Name: a conditioned place preference protocol for measuring incubation of craving in rats
Uploaded: 2018-11-06T14:00:00
Duration: 4 min 11 s
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Questo lavoro è stato supportato da National Natural Science Foundation di Cina (NSFC) 31741058 (Y.Z.), sovvenzioni governative Shenzhen (JCYJ20170818162613877 e JCYJ20170818163217196) e Cina Postdoctoral Science Foundation Grant 2017 M 622826 (K.Z.).

Le procedure sperimentali sono state eseguite in conformità con le linee guida per la cura nazionale e uso degli animali e gli esperimenti sono stati approvati dal comitato di uso alla Shenzhen istituti di tecnologia avanzata, cinese e istituzionali Animal Care Accademia delle scienze.
1. animale assuefazione
<ol><li>Ottenere i ratti adulti maschii da animali da laboratorio e mantenerli sotto un ciclo luce/buio di 12 h (luce accesa da 07:00 a 19:00) con libero accesso al cibo e acqua.</li>
	<li>Gestire gli animali giocando con loro o li accarezzando due volte al giorno per due settimane prima degli esperimenti.</li>
	<li>Assegnare in modo casuale gli animali in gruppi di morfina o di soluzione fisiologica.</li>
</ol>2. droga preparazione
<ol><li>Cloridrato di morfina 10 mg/ml di preparare ed iniettare ratti intraperitonealmente (i.p.) ad un volume di 1 mL/kg.</li>
	<li>Come controllo, iniettare ratti con soluzione fisiologica ad un volume di 1 mL/kg.</li>
</ol>3. CPP apparato
<ol><li>Costruire un apparato CPP tre-alloggiamento con spunti diversi tattile (piano) e testare il preferenza iniziale dei ratti a due camere laterali. L'apparecchio consiste di due alloggiamenti laterali nero di grandi dimensioni (30 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) e una camera di mezzo bianca (11 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) con pavimento in PVC liscio bianco. Gli alloggiamenti di due laterali hanno texture piano diverso come segnali somatosensoriali: uno con un piano di plexiglass di griglia, l'altro con un pavimento PVC grezzo.</li>
	<li>Variare la combinazione dei segnali tattili per assicurarsi che l'apparecchio sia imparziale, dato che un apparato distorto è suscettibile di producendo risultati falsi positivi4. Nota: Un importante problema metodologico nella progettazione dell'apparato CPP è se l'apparato è "parziale" o "imparziale"4. Se un gruppo di ratti non addestrati non mostra alcuna preferenza iniziale per l'alloggiamento di un lato rispetto ad un altro, l'apparato è considerato "imparziale". In caso contrario, considerare come "prevenuto"13.</li>
</ol>4. procedura CPP
<ol><li>Stabilire il paradigma CPP indotta da morfina pricipalmente secondo precedente studi21,22 con la modifica degli intervalli di tempo, numero di sessioni di condizionamento, condizionata periodo di prova e collaudo tempo punti20 di condizionamento . Una breve descrizione è data sotto, di cui il programma sperimentale è raffigurato nella Figura 1.</li>
	<li>Fase di pre-condizionamento<ol>
<li>Durante questa fase (giorno 1-3), rimuovere porte a ghigliottina per consentire il libero accesso a tutto l'apparato e posizionare l'animale in camera di mezzo.</li>
		<li>Registrare l'attività degli animali per 15 min.</li>
		<li>Calcolare il tempo trascorso nelle camere a due fianco il giorno 3 come base di riferimento e si riferiscono a questo come T0.</li>
		<li>Rimuovere i ratti che entrano meno di - quattro volte a uno degli alloggiamenti laterali dal esperimento23 come questi ratti sono probabili avere problemi nel benessere generale (ad es., pelliccia sporca e avendo tumori). Verificare lo stato di salute degli animali durante il periodo intero sperimentale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase di condizionamento Nota: La fase di condizionamento include 6 giorni (giorno 4 a 9).<ol>
<li>Per i soggetti di morfina-condizionato, iniettare ratti i.p. con morfina (10 mg/kg) o salino (1 mL/kg) alternativamente la mattina (09:00) e sessioni serali (19:00) (10 h apart).</li>
		<li>Confinare ratti immediatamente dopo ogni iniezione per sua droga-accoppiato (non preferite) o salino-accoppiato di camera (preferito) per 45 min (Figura 1B).</li>
