Name: use of pre-assembled plastic microfluidic chips for compartmentalizing primary murine neurons
Uploaded: 2018-11-02T14:30:00
Duration: 10 min 50 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons at JoVE.com

Авторы признают технические или редакционные помощи от увядания Тейлор (Xona), Paranjape Смита (КООН-Чапел-Хилл), Джойс Ciechanowski (Xona) и Брэд Тейлор (Xona). Авторы признают поддержке микрофлюидика Xona, LLC и Национальный институт психического здоровья (R42 MH097377). Визуализация поддержали частично Confocal и Multiphoton Imaging основного объекта из NINDS центра Грант P30 NS045892 и NICHD центр Грант (U54 HD079124). Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения национальных институтов здоровья.

<ol>
	<li>Neto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+Microfluidic+Platforms:+The+Unrivaled+Breakthrough+of+In+Vitro+Tools+for+Neurobiological+Research.">Compartmentalized Microfluidic Platforms: The Unrivaled Breakthrough of In Vitro Tools for Neurobiological Research.</a> The Journal of Neuroscience. 36 (46), 11573-11584 (2016).</li><li>Virlogeux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituting+Corticostriatal+Network+on-a-Chip+Reveals+the+Contribution+of+the+Presynaptic+Compartment+to+Huntington's+Disease.">Reconstituting Corticostriatal Network on-a-Chip Reveals the Contribution of the Presynaptic Compartment to Huntington's Disease.</a> Cell Reports. 22 (1), 110-122 (2018).</li><li>Batista, A. F. R., Mart&#237;nez, J. C., Hengst, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-axonal+Synthesis+of+SNAP25+Is+Required+for+the+Formation+of+Presynaptic+Terminals.">Intra-axonal Synthesis of SNAP25 Is Required for the Formation of Presynaptic Terminals.</a> Cell Reports. 20 (13), 3085-3098 (2017).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+regulation+of+astroglial+excitatory+neurotransmitter+transporter+GLT1.">Presynaptic regulation of astroglial excitatory neurotransmitter transporter GLT1.</a> Neuron. 61 (6), 880-894 (2009).</li><li>Sutton, M. A., Taylor, A. M., Ito, H. T., Pham, A., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+decoding+of+neural+activity:+eEF2+as+a+biochemical+sensor+coupling+miniature+synaptic+transmission+to+local+protein+synthesis.">Postsynaptic decoding of neural activity: eEF2 as a biochemical sensor coupling miniature synaptic transmission to local protein synthesis.</a> Neuron. 55 (4), 648-661 (2007).</li><li>Hengst, U., Deglincerti, A., Kim, H. J., Jeon, N. L., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+elongation+triggered+by+stimulus-induced+local+translation+of+a+polarity+complex+protein.">Axonal elongation triggered by stimulus-induced local translation of a polarity complex protein.</a> Nature Cell Biology. 11 (8), 1024-1030 (2009).</li><li>Sharma, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-distance+control+of+synapse+assembly+by+target-derived+NGF.">Long-distance control of synapse assembly by target-derived NGF.</a> Neuron. 67 (3), 422-434 (2010).</li><li>Harrington, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+actin+modifiers+to+TrkA+endosomes+governs+retrograde+NGF+signaling+and+survival.">Recruitment of actin modifiers to TrkA endosomes governs retrograde NGF signaling and survival.</a> Cell. 146 (3), 421-434 (2011).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+and+maintenance+of+nodes+of+ranvier+rely+on+distinct+sources+of+proteins+and+targeting+mechanisms.">Assembly and maintenance of nodes of ranvier rely on distinct sources of proteins and targeting mechanisms.</a> Neuron. 73 (1), 92-107 (2012).</li><li>Taylor, A. M., Wu, J., Tai, H. C., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+translation+of+beta-catenin+regulates+synaptic+vesicle+dynamics.">Axonal translation of beta-catenin regulates synaptic vesicle dynamics.</a> The Journal of Neuroscience. 33 (13), 5584-5589 (2013).</li><li>Tran, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-synuclein+immunotherapy+blocks+uptake+and+templated+propagation+of+misfolded+alpha-synuclein+and+neurodegeneration.">Alpha-synuclein immunotherapy blocks uptake and templated propagation of misfolded alpha-synuclein and neurodegeneration.</a> Cell Reports. 7 (6), 2054-2065 (2014).</li><li>Calafate, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+Contacts+Enhance+Cell-to-Cell+Tau+Pathology+Propagation.">Synaptic Contacts Enhance Cell-to-Cell Tau Pathology Propagation.</a> Cell Reports. 11 (8), 1176-1183 (2015).</li><li>Cosker, K. E., Fenstermacher, S. J., Pazyra-Murphy, M. F., Elliott, H. L., Segal, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA-binding+protein+SFPQ+orchestrates+an+RNA+regulon+to+promote+axon+viability.">The RNA-binding protein SFPQ orchestrates an RNA regulon to promote axon viability.</a> Nature Neuroscience. 19 (5), 690-696 (2016).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+mRNA+in+uninjured+and+regenerating+cortical+mammalian+axons.">Axonal mRNA in uninjured and regenerating cortical mammalian axons.</a> The Journal of Neuroscience. 29 (15), 4697-4707 (2009).</li><li>Pinto, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proteasome+controls+presynaptic+differentiation+through+modulation+of+an+on-site+pool+of+polyubiquitinated+conjugates.">The proteasome controls presynaptic differentiation through modulation of an on-site pool of polyubiquitinated conjugates.</a> The Journal of Cell Biology. 212 (7), 789-801 (2016).</li><li>Bigler, R. L., Kamande, J. W., Dumitru, R., Niedringhaus, M., Taylor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNAs+localized+to+distal+projections+of+human+stem+cell+derived+neurons.">Messenger RNAs localized to distal projections of human stem cell derived neurons.</a> Scientific Reports. 7 (1), 611 (2017).</li><li>Nagendran, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+axotomy+enhances+retrograde+presynaptic+excitability+onto+injured+pyramidal+neurons+via+trans-synaptic+signaling.">Distal axotomy enhances retrograde presynaptic excitability onto injured pyramidal neurons via trans-synaptic signaling.</a> Nature Communications. 8 (1), 625 (2017).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2 (8), 599-605 (2005).</li><li>Taylor, A. M., Dieterich, D. C., Ito, H. T., Kim, S. A., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+local+perfusion+chambers+for+the+visualization+and+manipulation+of+synapses.">Microfluidic local perfusion chambers for the visualization and manipulation of synapses.</a> Neuron. 66 (1), 57-68 (2010).</li><li>Mukhopadhyay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+PDMS+isn't+the+best.+What+are+its+weaknesses,+and+which+other+polymers+can+researchers+add+to+their+toolboxes?.">When PDMS isn't the best. What are its weaknesses, and which other polymers can researchers add to their toolboxes?.</a> Analytical Chemistry. 79 (9), 3248-3253 (2007).</li><li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture.">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain research. 126 (3), 397-425 (1977).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , (1998).</li></ol>

