Name: monitoring hippo signaling pathway activity using a luciferase-based large tumor suppressor (lats) biosensor
Uploaded: 2018-09-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Hippo Signaling Pathway Activity Using a Luciferase-based Large Tumor Suppressor LATS Biosensor at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra den canadiske Institut for sundhedsforskning (CIHR #119325, 148629) og den canadiske Breast Cancer Foundation (CBCF) til XY. TA er støttet af Vanier Canada Graduate stipendium og Ontario International Graduate stipendium. HJJVR understøttes af en dronning Elizabeth II Graduate stipendium i videnskab og teknologi.

1. undersøgelse af et formodet Regulator af Hippo signalering, ved hjælp af LATS-BS
<ol><li>
Plating og Transfektion af celler
	<ol>
<li>Forberedelse af cellekultur<ol>
<li>Varm 1 x PBS, DMEM som indeholder 10% FBS og 1% penicillin/streptomycin og 0,25% trypsin-EDTA til 37 ° C i vandbad i ca 30 min.</li>
			<li>Grundigt rense en biosikkerhed kabinet med 70% ethanol.</li>
			<li>Placere vævskultur retter, Pasteur pipetter, serologisk pipetter og pipette tips i vævskultur hood som krævet.</li>
			<...

<ol>
	<li>Justice, R. W., Zilian, O., Woods, D. F., Noll, M., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+tumor+suppressor+gene+warts+encodes+a+homolog+of+human+myotonic+dystrophy+kinase+and+is+required+for+the+control+of+cell+shape+and+proliferation.">The Drosophila tumor suppressor gene warts encodes a homolog of human myotonic dystrophy kinase and is required for the control of cell shape and proliferation.</a> Genes &amp; Development. 9 (5), 534-546 (1995).</li><li>Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+tumor+suppressors+in+genetic+mosaics:+the+Drosophila+lats+gene+encodes+a+putative+protein+kinase.">Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase.</a> Development. 121 (4), 1053-1063 (1995).</li><li>Taha, Z., Janse van Rensburg, H. J., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hippo+Pathway:+Immunity+and+Cancer.">The Hippo Pathway: Immunity and Cancer.</a> Cancers. 10 (4), 94 (2018).</li><li>Maugeri-Sacc&#224;, M., De Maria, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hippo+pathway+in+normal+development+and+cancer.">The Hippo pathway in normal development and cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 186, 60-72 (2018).</li><li>van Rensburg, H. J. J., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+the+Hippo+pathway+in+cancer+metastasis.">The roles of the Hippo pathway in cancer metastasis.</a> Cellular Signalling. 28 (11), 1761-1772 (2016).</li><li>Yeung, B., Yu, J., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+Hippo+pathway+in+lung+development+and+tumorigenesis.">Roles of the Hippo pathway in lung development and tumorigenesis.</a> International Journal of Cancer. 138 (3), 533-539 (2016).</li><li>Zhao, Y., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hippo+pathway+in+chemotherapeutic+drug+resistance.">The Hippo pathway in chemotherapeutic drug resistance.</a> International Journal of Cancer. 137 (12), 2767-2773 (2015).</li><li>Yu, F. -. X., Guan, K. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hippo+pathway:+regulators+and+regulations.">The Hippo pathway: regulators and regulations.</a> Genes &amp; Development. 27 (4), 355-371 (2013).</li><li>Yang, X., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+of+size+control+in+development+and+human+diseases.">Molecular mechanism of size control in development and human diseases.</a> Cell Research. 21 (5), 715 (2011).</li><li>Visser, S., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LATS+tumor+suppressor:+a+new+governor+of+cellular+homeostasis.">LATS tumor suppressor: a new governor of cellular homeostasis.</a> Cell Cycle. 9 (19), 3892-3903 (2010).</li><li>Zhao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+YAP+oncoprotein+by+the+Hippo+pathway+is+involved+in+cell+contact+inhibition+and+tissue+growth+control.">Inactivation of YAP oncoprotein by the Hippo pathway is involved in cell contact inhibition and tissue growth control.</a> Genes &amp; Development. 21 (21), 2747-2761 (2007).</li><li>Hao, Y., Chun, A., Cheung, K., Rashidi, B., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+suppressor+LATS1+is+a+negative+regulator+of+oncogene+YAP.">Tumor suppressor LATS1 is a negative regulator of oncogene YAP.