		<li>Mantenere il sistema di registrazione video. Nota: Secondo la nostra esperienza, circa il 5% dei ratti hanno la depressione respiratoria dopo la prima iniezione di morfina (10 mg/kg). In tal caso, per aumentare il tasso di sopravvivenza dei ratti depressione respiratorie, uscire il ratto della camera condizionata, tirare la lingua fuori e metterlo su una carta velina bianca nella sua gabbia a casa.</li>
		<li>Per i controlli di salino-condizionato, dare ratti iniezioni di soluzione salina (1 mL/kg) prima dell'esposizione a una camera sul lato dell'apparato CPP durante la sessione del mattino e verso l'altro lato durante la sera per 45 min/sessione in linea con gruppo di morfina (Figura 1 C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase di test<ol>
<li>Durante questa fase, è necessario rimuovere porte a ghigliottina per consentire il libero accesso a tutto l'apparato e posizionare l'animale in camera di mezzo per far loro esplorare liberamente l'intero apparato per 15 min.</li>
		<li>Registrare la loro attività durante questo 15 min.</li>
		<li>Effettuare tre post-condizionata test, cioè, prova 1 (T1), test 2 (T2) e prova 3 (T3), 2 giorni, 10 giorni e 18 giorni dopo l'ultima sessione condizionata in uno stato privo di morfina, rispettivamente (Figura 1A).</li>
		<li>Variare i punti di tempo di prova per diversi obiettivi sperimentali. Nota: Per ridurre al minimo il numero di ratti necessaria, una progettazione dell'entro-oggetto è impiegato. Tuttavia, per escludere l'effetto di estinzione, una tra soggetto design è richiesto.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig1.jpg"> Figura 1: procedure sperimentali. (A) procedure sperimentali dell'intero processo CPP. (B) sperimentale calendario della fase condizionata del gruppo di morfina. (C) sperimentale pianificazione della fase condizionata del gruppo salino. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
5. analisi dei dati
<ol><li>Calcolare il Punteggio di CPP nel gruppo morphine(saline) come: Punteggio CPP = il tempo trascorso in camera (non preferite) di droga-accoppiato / il tempo totale trascorso in entrambi gli alloggiamenti condizionata.</li>
	<li>Eseguire analisi di dati di CPP Spartiti e ingressi al camere laterali con opportuni metodi statistici utilizzando SPSS.</li>
	<li>Presentare tutti i dati comportamentali come media ± SEM, dove SEM è l'errore standard della media. Considerare i valori di p < 0,05 come statisticamente significativo e indicare da asterischi (*) e octothorpesin (#) nelle figure.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Leshner, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction+is+a+brain+disease,+and+it+matters.">Addiction is a brain disease, and it matters.</a> Science. 278 (5335), 45-47 (1997).</li><li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurocircuitry+of+Addiction.">Neurocircuitry of Addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li><li>Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thalamic+input+to+the+nucleus+accumbens+mediates+opiate+dependence.">A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence.</a> Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).</li><li>Tzschentke, T. 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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Qui, un metodo che utilizza un paradigma CPP di morfina è descritto per stabilire la memoria a lungo termine di ricompensa nel ratto con segnali somatosensoriali come contesto condizionato. Per creare tali una memoria a lungo termine di ricompensa, un precedente protocollo21 con un apparato CPP equilibrato viene modificato e le sessioni di saline e morfina sono insieme almeno 10 h a pezzi. Inoltre, ulteriori sessioni di condizionamento vengono aggiunti durante la fase di condizionamento per migliorare l'apprendimento associativo. A parte i punteggi CPP, gli ingressi ai due camere laterali sono misurati e il modello di maggiore entrate per camere laterali è simile a quella delle risposte attive aumentate nel paradigma di autosomministrazione.