A.M.T. — изобретатель microfluidic камеры/чипа (нас 7419822 B2) и является членом Xona микрофлюидика, LLC. В.п. является сотрудником микрофлюидика Xona, LLC. J.H. является членом Xona микрофлюидика, LLC. Т.н. объявляет без финансовых интересов. Открытого доступа публикации этой статьи авторами микрофлюидика Xona.

Пластиковые многосредовой микросхемы обеспечивают возможность easy-to-use допускаться нейронов, обеспечивая долгосрочное нейрональных культур (> 3 недели). Этот протокол описывает культура мышиных нейронов коры головного мозга и гиппокампе в пределах этих чипов. Были также обсуждены создание растворимых микросреды и как Ретроградная лейбл нейронов, axotomy, с выполнением иммуноцитохимии. Важно отметить, что эти чипы совместимы с высоким разрешением, флуоресценции и живой изображений.
Пластиковые многосредовой фишки обеспечивают многие из тех же функций как PDMS-устройств на базе разобщенным, но имеют свои преимущества, недостатки и некоторые отличительные черты. Таблица 1 содержит сравнение пластиковых чип и устройств на базе PDMS. Прежде всего чипы являются предварительно собранных и сделал постоянно гидрофильные, которая облегчает смачивания, что делает их легче использовать. Пластик не является газа проницаемыми, в отличие от PDMS, так что если пузыри форма неожиданно в каналы, они не легко бежать и должны быть удалены. Предварительное покрытие раствор, содержащий главным образом этанола и некоторые другие проприетарные агенты исключает формирования пузыря.
Живут изображений прогнозов, выполненных следующие трансдукции флуоресцентных белков внутри микросхемы (Рисунок 4) и там было не обнаружено аутофлюоресценция пластика. Предостережение, что погружение масла, используемые с чип для целей высокая числовая апертура должна быть силиконовое масло на основе, а не минерального масла на основе. Минеральное масло может вызвать негативную реакцию с сополимером циклических олефинов. Для brightfield изображений, важно отметить, что microgrooves в чипе закруглены на концах, и постепенно сужающийся z направлении магистральных каналов к microgroove барьер, вызывая некоторые преломление света на любом конце microgrooves во время brightfield изображений (рис. 3). Потому что чип собранном, антитела проникновения в microgrooves микронных размеров может быть неравномерным (как с постоянно кабального устройств на базе PDMS); Таким образом количественный анализ, после иммуноокрашивания должны выполняться в отсеках каналы. Иммуноокрашивания нейронов прогнозов в microgrooves может быть улучшено путем создания тома разница между отсеками для помощи потока антител и флуорофоров в microgrooves.