</a> Journal of Biological Chemistry. 283 (9), 5496-5509 (2008).</li><li>Ozawa, T., Kaihara, A., Sato, M., Tachihara, K., Umezawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split+Luciferase+as+an+Optical+Probe+for+Detecting+Protein.">Split Luciferase as an Optical Probe for Detecting Protein.</a> Protein Interactions in Mammalian Cells Based on Protein Splicing. Analytical Chemistry. 73 (11), 2516-2521 (2001).</li><li>Hashimoto, T., Adams, K. W., Fan, Z., McLean, P. J., Hyman, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+oligomer+formation+of+amyloid-&#946;+peptide+using+a+split-luciferase+complementation+assay.">Characterization of oligomer formation of amyloid-&#946; peptide using a split-luciferase complementation assay.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (31), 27081-27091 (2011).</li><li>Decock, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+by+a+highly+sensitive+split+luciferase+assay+of+the+regions+involved+in+APP+dimerization+and+its+impact+on+processing.">Analysis by a highly sensitive split luciferase assay of the regions involved in APP dimerization and its impact on processing.</a> FEBS Open Bio. 5 (1), 763-773 (2015).</li><li>Azad, T., Tashakor, A., Rahmati, F., Hemmati, R., Hosseinkhani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillation+of+apoptosome+formation+through+assembly+of+truncated+Apaf-1.">Oscillation of apoptosome formation through assembly of truncated Apaf-1.</a> European Journal of Pharmacology. 760, 64-71 (2015).</li><li>Br&#252;ckner, A., Polge, C., Lentze, N., Auerbach, D., Schlattner, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+two-hybrid,+a+powerful+tool+for+systems+biology.">Yeast two-hybrid, a powerful tool for systems biology.</a> International Journal of Molecular Sciences. 10 (6), 2763-2788 (2009).</li><li>Pattnaik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+plasmon+resonance.">Surface plasmon resonance.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 126 (2), 79-92 (2005).</li><li>Clegg, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+resonance+energy+transfer.">Fluorescence resonance energy transfer.</a> Current Opinion in Biotechnology. 6 (1), 103-110 (1995).</li><li>Azad, T., Tashakor, A., Hosseinkhani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split-luciferase+complementary+assay:+applications,+recent+developments,+and+future+perspectives.">Split-luciferase complementary assay: applications, recent developments, and future perspectives.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 406 (23), 5541-5560 (2014).</li><li>Hu, C. -. D., Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+protein+interactions+in+living+cells+using+multicolor+fluorescence+complementation+analysis.">Simultaneous visualization of multiple protein interactions in living cells using multicolor fluorescence complementation analysis.</a> Nature Biotechnology. 21 (5), 539-545 (2003).</li><li>Hosseinkhani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+enigma+of+multicolor+bioluminescence+of+firefly+luciferase.">Molecular enigma of multicolor bioluminescence of firefly luciferase.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 68 (7), 1167-1182 (2011).</li><li>Paulmurugan, R., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+library+screening+for+developing+an+improved+split-firefly+luciferase+fragment-assisted+complementation+system+for+studying+protein-protein+interactions.">Combinatorial library screening for developing an improved split-firefly luciferase fragment-assisted complementation system for studying protein-protein interactions.</a> Analytical Chemistry. 79 (6), 2346-2353 (2007).</li><li>Azad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+LATS+biosensor+screen+identifies+VEGFR+as+a+regulator+of+the+Hippo+pathway+in+angiogenesis.">A LATS biosensor screen identifies VEGFR as a regulator of the Hippo pathway in angiogenesis.</a> Nature Communications. 9 (1), 1061 (2018).</li><li>Moroishi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+YAP/TAZ-induced+feedback+mechanism+regulates+Hippo+pathway+homeostasis.">A YAP/TAZ-induced feedback mechanism regulates Hippo pathway homeostasis.</a> Genes &amp; Development. 29 (12), 1271-1284 (2015).</li></ol>

