Name: lentiviral vector-mediated gene therapy of hepatocytes ex vivo for autologous transplantation in swine
Uploaded: 2018-11-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine at JoVE.com

Os autores agradecer o Duane Meixner expertise em realizar a injeção de veia porta, Steve Krage, Joanne Pederson e Lori Hillin pelo apoio durante os procedimentos cirúrgicos. Este trabalho foi apoiado pelo Hospital de Minnesota Foundation e Minnesota medicina regenerativa das crianças. R.D.H. era financiado por um prêmio de NIH K01 DK106056 e um centro da clínica de Mayo para a concessão do desenvolvimento da carreira da medicina regenerativa.

Todos os procedimentos de animais foram realizados em conformidade com as orientações institucionais e foram revistos e aprovados pelo cuidado institucional do Animal e uso Comité (IACUC) antes da realização do estudo. Procedimentos descritos aqui foram realizados em suínos machos e fêmeas branco grande fazenda (base genética de 50% Landrace/50% Large White) até 3 meses de idade que são considerados saudáveis e adequados para a cirurgia.  Os animais estão alojados socialmente excepto se for considerada incom...

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	<li>Mak, C. M., Lee, H. C., Chan, A. Y., Lam, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inborn+errors+of+metabolism+and+expanded+newborn+screening:+review+and+update.">Inborn errors of metabolism and expanded newborn screening: review and update.</a> Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. 50 (6), 142-162 (2013).</li><li>Hansen, K., Horslen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+liver+disease+in+children.">Metabolic liver disease in children.</a> Liver Transplantation. 14 (5), 713-733 (2008).</li><li>Schneller, J. L., Lee, C. M., Bao, G., Venditti, C. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarylacetoacetate+hydrolase+deficient+pigs+are+a+novel+large+animal+model+of+metabolic+liver+disease.">Fumarylacetoacetate hydrolase deficient pigs are a novel large animal model of metabolic liver disease.</a> Stem Cell Research. 13 (1), 144-153 (2014).</li></ol>

Este relatório descreve uma ex vivo gene autólogo terapia abordagem para curar um modelo suíno de HT-1. Envolve uma hepatectomy parcial, seguido por ex vivo hepatócito isolamento e transdução de hepatócitos isolados com lenti vírus carregando o transgene corretivo. Hepatócitos autólogos corrigidos então são transplantados para o animal deficiente FAH através da veia porta8. Embora o método descrito é aplicável a todos os modelos animais grandes, com algumas modifi...