Нейрон традиционной культуры подходов результат в случайных нарост аксонов и дендритов, препятствующие исследования нейронов в их уникальный поляризованные морфологии. Microfabricated многосредовой устройства стали устоявшихся и хорошо использовали исследовательских инструментов для неврологов в последние 10-15 лет (отдельных громких публикаций являются ссылки1,2,3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17). Эти устройства устроены нейронов и предоставляют метод для физически и химически манипулировать внутриклеточных регионов нейронов, включая somata, дендриты, аксоны и синапсы18,19. Они также предоставляют несколько экспериментальных парадигм, которые не возможно с использованием случайных культур, включая исследования аксональное транспорта, аксональное белкового синтеза, травмы/регенерации аксона и аксон Сома сигнализации. Базовая конфигурация 2-купе состоит из двух параллельных microfluidic каналов, разделенных серии небольших перпендикулярные microgrooves. Первичный или стволовых клеток, полученных нейронов покрыты в один из каналов microfluidic, урегулировать и прикрепить к нижней поверхности устройства и расширить невритов в течение дней. Многие конусы роста найти свой путь в microgrooves, которые достаточно малы, что они препятствуют клеток органов проникновения. Потому что конусы роста физически ограничены и не в состоянии повернуть вокруг внутри microgrooves, они растут прямо в отсеке рядом (аксональное отсека), где они изолированы.
Исторически эти устройства сформировали с помощью анонсированный (PDMS) с photolithographically рисунком мастер формы и сделал доме в лабораториях следователей или приобрели коммерчески. Один из главных недостатков с использованием PDMS является его гидрофобность20. PDMS могут быть сделаны гидрофильные временно, но затем быстро становится гидрофобные в течение часов в неводных среды20. Из-за этого устройства должны быть придает coverslip стекла или другой подходящий субстрат во время использования. Предварительно собранные пластиковые многосредовой фишки в настоящее время коммерчески доступных (например, XonaChips) литого пластика. Эти чипы изготавливаются постоянно гидрофильные, упрощения устройства увлажнения и позволяя Корпусообрабатывающее чип с тонкой пленкой циклических олефинов сополимер (COC) ограждающих microfluidic каналы на дне. Эти чипы изготавливаются в оптически прозрачный пластик, подходит для изображений с высоким разрешением флуоресценции.
Цель настоящего Протокола заключается в том, чтобы продемонстрировать использование предварительно собранные пластиковые microfluidic чипов для нескольких экспериментальных парадигм, с использованием мышиных гиппокампа или корковых нейронов. Этот протокол описывает ретроградной нейронов метки с помощью модифицированных бешенства вирус внутри чипа. Axotomy для исследования аксона травмы и регенерации также описаны. Наконец этот протокол показывает, как выполнить флуоресценции иммуноокрашивания с устройством.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="651">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">XonaChip</td>
			<td style="width:175px;">Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td style="width:109px;">XC150</td>
			<td style="width:165px;">150 &#181;m length microgroove barrier</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;"></td>
			<td style="width:175px;">Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td style="width:109px;">XC450</td>
			<td style="width:165px;">450 &#181;m length microgroove barrier</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;"></td>
			<td style="width:175px;">Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td style="width:109px;">XC900</td>
			<td style="width:165px;">900 &#181;m length microgroove barrier</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">XC pre-coat&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td style="width:109px;">XC Pre-Coat</td>
			<td style="width:165px;">included with XonaChips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">XonaPDL&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Xona Microfluidics, LLC</td>
			<td style="width:109px;">XonaPDL</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">E17/E18 timed pregnant Sprague Dawley rats</td>
			<td style="width:175px;">Charles River</td>
			<td style="width:109px;">24100564</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">neuronal culture media:</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">- Neurobasal medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">21103049</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">-B-27 Plus Supplement (50x)</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">A3582801</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">-GlutaMAX Supplement</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">35050061</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">-Antibiotic-Antimycotic (100x)</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">15240112</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">fluorinated ethylene propylene film</td>
			<td style="width:175px;">American Durafilm</td>
			<td style="width:109px;">50A</td>
			<td style="width:165px;">0.5 mil thickness</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">modified rabies virus</td>
			<td style="width:175px;">Salk Institute for Biological Studies</td>
			<td style="width:109px;">G-deleted Rabies-eGFP</td>
			<td style="width:165px;">Material Transfer Agreement required</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:203px;"></td>
			<td style="width:175px;">Salk Institute for Biological Studies</td>
			<td style="width:109px;">G-deleted Rabies-mCherry</td>
			<td style="width:165px;">Material Transfer Agreement required</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Alexa Fluor hydrazide 488</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">A10436</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Fluoromount G</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">00-4958-02</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Glass Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:109px;">CLS7095D5X SIGMA</td>
			<td style="width:165px;">5.75 in length</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">hibernate-E Medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">A1247601</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Pierce 16% formaldehyde</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">28906</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">PBS (10x)</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">QVC0508</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">normal goat serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">16210064</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">triton X-100</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;">28314</td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">anti-vGlut1 antibody</td>
			<td style="width:175px;">NeuroMab</td>
			<td style="width:109px;">75-066</td>
			<td style="width:165px;">clone N28/9, 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">anti-vGAT antibody</td>
			<td style="width:175px;">Synaptic Systems</td>
			<td style="width:109px;">131 003</td>
			<td style="width:165px;">1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">anti_beta-tubulin III</td>
			<td style="width:175px;">Aves</td>
			<td style="width:109px;">TUJ</td>
			<td style="width:165px;">1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Alexa Fluor secondary antibodies</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:165px;">1:1000</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:203px;">Incubator, 5% CO2 37 &#176;C</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:165px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Epifluorescence imaging system</td>
			<td style="width:175px;">EVOS Fluorescence imaging system</td>
			<td style="width:109px;">AMF4300</td>
			<td style="width:165px;">10x objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Spinning disk confocal imaging system</td>
			<td style="width:175px;">Andor Technology</td>
			<td style="width:109px;">CSU-X1, iXon X3 EMCCD</td>
			<td style="width:165px;">60x silicone oil &#38; 20x objectives</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:203px;">Laser scanning confocal imaging system</td>
			<td style="width:175px;">Olympus</td>
			<td style="width:109px;">FV3000RS</td>
			<td style="width:165px;">30x silicone oil objective</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of pre-assembled plastic microfluidic chips for compartmentalizing primary murine neurons

