometri och Elisa analys, är den relativa folk förändring av DHT kontra no-DHT insättningspunkten liknande från både analyser och över experiment.DHT nivåer är betydligt ökade från pre-befruktningen genom graviditet i både DHT och inga DHT möss. DHT-nivåerna är dock tvåfaldiga högre hos DHT-möss jämfört med inga DHT-möss vid både pre-conceptional och gestationella tidspunkter. Vuxna DHT-döttrar uppvisar skillnader i fortplantningsförmåga.Till exempel störd eestrous cyklicity jämfört med vuxna inga DHT döttrar upplever betydligt längre gånger i metestrus diestrus och mindre tid i pro-esterous och esterous. Samtidigt försöker detta förfarande är det viktigt att komma ihåg att inkubera pellets i 24 timmar innan de används för enhetlig frisättning av hormonet. Efter detta förfarande kan även de reproduktiva och metaboliska konsekvenserna av DHT-exponeringen undersökas.Efter det utveckling, detta technic banade väg för forskare inom endrokronologi och moderns fetala interaktioner för att studera PCOS och effekterna av låg nivå hyperandrogenism hos kvinnliga möss. Glöm inte att arbeta med DHT kan vara extremt farligt och de försiktighetsåtgärder som att bära handskar och en mask och skyddsglasögon, och arbetar i en bio-säkerhet huva, bör alltid vidtas när du utför denna procedur.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

Generera crispr / Cas9 medierad monoallel Strykningar att studera Enhancer Funktion i mus embryonala stamceller

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolering och karakterisering av primära råtta ventil interstitiella celler: en ny modell att studera aortaklaffen förkalkning

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

Hela-mount konfokalmikroskopi för vuxna öron hud: modellsystem studera Neuro-vaskulär förgrenade morfogenes och immunceller Distribution

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic kultur metod att studera utvecklingen av embryonala kyckling vävnader

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Äggstockscancer vävnad kultur att visualisera företeelser i mus äggstock

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

En musmodell distraktion Osteogenesis

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

Användning av hematopoetisk stamcellstransplantation att bedöma beskärningen av myelodysplastiskt syndrom

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro -modell av ett parallell-plattan Perfusion System att studera bakteriell vidhäftning för att ympa vävnader

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

En In Vivo -Metod för att studera mus blod-Testis barriär integritet

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Adult Mouse Digit Amputation and Regeneration: A Simple Model to Investigate Mammalian Blastema Formation and Intramembranous Ossification

Vuxen mus siffra amputation och regenerering: en enkel modell för att undersöka bildandet av BLASTEMA hos däggdjur och Intramembranös ossifiering

Here, we present a protocol of adult mouse distal terminal phalanx (P3) amputation, a procedurally simple and reproducible mammalian model of epimorphic ...