Name: lentiviral vector-mediated gene therapy of hepatocytes ex vivo for autologous transplantation in swine
Uploaded: 2018-11-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine at JoVE.com

Los autores agradecen a Duane Meixner por experiencia en la realización de la inyección en la vena portal, Steve Krage, Joanne Pederson y Lori Hillin de apoyo durante los procedimientos quirúrgicos. Este trabajo fue apoyado por la Fundación del Hospital de Minnesota y medicina regenerativa Minnesota los niños. R.D.H. fue financiado a través de un premio de NIH K01 DK106056 y un centro de Mayo Clinic para el Premio de desarrollo de carrera de medicina regenerativa.

Animales todos los procedimientos fueron realizados según las directrices y revisaron y aprobados por el cuidado institucional del Animal y el Comité uso (IACUC) antes de la conducta de estudio. Procedimientos aquí descritos fueron realizados en cerdos machos y hembras granja blanca grande (fondo genético del Large White de Landrace/50% del 50%) hasta a 3 meses de edad que se considerarán saludable y conveniente para la cirugía.  Animales se encuentran socialmente si no considera incompatibles por personal institu...

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	<li>Mak, C. M., Lee, H. C., Chan, A. Y., Lam, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inborn+errors+of+metabolism+and+expanded+newborn+screening:+review+and+update.">Inborn errors of metabolism and expanded newborn screening: review and update.</a> Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. 50 (6), 142-162 (2013).</li><li>Hansen, K., Horslen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+liver+disease+in+children.">Metabolic liver disease in children.</a> Liver Transplantation. 14 (5), 713-733 (2008).</li><li>Schneller, J. L., Lee, C. M., Bao, G., Venditti, C. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarylacetoacetate+hydrolase+deficient+pigs+are+a+novel+large+animal+model+of+metabolic+liver+disease.">Fumarylacetoacetate hydrolase deficient pigs are a novel large animal model of metabolic liver disease.</a> Stem Cell Research. 13 (1), 144-153 (2014).</li></ol>

Este informe describe un gen autólogas ex vivo terapia enfoque para curar un modelo porcino de HT-1. Se trata de una hepatectomía parcial, seguida por ex vivo el aislamiento de hepatocitos y transducción de hepatocitos aislados con lenti virus lleva el transgén correctivo. Hepatocitos autólogos corregidas luego se trasplantan a los animales deficientes de FAH a través de la vena porta8. Aunque el método descrito es aplicable a todos los modelos animales grandes con alguna ...

