Name: a conditioned place preference protocol for measuring incubation of craving in rats
Uploaded: 2018-11-06T14:00:00
Duration: 4 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats at JoVE.com

Эта работа получила поддержку от национальных естественных наук фонд из Китая (NSFC) 31741058 (ВМФ), Шэньчжэнь правительственных грантов (JCYJ20170818162613877 и JCYJ20170818163217196) и Китай докторской науки Фонд Грант 2017 М 622826 (К.Ж).

Экспериментальной процедуры выполнялись в соответствии с руководящими принципами для национальных уход и использование животных и экспериментов были утверждены институциональный уход животных и использования Комитетом в Шэньчжэнь институты передовых технологий, китайский Академия наук.
1. животных привыкания
<ol><li>Получить от животных лабораторных взрослых самцах и поддерживать их под свет/темно цикла 12 h (свет на с 7:00 до 19:00) с свободный доступ к продовольствию и воде.</li>
	<li>Обрабатывать животных, играя с ними или поглаживая их два раза в день за две недели до начала экспериментов.</li>
	<li>Случайным образом назначьте животных в соленой или морфин группы.</li>
</ol>2. наркотиков подготовка
<ol><li>Подготовить морфина гидрохлорида как 10 мг/мл и придать крыс внутрибрюшинно (и.п.) в объеме 1 мл/кг.</li>
	<li>Как элемент управления придать крыс с физиологического раствора в объеме 1 мл/кг.</li>
</ol>3. CPP аппарат
<ol><li>Построить-трехкамерный CPP аппарат с различных тактильные (этаж) сигналы и тест крыс первоначальное предпочтение двух бортовых камер. Аппарат состоит из двух палат большие черные боковые (30 см × 25 × 30 см, Д × Ш × в) и один среднего белого камеры (11 cm × 25 × 30 см, Д × Ш × в) с белым полом гладкая ПВХ. Два бортовых камер имеют различные этаж текстуры как соматосенсорные подсказки: один с полом из плексигласа сетки, а другой с черновой пол из ПВХ.</li>
	<li>Отличаются сочетанием тактильные сигналы, чтобы убедиться, что аппарат является беспристрастной, поскольку предвзятое аппарат подвержен давая ложные положительные результаты4. Примечание: Важным методологическим вопросом в дизайн аппарата CPP является ли аппарат «предвзятой» или «объективное»4. Если одна группа неподготовленных крыс показывает не первоначальное предпочтение одной стороны камеры над другой, аппарат считается «объективное». В противном случае рассматривать его как «предвзятым»13.</li>
</ol>4. CPP процедура
<ol><li>Создание морфина индуцированной CPP парадигмы главным образом согласно предыдущих исследования21,22 модификация кондиционирования моменты времени, количество кондиционирования сессий, кондиционирования испытательный период и тестирования время точек20 . Краткое описание приводится ниже, из которых экспериментальный график изображен на рисунке 1.</li>
	<li>Этап предварительного кондиционирования<ol>
<li>Во время этой фазы (день 1-3) удалите дверцы системы Гильотина разрешить свободный доступ к весь аппарат и место животного в середине камеры.</li>
		<li>Рекорд активности животных на 15 мин.</li>
		<li>Рассчитать время, проведенное в двух бортовых камер на 3 день как базовый и называть это T0.</li>
		<li>Удаление крыс, которые ввести меньше чем - четыре раза либо из бортовых камер от эксперимента23 как этих крыс, скорее всего, есть проблемы в общее благосостояние (например, грязный меха и наличие опухоли). Проверьте состояние здоровья животных в целом экспериментальный период.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Фаза принадлежности Примечание: Принадлежности этап включает в себя 6 дней (день 4-9).<ol>
<li>Для морфина кондиционером субъектов придать крыс и.п. морфин (10 мг/кг) или физиологического раствора (1 мл/кг) поочередно утром (9:00) и вечером (19:00) сессий (10 h врозь).</li>
		<li>Ограничивайте крыс сразу же после каждой инъекции в паре наркотиков-(предпочтительно) или физиологического раствора в паре (предпочитаемый) Палата 45 мин (рис. 1B).</li>
		<li>Держите система видеозаписи на. Примечание: Согласно нашему опыту, около 5% крыс имеют угнетение дыхания после первой инъекции морфина (10 мг/кг). В таком случае для увеличения выживаемости дыхательной депрессии крыс, получить крысы из кондиционной камеры, вытащить свой язык и положил его на белой папиросной бумаги в его домашней клетке.</li>
		<li>Для элементов управления, солевых кондиционером дают крыс физиологическим инъекций (1 мл/кг) перед воздействием одной стороны палату CPP аппарата во время утренней сессии и на другой стороне, во время вечерней сессии 45 мин/сессии соответствует группы морфина (Рисунок 1 C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Этап тестирования<ol>
<li>Во время этой фазы удалите дверцы системы Гильотина разрешить свободный доступ к весь аппарат и место животного в Ближнем палаты, чтобы позволить им свободно исследовать весь аппарат за 15 мин.</li>
		<li>Запишите их активности в течение этого 15 мин.</li>
		<li>Провести три испытания после принадлежности, т.е., тест 1 (T1), тест 2 (T2) и тест 3 (T3), 2 дней, 10 дней и 18 дней после последней сессии принадлежности в государства, свободного от морфина, соответственно (рис. 1A).</li>
		<li>Различаются тестирования время точки для различных экспериментальных целей. Примечание: Чтобы свести к минимуму количество необходимых крыс, используется в рамках темы дизайна. Однако, чтобы исключить эффект исчезновения, между субъектом дизайн не требуется.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig1.jpg"> Рисунок 1: экспериментальный процедуры. (A) экспериментальных процедур всего процесса CPP. (B) экспериментальный график этапа принадлежности группы морфина. (C) экспериментальный график этапа принадлежности солевой группы. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