Mens Hippo pathway spiller vigtige roller i forskellige biologiske processer og dysregulering af Hippo sti fører til kræft6, er hvordan Hippo pathway er reguleret i respons på forskellige stimuli ikke helt forstået. Derudover er der ingen kvantitative og real-time system til at vurdere aktiviteten af Hippo kernekomponenter. For nylig har vi udviklet og valideret en roman biosensor til måling af LATS kinase aktivitet i Hippo pathway24. Denne biosensor kan bruges ikke bl...

Hippo signalering pathway blev først identificeret i Drosophila som en roman regulator af cellevækst og dyrenes størrelse1,2. Siden sin første opdagelse, montering beviser har overbevisende vist at Hippo pathway spiller afgørende roller i udviklingen (f.eks., tidlige fosterudviklingen, organ størrelse kontrol, og tre-dimensionelle [3D] morfologi) () tumordannelse fx, tumor udvikling, metastase, angiogenese, immun unddragelse, genomisk ustabilitet, stressrespons og resistens), og væv homeostase (fx, stamcelle fornyelse og differentiering og vævsregeneration efter skade) 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10. hippo signalering er ofte dysregulated i forskellige kræftformer7,8,9,10,11,12. Derfor er belyse funktioner af Hippo pathway i kræft biologi og therapeutics og regenerativ medicin blevet et af de hotteste områder i biomedicinsk forskning.
I korte, i Hippo pathway ved aktivering af upstream tilsynsmyndigheder (f.eks.celle-celle kontakt, næringsstof stress og ekstracellulære matrix [ECM]), MST1/2 (MST; pattedyr homologs i Drosophila Hippo) Serin/Threonin (S/T) kinaser phosphorylate/aktivere adapteren proteiner hMOB1 og WW45, samt LATS1/2 (LATS) kinaser, som efterfølgende phosphorylate transcriptional Co aktivator YAP og dens paralog TAZ på bevarede HX(H/R/K)XX(S/T) (H, histidin; Rasmussen, arginin; K, lysin; Sørensen, Serin; T, threonin; X, alle aminosyrer) motiver, herunder YAP-S127 og TAZ-S8911,12. S127-fosforyleret YAP (YAP-pS127) og S89-fosforyleret TAZ (TAZ-pS89) er nedbrudt af ubiquitination eller binde til cytoplasmatiske protein 14-3-3 og er forhindret i at interagere med TEAD1-4 transskriptionsfaktorer i cellekernen til transactivate nedstrøms gener involveret i celleproliferation og apoptose (figur 1). Trods den enorme interesse i Hippo pathway, få værktøjer til måling af Hippo signalering findes og dem, der have været historisk begrænset til indberettere af YAP/TAZ/TEAD transcriptional output. Ja, indtil for nylig var der ingen værktøjer til at måle dynamikken og aktivitet af Hippo signalering komponenter i en kvantitativ, real-time, høj overførselshastighed og non-invasiv måde både in vitro- og in vivo.
I betragtning af vores nye forståelse af protein-protein interaktioner i fysiologi og patologi rolle, er der stor interesse i udviklingen af værktøjer, der kan bruges til at studere disse interaktioner i en kvantitativ og real-time måde13, 14,15,16. Faktisk er der sket betydelige fremskridt i udviklingen af bio-analytiske strategier, herunder gær to-hybrid (Y2H)17, overflade plasmon resonans (SPR)18og Förster resonans energi overførsel (FRET)19 assays, at evaluere protein-protein interaktioner. Men disse tilgange bære begrænsning af kræver betydelig optimering af reporter orientering, således at mange konstruktioner skal afprøves for at finde en effektiv. Yderligere, disse tilgange også har et relativt lavt signal / støj-forhold, så kræsne et sandt positive signaler kan være udfordrende.