Errores innatos del metabolismo del hígado son una familia de enfermedades genéticas que afectan colectivamente a tantos como 1 en 800 nacidos vivos1. Muchas de estas enfermedades son defectos de gen único2 y funcionalmente pueden curarse mediante la introducción de una única copia corregida del gen afectado en un número suficiente de hepatocitos3. El porcentaje real de hepatocitos que necesita ser corregida varía según la enfermedad4 y depende en gran medida la naturaleza de la proteína que codifica, por ejemplo, excretadas proteínas versus citoplásmico. En la mayoría de los casos, eficacia de cualquier tratamiento para enfermedad metabólica se analizan fácilmente a través de la presencia de biomarcadores a menudo disponibles en la circulación.
HT-1 es un error innato del metabolismo del hígado que resulta de un defecto de fumarylacetoacetate hidrolasa (FAH)5, el último paso enzimático en el metabolismo de tirosina6. Deficiencia de la FAH lleva a la acumulación de metabolitos tóxicos en el hígado que puede causar la muerte y la insuficiencia hepática aguda o en la forma crónica de la enfermedad puede causar cirrosis y el carcinoma hepatocelular. La enfermedad clínicamente está gestionada por la administración de 2-(2-nitro-4-trifluoromethylbenzoyl)-1,3-cyclohexanedione (NTBC), un inhibidor de molécula pequeña de enzima aguas arriba de la FAH en el metabolismo de la tirosina. La enfermedad ofrece un entorno ideal probar métodos de terapia génica, como corrección acertada de incluso un pequeño número de hepatocitos resultará eventualmente en la repoblación del hígado entero con células corregidas en modelos de animales grandes y pequeños 7 , 8. esto ocurre porque corrigió las células tienen una ventaja de supervivencia profunda sobre las células sin corregir debido a la acumulación de metabolitos tóxicos en el último. La pérdida de hepatocitos permite expansión selectiva de hepatocitos corregidos consistente con la capacidad regenerativa del hígado. Tratamiento puede seguirse fácilmente midiendo la disminución en la circulación de los niveles de tirosina y succinylacetone después del trasplante.
Para justificar la naturaleza invasiva del procedimiento, que incluye una hepatectomía parcial, el objetivo de este enfoque debe ser una cura duradera. Por lo tanto, vectores lentivirales incompetente de replicación se utilizan porque estable integrará en el genoma de hepatocitos9. garantizar la entrega del gene corregido a todas las células de la hija como el hígado crece y se expande para reemplazar la pérdida rápida de células sin corregir. Esto es ventajoso sobre vectores (AAV) virales adeno asociado, existen principalmente como episomas que sólo pueden pasar a una célula hija durante la mitosis10 perdiendo cualquier efecto de la terapia en cuestión de semanas.
Aunque un creciente cuerpo de literatura es compatible con la seguridad de los lentivirus11, preocupaciones sobre eventos genotóxicos son mitigados por la limitación de la transducción de las células del huésped en un ambiente controlado en vitro . Vector libre nunca sistémicamente se introduce en el host cuando se realiza este método, limitar la exposición a los hepatocitos que será reintroducido con trasplante autólogo vía la vena porta.
Este informe describe el método de la cirugía y ex vivo de procedimientos empleados para aislar hepatocitos para terapia génica ex vivo y posterior trasplante autólogo12 para el tratamiento de la de cerdo HT-18. El proceso completo incluye 1) una hepatectomía parcial que sirve como fuente de hepatocitos y un estímulo de crecimiento para el hígado del hospedador, 2) aislamiento de hepatocitos del hígado suprimido seguida por corrección de génica ex vivo y finalmente 3) reintroducción de la hepatocitos corregidos de nuevo en el host. El método descrito es aplicable a todos los modelos animales grandes con algunas modificaciones, pero sólo el cerdo de FAH deficiente13 tendrá la ventaja del medio selectivo de hepatocitos corregidas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="763">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">2-(2-nitro-4-trifluoromethylbenzoyl)-1,3-cyclohexanedione (NTBC)</td>
			<td style="width:139px;">Yecuris</td>
			<td style="width:127px;">20-0027</td>
			<td style="width:109px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12 mm Trocar</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>B12STS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mm Trocar</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>B5SHF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 60</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>EGIA60AMT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 45</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>EGIA45AVM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo Surgical Stapler 30</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>SIG30AVM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endo catch bag</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>173050G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0 PDS</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z340H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J459H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J426H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dermabond</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>DNX12</td>
			<td>Sterile Dressing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Williams&#8217;-E Powder&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>ME16060P1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8875-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP310-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pen/Strep&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-011-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1679-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGTA (g/L)</td>
			<td>Oakwood Chemical</td>
			<td>45172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Oakwood Chemical</td>
			<td>3631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">(N-A-C, g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2 2H2O (g/L)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase D (mg/mL)</td>
			<td>Crescent Chemical</td>
			<td>17456.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexamethasone</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>NDC6337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal Growth Factor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>PHG0314</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lentiviral vector-mediated gene therapy of hepatocytes ex vivo for autologous transplantation in swine