5. анализ данных
<ol><li>Подсчитать очки CPP в morphine(saline) группы, как: Оценка CPP = время, проведенное в камере наркотиков в паре-(предпочтительно) / общее время, затраченное в обеих палатах принадлежности.</li>
	<li>Выполните анализ данных CPP баллы и входы в сторону камеры с соответствующих статистических методов, использовании SPSS.</li>
	<li>Представляем все поведенческих данных означает ± SEM, где SEM это стандартная ошибка среднего. Рассмотрим значения p < 0,05 как статистически значительным и указывают на звездочки (*) и octothorpesin (#) в цифрах.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Leshner, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction+is+a+brain+disease,+and+it+matters.">Addiction is a brain disease, and it matters.</a> Science. 278 (5335), 45-47 (1997).</li><li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurocircuitry+of+Addiction.">Neurocircuitry of Addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li><li>Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thalamic+input+to+the+nucleus+accumbens+mediates+opiate+dependence.">A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence.</a> Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).</li><li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+paradigm:+a+comprehensive+review+of+drug+effects,+recent+progress+and+new+issues.">Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues.</a> Progress in Neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).</li><li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+(CPP)+paradigm:+update+of+the+last+decade.">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).</li><li>Mucha, R. F., vander Kooy, D., O'Shaughnessy, M., Bucenieks, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+reinforcement+studied+by+the+use+of+place+conditioning+in+rat.">Drug reinforcement studied by the use of place conditioning in rat.</a> Brain Research. 243 (1), 91-105 (1982).</li><li>van Ree, J. M., Gerrits, M. A., Vanderschuren, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opioids,+reward+and+addiction:+An+encounter+of+biology,+psychology,+and+medicine.">Opioids, reward and addiction: An encounter of biology, psychology, and medicine.</a> Pharmacological Reviews. 51 (2), 341-396 (1999).</li><li>Le Merrer, J., Becker, J. A., Befort, K., Kieffer, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reward+processing+by+the+opioid+system+in+the+brain.">Reward processing by the opioid system in the brain.</a> Physiological Reviews. 89 (4), 1379-1412 (2009).</li><li>Bardo, M. T., Bevins, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+place+preference:+what+does+it+add+to+our+preclinical+understanding+of+drug+reward?.">Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward?.</a> Psychopharmacology. 153 (1), 31-43 (2000).</li><li>Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+place+preference+using+opiate+and+stimulant+drugs:+a+meta-analysis.">Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: a meta-analysis.</a> Neuroscience &amp; Biobehavioral Reviews. 19 (1), 39-51 (1995).</li><li>Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+entrances+to+side+compartments+indicate+incubation+of+craving+in+morphine-induced+rat+and+tree+shrew+CPP+models.">Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).</li><li>Sun, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+caudal+part+of+the+posterior+insula+of+rats+participates+in+the+maintenance+but+not+the+acquisition+of+morphine+conditioned+place+preference.">The caudal part of the posterior insula of rats participates in the maintenance but not the acquisition of morphine conditioned place preference.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. , (2018).</li><li>Cunningham, C. L., Ferree, N. K., Howard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparatus+bias+and+place+conditioning+with+ethanol+in+mice.">Apparatus bias and place conditioning with ethanol in mice.</a> Psychopharmacology. 170 (4), 409-422 (2003).</li><li>Carles, S. -. S., Rainer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=REVIEW:+Behavioural+assessment+of+drug+reinforcement+and+addictive+features+in+rodents:+an+overview.">REVIEW: Behavioural assessment of drug reinforcement and addictive features in rodents: an overview.</a> Addiction Biology. 11 (1), 2-38 (2006).</li><li>Grimm, J. W., Hope, B. T., Wise, R. A., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroadaptation.+Incubation+of+cocaine+craving+after+withdrawal.">Neuroadaptation. Incubation of cocaine craving after withdrawal.</a> Nature. 412 (6843), 141-142 (2001).</li><li>Gawin, F., Kleber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+treatments+of+cocaine+abuse.">Pharmacologic treatments of cocaine abuse.</a> Psychiatric Clinics of North America. 9 (3), 573-583 (1986).</li><li>Li, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+amygdala+extracellular+signal-regulated+kinase+signaling+pathway+is+critical+to+incubation+of+opiate+craving.">Central amygdala extracellular signal-regulated kinase signaling pathway is critical to incubation of opiate craving.</a> J Neurosci. 28 (49), 13248-13257 (2008).