Parecchi fattori influenzano l'istituzione del paradigma CPP menzionato sopra. Un fattore chiave è la struttura dell'apparecchio: ratti in generale dovrebbero avere la preferenza simile per entrambi gli alloggiamenti laterali per garantire l'apparato è equilibrato. Un apparato sbilanciato può mascherare l'acquisizione di CPP dovuto l'alta preferenza iniziale a un lato camera13. Di conseguenza, estrema preferenza per una camera lato (oltre il 90% del tempo totale in una qualsiasi delle sezioni laterali) dovrebbe essere evitato quando si sceglie la texture del pavimento o altri segnali contestuali. Per scopi sperimentali diversi, gli sperimentatori possono equilibrare l'apparato CPP modificando gli stimoli contestuali. Per l'apparato equilibrato, due modi di disegno sperimentale sono comunemente usato4. Un modo distorto è alle droghe di coppia con la camera non preferite di tutti i soggetti; un modo imparziale è quello di accoppiare la metà degli animali con le droghe in Aula non preferite, l'altra metà con la camera di comodo. Entrambi i modi possono stabilire CPP13 ma studi17,25 con il design di quest'ultimo sempre escludere molti soggetti a causa della loro forte preferenza alla camera di un lato. Come esiste una vulnerabilità individuale a droga dipendenza26,27,28 , un design parziale è stato scelto in questo studio per evitare l'esclusione di soggetti sani. Una limitazione di progettazione parziale è l'effetto di preferenza incoerente per camere laterali. Come illustrato nella Figura 2, ratti nel gruppo salino hanno punteggi bassi coerenti di CPP per la camera iniziale non preferite. Così, la possibilità che incoerente preferenza agli alloggiamenti laterali poteva influenzare i punteggi CPP nel gruppo della morfina è esclusa impostando i controlli salini. Per evitare l'effetto del soffitto della camera preferita, usiamo la camera iniziale non preferite come la camera accoppiati di morfina. Per evitare l'effetto di novità e di stress sulla preferenza della linea di base a camere laterali, vengono eseguite tre sessioni di pre-condizionamento, e la terza sessione viene utilizzata come linea di base. Il quarto fattore è l'intervallo tra morfina e sessioni di saline. Nel nostro paradigma, scegliamo intervalli di almeno 10 ore per evitare l'effetto di ritiro nel periodo condizionata Salina. Il dosaggio di morfina è anche un fattore importante. Estremamente basse dosi di morfina, ad esempio 0,01 mg/kg6, non hanno indotto la preferenza di posto. Una dose di 10 mg/kg ha indotto il più alto punteggio di CPP17 in ratti ed è comunemente usata in ratto morfina CPP studi17,21,23. Tuttavia, la morfina 10 mg/kg (i.p.) potrebbe indurre depressione respiratoria in circa il 5% dei ratti. Basse dosi di morfina, ad esempio di 5 mg/kg, possono essere utilizzate negli studi futuri. Per altre specie, come albero toporagno, tolleranza ai farmaci dovrebbe essere considerato quando si costruisce il paradigma CPP. Poiché albero toporagno si sviluppa veloce tolleranza alla morfina, alte dosi di morfina devono essere usate durante il condizionamento fase29,30.
Con il protocollo modificato, una memoria a lungo termine di ricompensa è istituito per almeno 18 giorni dopo 6 giorni di condizionamento11 (Figura 2). Gli studi futuri dovrebbero valutare se CPP potrebbe essere mantenuto per un tempo più lungo. Ripetute recidive sono la barriera principale nel trattamento delle tossicodipendenze. Stress, stimoli ambientali e farmaci potrebbero indurre la ricaduta. Dopo l'estinzione della memoria CPP, questo modello potrebbe essere utilizzato per modellare ricaduta indotta da stress o farmaci.