La terapia génica es una opción ideal para curar muchos de los errores innatos del metabolismo del hígado. Ex vivo, vectores lentivirales se han utilizado con éxito en el tratamiento de muchas enfermedades hematopoyéticas en humanos, ya que su uso ofrece la expresión del transgén estable debido a la capacidad del vector para integrarse en el genoma del anfitrión. Este método demuestra la aplicación de la terapia génica ex vivo de hepatocitos en un modelo animal grande de la Tirosinemia hereditaria tipo I. Este proceso consiste en 1) aislamiento de hepatocitos primarios del animal donante autólogo/receptor, 2) ex vivo entrega gene vía transducción de hepatocitos con vectores lentivirales y 3) autólogo trasplante de hepatocitos corregidos vía portal inyección de la vena. Éxito del método depende generalmente de la extracción eficiente y estéril de la resección hepática, cuidadosa manipulación del espécimen suprimido para el aislamiento de hepatocitos viables suficientes para volver a engrafting, alto porcentaje de transducción de las células aisladas, y procedimientos quirúrgicos asépticos en todas partes para prevenir la infección. Fallo técnico en cualquiera de estos pasos resultará en bajo rendimiento de hepatocitos transduced viables para trasplante autólogo o infección del animal donante/receptor. El modelo de cerdo de tipo humano 1 tyrosinemia hereditario (HT-1) para este enfoque es excepcionalmente favorable a dicho método, como incluso un pequeño porcentaje del engraftment de células corregidas llevará a repoblación del hígado con las células sanas, basadas en un potente ventaja selectiva sobre hepatocitos nativos enfermos. Aunque esta selección de crecimiento no será válida para todas las indicaciones, este enfoque es una base para la expansión en otras indicaciones y permite la manipulación de este medio para tratar las enfermedades adicionales, tanto en el hígado y más allá, mientras que control de exposición a vectores virales y oportunidad para toxicidad de objetivo y tumorigenicidad.

La resección hepática y el trasplante autólogo se representan esquemáticamente en la figura 1. En una cohorte representativa de 5 cerdos que experimentó la resección hepática, la mayoría tenían rendimientos de > 1 x 109 hepatocitos con aproximadamente 80% de viabilidad (cuadro 2), proporcionando un montón de células de cualquier tipo de deseado manipulaciones, incluyendo gene terapia. Cultura posterior de la porción no-...

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Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Este protocolo pretende describir hepatocitos porcinos aislamiento y ex vivo gene entrega modelos de enfermedades metabólicas mediante trasplante autólogo de células de la curación. Aunque este modelo en particular disfruta de ventajas únicas que favorecen el tratamiento exitoso, la aplicación es una base pertinente para atender las indicaciones y enfermedades adicionales.

Terapia del Gene mediada por vectores lentivirales de hepatocitos Ex Vivo para trasplante autólogo en cerdos