</li><li>Lubbers, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Extracellular+Matrix+Protein+Brevican+Limits+Time-Dependent+Enhancement+of+Cocaine+Conditioned+Place+Preference.">The Extracellular Matrix Protein Brevican Limits Time-Dependent Enhancement of Cocaine Conditioned Place Preference.</a> Neuropsychopharmacology. 41 (7), 1907-1916 (2016).</li><li>Bardo, M. T., Miller, J. S., Neisewander, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+place+preference+with+morphine:+the+effect+of+extinction+training+on+the+reinforcing+CR.">Conditioned place preference with morphine: the effect of extinction training on the reinforcing CR.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 21 (4), 545-549 (1984).</li><li>Sun, Y., Zong, W., Zhou, M., Ma, Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-conditioned+place+preference+treatment+of+chloral+hydrate+interrupts+the+rewarding+effect+of+morphine.">Pre-conditioned place preference treatment of chloral hydrate interrupts the rewarding effect of morphine.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , 60-63 (2015).</li><li>Lin, X., Wang, Q., Cheng, Y., Ji, J., Yu, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+of+protein+expression+profiles+in+the+amygdala+during+the+process+of+morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rats.">Changes of protein expression profiles in the amygdala during the process of morphine-induced conditioned place preference in rats.</a> Behavioural Brain Research. 221 (1), 197-206 (2011).</li><li>Lv, X. -. F., Xu, Y., Han, J. -. S., Cui, C. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+activity-regulated+cytoskeleton-associated+protein+(Arc/Arg3.1)+in+the+nucleus+accumbens+is+critical+for+the+acquisition,+expression+and+reinstatement+of+morphine-induced+conditioned+place+preference.">Expression of activity-regulated cytoskeleton-associated protein (Arc/Arg3.1) in the nucleus accumbens is critical for the acquisition, expression and reinstatement of morphine-induced conditioned place preference.</a> Behavioural Brain Research. 223 (1), 182-191 (2011).</li><li>Meng, Z., Liu, C., Hu, X., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatosensory+cortices+are+required+for+the+acquisition+of+morphine-induced+conditioned+place+preference.">Somatosensory cortices are required for the acquisition of morphine-induced conditioned place preference.</a> PLoS One. 4 (11), e7742 (2009).</li><li>Shalev, U., Morales, M., Hope, B., Yap, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+changes+in+extinction+behavior+and+stress-induced+reinstatement+of+drug+seeking+following+withdrawal+from+heroin+in+rats.">Time-dependent changes in extinction behavior and stress-induced reinstatement of drug seeking following withdrawal from heroin in rats.</a> Psychopharmacology. 156 (1), 98-107 (2001).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+lesions+of+the+bilateral+ventrolateral+orbital+cortex+inhibit+methamphetamine-associated+contextual+memory+formation+in+rats.">Electrolytic lesions of the bilateral ventrolateral orbital cortex inhibit methamphetamine-associated contextual memory formation in rats.</a> Brain Research. , (2015).</li><li>Vanderschuren, L. J., Everitt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+seeking+becomes+compulsive+after+prolonged+cocaine+self-administration.">Drug seeking becomes compulsive after prolonged cocaine self-administration.</a> Science. 305 (5686), 1017-1019 (2004).</li><li>Deroche-Gamonet, V., Belin, D., Piazza, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+addiction-like+behavior+in+the+rat.">Evidence for addiction-like behavior in the rat.</a> Science. 305 (5686), 1014-1017 (2004).</li><li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+mechanism+for+choosing+alcohol+over+an+alternative+reward.">A molecular mechanism for choosing alcohol over an alternative reward.</a> Science. 360 (6395), 1321-1326 (2018).</li><li>Sun, Y. M., Yang, J. Z., Sun, H. Y., Ma, Y. Y., Wang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+tree+shrew+chronic+morphine+dependent+model.">Establishment of tree shrew chronic morphine dependent model.</a> Dongwuxue Yanjiu. 33 (1), 14-18 (2012).</li><li>Duan, Y., Shen, F., Gu, T., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction:+From+Context-Induced+Hedonia+to+Appetite,+Based+on+Transition+of+Micro-behaviors+in+Morphine+Abstinent+Tree+Shrews.">Addiction: From Context-Induced Hedonia to Appetite, Based on Transition of Micro-behaviors in Morphine Abstinent Tree Shrews.</a> Frontiers in Psychology. 7, 816 (2016).</li><li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rhesus+monkeys:+Resistance+to+inactivation+of+insula+and+extinction.">Morphine-induced conditioned place preference in rhesus monkeys: Resistance to inactivation of insula and extinction.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 131, 192-200 (2016).</li></ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Здесь метод с использованием парадигмы CPP морфина описана установить долгосрочные вознаграждения памяти в Крыса с соматосенсорные подсказки как кондиционером контекста. Для построения такой долгосрочной памяти вознаграждение, изменяется предыдущий протокол21 с сбалансированный аппарат CPP и физиологического раствора и морфин сеансы являются набор по крайней мере 10 h друг от друга. Кроме того во время этапа принадлежности для повышения качества обучения ассоциативные добавляются дополнительные принадлежности сессий. Помимо оценки CPP входы в две стороны камеры измеряются и шаблон расширения входов в сторону камеры схож с этим увеличение активных ответов в парадигме самоуправления.