Microfabricated методы для compartmentalize нейроны стали важными инструментами для многие неврологи. Этот протокол описывает использование коммерчески доступных собранном пластиковых чип для допускаться Нейроны гиппокампа культивировали первичной крыса. Эти пластиковые фишки, содержащихся в след стандартной микроскопа совместимы с высоким разрешением, живут и флуоресценции изображений. Этот протокол демонстрирует ретроградной лейбл нейронов через изолированные аксонов, с использованием модифицированных бешенства вирус кодирования флуоресцентный белок, создавать изолированные микросреды в одном отсеке, и выполнять axotomy и immunocytochemistry на чипе. Нейроны культивировали для > 3 недели в пластиковые фишки, иллюстрирующие совместимость этих чипов для долгосрочного нейрональных культур.

После примерно 5-7 дней нейрон роста в пределах чип аксональное рост является очевидным. Фишки, совместимы с фазово контрастной визуализации, как продемонстрировано в рисунке 3, которая показывает рост нейронов на 24 дня. Фишки также совместимы с флуоресценцией изображений (Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6и рис. 7). Через три дня после заражения вирусом бешенства через аксональное отсека, mCherry позитивных нейронов с аксоны в отсеке аксональное были образы на чипе (рис. 4). Продемонстрировать способность fluidically изолировать отсеков, низкий молекулярный вес Люминесцентную краску (Alexa Fluor 488 гидразида) был добавлен в отсеке аксональное. Эти результаты сопоставимы с камеры на основе PDMS17 и продемонстрировать пригодность пластиковых чип для фазово контрастной и флуоресценции изображений.
Чтобы проиллюстрировать нейрональных роста с пластиковых фишек и PDMS устройств, мы культивировали нейронов в обеих платформах и мониторинг нейрональных рост с течением времени. Рисунок 5 показывает нейрональных рост от 3 до 22 дней в культуре; Эти результаты являются представитель 3 независимых экспериментов. Нейрональных рост сопоставимых в пределах двух платформ до 15 дней в культуре, но больше культуры возрастов (> 21 дня) Аксоны изолированы в пластиковых чип появляются здоровыми с менее бисером (Рисунок 5A). Чтобы визуализировать аксонов внутри аксональное отсеков, мы immunostained для β-тубулина III, который показывает здорового аксональное роста в пределах пластиковые фишки на 22 дня в культуре (Рисунок 5B).
Аксон травмы и регенерации исследования являются общими, используя microfluidic разобщенным устройств. Чтобы продемонстрировать пригодность этих исследований с использованием микросхемы, ретроградная помечены нейронов были образы до и 24 h после axotomy (рис. 6). Ретракция луковицу и регенерации аксона являются оба очевидны следующие axotomy. Эти результаты являются эквивалентными опубликованных данных, с помощью устройств на базе PDMS14,17.
Immunocytochemistry является распространенным приемом в многокамерных устройства для визуализации локализация протеина. После 24 дней в культуре, нейроны в пределах фишки были фиксированной и витражи для возбуждающих и тормозящий синаптических маркеров, vGlut1 и vGat, соответственно (рис. 7). Ретроградная помечены mCherry нейроны были также фотосъемка (рис. 7 c). Изображений проводилось с использованием вращающийся диск конфокальный с 60 × силиконовые масла погружения цели, демонстрируя способность выполнять с высоким разрешением изображения. Важно отметить, что дендритных шипиков были очевидны в увеличенном региона, демонстрируя, что нейроны, культивируемых в фишки формирования зрелой синапсы.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig1.jpg"> Рисунок 1 : Готовые, пластиковые двухкамерные microfluidic чип для допускаться нейронов. (A) схематическое представление многосредовой чип, показаны расположения верхнего и нижнего скважин. (B) расширенного схема микросхемы, показаны основные каналы (или отсеков) и microgrooves, которые соединяют отсеков. Основные каналы являются примерно 1,5 мм × 7 × 0,060 мм (Ш × L × H). Ширина и высота microgrooves являются приблизительно 0,01 мм × 0,005 мм, соответственно. Длина microgrooves варьируется в зависимости от конфигурации, 0,15 мм до 0.9 мм. (C) А фотографию представителя многосредовой чип, содержащий краситель красителя в каждой основной канал или отсека, демонстрируя способность fluidically Изолируйте каждого канала. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig2.jpg"> Рисунок 2 : Дозирования методы, необходимые при использовании пластиковых многосредовой фишек. (A) при добавлении и аспирационных СМИ для смывки, наконечник пипетки следует быть угловой от входа в главный канал, как показано. (B) когда загрузки нейронов или выполнения axotomy, наконечник пипетки должно быть под углом к входу главного канала. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig3.jpg"> Рисунок 3 : Микрофотография контраст фазы, показаны типичные нейрональных роста в пределах чип на 24 дня в культуре. Эмбриональных Нейроны гиппокампа были посеяны в отсеке справа соматических. Аксон рост является видимым в начале аксональное отсека на 5-7 дней. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig4.jpg"> Рисунок 4 : Ретроградная помечены нейронов Экспресс mCherry флуоресцентный белок и продлить аксоны fluidically изолированные аксональное отсек. (A) Объединенные флуоресценции Микрофотография показаны живой Ретроградная помечены нейронов, инфицированных через изменение mCherry вирус бешенства, кратко применяется к аксональное отсека. Нейроны были образ 3 дня после инфекции на 21 день в культуре. Создание изолированных микроокружения в отсеке аксональное подтверждается применение низкомолекулярных красителя, Alexa Fluor 488 гидразида. (B) объединенного изображения (), включая образ контраст (DIC) дифференциальной помехи для визуализации регионе microgrooves чипа. Изображения были приобретены с лазерного сканирования конфокального микроскопа с помощью силиконового масла 30 × в 1.05 н.а. (ne = 1,406) объектива. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig5.jpg"> Рисунок 5 : Бок о бок сравнение нейрональных роста в многокомпонентных PDMS устройства и пластиковые фишки. (A) фаза контраст микроскопии обеих платформ, принятыми на 3, 7, 15 и 22 дней в культуре. В нижней части выше увеличение региона взяты из изображений на 22 дня входит проиллюстрировать аксональное роста в этом возрасте в обеих платформах. Аксоны в чип более непрерывный и появляются более здоровыми, чем в PDMS устройства в этом возрасте. (B) инвертировать иммунофлюоресценции Микрофотография β-тубулина III витражи аксоны в отсеке аксональное PDMS устройства и пластиковых чип на 22 дня в культуре. Изображения были приобретены с спиннинг диск конфокальный тепловизионные системы с использованием 20 x / 0.45 н.а. объектива. Все бары масштаба являются 100 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig5large.jpg" target="_blank">пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig6.jpg"> Рисунок 6 : Axotomy и регенерации гиппокампа нейронов в пластиковых многосредовой чип. (Вверху) Нейроны были ретроградным помечены с помощью модифицированных mCherry вирус бешенства и затем отображаемого перед axotomy на 24 дня в культуре. Изображения были pseudocolored с помощью просмотровой таблице «Огонь» цвет. (Внизу) Же нейрон, отображаемого в верхней панели был образ 24 h пост axotomy. Белый пунктирные линии показывают границы microgroove барьер. Axotomy произошло на месте левого пунктирной линии. Белая стрелка показывает Ретракция лампы. Белая стрелка указывает регенерации аксона. Изображения были приобретены с спиннинг диск конфокальный тепловизионные системы с использованием 20 × / 0,45 н.а. объектив. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig6large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58421/58421fig7.jpg"> Рисунок 7 : Синапсов формы между гиппокампа нейронов, культивируемых в пластиковые фишки многосредовой. Иммуноокрашивания была исполнена на 24 дня в культуре и отражаться в отсеке соматических, используя объектив погружения 60 × силиконовые масла. Нейроны Экспресс (A) маркер возбуждающим синапса, vGlut1 (зеленый) и (B) маркер ингибирующее синапса, vGAT (синий). (C) Ретроградная помечены mCherry, которую нейронов (красный) были инфицированы через вирус бешенства модифицированных, применяется к аксональное отсека. (D) Объединенные флуоресценции Микрофотография vGlut1, vGat и mCherry. (E) увеличенное региона в (D) указано с белой коробке показывает дендритных шипиков, сайты, которые получают синаптических вход от других нейронов. Изображения были приобретены с закручивая диск конфокальный изображений системы с использованием силиконового масла 60 × / 1,3 Н.А (ne = 1,406) объектива. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58421/58421fig7large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Пластиковый многосредовой фишки</td>
			<td>PDMS многосредовой устройства</td>
		</tr>
<tr>
<td>изолировать аксонов</td>
			<td>изолировать аксонов</td>
		</tr>
<tr>
<td>Создание микросреды</td>
			<td>Создание микросреды</td>
		</tr>
<tr>
<td>axotomize нейроны</td>
			<td>axotomize нейроны</td>
		</tr>
<tr>
<td>оптически прозрачный</td>
			<td>оптически прозрачный</td>
		</tr>
<tr>
<td>совместимость с высоким разрешением изображений</td>
			<td>совместимость с высоким разрешением изображений</td>
		</tr>
<tr>
<td>совместим с микроскопии флуоресцирования</td>
			<td>совместим с микроскопии флуоресцирования</td>
		</tr>
<tr>
<td>полностью собран</td>
			<td>Ассамблеи для субстрата необходимых</td>
		</tr>
<tr>
<td>здоровые аксоны > 21 дней</td>
			<td>здоровые аксоны > 14 дней</td>
		</tr>
<tr>
<td>Гидрофильные культивирования поверхности</td>
			<td>гидрофобная</td>
		</tr>
<tr>
<td>непроницаемый газ</td>
			<td>проницаемого газа</td>
		</tr>
<tr>
<td>округлые microgrooves и каналы</td>
			<td>прямой microgrooves</td>
		</tr>
<tr>
<td>меньшее количество этапы подготовки</td>
			<td>Top является съемным для пятнать в microgrooves</td>
		</tr>
<tr>
<td>не совместим с лазерной абляции</td>
			<td>поглощение малых молекул и органических растворителей</td>
		</tr>
<tr>
<td>не совместимо с маслами погружения на основе минерального масла (на основе силиконового масла являются штраф)</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1: Сравнение пластика и PDMS многосредовой платформ для культивирования нейронов.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons at JoVE.com