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

La terapia génica ex vivo y el trasplante de células autólogias para el tratamiento de errores innatos del metabolismo en el hígado es una alternativa importante a la terapia para estos trastornos. Y nos permite no sólo tratar estos trastornos, sino descubrir la biomasa necesaria para poder lograr un resultado terapéutico. Este enfoque también evita las consecuencias significativas de la inmunosupresión y otras consecuencias con diferentes tipos de terapias.En el contexto actual, estamos usando este enfoque para tratar la tirosinemia hereditaria tipo 1. Sin embargo, la idea es que este será un enfoque de plataforma para tratar una multitud de diferentes enfermedades hepáticas con mínima alteración. Es importante poder visualizar esta técnica porque hay cierta variabilidad a la hora de visualizar la eficiencia de la perfusión, que es esencial para obtener hepatocitos viables para el trasplante.Procedimiento quirúrgico realizado por Robert Kaiser y Joseph Lillegard. Aislamiento celular realizado por Zeji Du, Bruce Amiot. La purificación celular de UAU y la transducción ex vivo de las células fue realizada por Caitlin VanLith.La preparación de los animales y la preparación del quirófano fue hecha por Kari Allen y Laurie Hillin. Para realizar la entrada inicial del sitio portuario, realice una técnica abierta de Hasson cephalad al umbilicus de un cerdo de granja anesthetizado, de hasta tres meses de edad, grande y blanco. Introduciendo un trocar de 12 milímetros en la cavidad abdominal, donde el peritoneo es visible.Cuando el trocar está en su lugar, pasar un alcance de 5 milímetros 30 grados a través del puerto de entrada e insuflar el abdomen con dióxido de carbono a 15 milímetros de mercurio. Bajo visualización directa con la cámara laparoscópica, coloque 2 puertos adicionales de 5 milímetros, triangulando en el lóbulo lateral izquierdo del hígado. Y coloque el laparoscopio en uno de los nuevos puertos.Identifique el segmento lateral izquierdo del hígado en el punto de la fisura principal del lóbulo izquierdo que separa los segmentos laterales medios e izquierdos. Y usa una grapadora quirúrgica para asegurar las estructuras vasculares y la vena hepática a lo largo de esta fisura. Transecte el parénquima a través de esta fisura usando disparos secuenciales y cargas vasculares de 60, 45 o 30 milímetros de largo.Cuando la resección esté completa, evalúe el hígado remanente para asegurar una hemostasia adecuada y use pinzas endoscópicas y una bolsa de recuperación de tejido endoscópico para recuperar la sección hepática. Ahora, quite los puertos y utilice una sutura de tamaño cero interrumpida para la fascia de línea media. Una sutura 2-0 para la capa dérmica profunda.Y una sutura 4-0 para la capa subcuticular, para cerrar la incisión de puerto de 12 milímetros en las tres capas. A continuación, cierre los puertos de cinco milímetros en una capa con 2-0 suturas. Y coloca un apósito estéril en las incisiones.Para el aislamiento de hepatocitos, conecte primero un conjunto de bombas peristálticas para entregar las soluciones de dispersión, mantenidas en un baño de agua celsius de 43 grados, a los catéteres que se colocarán en los vasos grandes expuestos de la sección hepática. Preparar la bomba y el tubo con la perfusión dos solución, hasta una posición de la polla de parada para cambiar entre la perfusión uno y la perfusión de dos solución de entrega al tejido. Y cambie la polla de parada a la perfusión una posición.A continuación, prepara el resto del conjunto de tubos. Llenar completamente una trampa de burbujas en línea para evitar la introducción de burbujas de aire en el tejido. A continuación, haga una incisión transversal limpia, perpendicular a la circulación hepática para revelar secciones transversales de las ramas de la vena porta y las venas hepáticas para el cateterismo.Y usa un catéter de ajuste perfecto para cateterizar las venas expuestas disponibles. Cuando los catéteres estén en su lugar, perfume el tejido hepático resecado con perfusión caliente una solución a un caudal de 100 milímetros por minuto. Mover el tubo de salida de vena a vena cada 30 a 60 segundos.Y usando un tubo de evacuación para eliminar el exceso de tampón de la bandeja de tejido. Después de recorrer todas las venas disponibles durante 15 a 20 minutos, cambie a la perfusión de dos soluciones en las mismas condiciones. Usando una bomba de retorno para reciclar la perfusión dos solución de nuevo al depósito, a un caudal más lento, para su re-administración en el tejido.Compruebe la temperatura superficial de la trampa de burbujas y, o el hígado aproximadamente cada cinco minutos para confirmar que los hepatocitos no se están enfriando. Cuando el hígado se blanquee después de unos 30 minutos de perfusión, transfiera el tejido a un recipiente estéril, envuelto con un drap estéril, y coloque el recipiente en una capucha de cultivo celular para mantener la esterilidad durante el procesamiento de hepatocitos. El aislamiento de la colagenasa de los hepatocitos y la desasociación celular debe hacerse completamente para que no se agrupe de las células, lo que disminuye la viabilidad de las células y la frecuencia de transducción.Sumerja el hígado con el medio de lavado de hepatocitos y arrastre las tijeras a través de la parte superior del tejido para interrumpir la cápsula hepática. Usando guantes estériles, masajee suavemente el hígado para liberar los hepatocitos en el medio. Y filtrar el sobrenadante de tejido, a través de gasa estéril, en botellas de