Создание CPP парадигмы, упомянутые выше влияют несколько факторов. Одним из ключевых факторов является дизайн аппарата: крысы в целом должны иметь аналогичные предпочтение обеспечить сбалансированный аппарат по обе стороны камеры. Несбалансированные аппарат может маскировать приобретение CPP из-за первоначального высокое предпочтение одной стороны Палаты13. Таким образом крайняя предпочтение одной стороне камеры (более 90% общего времени в любом из двух бортовых камер) следует избегать при выборе текстуру слово или другие контекстные подсказки. Для различных экспериментальных целей экспериментаторов можно сбалансировать CPP аппарат, изменяя контекстуальные раздражителей. Для сбалансированного аппарат часто используемые4существуют два способа экспериментальный дизайн. Один из способов предвзятым — пара наркотиков с непредпочитаемого камеры со всеми субъектами; объективное способом является пара половина животных с наркотиками в зале непредпочитаемого, другая половина с предпочтительным камеры. Оба способа можно установить CPP13 , но исследования17,25 с последнего дизайн всегда исключают многие предметы из-за их явное предпочтение одной стороне камеры. Как отдельные уязвимость к наркотиков наркомания26,27,28 , предвзятым дизайн был выбран в этом исследовании чтобы избежать исключения здоровых испытуемых. Одно ограничение предвзятым дизайна является эффект несовместимым предпочтение стороне камеры. Как показано на рисунке 2, крыс в группе физиологическим имеют последовательную низкие оценки CPP для первоначального непредпочитаемого камеры. Таким образом исключается возможность, что несогласованные предпочтение стороне камеры может повлиять на оценки CPP в группе морфина, установив физиологический контроль. Чтобы избежать эффекта потолок предпочтительным камеры, мы используем первоначальный непредпочитаемого камеры как морфин спаренные камеры. Чтобы избежать эффекта новизны и стресса на базовых предпочтений в сторону камеры, выполняются три сессии предварительного кондиционирования, и третья сессия используется в качестве базового. Четвертым фактором является интервал между морфина и физиологическим сессий. В нашей парадигме мы выбираем промежутки времени по крайней мере 10 часов чтобы избежать вывода эффекта в период физиологическим принадлежности. Доза морфина также является важным фактором. Чрезвычайно низкие дозы морфина, например 0,01 мг/кг6, не вызвать место предпочтения. В дозе 10 мг/кг индуцированной высокая оценка CPP17 крыс и широко используется в крыса морфина CPP исследования17,21,23. Однако 10 мг/кг морфина (и.п.) может вызвать угнетение дыхания в около 5% крыс. Более низкие дозы морфина, например 5 мг/кг, могут использоваться в будущих исследованиях. Для других видов, таких как дерево бурозубка терпимости к наркотикам должны рассматриваться при построении CPP парадигмы. Поскольку дерево белозубка развивается быстро терпимости к морфину, увеличение дозы морфина должны использоваться в ходе кондиционирования этап29,30.
С изменение протокола долговременную память вознаграждение устанавливается для по крайней мере 18 дней после 6 дней кондиционирования11 (рис. 2). Будущие исследования должны измерять ли CPP могут сохраняться в течение длительного времени. Повторные рецидивы является главным препятствием в лечении наркомании. Рецидив может вызвать стресс, экологические сигналы и наркотики. После исчезновения CPP памяти эта модель может использоваться для моделирования рецидив, вызванный стресс или наркотиков.
Входы в паре наркотиков камеры в группе морфина увеличилась в период воздержания11 (рис. 3), которая схожа с повышенной активные ответы в парадигме самоуправления. Однако входы в камеру физиологического раствора в паре также увеличилось с CPP парадигмы в крыс и тупайи11, который отличается от неактивных ответы самоуправления парадигмы. Эта разница может из-за различных основополагающих принципов двух парадигм: один классический подготовлять, другой — оперантного кондиционирования. Кроме того тупайи с пищей, которую испытывает CPP не показывают такой шаблон расширения входов30. Таким образом увеличение входов в обе стороны камеры в морфин опытных животных считается представляют инкубирован жажда наркотиков. Хотя нельзя исключить ограничение использования повторяющихся мер в одной теме, шаблон повышенной записей был сохраняется в крыс11, тупайи11,30 и обезьян31. Тем не менее между предметом дизайна во время абстиненции период настоятельно рекомендуется для будущих исследований исключить эффект исчезновения повторных измерений.
Помимо расширения входов CPP счеты с низкими дозами морфина (1 мг/кг и 3 мг/кг) увеличивалось в течение периода воздержания17. Эти результаты показывают, что CPP парадигма может также модель инкубации тяга явление. Однако расширение CPP оценка может также представлять увеличения памяти на условный стимул. В этом аспекте входы в сторону камеры в аппарате трехкамерный, которые похожи на активной реакции в парадигме самоуправления, больше напоминают Поиск наркотиков или полезный эффект препаратов. Было бы интересно проверить тенденции входов в сторону камеры в период воздержания в крыса CPP парадигмы более низкие дозы морфия. Будущие исследования с другими препаратами и мышей должно быть сделано для проверки ли это явление сохраняется через наркотики видов злоупотреблений.