Use of Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips for Compartmentalizing Primary Murine Neurons

Этот протокол описывает использование пластиковых фишек, чтобы культура и устроены первичной мышиных нейронов. Эти чипы креплению, удобный и совместим с высоким разрешением, живут и флуоресценции изображений. Этот протокол описывает пластины гиппокампа крысы нейронов в пределах этих чипов и выполнять аэрогидродинамических изоляции, axotomy и иммуноокрашивания.

Использование предварительно собранные пластиковые Microfluidic чипов для допускаться первичной мышиных нейронов

Microfabricated methods to compartmentalize neurons have become essential tools for many neuroscientists. This protocol describes the use of a ...

Микрофлюидные устройства, используемые для разобщенности нейронов, стали стандартным инструментом в неврологии, что позволяет исследователям физически и химически манипулировать субклеточными областями нейронов, включая соматы, аксоны, дендриты и синапсы. Эти разрозненные устройства культуры могут помочь ответить на многочисленные вопросы в области неврологии, такие как, как аксоны распространяются во время развития, чтобы сформировать синапсы, как синапсы переделывать и реформировать после повреждения аксона и как патологические условия могут транс-синаптически размножаться при таких заболеваниях, как болезнь Альцгеймера. Этот протокол описывает использование предварительно собранного пластикового многокомпоненциального чипа для разобщенности культуры первичных крысиных нейронов.Основным преимуществом использования этих чипов является то, что они обеспечивают простой в использовании и очень воспроизводимый метод разобщенить нейроны. Еще одним преимуществом является то, что эти чипы дают более здоровый, долгосрочный рост нейронов и изолированных аксонов, чем предыдущие кремниевые разрозненные устройства и в равной степени совместимы с микроскопией высокого разрешения. Другие модельные системы, включая стволовые клетки человека, также могут быть обучаемы в предварительно собранном разрознять чип.Для начала поместите стерильный многокомпоненциальную фишку в чашку Петри. Добавьте 100 микролитров предкодирования раствора в верхнюю левую колодец чипа и дайте ему протекать через основной канал в прилегающую колодец. Далее заполните нижний левый колодец чипа 100 микролитров предкодирования раствора.На этот раз подождите пять минут, чтобы раствор протек через микро-грувы. Теперь добавьте 100 микролитров предкодного раствора в верхнюю правую колодец и дайте ему протекать через основной канал в соседний колодец. Через 90 секунд заполните нижний правый колодец 100 микролитров раствора прекодирования и инкубировать чип в течение 10 минут.Тщательно угол наконечник пипетки, от основного канала и аспирировать решение из каждой хорошо. Затем немедленно добавьте 150 микролитров PBS в верхний левый колодец и подождите полтора минуты. Затем добавьте 150 микролитров PBS к левому нижнему левому колодец и подождите пять минут, чтобы жидкость текла через микро-канавки.Затем добавьте 150 микролитров PBS в верхние правые и нижние правые скважины, в этом порядке. Через 10 минут, снова аспирировать PBS и повторить мыть шаги во второй раз. После второй стирки, аспирировать PBS из скважин, как и раньше, рыбалка пипетки отзыв, от открытия канала.Затем добавьте 100 микролитров 0,5 смеси на мил Poly-D-Lysine раствор, в верхнем левом хорошо чипа. Подождите полтора минуты, а затем заполните нижний левый колодец 100 микролитров раствора Poly-D-Lysine. Повторите этот процесс на правой половине чипа.Закройте чашку Петри. Затем поместите чип в инкубатор при 37 градусах по Цельсию в течение одного часа. После инкубации, промыть чип дважды с PBS, как описано ранее.Далее, аспирировать PBS от устройства. Немедленно добавьте 100 микролитров средств культуры клетки к верхнему левому well обломока. Через полтора минуты добавьте мультимедиа в левый нижний хорошо.Подождите пять минут, чтобы позволить средствам массовой информации течь через микро-grooves, а затем повторить процесс заполнения на правой стороне чипа. Подготовье клеточной суспензии диссоциированных крысиных гиппокамповых нейронов в соответствии с установленными протоколами. Удалите большинство средств массовой информации в каждом колодец чипа, но оставить каналы заполнены.Затем немедленно загрузите пять микролитров клеточной подвески в верхнюю правую колодец и еще пять микролитров клеточной подвески в правом нижнем направлении. При загрузке ячеек навемите кончик пипетки на основной канал. После загрузки клеток, передать чип на стадии микроскопа и убедиться, что нейроны находятся в главном канале.После ожидания пять минут для клеток, чтобы прикрепить, добавить примерно, 150 микролитров нейрональной культуры средств массовой информации для каждого из верхних и нижних правых скважин. Затем добавьте 150 микролитров мультимедиа к каждой из верхних и нижних левых скважин. Обложка чашку Петри и поместите чип в увлажненной лоток в 5%углекислого газа, 37 градусов по Цельсию инкубатор.