Erros inatos do metabolismo do fígado são uma família de doenças genéticas que afetam coletivamente como muitos como 1 em 800 nascidos vivos1. Muitas destas doenças são único gene defeitos2 e podem ser curadas funcionalmente através da introdução de uma única cópia corrigida do gene afetado em um número suficiente de hepatócitos3. Percentagem efectiva de hepatócitos que precisa ser corrigido varia de acordo com a doença de4 e é largamente dependente da natureza da proteína que ele codifica, por exemplo, excretadas proteínas contra citoplasmática. Na maioria dos casos, a eficácia de qualquer tratamento para a doença metabólica é facilmente analisada através da presença de biomarcadores, muitas vezes disponíveis na circulação.
HT-1 é um erro inato do metabolismo do fígado que resulta de um defeito no fumarylacetoacetate hidrolase (FAH)5, a última etapa enzimática em tirosina metabolismo6. Deficiência de FAH conduz a compilação de metabólitos tóxicos no fígado que pode causar morte e insuficiência hepática aguda ou na forma crônica da doença pode causar cirrose e carcinoma hepatocelular. Clinicamente, a doença é gerenciada pela administração de 2-(2-nitro-4-trifluoromethylbenzoyl)-1,3-cyclohexanedione (NTBC), um inibidor de pequenas moléculas de uma enzima montante de FAH no metabolismo da tirosina. A doença fornece um ambiente ideal testar métodos de terapia de gene, como correção de sucesso de até mesmo um pequeno número de hepatócitos eventualmente resultará no repovoamento do fígado inteiro com células corrigidas em modelos animais pequenos e grandes 7 , 8. isso ocorre porque corrigido as células têm uma vantagem de sobrevivência profunda sobre células não corrigidas devido ao acúmulo de metabólitos tóxicos no último. A perda de hepatócitos não corrigidas permite a expansão seletiva dos hepatócitos corrigidos consistente com a capacidade regenerativa do fígado. Tratamento pode ser seguido facilmente medindo a diminuição nos níveis de tirosina e succinylacetone após transplante circulante.
Para justificar a natureza invasiva do procedimento, que inclui uma hepatectomy parcial, o objectivo desta abordagem deve ser uma cura durável. Portanto, vetores de Lentivirus incompetente de replicação são usados porque eles estàvel integrará no hepatócito genoma9. garantindo a entrega do gene corrigida de todas as células-filhas como o fígado cresce e se expande para substituir a rápida perda de células não corrigidas. Isto é vantajoso sobre vetores virais adeno-associado (AAV), que existe principalmente como episomes que só podem ser passados para uma única célula-filha durante a mitose10 , perdendo assim qualquer efeito da terapia em questão de semanas.
Apesar de um crescente corpo de literatura oferece suporte a segurança de lentivirus11, preocupações sobre genotóxicos eventos são atenuados, limitando a transdução das células do hospedeiro a um ambiente controlado em vitro . Vetor livre nunca sistemicamente é introduzido para o host quando este método é executado, limitar a exposição para os hepatócitos que será re-introduzida com transplante autólogo através da veia portal.
Este relatório descreve o método da cirúrgica e procedimentos ex vivo usados para isolar os hepatócitos para gene terapia ex vivo e posterior transplante autólogo12 para o tratamento do porco HT-18. O processo completo inclui 1) uma hepatectomy parcial que serve como uma fonte de hepatócitos e um estímulo de crescimento para o fígado do hospedeiro, 2) isolamento dos hepatócitos do fígado extirpado seguido por ex vivo correção do gene e, finalmente, 3) reintrodução do hepatócitos corrigidos de volta para o host. O método descrito é aplicável a todos os modelos animais grandes, com algumas modificações, mas apenas o FAH-deficiente porco13 terá a vantagem do ambiente seletivo para hepatócitos corrigidos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="763">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">2-(2-nitro-4-trifluoromethylbenzoyl)-1,3-cyclohexanedione (NTBC)</td>
			<td style="width:139px;">Yecuris</td>
			<td style="width:127px;">20-0027</td>
			<td style="width:109px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12 mm Trocar</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>B12STS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mm Trocar</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>B5SHF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 60</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>EGIA60AMT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 45</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>EGIA45AVM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 30</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>SIG30AVM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo catch bag</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>173050G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0 PDS</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z340H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J459H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J426H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dermabond</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>DNX12</td>
			<td>Sterile Dressing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Williams&#8217;-E Powder&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>ME16060P1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8875-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP310-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pen/Strep&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-011-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1679-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA (g/L)</td>
			<td>Oakwood Chemical</td>
			<td>45172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Oakwood Chemical</td>
			<td>3631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">(N-A-C, g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2 2H2O (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase D (mg/mL)</td>
			<td>Crescent Chemical</td>
			<td>17456.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexamethasone</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>NDC6337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal Growth Factor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHG0314</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lentiviral vector-mediated gene therapy of hepatocytes ex vivo for autologous transplantation in swine