Наркомания представляет собой хроническое заболевание1 с несколькими различных этапов2: выпивка/интоксикации, вывод/отрицательное влияние и заботой/ожидание. В стадии первоначального выпивка/интоксикации цикла зависимость от наркотиков субъектов принимать наркотики из-за усиливающие эффект2. В стадии влияет на вывод/отрицательная предметы опыт негативные соматических и эмоциональных состояний наркотиков вывода, способствующие отрицательное подкрепление механизмы, связанные с развитием наркомании3. В стадии озабоченность/ожидание субъектов восстановить поисках наркотиков после исчезновения, которые могут быть вызваны сигналы, связанные с наркотиками или стресс. В исследованиях на животных наркомании кондиционером место предпочтение (CPP) парадигмы используются для имитации армирующие положительный эффект препаратов4,5,6 , и, таким образом, он используется для моделирования на начальном этапе препарата зависимость от цикла. Морфин, членом семьи opioid, производит положительный эффект армирующие, активировав опиоидные рецепторы в мозге7,,8.
CPP парадигмы основаны на принципе классической кондиционирования (Павловский) и часто используется для измерения полезный эффект наркотических средств, таких как морфин4,5,9,10, из-за его легко доступность в лаборатории. Типичный CPP парадигмы состоит из трех этапов: этапа предварительного кондиционирования, кондиционирования и испытания. Во время этапа принадлежности награждение свойства препарата (unconditioned стимул) в паре с одной или более нейтральных контекстной раздражителей, которые получить свойства, награждение после нескольких комбинаций принадлежности и служить в качестве условных раздражителей. На этапе тестирования предпочтение животных наркотиков в паре отсеков измеряются и отражение их вознаграждение памяти. По этой причине CPP парадигма также используется для изучения механизмов обучения и памяти. Учредить долгосрочную память награду морфина, переменные, которые влияют на создание CPP были скорректированы и оптимизированы с ниже описывается протокол11. Контекстуальные стимулы представляют собой сочетание визуальные, тактильные и запах подсказки. Вариации контекстуальные раздражителей и тестирования время точек изготавливаются по различных научно-исследовательских целей. Например в наших предыдущих исследования12, соматосенсорные сигналы (различных напольных текстуры) главным образом использовались как контекстуальные раздражители расследовать роль хвостовой части островной коры мозга региона соматосенсорной функцией, в приобретении и поддержание долгосрочной памяти вознаграждение. Дизайн аппарата и назначение крысы предпочитали/непредпочитаемого сторон влияют на создание CPP. Трехкамерная аппарат вместо 2 камеры аппарата используется в ниже протокол, чтобы избежать принудительного выбора. Баланс двух бортовых камер и первоначальная уступка животных в них влияют на приобретение CPP4,13. Таким образом сбалансированный дизайн бортовых камер и предвзятым назначение животных применяются в этом протоколе приобрести прочное место предпочтение. Поддержание долгосрочной памяти награда требует более принадлежности испытания на этапе принадлежности. Чтобы уменьшить время стоимость во время фазы принадлежности, проводятся два испытания принадлежности в день и инъекции морфина/физраствора уравновешенной чтобы избежать острого абстинентного эффекта морфина в солевой парных испытания4.
Восстановление животных моделей14 были созданы для моделирования озабоченность/ожидание этап цикла зависимость от наркотиков. CPP также использовались для изучения восстановление, моделирующее рецидив аддиктивного поведения5. Рецидив является одним из препятствий на пути в лечении наркомании. Тяга является одной из причин повторный рецидив. Жажда наркотиков увеличивается постоянно в период воздержания, явление называется инкубации тяга15,16. Инкубации тягу широко изучается в парадигмы самоуправления наркотиков, но не CPP парадигмы. Использование парадигмы CPP, чтобы отразить инкубации тяга была впервые предложенный Li et al. 17. их результаты17 показал, что CPP десятки низкими дозами морфина (1 мг/кг и 3 мг/кг), но не высокой дозе (10 мг/кг) увеличен постепенно в течение первых 14 дней воздержания. Аналогичным образом мышей вводили с низкой дозой кокаина, показал увеличение CPP баллы за время18. Увеличение CPP десятки низкой дозы морфина были использованы для отражать инкубирован тяга17. Длительность показа в и количество записей в связанных с наркотиками окружающую среду предлагается отразить армирующие условных реакций в CPP парадигмы19. Большинство из последних исследований использовать CPP баллы для прямо или косвенно отражают время, проведенное в паре наркотиков камеры во время количество записей бортовых камер как параметр часто пренебрегают. По этим причинам морфин доза 10 мг/кг был использован и в нашем исследовании11было измерено количество записей. Результаты показывают, что входы крыс в сторону камеры значительно возросло во время периода воздержания11. Это означает, что CPP баллы и количество записей являются полезными параметрами в оценке увеличение жажда наркотиков и CPP парадигма применяется для моделирования инкубации тяга явление. Однако чтобы уменьшить количество животных требуется, группа морфина опытных животных тестируется неоднократно; Таким образом эффект исчезновения не могут быть исключены с током в пределах тема дизайн. A между тема дизайн с тот же протокол может преодолеть это ограничение.
Ниже описывается протокол CPP, установлены долгосрочные вознаграждения памяти и моделируется увеличение жажды. Кратко после трех дней предварительного кондиционирования, крыс через шесть дней принадлежности с двумя принадлежности испытаний в день и затем проверяются в разное время точках после последнего суда принадлежности. В этой парадигме CPP построен-трехкамерный поливинилхлорид (ПВХ) окна, используется как аппарат CPP и пол аппарата является сбалансированным. Аппарат состоит из двух палат большие черные боковые (30 см × 25 × 30 см, Д × Ш × в) и один среднего белого камеры (11 cm × 25 × 30 см, Д × Ш × в) с белым полом гладкая ПВХ. Два бортовых камер имеют различные этаж текстуры как соматосенсорные подсказки: один с полом из плексигласа сетки, а другой с черновой пол из ПВХ.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="854">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Morphine</td>
			<td style="width:352px;">Shenyang First Pharmaceutical Factory</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CPP apparatus/Camera</td>
			<td style="width:352px;">Anlai Technology Company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">SPSS</td>
			<td style="width:352px;">IBM Inc</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a conditioned place preference protocol for measuring incubation of craving in rats