Gli ingressi alle camere di droga-accoppiato nel gruppo della morfina aumentato nel periodo di astinenza11 (Figura 3), che è simile con la maggiore risposte attive nel paradigma di autosomministrazione. Tuttavia, anche ingressi alla camera di salino-accoppiato aumentato con il paradigma CPP in entrambi i ratti e toporagni albero11, che è diverso dalle risposte inattive del paradigma autosomministrazione. Questa differenza potrebbe a causa di diversi principi dei due paradigmi: uno è il condizionamento classico, l'altro è il condizionamento operante. Inoltre, albero toporagni con cibo che esperienze CPP non ha mostrato un tale modello di aumento ingressi30. Pertanto, le entrate aumentate ad entrambe le camere lato in morfina-esperto di animali sono pensate per rappresentare incubata desiderio delle droghe. Anche se la limitazione dell'utilizzo di misure ripetute in un soggetto non può essere esclusa, il modello delle voci aumentate è stato conservato in ratti11, albero toporagni11,30 e scimmie31. Ciò nonostante, una tra il disegno dell'oggetto durante l'astinenza periodo è altamente raccomandato per gli studi futuri di escludere l'effetto di estinzione di misurazioni ripetute.
A parte le entrate aumentate, punteggi CPP con basse dosi di morfina (1 mg/kg e 3 mg/kg) è aumentato progressivamente durante il periodo di astinenza17. Questi risultati suggeriscono che il paradigma CPP potrebbe anche modellare l'incubazione di craving fenomeno. Tuttavia, un maggiore punteggio CPP può rappresentare anche una maggiore memoria per lo stimolo condizionato. In questo aspetto, ingressi per gli alloggiamenti di lato in un apparato di tre-alloggiamento, che sono simili a risposte attive nel paradigma di autosomministrazione, assomigliano più molto attentamente la ricerca di farmaci o l'effetto gratificante delle droghe. Sarebbe interessante verificare le tendenze degli ingressi alla camere laterali durante il periodo di astinenza in paradigmi CPP di ratto delle dosi più basse di morfina. Gli studi futuri con altri farmaci e topi dovrebbero essere fatto per verificare se questo fenomeno è conservato attraverso Farmaci di abuso/specie.

La tossicodipendenza è una malattia cronica1 con diverse tappe2: binge/intossicazione, ritiro/negativo effetto e preoccupazione/anticipazione. Nella fase iniziale binge/intossicazione di Drug addiction, soggetti assumono farmaci dovuto il rinforzo di effetto2. In fase di effetto di ritiro/negativo, soggetti esperienza negativi stati somatici ed emotivi di ritiro di droga, che promuovono meccanismi di rinforzo negativo associati allo sviluppo di dipendenza3. In fase di preoccupazione/anticipazione, soggetti ripristinare la droga in cerca dopo l'estinzione, che potrebbe essere innescato da stecche di droga-collegato o fattori di stress. Negli studi sugli animali di tossicodipendenza, paradigmi di preferenza (CPP) condizionata posto sono utilizzati per simulare l'effetto di rinforzo positivo delle droghe4,5,6 e, così, è usato per modellare la fase iniziale del farmaco ciclo di dipendenza. Morfina, un membro della famiglia degli oppioidi, produce un effetto di rinforzo positivo attivando i recettori oppioidi nel cervello7,8.