centrífugas de 200 mililitros.Recoger los hepatocitos filtrados por centrifugación. Agrupación de las células en 150 mililitros de hepatocito fresco medio de lavado en una sola botella de 200 mililitros para 2 lavados adicionales. Y contando las células después de la tercera centrifugación.Luego, diluir las células a 1 por 10 a la novena concentración de hepatocitos por mililitro de solución salina. Para la autotrasplanación de los hepatocitos aislados, utilice un transductor de dos-cinco megahercios para identificar la vena porta a través de ultrasonido y dirigir una aguja de cinco pulgadas de calibre 18 hacia la vena porta principal, aproximadamente a su bifurcación. Cargue las células en una jeringa de 60 mililitros, de acuerdo con el volumen total de la célula y conecte la jeringa a la aguja, teniendo cuidado de no introducir burbujas.A continuación, presione lentamente el émbolo de la jeringa para infundir manualmente hasta 1 veces 10 a la novena hepatocitos a través de la vena porta utilizando un catéter de perfusión para controlar la presión poral durante el trasplante. Cuando todas las células hayan sido entregadas, retire el catéter y monitoree la vena porta para detectar la presencia de eventos trombóticos y el flujo hacia adelante por ultrasonido. En una cohorte representativa de cinco cerdos, que se sometieron a resección hepática, la mayoría tuvo rendimientos superiores a 10 a los novenos hepatocitos con aproximadamente 80% de viabilidad.Proporcionar un número suficiente de células para cualquier tipo de manipulación deseada, incluida la terapia génica. El cultivo posterior de la porción no trasplantada de estos hepatocitos preparados, demostró una buena viabilidad y adhesión con una morfología típica de hepatocitos 46 horas después de su transducción y chapado inicial. Un injerto inicial variará según el número de células reintroducidas durante el trasplante.Estas biopsias representativas demuestran una cronología de la expansión celular corregida por genes. Es exclusivo de enfermedades, como la tirosinemia hereditaria tipo 1, que gozan de una presión positiva seleccionada para las células sanas. Esta expansión suele completarse 12 meses después del trasplante.Una vez que un animal knockout de fumarylacetoacetato de fumarylacetoacetato trasplantado ha logrado alrededor del 20% de la re-población de los hepatocitos corregidos dentro del hígado, los niveles de tirosina se normalizarán en comparación con los animales de tipo salvaje. Mientras que los animales no corregidos presentan una elevación significativa tanto en la fosfatasa alcalina como en la transaminasa de aspartato en comparación con los animales de tipo salvaje, la terapia génica ex vivo devuelve estos niveles de enzimas séricas a la normalidad. Además, la salud metabólica hepática general se interrumpe en los cerdos noutados no tratados, como se indica por las elevaciones en el amoníaco circulante que se corrigen después de volver a poblar con los hepatocitos tratados.Es importante recordar con el uso de esta técnica para manejar y manipular el tejido con cuidado y lo menos posible. Aumento del manejo o manipulación del tejido, conduce a disminuir la viabilidad de las células y disminuir el rendimiento. Este enfoque también puede ser aplicable a las personas que están interesadas en estudiar la distribución de arcos y graficiencias gráficas en técnicas de etiquetado, utilizando otras técnicas fuera de los protocolos de transducción viral.No olvide que trabajar con vectores virales puede ser peligroso, por lo que es necesario seguir los procedimientos de biosecuerpo adecuados, así como usar equipos de protección personal cuando se utilizan estas técnicas.

Research

JoVE Journal

Medicine

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Cultura de tejido del paciente y examen de la entrega de genes

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Investigación

Medicina

In Vivo Canine Muscle Function Assay

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Ensayo in vivo del canino función muscular

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Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Establecimiento y propagación de los tumores del retinoblastoma humanos en ratones con deficiencia inmune

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Producción y la detección de especies reactivas del oxígeno (ROS) en los cánceres

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Un nuevo enfoque quirúrgico para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en un modelo de ratón fetal

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

Neo-Islet Formación en el hígado de ratones diabéticos por Ayudante dependiente de transferencia adenoviral Gene mediada por vector

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Matrix-assisted Autologous Chondrocyte Transplantation for Remodeling and Repair of Chondral Defects in a Rabbit Model

Matrix asistida por trasplante de condrocitos autólogos para la remodelación y reparación de defectos condrales en un modelo de conejo

Articular cartilage defects are considered a major health problem because articular cartilage has a limited capacity for self-regeneration 1. Untreated ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normotérmica máquina de perfusión de hígados de donantes

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotérmica<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusión renal para la Preservación de riñón Injertos antes del trasplante

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...