Terapia gênica é a escolha ideal para curar muitos erros inatos do metabolismo do fígado. Ex-vivo, vetores de Lentivirus terem sido utilizadas com sucesso no tratamento de muitas doenças hematopoiéticas em seres humanos, sua utilização oferece a expressão do transgene estável devido à capacidade do vetor para integrar o genoma do hospedeiro. Este método demonstra a aplicação ex vivo da terapia do gene dos hepatócitos para uma grande modelo animal de tirosinemia hereditária tipo eu. Este processo consiste em 1) isolamento dos hepatócitos primários do animal doador/beneficiário autólogo, 2) ex vivo entrega de gene via transdução de hepatócitos com um vetor de Lentivirus e 3) autólogo transplante de hepatócitos corrigidos através do portal injeção da veia. Sucesso do método baseia-se geralmente em cima da remoção eficiente e estéril da ressecção hepática, cuidadosa de manipulação do espécime extirpado para isolamento dos hepatócitos viáveis suficientes para transdução re-engrafting, alta porcentagem de células isoladas, e procedimentos cirúrgicos assépticos por toda parte para prevenir a infecção. Falha técnica em qualquer dessas etapas irá resultar em baixo rendimento dos hepatócitos transduzidos viáveis para transplante autólogo ou infecção do animal doador/beneficiário. O modelo de porco de tirosinemia hereditária humana tipo 1 (HT-1) escolhido para esta abordagem é excepcionalmente favorável para tal método, como até mesmo uma pequena porcentagem de enxertia das células corrigidas levará para repovoamento do fígado com células saudáveis com base em um poderoso vantagem seletiva sobre hepatócitos nativo-doentes. Embora esta selecção de crescimento não será verdadeira para todas as indicações, esta abordagem é uma Fundação para expansão em outras indicações e permite a manipulação deste ambiente para tratar doenças adicionais, ambos dentro do fígado e para além dele, enquanto controle para a exposição ao vetor viral e oportunidade para toxicidade fora do alvo e tumorigenicidade.

A ressecção hepática e transplante autólogo são representados esquematicamente na Figura 1. Em uma coorte representativa de 5 porcos, que foram submetidos a ressecção hepática, a maioria tinha rendimentos de > 1 x 109 hepatócitos com viabilidade de aproximadamente 80% (tabela 2), fornecendo a abundância de células para qualquer tipo de desejado manipulações, incluindo gene terapia. Cultura subsequente da parte não-tra...

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Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Este protocolo destina-se a descrever o hepatócito porcina isolamento e ex vivo gene entrega para curar modelos de doenças metabólicas através do transplante de células autólogas. Embora este modelo em particular beneficia de vantagens únicas que favorecem a terapia bem sucedida, o aplicativo é uma Fundação relevante para tratar doenças adicionais e indicações.

Particulas de Lentivirus terapia gênica mediada por vetor de hepatócitos Ex Vivo para transplante autólogo em suínos