Il paradigma CPP è basato sul principio del condizionamento classico (pavloviano) e comunemente usato per misurare l'effetto gratificante delle droghe di abuso, come la morfina4,5,9,10, a causa della sua facile disponibilità in tutti i laboratori. Un paradigma CPP tipico è costituito da tre fasi: le fasi di pre-condizionamento, condizionata e test. Durante la fase di condizionamento, la proprietà gratificanti di un farmaco (stimolo incondizionato) sono in coppia con uno o più stimoli contestuali neutri, che guadagno proprietà gratificanti dopo diversi abbinamenti condizionata e servono come stimoli condizionati. Durante la fase di test, preferenza degli animali per droga-accoppiato scomparti sono misurati e riflette come loro memoria di ricompensa. Per questo motivo, il paradigma CPP è anche utilizzato per studiare i meccanismi di apprendimento e memoria. Per stabilire una memoria a lungo termine di ricompensa di morfina, variabili che influenzano l'istituzione del CPP sono state regolate e ottimizzate con il sotto protocollo descritto11. Stimoli contestuali sono una combinazione di visive, tattili e spunti di odore. Variazioni di stimoli contestuali e punti di tempo prova sono realizzati secondo gli scopi differenti di ricerca. Ad esempio nel nostro precedente studio12, i segnali somatosensoriali (texture piano diverso) sono stati utilizzati principalmente come stimoli contestuali per studiare il ruolo della parte caudale della corteccia insulare, una regione del cervello con funzione somatosensoriale, nell'acquisizione e la manutenzione della memoria a lungo termine di ricompensa. Il design dell'apparecchio e l'assegnazione dei ratti ai lati preferito/non preferite pregiudicare del CPP. Un'apparecchiatura di tre-alloggiamento invece di un apparato di bicamerale è utilizzata nel sotto protocollo per evitare scelte forzate. L'equilibrio delle due camere laterali e l'assegnazione iniziale di animali in loro influenzano l'acquisizione di CPP4,13. Così, un design equilibrato delle sezioni laterali e assegnazione parziale degli animali vengono applicati nel presente protocollo per acquisire una preferenza di posto forte. Mantenimento della memoria a lungo termine di ricompensa richiede più condizionata prove durante la fase di condizionamento. Per ridurre il costo del tempo durante la fase di condizionamento, vengono effettuate due prove condizionata al giorno e le iniezioni di morfina/saline sono controbilanciate per evitare l'effetto di acuta di ritiro della morfina in Salina prove accoppiato4.
Reintegrazione modelli animali14 sono stati stabiliti per la fase di preoccupazione/anticipazione di droga dipendenza dal ciclo di modello. CPP è utilizzato anche per studiare la reintegrazione che modella la ricaduta a comportamenti di dipendenza5. La ricaduta è uno degli ostacoli nel trattamento della tossicodipendenza. Il desiderio è una causa di ripetute recidive. Il desiderio di droghe aumenta costantemente durante il periodo di astinenza, un fenomeno definito incubazione di craving15,16. Incubazione di desiderio è ampiamente studiato nel paradigma di auto-somministrazione di droga ma non il paradigma CPP. L'uso del paradigma CPP a riflettere l'incubazione di desiderio era primo proposto da Li et al. 17. loro risultati17 ha dimostrato che i punteggi CPP di basse dosi di morfina (1 mg/kg e 3 mg/kg), ma non una dose elevata (10 mg/kg) ha aumentati progressivamente durante i primi 14 giorni di astinenza. Allo stesso modo, i topi iniettati con una dose bassa di cocaina ha mostrata maggiore CPP punteggi oltre tempo18. I punteggi CPP aumentati di basse dosi di morfina sono stati utilizzati per riflettere incubate desiderio17. Sia durata trascorso in e numero di voci nell'ambiente droga-collegato è suggerita per riflettere il rinforzo le risposte condizionate a CPP paradigma19. La maggior parte degli studi recenti utilizzano CPP punteggi direttamente o indirettamente riflettere il tempo trascorso nelle camere abbinate in droga mentre il numero di voci da camere laterali come un parametro è spesso trascurato. Per questi motivi, una dose di morfina di 10 mg/kg è stata utilizzata e il numero di voci è stato misurato nel nostro Studio11. I risultati mostrano che le entrate dei ratti per le camere lato aumentato significativamente durante il periodo di astinenza11. Questo indica che punteggi CPP e il numero di iscrizioni sono parametri utili nella valutazione maggiore voglia di farmaci e il paradigma CPP è applicabile per l'incubazione di craving fenomeno di modello. Tuttavia, per ridurre il numero di animali necessari, un gruppo di animali con esperienza di morfina è testato ripetutamente; così, l'effetto dell'estinzione non potrebbe escludersi con la corrente all'interno del disegno dell'oggetto. A tra il disegno dell'oggetto con lo stesso protocollo in grado di superare questa limitazione.