Одной из основных причин повторные рецидивы является жажда наркотиков. Наркотиков жажда увеличивается постепенно в период воздержания, явление называется инкубации жажда наркотиков. Здесь мы описываем морфин-кондиционером место предпочтение (CPP) протокол для измерения инкубации тягу в крыс. В настоящем Протоколе CPP парадигмы, главным образом используя соматосенсорные подсказки используется для создания долгосрочной памяти награду морфина. Окно CPP-трехкамерный, которое отличается в текстуре пола камеры построен. Во-первых животные проверяются на их исходных предпочтение двух бортовых камер трех дней подряд. Затем они вводили внутрибрюшинно морфин/физиологического раствора и положить в их предпочитали/непредпочитаемого камеру за 45 мин. После 6 дней кондиционирования их предпочтений в сторону камеры проверяется на 15 мин в разное время точках после последней сессии принадлежности. С этой парадигмы награда памяти морфина может продолжаться в течение 18 дней. Чтобы проверить ли вышеупомянутый Протокол можно смоделировать увеличение жажды, количество входов в двух бортовых камер, учитываются в период воздержания. Результаты показывают, что входы увеличилось, предполагая, что CPP парадигма может имитировать инкубации тягу. Будущие исследования могут использовать эту модель для изучения нейронных механизмов долговременной памяти и инкубации тягу.