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

A terapia genética ex vivo e o transplante de células autólogas para o tratamento de erros de inato do metabolismo no fígado é uma alternativa importante à terapia para esses distúrbios. E nos permite não só tratar esses transtornos, mas descobrir a biomassa necessária para conseguir alcançar um resultado terapêutico. Essa abordagem também evita as consequências significativas da imunossupressão e outras consequências com diferentes tipos de terapias.No contexto atual, estamos usando essa abordagem para tratar a tyrosinemia hereditária tipo 1. No entanto, a ideia é que esta será uma abordagem de plataforma para tratar uma infinidade de diferentes doenças hepáticas com alteração mínima. É importante poder visualizar essa técnica porque há alguma variabilidade quando se trata de visualizar a eficiência da perfusão, que é essencial para obter hepatócitos viáveis para o transplante.Procedimento cirúrgico realizado por Robert Kaiser e Joseph Lillegard. Isolamento celular realizado por Zeji Du, Bruce Amiot. A purificação celular UAU e a transdução ex vivo das células foram feitas por Caitlin VanLith.A preparação dos animais e a preparação do OR foi feita por Kari Allen e Laurie Hillin. Para realizar a entrada inicial do local do porto, realize uma técnica hasson aberta para o umbigo de um anestesizado, de até três meses de idade, grande porco de fazenda branca. Introduzindo um trocarte de 12 milímetros na cavidade abdominal, onde o peritônio é visível.Quando o trocarte estiver no lugar, passe um escopo de 5 milímetros de 30 graus através da porta de entrada e insuflou o abdômen com dióxido de carbono a 15 milímetros de mercúrio. Sob visualização direta com a câmera laparoscópica, coloque 2 portas adicionais de 5 milímetros, triangulando no lobo lateral esquerdo do fígado. E coloque o laparscópio em um dos novos portos.Identifique o segmento lateral esquerdo do fígado no ponto da maior fissura do lobo esquerdo que separa os segmentos lateral medial e esquerdo. E use um grampeador cirúrgico para proteger as estruturas vasculares e a veia hepática ao longo desta fissura. Transecte o parenchyma através desta fissura usando disparos sequenciais e 60, 45 ou 30 milímetros de carga vascular longa.Quando a ressecção estiver completa, avalie o fígado remanescente para garantir uma hemostasia adequada e use agarradores endoscópicos e um saco de recuperação de tecido endoscópico para recuperar a seção hepática. Agora, remova as portas e use uma sutura de tamanho zero interrompida para a fáscia midline. Uma sutura 2-0 para a camada dérmica profunda.E uma sutura 4-0 para a camada subcuticular, para fechar a incisão da porta de 12 milímetros nas três camadas. Em seguida, feche as portas de cinco milímetros em uma camada com suturas 2-0. E coloque um curativo estéril nas incisões.Para o isolamento do hepatocitado, primeiro conecte uma bomba peristáltica para fornecer as soluções de dispersão, mantidas em um banho de água de 43 graus Celsius, aos cateteres a serem colocados nos vasos grandes e expostos da seção hepática. Prime a bomba e tubo com a solução de perfusão dois, até uma posição de pare galo para alternar entre a perfusão um e perfusão duas entrega de solução para o tecido. E mude o pau de parada para a posição de perfusão.Em seguida, prime o resto do conjunto de tubos. Preenchendo completamente uma armadilha de bolhas inline para evitar a introdução de bolhas de ar no tecido. Em seguida, faça uma incisão transversal limpa, perpendicular à circulação hepática para revelar seções transversais dos ramos venosos do portal e das veias hepáticas para cateterismo.E use um cateter de encaixe confortável para cateterizar as veias disponíveis e expostas. Quando os cateteres estiverem no lugar, perfumam o tecido hepático ressecado com uma solução de perfusão quente a uma taxa de fluxo de 100 milímetros por minuto. Movendo o tubo de saída da veia para a veia a cada 30 a 60 segundos.E usando um tubo de evacuação para remover o excesso de tampão da bandeja de tecido. Depois de pedalar por todas as veias disponíveis por 15 a 20 minutos, mude para perfusão duas soluções sob as mesmas condições. Usando uma bomba de retorno para reciclar a solução de perfusão dois de volta ao reservatório, a uma taxa de fluxo mais lenta, para re-administração no tecido.Verifique a temperatura da superfície da armadilha da bolha e, ou o fígado a cada cinco minutos para confirmar que os hepatócitos não estão esfriando. Quando o fígado branquear após cerca de 30 minutos de perfusão, transfira o tecido para um recipiente estéril, embrulhado com uma cortina estéril, e coloque o recipiente em uma capa de cultura celular para manter a esterilidade durante o processamento do hepatocitte. O isolamento colagenase dos hepatócitos e da dissociação celular precisa ser feito completamente para que você não tenha aglomerado as células que diminui a viabilidade das células e a frequência de transdução.Submergir o fígado com hepatocitte lavar o meio e arrastar tesouras pelo topo do tecido para interromper a cápsula hepática. Usando luvas estéreis, massageie suavemente