Quanto segue descrive il protocollo CPP che stabilito la memoria a lungo termine di ricompensa e modellato aumentato desiderio. Brevemente, dopo tre giorni di pre-condizionamento, ratti passano attraverso sei condizionata giorni con due prove condizionata al giorno e quindi sono testati in diversi momenti dopo l'ultima prova condizionata. In questo paradigma CPP, viene costruito un riquadro di tre-alloggiamento di cloruro di polivinile (PVC) utilizzato come l'apparato CPP e il piano dell'apparato è equilibrato. L'apparecchio consiste di due alloggiamenti laterali nero di grandi dimensioni (30 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) e una camera di mezzo bianca (11 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) con pavimento in PVC liscio bianco. Gli alloggiamenti di due laterali hanno texture piano diverso come segnali somatosensoriali: uno con un piano di plexiglass di griglia, l'altro con un pavimento PVC grezzo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="854">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Morphine</td>
			<td style="width:352px;">Shenyang First Pharmaceutical Factory</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CPP apparatus/Camera</td>
			<td style="width:352px;">Anlai Technology Company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SPSS</td>
			<td style="width:352px;">IBM Inc</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a conditioned place preference protocol for measuring incubation of craving in rats

Delle principali cause di ricadute ripetute è un forte desiderio per la droga. Drug craving aumenta progressivamente durante il periodo di astinenza, un fenomeno definito incubazione del desiderio di droga. Qui, descriviamo un protocollo di preferenza (CPP) del posto di morfina condizionata per l'incubazione di desiderio nei ratti di misura. In questo protocollo, un paradigma CPP principalmente impiegando segnali somatosensoriali viene utilizzato per stabilire una memoria a lungo termine di ricompensa di morfina. È costruita in una scatola CPP di tre-alloggiamento che si differenzia la texture del pavimento della camera. In primo luogo, gli animali sono testati per la loro preferenza della linea di base per le camere due lato per tre giorni consecutivi. Quindi, sono iniettati intraperitonealmente con morfina/salino e inserire nella loro camera non preferito/preferite per 45 min. Dopo 6 giorni di condizionata, loro preferenza agli alloggiamenti laterali è testato per 15 min a intervalli di tempo differenti dopo l'ultima sessione di condizionata. Con questo paradigma, la memoria di ricompensa di morfina potrebbe durare per almeno 18 giorni. Per verificare se il protocollo di cui sopra può modellare aumentato desiderio, il numero di ingressi nelle camere a due laterali è contato durante il periodo di astinenza. I risultati mostrano che le entrate aumentato, suggerendo che il paradigma CPP potrebbe imitare l'incubazione di desiderio. Gli studi futuri possono utilizzare questo modello per studiare i meccanismi neurali alla base di memoria a lungo termine e l'incubazione di desiderio.

I seguenti risultati rappresentativi mostrano che può essere mantenuta una morfina che CPP può essere stabilita con successo dal protocollo sopra descritto e la memoria per la ricompensa di morfina a lungo termine (Figura 2). Il numero di voci da camere laterali, analoghe al numero di risposte attive nel paradigma di autosomministrazione, riflette la proprietà rinforza di morfina. L'aumento del numero di voci (Figura 3), che indica l'incubazione di brama, è stata osservata mediante questo paradigma CPP di morfina.
Memoria CPP potrebbe durare almeno 18 giorni dopo l'ultima sessione di condizionata.