Следующие представитель результаты показывают, что морфин, созданные CPP может быть успешно протоколом, описанных выше и долговременную память награду морфина (рис. 2) может быть сохранен. Количество записей бортовых камер, аналогично количество активных ответов в парадигме самоуправления, отражает армирующие свойства морфина. Увеличение числа записей (рис. 3), указывающее инкубации тягу, было отмечено, с помощью этой парадигмы CPP морфина.
CPP память может продолжаться по крайней мере 18 дней после последней сессии принадлежности.
21 крыс в группе морфина и 10 крыс в солевой группы были использованы для тестирования выражение долгосрочной памяти, награждение. Смешанные ANOVA выявлены существенные различия в области взаимодействия между группой и тест (F (3,87) = 4.973, p = 0,003), испытания (F (3,87) = 18.237, p < 0,001) и группы (F (1,29) = 11.413, p = 0,002). Значительные различия среди тестов (F (3,60) = 46.628, p < 0,001) в группы морфина, но не физиологическим group(F(3,27) = 1.576, p = 0.218) были обнаружены односторонней неоднократные ANOVA. Несколько сравнительный анализ с регулировкой Бонферрони показали значительные различия между тремя тесты и T0 в группе морфина. Как показано на рисунке 2, морфин награда памяти продолжалась по крайней мере 18 дней и снизилась в зависимости от времени тенденции. Данные получены из предыдущих опубликованное исследование11.
Входы для бортовых отсеков в группы морфина, увеличивалось
Группа морфина Чтобы протестировать тренд входов, группа (физиологического раствора в паре и морфина в паре) как фактор между предметов и тест (T0, T1, T2 и T3) как фактор в рамках темы были установлены для смешанного ANOVA. Никаких существенных различий в области взаимодействия между группой и тест (F (2.311,92.449) = 1,915, p = 0.147) и группы (F(1,40) = 0.898, p = 0.349), но значение в тесте (F(2.311,92.499) = 24.243, p < 0,001), были обнаружены. Несколько сравнительный анализ с наименее значительные различия (ЛСД) испытания показали значительные различия между T1 и T0 (p < 0,001), T2 и T0 (p < 0,001) и T3 и T0 (p < 0,001) в группе морфина в паре морфина входов. Относительно физиологического раствора в паре отсеков, между T2 и T0 существовало статистической значимости (p = 0,002) и T3 и T0 (p = 0,003) но не T1 и T0 (p = 0.246), который подобен шаблону инкубации героина, жажда24. В общем входы в сторону камеры в морфин группы увеличение время зависим.
Крысы, чаще вступил в паре морфина отделение чем физиологического раствора в паре отсек на T1 (t(1,21) =-2.833, p = 0,010) и T2 (t(1,21) =-4.458, p = 0.0002) но не T3 (t(1,21) =-0.471, p = 0.642) (2 tailed паре t тесты).
Солевой группы Аналогичные с группой морфина, смешанная ANOVA был применен и выявлено статистически значимых различий в области взаимодействия между группой и тест (F(3,54) = 0.345, p = 0.793), тест (F(3,54) = 1,793, p = 0.159) и группы (F(1,18) = 0.151, p = 0,702). Таким образом входы в сторону камеры в группе физиологическим были стабильными с течением времени.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig2.jpg"> Рисунок 2: CPP памяти может длиться минимум 18 дней, но снижается со временем. Сохранение памяти CPP в группе морфина (n = 21) и солевой группы (n = 10) оценивалась путем измерения CPP Оценка для нескольких точек времени после последнего кондиционирования (T1, 2 дня; T2, T3, 18 дней и 10 дней). Все значения CPP оценки являются среднее ± SEM. ### указывает p < 0,001 и ## означает p < 0,01 по сравнению с физиологическим группой; указывает p < 0,001 по сравнению с T0 в группе морфина. Эта цифра была изменена от Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig3.jpg"> Рисунок 3: входы в сторону камер в группы морфина и физраствора. Входы в две стороны камер в группе морфина (n = 21) и солевой группы (n = 10) были оценены в нескольких точках времени после последнего кондиционирования (T1, 2 дня; T2, T3, 18 дней и 10 дней) и по сравнению с T0. Все значения входов являются среднее ± SEM. В группе морфина (A), входы в сторону морфина в паре очень значительно возросло от T1 до T3 при входов палаты физиологического раствора в паре, только значительно возросла от T2. Парные t тесты с морфина в паре отсек и отсек физиологического раствора в паре показал очень значительное увеличение в T1 и T2. В группе физиологический (B) есть никаких существенных изменений в входов для обеих сторон. Эта цифра была изменена от Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats at JoVE.com