Во-первых, удалите 20 микролитров из нижнего левого колодеца аксонального отсека и поместите его в верхний правый колодец соматичного отсека. Подождите две минуты для потока в каждом канале, чтобы уравночные. Затем удалите 50 микролитров мультимедиа из аксонального отсека и добавьте к этому средству 0,3 микролитров одного миллимоляра Alexa Fluor 488 hydrazide.Pipette вверх и вниз, чтобы смешать раствор, а затем вернуть средства массовой информации, содержащие флуоресцентный краситель обратно в аксональный отсек. На данный момент поместите чип на микроскоп и изображение по желанию. Для выполнения аксотомии внутри чипа, во-первых, удалите средства массовой информации из аксонального отсека, удерживая наконечник пипетки от входа в главный канал.Храните удаленные средства массовой информации в центрифуге трубки на данный момент. Далее поместите аспирации пипетки рядом, либо вход в главный канал аксонального отсека и аспирировать аксональный отсек полностью. Продолжайте аспирировать область в течение одной-двух минут.Замените аксональный отсек на сохраненный мультимедиа. Убедитесь, что раствор полностью удален из отсека и аксоны разорваны, глядя на образец под микроскопом. Затем накройте чип и верните его в инкубатор.Чтобы начать флуоресценцию иммуностимулятора, удалите большую часть средств массовой информации из чипа, сохраняя внутренние отсеки гидратированных. Немедленно добавьте 100 микролитров фиксационо-раствора к верхним колодцам аксональных и соматических отсеков. Через минуту добавьте 100 микролитров раствора фиксации в нижние скважины и зафиксните клетки на 30 минут при комнатной температуре.Удалите большую часть раствора из скважин и немедленно добавьте 150 микролитров PBS к каждой из верхних скважин аксональных и соматических отсеков. Подождите две минуты для PBS течь в нижних скважинах, а затем, удалить PBS и промыть скважины в два раза больше, используя этот же процесс. После последнего полоскания удалите большую часть PBS из колодцев чипа и немедленно добавьте 150 микролитров PBS с 0,25%тритон x-100 к каждой из верхних скважин аксональных и соматических отсеков.Подождите 15 минут, а затем удалите большую часть жидкости из колодцев. Сразу же добавьте 150 микролитров блокирующего раствора к каждой из верхних скважин аксональных и соматических отсеков. Через 15 минут удалите большую часть жидкости из колодцев и немедленно добавьте 100 микролитров первичного раствора антител к каждому из верхних колодцев аксональных и соматических отсеков.Обложка чипа, чтобы свести к минимуму испарение и инкубировать клетки в первичных антител в течение одного часа при комнатной температуре. Затем промойте чип, удалив большую часть раствора и немедленно добавив 150 микролитров PBS к каждой из верхних скважин аксональных и сематических отсеков. Через пять минут снимите PBS с обеих скважин и повторите полоскание еще два раза.Теперь удалите большую часть жидкости из скважин и немедленно добавьте 100 микролитров вторичных антител в PBS, к каждой из верхних скважин аксональных и соматических отсеков. Обложка чип, чтобы свести к минимуму испарение и инкубировать чип в течение одного часа при комнатной температуре. Как показано ранее, промыть чип три раза с PBS, то, монтировать и изображение чипов, как описано в сопроводительном текстовом протоколе.Показано здесь, является бок о бок сравнение нейронов, выращенных на пластиковых чипов и PDMS устройств. Нейронный рост сопоставим в двух платформах до 15 дней в культуре, но в более длительный возраст культуры, изолированные аксоны в пластиковом чипе, кажутся более здоровыми с меньшим избиением. Для дальнейшей визуализации аксонов в аксональных отсеках, эти образцы были также иммунотелин для бета-тубулина III, который показывает здоровый аксональный рост в пластиковых чипов на 22 дней в культуре.Дальнейшее окрашивание 24-дневными образцами показывает нейроны, выращенные в пластиковых чипах, чтобы выразить как возбуждающие, так и ингибирующие синаптические маркеры, vGlut1 и vGat. Вот два синаптических маркеров в сочетании с ретроградной помечены mCherry нейронов. Чтобы продемонстрировать пригодность этого чипа для исследования травмы аксона и регенерации, ретроградные помеченные нейроны были изображены до и через 24 часа после аксотомии.Опровержения лампы и регенерации аксона оба очевидны после аксотомии. Эти результаты эквивалентны опубликованным данным с использованием устройств на основе PDMS. Классические многокомпоненциальные чипы обеспечивают простой в использовании вариант для разобщенности нейронов, обеспечивающих долгосрочные нейронные культуры, которые остаются жизнеспособными в течение более трех недель.При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы семена соответствующего количества нейронов и убедитесь, что ваш инкубатор хорошо увлажняется во время культуры.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Culturing and Electrophysiology of Cells on NRCC Patch-clamp Chips