10 ratti nel gruppo salino e ventuno nel gruppo della morfina sono stati utilizzati per testare l'espressione della memoria a lungo termine gratificante. Un misto ANOVA ha rivelato differenze significative nell'interazione tra gruppo e test (F (3,87) = 4.973, p = 0,003), test (F (3,87) = 18.237, p < 0,001) e gruppo (F (1,29) = 11.413, p = 0,002). Differenze significative tra test (F (3,60) = 46.628, p < 0,001) nel gruppo di morfina, ma non fisiologica group(F(3,27) = 1.576, p = 0.218) sono state rilevate da un one-way ANOVA ripetuta. L'analisi di confronto più con regolazione di Bonferroni ha mostrato differenze significative tra le tre prove e T0 nel gruppo della morfina. Come mostrato nella Figura 2, la memoria di ricompensa di morfina è durato almeno 18 giorni e diminuito in una tendenza di tempo-dipendente. I dati sono ottenuti da un precedente studio pubblicato11.
Ingressi ai vani laterali in gruppo di morfina è aumentato progressivamente
Gruppo di morfina Per verificare l'andamento delle entrate, gruppo (abbinate in soluzione salina e morfina-accoppiato) come fattore tra soggetti e test (T0, T1, T2 e T3) come fattore di entro-oggetti sono stati fissati per un ANOVA mista. Nessuna differenza significativa nell'interazione tra gruppo e test (F (2.311,92.449) = 1.915, p = 0.147) e gruppo (F(1,40) = 0,898, p = 0.349), ma significato nel test (F(2.311,92.499) = 24.243, p < 0,001), sono stati rilevati. L'analisi di confronto più con meno significativi test di differenza (LSD) ha mostrato differenze significative tra T1 e T0 (p < 0,001), T2 e T0 (p < 0,001) e T3 e T0 (p < 0,001) nel gruppo della morfina in ingressi abbinati in morfina. Per quanto riguarda scomparti abbinate in soluzione fisiologica, statistiche significati esistevano tra T2 e T0 (p = 0,002) e T3 e T0 (p = 0,003) ma non T1 e T0 (p = 0.246), che è simile al modello di incubazione di eroina brama24. In generale, entrate nelle stanze laterali nella morfina gruppo maggiore tempo-dipendente.
Ratti inseriti più frequentemente al vano morfina-accoppiato di vano salino-accoppiato al T1 (t(1,21) =-2.833, p = 0,010) e T2 (t(1,21) =-4.458, p = 0,0002) ma non T3 (t(1,21) =-0.471, p = 0,642) (a due code accoppiato t-test).
Gruppo salino Simile con il gruppo di morfina, un misto ANOVA è stato applicato e ha rivelato nessuna differenza significativa nell'interazione tra gruppo e test (F(3,54) = 0,345, p = 0.793), test (F(3,54) = 1,793, p = 0.159) e gruppo (F(1,18) = 0,151, p = 0.702). Così, entrate nelle stanze laterali nel gruppo salino sono stabili nel tempo.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig2.jpg"> Figura 2: memoria CPP può durare almeno 18 giorni ma diminuisce con il tempo. Conservazione della memoria di CPP nel gruppo della morfina (n = 21) e il gruppo salino (n = 10) è stata valutata misurando il Punteggio di CPP per parecchi punti di tempo dopo ultimo condizionata (T1, 2 giorni; T2, 10 giorni e T3, 18 giorni). Tutti i valori dei punteggi CPP sono media ± SEM. # # # indica p < 0,001 e # # significa p < 0.01 rispetto al gruppo salino; indica p < 0,001 rispetto a T0 nel gruppo della morfina. Questa figura è stata modificata da sole et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig3.jpg"> Figura 3: ingressi al lato-chambers in gruppi di morfina e saline. Ingressi per due camere laterali nel gruppo della morfina (n = 21) e il gruppo salino (n = 10) sono stati valutati a parecchi punti di tempo dopo l'ultimo condizionata (T1, 2 giorni; T2, 10 giorni e T3, 18 giorni) e rispetto a T0. Tutti i valori degli ingressi sono media ± SEM Nel gruppo di morfina (A), ingressi al lato di morfina-accoppiato aumentato in maniera significativa da T1 a T3 mentre entrate della camera Salina-accoppiato solo aumentato significativamente da T2. Accoppiata di t test con compartimento abbinate in morfina e abbinate in soluzione salina ha mostrato un aumento molto significativo sia T1 che T2. Nel gruppo salino (B), non ci sono cambiamenti significativi in ingressi ad entrambi i lati. Questa figura è stata modificata da sole et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

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A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Qui, un protocollo di preferenza (CPP) di morfina condizionata posto è descritto per misurare l'incubazione di desiderio in ratti.