Protein komplementering assays blev udviklet for at overvinde disse begrænsninger. Den første generation af protein komplementering assays blev baseret på split multicolor fluorescens proteiner og kunne ikke løse ovennævnte begrænsninger20. Flerfarvet fluorescens proteiner består af kun ét domæne, hvilket gør det vanskeligt at opdele dem i to separate stabil fragmenter med lav affinitet og baggrund støj21. Efterfølgende, blev firefly luciferase identificeret som en ny kandidat til brug i udviklingen af split protein komplementering assays. I denne tilgang, er firefly luciferase opdelt i to fragmenter (N-terminal og C-terminale luciferase [NLuc og CLuc]) med hver fragment smeltet til en target protein af interesse. Hvis NLuc og CLuc er bragt i nærhed af samspillet mellem to mål proteinerne, luciferase aktivitet er rekonstitueret og en bioluminescerende light er genereres luciferin substrat og ATP22. I 2001, ved at udføre en kombinatorisk screening ved hjælp af et bibliotek som indeholder NLuc og CLuc fragmenter skåret på forskellige steder og fastgjort til proteiner med forskellige linkers, Paulmurugan og Gambhir på Stanford Universitet udviklet en optimeret split-firefly luciferase fragment-assisteret komplementering system for protein-protein interaktioner23. I dette system, er firefly luciferase bagfjerding aminosyre (aa) 398 danner NLuc og CLuc, som er knyttet til to proteiner af interesse ved hjælp af en fleksibel linker otte glycin restkoncentrationer og to Serin restkoncentrationer.
Ved hjælp af en lignende tilgang, vi for nylig udviklet en ny LATS-BS ved at fusionere NLuc til 15 aa af YAP omkring LATS fosforylering websted på S127 (YAP15) og CLuc med 14-3-3. Fuld længde YAP protein var ikke anvendes, at undgå forstyrrende signaler af posttranslationelle modifikationer af YAP (fx, fosforylering på andre sites og ubiquitination) af andre opstrøms regulatorer. LATS-BS præsenteres her kan ikke-invasivt overvåge Hippo signalering aktivitet, både in vitro i levende celler og vivo på mus20,24 (figur 2). Her beskriver vi en detaljeret protokol til måling af LATS kinase aktivitet in vitro- brug LATS-BS. Vi viser først, hvordan LATS-BS kan bruges til at undersøge effekten af en overexpressed protein på LATS aktivitet. Derefter, vi viser, hvordan biosensor kan bruges til at overvåge aktiviteten på Hippo pathway efter behandling med agenter regulering Hippo pathway. Denne protokol kan bruges til at identificere og karakterisere signaling veje eller stimuli regulering LATS kinase aktivitet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="692">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td style="width:121px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:91px;">2520056</td>
			<td style="width:213px;">0.25%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:91px;">F1051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">DMEM</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:91px;">D6429-500ml</td>
			<td>DMEM with high glucose&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:121px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:91px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PolyJet In Vitro DNA Transfection Reagent&#160;</td>
			<td style="width:121px;">Signagen</td>
			<td style="width:91px;">SL100688.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">5x Passive lysis buffer</td>
			<td style="width:121px;">Promega</td>
			<td style="width:91px;">E194A</td>
			<td>30 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Dual-Glo&#174; Luciferase Assay System</td>
			<td style="width:121px;">Promega</td>
			<td style="width:91px;">E2940</td>
			<td>100 ml kit</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">20/20 luminometer</td>
			<td style="width:121px;">Turner Biosystems</td>
			<td style="width:91px;">998-2036</td>
			<td>Single tube reader luminometer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">GloMax&#174;Navigator with dual injectors</td>
			<td style="width:121px;">Promega</td>
			<td style="width:91px;">GM2010</td>
			<td>96-well plates reader luminometer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring hippo signaling pathway activity using a luciferase-based large tumor suppressor (lats) biosensor