Культивирование и электрофизиологии ячеек на NRCC Патч зажим фишки

Due to its exquisite sensitivity and the ability to monitor and control individual cells at the level of ion channels, patch-clamping is the gold standard ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Фосфат кальция Трансфекцию первичной нейронов гиппокампа

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

Визуализация дендритных шипиков крысы первичной нейронов гиппокампа с помощью структурированного подсветки микроскопия

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

Primary Culture of Mouse Dopaminergic Neurons

Первичная культура Mouse дофаминергических нейронов

Dopaminergic neurons represent less than 1% of the total number of neurons in the brain. This low amount of neurons regulates important brain functions ...

Isolation of Primary Murine Brain Microvascular Endothelial Cells

Выделение Первичная мышиный Brain Микрососудистой эндотелиальных клеток

The blood-brain-barrier is ultrastructurally assembled by a monolayer of brain microvascular endothelial cells (BMEC) interconnected by a junctional ...

Modeling Neuronal Death and Degeneration in Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons

Моделирования нейронов смерти и дегенерации в мышь первичной мозжечковой гранул нейронов

Cerebellar granule neurons (CGNs) are a commonly used neuronal model, forming an abundant homogeneous population in the cerebellum. In light of their ...

Live Images of GLUT4 Protein Trafficking in Mouse Primary Hypothalamic Neurons Using Deconvolution Microscopy

Изображения в реальном времени GLUT4 белка оборота первичной нейронов гипоталамуса мыши с помощью микроскопии деконволюция

Type 2 diabetes mellitus (T2DM) is a global health crisis which is characterized by insulin signaling impairment and chronic inflammation in peripheral ...

High-resolution Volume Imaging of Neurons by the Use of Fluorescence eXclusion Method and Dedicated Microfluidic Devices

Высоким разрешением объем изображений из нейронов путем использования флуоресценции исключения метод и посвятил Microfluidic приборы

Volume is an important parameter regarding physiological and pathological characteristics of neurons at different time scales. Neurons are quite unique ...

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

Изоляция микрососудистой эндотелиальных клеток первичного мышиных скелетных мышц

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...