Un protocollo di Conditioned Place Preference per l'incubazione di Craving nei ratti di misura

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Questo metodo può aiutare ad affrontare alcune domande chiave nel campo della tossicodipendenza sulle voglie di consumo di droga e sull'incubazione della risposta al desiderio. Con soli sei giorni di condizionamento della morfina, la risposta della memoria di preferenza del luogo condizionata può essere estesa a 18 giorni per l'osservazione dei fenomeni di brama nel modello del ratto. Le implicazioni di questo modello di condizionamento della morfina del ratto si estendono verso il promuovere la nostra comprensione dei meccanismi sottostanti dell'incubazione delle voglie.Prima di iniziare la procedura, costruire un apparato di preferenza del luogo condizionato a tre camere composto da due grandi camere laterali nere da 30 per 25 per 30 centimetri. E una camera centrale bianca da 11 a 25 per 30 centimetri, con un pavimento liscio in PVC bianco. Quindi aggiungere diversi segnali tattili alle camere laterali per testare le preferenze iniziali del topo.Per il precondizione degli animali, rimuovere le porte della ghigliottina per consentire il libero accesso all'intero apparato. E metti un topo nella camera centrale. Registrare l'attività dell'animale per 15 minuti, calcolando il tempo trascorso nelle due camere laterali il terzo giorno come linea di base.Per il condizionamento degli animali, iniettare il gruppo di ratti condizionati alla morfina con un millilitro per chilogrammo di 10 milligrammi per millilitro morfina cloridrato IP al mattino. E con un millilitro per chilogrammo salina 10 ore dopo, ogni giorno per sei giorni. Mettendo ogni topo nel suo farmaco appropriato accoppiato, non preferito o soluzione salina accoppiato, camera preferita per 45 minuti immediatamente dopo ogni iniezione.Per il test degli animali condizionati alla morfina, nei giorni due, 10 e 18 dopo l'ultima sessione di condizionamento, rimuovere le porte della ghigliottina per consentire il libero accesso all'intero apparato. E registrare l'attività di ogni animale per 15 minuti dopo il posizionamento nella camera centrale per l'esplorazione gratuita dell'intero apparato in uno stato libero di morfina. La conservazione della memoria della preferenza del luogo condizionato nei gruppi morfina e salina viene valutata misurando il punteggio delle preferenze del luogo condizionato in più punti di tempo dopo l'ultima sessione di condizionamento.Il numero di voci alle camere laterali è analogo al numero di risposte attive nel paradigma di auto-amministrazione, riflettendo la proprietà rinforzante della morfina e con un numero maggiore di voci che indicano l'incubazione del desiderio. Come illustrato, è possibile stabilire correttamente una preferenza di posizione condizionata dalla morfina utilizzando questo protocollo. Indurre una memoria di ricompensa della morfina a lungo termine per un massimo di 18 giorni dopo l'ultima sessione di condizionamento.Quando si tenta questa procedura, è importante ricordare di scegliere di bilanciare i segnali tattili. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altre misure come il ripristino dopo ogni condizionamento. Per rispondere ad ulteriori domande sul fatto che il reintegro sotto l'incubazione del desiderio abbia meccanismi sottostanti simili.Dopo il reintegro, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel campo dell'aggiunta di farmaci per esplorare l'incubazione del desiderio nei paradigmi di preferenza del luogo condizionato dei ratti.

Research

JoVE Journal

Behavior

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microiniezione stereotassica di vettori virali che esprimono Cre ricombinasi per studiare il ruolo di geni bersaglio in cocaina condizionata place preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

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