Hippo signalering pathway er en bevaret regulator af orgel størrelse og har vigtige roller i udvikling og kræft biologi. På grund af tekniske udfordringer, er det stadig vanskeligt at vurdere aktiviteten af denne signalvejen og fortolke det i en biologisk sammenhæng. Den eksisterende litteratur om store tumor suppressor (LATS) bygger på metoder, der kvalitativt og ikke kan nemt blive skaleret op til screening. For nylig, har vi udviklet en bioluminescens-baserede biosensor for at overvåge kinase aktiviteten af LATS-en kernekomponent i Hippo kinase cascade. Her, beskrive vi procedurer for hvordan denne LATS biosensor (LATS-BS) kan bruges til at karakterisere Hippo pathway regulatorer. Først, vi leverer en detaljeret protokol for at undersøge effekten af en overexpressed protein kandidat (f.eks.VEGFR2) på LATS aktivitet ved hjælp af LATS-BS. Derefter, vi viser, hvordan LATS-BS kan bruges til en mindre kinase inhibitor skærm. Denne protokol kan realistisk være skaleres op til at udføre større skærme, som uden tvivl vil identificere roman regulatorer af Hippo pathway.

LATS-BS var cotransfected med forskellige gener til at vurdere deres effekt på LATS aktivitet (figur 3). I dette eksperiment, blev Renilla brugt som en intern kontrol. Den forbigående udtryk af YAP-5SA, en konstitutiv aktiv form af YAP, forårsager stigende niveauer af YAP transcriptional mål og en efterfølgende stigning i LATS kinase aktivitet gennem en etableret feedback pathway25. MST, opstrøms aktivator af LATS i Hipp...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Hippo Signaling Pathway Activity Using a Luciferase-based Large Tumor Suppressor LATS Biosensor at JoVE.com

Monitoring Hippo Signaling Pathway Activity Using a Luciferase-based Large Tumor Suppressor LATS Biosensor

Her præsenterer vi en luciferase-baserede biosensor for at kvantificere kinase aktiviteten af stor tumor suppressor (LATS)-en central kinase i Hippo signalering pathway. Denne biosensor har forskellige programmer i basic og Translationel forskning med henblik på at undersøge Hippo pathway lovgivere i in vitro og i vivo.

Overvågning Hippo signalering Pathway aktivitet ved hjælp af en Luciferase-baserede store Tumor Suppressor (LATS) Biosensor

The Hippo signaling pathway is a conserved regulator of organ size and has important roles in the development and cancer biology. Due to technical ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Monitoring Hippo Signaling Pathway Activity Using a Luciferase-based Large Tumor Suppressor (LATS) Biosensor

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

En Muse ortotopisk Blære Tumor Model og Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Karakterisering af tumorceller ved hjælp af en medicinsk Wire for optager cirkulerende tumorceller: en 3D tilgang baseret på immunofluorescens og DNA fisk

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live celle billeddannelse af den TGF-β/Smad3 Signaling Pathway In Vitro og In Vivo ved hjælp af en Adenovirus Reporter System

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for den genetiske Variation i en sporadisk familiær adenomatøs polypose Patient med formatet Chip i rør

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Undersøgelse af genetiske afhængigheder ved hjælp af CRISPR-Cas9-baserede konkurrence Assays

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Langsgående morfologiske og fysiologiske overvågning af tre-dimensionelle Tumor Spheroids bruge optisk kohærens tomografi

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Predicting In Vivo Payloads Delivery using a Blood-brain Tumor-barrier in a Dish

Forudsigelse i Vivo nyttelast levering ved hjælp af en blod-hjerne Tumor barriere i et fad

Highly selective by nature, the blood-brain barrier (BBB) is essential for the brain homeostasis in physiological conditions. However, in the context of ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Påvisning og overvågning af tumor associeret cirkulerende DNA i patientens Biofluider

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Characterize Disease-related Mutants of RAF Family Kinases by Using a Set of Practical and Feasible Methods

Karakterisere sygdomsrelaterede mutanter af RAF-familie kinaser ved hjælp af et sæt praktiske og gennemførlige metoder

The rapidly accelerated fibrosarcoma (RAF) family kinases play a central role in cell biology and their dysfunction leads to cancers and developmental ...

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Identifikation af Transskription Factor Regulators ved hjælp af Medium-Throughput Screening af Arrayed Biblioteker og en Dual-Luciferase-baserede Reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...