o fígado para liberar os hepatócitos no meio. E filtrar o supernazio tecidual, através de gaze estéril, em garrafas centrífugas de 200 mililitros.Colete os hepatócitos filtrados por centrifugação. Agrupando as células em 150 mililitros de hepatocitte fresco, lave o meio em uma única garrafa de 200 mililitros para 2 lavagens adicionais. E contando as células após a terceira centrifugação.Em seguida, diluir as células para 1 vezes 10 a nona hepatócitos por concentração salina mililitro. Para autotransplantação dos hepatócitos isolados, use um transdutor de dois a cinco mega-hertz para identificar a veia portal via ultrassom e direcionar uma agulha de 5 polegadas e 18 para a veia principal do portal, aproximada à bifurcação. Carregue as células em uma seringa de 60 mililitros, de acordo com o volume total da célula e conecte a seringa à agulha, tomando cuidado para não introduzir bolhas.Em seguida, deprime lentamente o êmbolo da seringa para infundir manualmente até 1 vezes 10 a nona hepatócitos através da veia portal usando um cateter de infusão para monitorar a pressão poral durante o transplante. Quando todas as células tiverem sido entregues, remova o cateter e monitore a veia portal para a presença de eventos trombóticos e fluxo avançado por ultrassom. Em uma coorte representativa de cinco suínos, que foram submetidos à ressecção hepática, a maioria apresentou rendimentos superiores a 10 aos nonos hepatócitos com aproximadamente 80% de viabilidade.Fornecendo um número suficiente de células para qualquer tipo de manipulação desejada, incluindo terapia genética. A cultura subsequente da porção não transplantada desses hepatócitos preparados, demonstrou uma boa viabilidade e adesão com uma morfologia hepatócica típica 46 horas após sua transdução e revestimento inicial. Um enxerto inicial varia de acordo com o número de células reintroduzidas durante o transplante.Essas biópsias representativas demonstram uma linha do tempo de expansão celular corrigida por genes. Exclusivo de doenças, como a tyrosinemia hereditária tipo 1, que desfrutam de uma pressão positiva selecionada para células saudáveis. Esta expansão é tipicamente completa 12 meses após o transplante.Uma vez que um animal de hidrolase hidrolase transplantado tenha alcançado cerca de 20% de re-população dos hepatócitos corrigidos dentro do fígado, os níveis de tyrosina normalizarão em comparação com animais do tipo selvagem. Enquanto animais não corrigidos apresentam uma elevação significativa tanto na fosfatase alcalina quanto na transaminase asparta em comparação com animais do tipo selvagem, a terapia genética ex vivo retorna esses níveis de enzimas séricos ao normal. Além disso, a saúde metabólica hepática geral é interrompida em suínos não tratados, como indicado por elevações na amônia circulante que são corrigidas após a re-população com os hepatócitos tratados.É importante lembrar com o uso desta técnica para manusear e manipular o tecido com cuidado e o mínimo possível. O aumento do manuseio ou manipulação do tecido, leva à diminuição da viabilidade das células e à diminuição do rendimento. Essa abordagem também pode ser aplicável para pessoas interessadas em estudar distribuição de arcos e ineficiências de gráficos em técnicas de rotulagem, utilizando outras técnicas fora dos protocolos de transdução viral.Não se esqueça que trabalhar com vetores virais pode ser perigoso, portanto, seguir procedimentos adequados de bio segurança, bem como usar equipamentos de proteção individual é necessário ao usar essas técnicas.

Research

JoVE Journal

Medicine

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

Ex Cultura Vivo de tecido do paciente e Exame de Entrega Gene

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Medicina

In Vivo Canine Muscle Function Assay

In Vivo Canine Muscle Function Assay

Em função Assay Canine Muscle Vivo

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Produção e Detecção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) em Câncer

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Uma nova abordagem cirúrgica para administração intratraqueal de agentes bioativos em um modelo de camundongo Fetal

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

Neo-Islet Formação em fígado de ratos diabéticos por Helper dependente de Transferência de Gene adenoviral Vector Mediada

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Matrix-assisted Autologous Chondrocyte Transplantation for Remodeling and Repair of Chondral Defects in a Rabbit Model

Matrix-assistida Transplante autólogo de condrócitos para remodelação e reparação de lesões condrais em um modelo de coelho

Articular cartilage defects are considered a major health problem because articular cartilage has a limited capacity for self-regeneration 1. Untreated ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normotérmica máquina de perfusão de fígados doados

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotérmica<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão rim para a Preservação do rim Os enxertos antes do transplante

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...