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Здесь морфин кондиционером место предпочтение (CPP) Протокол описан измерить инкубации тягу в крыс.

Протокол предпочтение кондиционером место для измерения инкубации тягу в крыс

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Этот метод может помочь адресовать некоторые ключевые вопросы в поле наркомании о пристрастиях пользы снадобья и инкубации реакции жажды. Что только шесть дней морфина кондиционирования, обусловленное место предпочтение памяти ответ может быть продлен до 18 дней для наблюдения тягу явлений в крысы модели. Последствия этой модели кондиционирования крыс морфина распространяется на дальнейшее наше понимание основных механизмов инкубации тягу.Перед началом процедуры постройте трехкумерный аппарат, состоящий из двух больших, черных 30 на 25 на 30 сантиметров боковых камер. И один белый 11 на 25 на 30 сантиметров средней камеры, с гладкой, белый пол ПВХ. Затем добавьте различные тактильные сигналы в боковые камеры для проверки первоначальных предпочтений крысы.Для предварительного кондиционирования животных снимите двери гильотины, чтобы обеспечить свободный доступ ко всему аппарату. И поместите крысу в среднюю камеру. Запись активности животного в течение 15 минут, расчет времени, затязаемого в двух боковых камерах на третий день в качестве базового.Для кондиционирования животных, вводить морфина обусловленной крысы группы с одним миллилитр на килограмм 10 миллиграммов на миллилитр гидрохлорид морфина IP в первой половине дня. И с одним миллилитром на килограмм физраствора 10 часов спустя, каждый день в течение шести дней. Размещение каждой крысы в соответствующий препарат в паре, не предпочтительный или солевой парной, предпочтительной камеры в течение 45 минут сразу после каждой инъекции.Для тестирования морфина условных животных, в дни два, 10 и 18 после последнего сеанса кондиционирования, удалить двери гильотины, чтобы свободный доступ ко всему аппарату. И записывать активность каждого животного в течение 15 минут после размещения в средней камере для свободного исследования всего аппарата в состоянии, свободном от морфина. Сохранение памяти условных предпочтений места в морфина и солевые группы оценивается путем измерения условных место предпочтение оценка на несколько точек времени после последнего сеанса кондиционирования.Количество записей в боковые камеры аналогично количеству активных ответов в парадигме самоуправления, отражающих укрепляющее свойство морфина и с увеличением числа записей, указывающих на инкубацию тяги. Как показано на примере, морфин условные предпочтения место может быть успешно создана с помощью этого протокола. Индуцирование долгосрочной памяти награды морфина на срок до 18 дней после последнего сеанса кондиционирования.При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы выбрать, чтобы сбалансировать тактильные сигналы. После этой процедуры, другие меры, такие как восстановление после каждого кондиционирования могут быть выполнены. Чтобы ответить на дополнительные вопросы о том, восстановление под инкубацию тягу имеют аналогичные основные механизмы.После восстановления, этот метод проложил путь для исследователей в области добавления наркотиков для изучения инкубации тягу в rats'conditioned парадигмы предпочтения места.

Research

JoVE Journal

Behavior

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Стереотаксические Микроинъекции Вирусные векторы, экспрессирующие Cre рекомбиназы для изучения роли генов-мишеней в Кокаин Условные предпочтения Место

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

Процедура для изучения влияния длительного продовольственной ограничение на героин Ищу в абстинентного крыс

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Жир предпочтения: Роман Модель пищевого поведения у крыс

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Процедура Соблюдать Context-индуцированной Возобновление павловской кондиционером Алкоголь на обращении у крыс

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Протокол для изучения Вымирание условных страх Естественно Велоспорт самок крыс

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Модифицированный Совет Hole - Измерение поведения, познания и социального взаимодействия у мышей и крыс

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

Оценка кокаина индуцированных поведенческих сенсибилизации и условной площади Домашние у мышей

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

Место и реагирования обучение в Открытом поле башня лабиринт

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Павлова кондиционером подход к обучению у крыс

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Восстановление поиска наркотиков у мышей с использованием парадигмы предпочтение кондиционером место

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...