Name: sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

ونحن نشكر "المعلم جيان فنغ ليو" وزملاؤه من جامعة الطب في العاصمة للتوجيه أثناء التصوير بالرنين المغناطيسي. ونشكر أيضا تسنغ جينغ من قسم الأعصاب، مستشفى من ييتشانغ "الشعب الثانية" لتوفير الدعم التقني.

جميع الأساليب الموصوفة هنا أقرها "العناية بالحيوان" واستخدام اللجنة (ACUC) من المستشفى العام في الجيش جيش التحرير الشعبي الصيني.
1-المواد
<ol><li>التحضير للحقن بلبس<ol>
<li>إضافة 25 مل ماء المقطر إلى 25 ملغ مسحوق لبس المستمدة من S. typhimurium بتركيز 1 ملغ/مل نهائي. تخزين الحقن في أنبوب ع?...

<ol>
	<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds.">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).</li><li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study.">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li><li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbleed+topography,+leukoaraiosis,+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study.">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort.">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li><li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain.">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li><li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study.">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).</li><li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases.">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22 (2018).</li><li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice:+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection.">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+H&amp;E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds.">Comparative analysis of H&amp;E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li><li>Zeng, J., Zh&#224;o, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats.">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li><li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds:+A+guide+to+detection+and+interpretation.">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li><li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb.">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages.">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model.">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).</li><li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression.">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li><li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex.">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li><li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lipopolysaccharide+Parkinson's+disease+animal+model:+mechanistic+studies+and+drug+discovery.">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li><li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease.">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li><li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease.">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li><li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+small+vessel+disease:+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges.">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li><li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice.">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li><li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease.">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).</li><li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease?+-+New+insights+from+a+rat+model.">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental &amp; Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).</li></ol>

الدراسات البحثية في كمهس زادت في السنوات القليلة الماضية. ومع ذلك، لا تزال الآلية كمهس غير واضحة، مما دفع العلماء وضع النماذج الحيوانية التي تحاكي هذا الشرط على وجه الخصوص. على سبيل المثال، هوفمان et al. وضع الناجمة عن نقص كمهس ماوس نموذج يوضح أن كمهس هي سبب نقص واضطراب autoregulation المخية<sup ...

ميكروهيمورهاجيس الدماغية الكلاسيكية (كمهس) تشير إلى الودائع ارتشاح صغيرة من نواتج انحلال الدم مثل هيموسيديرين من خلايا الدم الحمراء في المخ1. وفقا "دراسة مسح روتردام"، يمكن العثور على كمهس في ما يقرب من 17.8% أشخاص الذين تتراوح أعمارهم بين 60-69 سنة و 38.3 في المائة في تلك ما يزيد على 80 عاماً2. انتشار كمهس في كبار السن مرتفع نسبيا، ووجود علاقة بين تراكم كمهس والإدراكية والنفسية العصبية الخلل ثابتة3،4. العديد من النماذج الحيوانية من كمهس ذكرت في الآونة الأخيرة، بما في ذلك نماذج القوارض الناجم عن النوع الرابع كولاجيناز حقن ستيريوتاكسيك5والتطبيق المعدلة وراثيا6، التعرض β-N-ميثيلامينو-L-ألانين7، و8من ارتفاع ضغط الدم، مع كمهس الناجمة عن الالتهابات الجهازية كواحد من الخيارات الأكثر قبولا جيدا. فيشر وآخرون 9 أول من استخدم لبس المستمدة من typhimurium السالمونيلا إلى وضع نموذج ماوس كمهس حاد. وفي وقت لاحق، أفادت نفس المجموعة تطوير طراز الماوس كمهس شبه حادة باستخدام النهج نفسه2.
ويعتبر لبس كحافز تحريضية موحدة عن طريق حقن داخل. أكدت الدراسات السابقة أن حقن لبس يمكن أن يسبب نيوروينفلاميشن كما يتبين من كميات كبيرة من microglia ونماذج التنشيط أستروسيتي في الحيوان2،10. وعلاوة على ذلك، كان ارتباط إيجابي بين التنشيط لتفعيل نيوروينفلاميشن وعدد كمهس المنشأة2،10. استناداً إلى هذه الدراسات السابقة، نحن كانت تطالب بوضع نموذج فأر كمهس بالحقن داخل للبس.
التقدم في الكشف عن التكنولوجيات قد أدت إلى زيادة في عدد التحقيقات للبحث عن كمهس. الأكثر على نطاق واسع وتشمل أساليب الكشف عن كمهس الكشف عن خلايا الدم الحمراء الهيماتوكسيلين ويوزين (أنه) تلطيخ، كشف الحديديك الحديد قبل Blue البروسية تلطيخ9، الكشف عن إيفانز الأزرق (EB) ترسب من الفلورة التصوير، والتصوير بالرنين المغناطيسي-التعرض المرجحة تسلا 7.0 التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي-SWI)10. وتهدف الدراسة الحالية لتطوير طريقة للكشف عن كمهس.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2630</td>
			<td>for inflammation induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EB</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>for EB leakage detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI dying solution</td>
			<td>Servicbio</td>
			<td>G1012</td>
			<td>count medium for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perl&#8217;s Prussian staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1424</td>
			<td>Kit for Prussian staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>Kit for HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloral hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47335U</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022</td>
			<td>a kind of buffer solution commonly used in experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China</td>
			<td></td>
			<td>solution for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2461</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2460</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vet ointment</td>
			<td>Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>for rat&#39;s eyes protection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats

شائعة في المرضى الذين تتراوح أعمارهم بين ميكروهيمورهاجيس الدماغي (كمهس) وترتبط بالاضطرابات العصبية المختلفة. مسببات كمهس معقدة، وكثيراً ما يلاحظ neuroinflammation كتواجد المشارك. وهنا، يمكننا وصف شبه حادة نموذج الفئران كمهس الناجم عن حقن lipopolysaccharide (LPS)، فضلا عن أسلوب للكشف عن حقن كمهس. "لبس المنهجي" بسيط نسبيا، واقتصادا، وفعالة من حيث التكلفة. ميزة واحدة كبرى لحقن لبس هو استقرارها للحث على التهاب. كمهس الناجم عن حقن لبس يمكن الكشف عنها بواسطة المراقبة الإجمالية وتوضع وتلطيخ ويوزين (أنه)، بيرل تلطيخ البروسية، إيفانز الأزرق (EB) مزدوجة-وضع العلامات والتصوير بالرنين المغناطيسي-قابلية مرجح التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي-SWI) التكنولوجيا. وأخيراً، تناقش أيضا أساليب أخرى لتطوير نماذج حيوانية كمهس، بما في ذلك مزايا و/أو عيوب، في هذا التقرير.

ويمكن الكشف عن كمهس باستخدام نهج مختلف. الأساليب الأكثر قبولا جيدا وتشمل ما يلي: (1) إجمالي المراقبة والتقييم من سطح كمهس (كما هو موضح في الشكل 1، اللوحة العلوية)؛ (2) وتلطيخ للكشف عن خلايا الدم الحمراء (هو مبين في الشكل 2 ألف، اللوحة العلوية) أ?...

Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

نقدم بروتوكولا للحث والكشف عن كمهس الناجمة عن لبس حقن الفئران سبراغ داولي، التي قد تكون استخدمت في المستقبل التحقيقات للبحث في الآلية المرضية من كمهس.

ميكروهيموررهاجيس الدماغي شبه الحاد الناجم عن حقن ليبوبوليساكتشاريدي في الفئران

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال النزف الدماغي الدقيق مثل المسببات، والتوزيع، والكشف عن النزيف الدماغي الدقيق وهلم جرا. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن حقن LPS تستحث الالتهاب بشكل ثابت. بالإضافة إلى ذلك، حقن LPS بسيط جداً، اقتصادية، وفعالة من حيث التكلفة.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الحث نزيف الدماغ، ويمكن أيضا أن تطبق على اضطرابات الدماغ الأخرى مثل الاكتئاب، والفصام، ومرض باركنسون، ومرض الزهايمر، ومرض البريون. إدارة LPS بجرعة من ملليغرام واحد لكل كيلوغرام من وزن الجسم ل10 أسابيع الذكور الجرذان Doley Sprague عن طريق الحقن داخل الصفتون، ثم العودة كل الفئران إلى القفص المنزلي. كرر حقن LPS بعد ست ساعات و 16 ساعة.يرجى ملاحظة أن حقن الفئران SD مع LPS بجرعة من مليغرام واحد للكيلوغرام الواحد قد يؤدي إلى 5٪ وفيات. ويمكن أن يزداد معدل الوفيات في الجرذان الأصغر سنا أو الأكبر سنا أو الجرذان الحامل. إعادة الفئران إلى أقفاصها بعد حقن LPS، وتوفير الإعلان libitum الوصول إلى الطعام والشراب.تحت التخدير النهائي، قم بإجراء ثقب قلبي عميق من 5 إلى 8 ملليمترات على كل جرذ. يجب أن تكون نقطة الثقب خمسة ملليمترات إلى الهامش الأيسر من القص في الفضاء الوربي الثالث والرابع. عقد الإبرة في مكان واستبدال أنبوب فارغ مع أنبوب يحتوي على ايفانز الأزرق.انتظر حتى يتم ملاحظة استعادة الدم ، ثم حقن ايفانز الأزرق بجرعة من 0.2 ملليلتر لكل 100 غرام من وزن الجسم في البطين الأيسر للقلب. إبقاء الفئران في موقف supine لمدة 10 دقائق إذا تقييم ايفانز تسرب الأزرق من خلال حاجز الدم / الدماغ عن طريق التصوير المناعي. إجراء ضخ القلب باستخدام الجليد الباردة 200 إلى 300 ملليلتر من 0.9٪ محلول ملحي لمسح الأوعية الدموية الدماغية والعقول.التحول إلى الجليد الباردة 4٪ شبهformaldehyde لتثبيت. ثم، بعد عزل الدماغ، غمره في 20٪ من السكروز في برنامج تلفزيوني لمدة ست ساعات على الأقل أو حتى يغرق الدماغ إلى أسفل الأنبوب. تغيير الحل إلى 30٪ السكروز وإصلاحه لمدة ست ساعات أخرى.وأخيراً، أعد أقسام أنسجة الدماغ السميكة 10 ملليمتر باستخدام جهاز التبريد. غسل الشرائح مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل من هذه، ثم احتضان الشرائح مع 4، 6'diamidino-2-فينيليندول أو DAPI حل لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد غسل الشرائح في برنامج تلفزيوني كما كان من قبل، تحميل الشرائح مع برنامج تلفزيوني- محلول الجلسرين.التقاط الصور على المجهر المفلور. يشار إلى ترسب EB بواسطة الفلوري الأحمر ، ويشار إلى النوى من قبل الفلورسينس الأزرق. ابدأ تلطّخ H&E عن طريق غسل الشرائح في الماء المقطر.ثم تزج في حل الهماوكسيلين لمدة ثماني دقائق. بدلا من ذلك، لبيرل البروسية الأزرق تلطيخ، وصمة عار في حل رد فعل مع خليط متساو أجزاء من حمض ferrocyanide وحمض الهيدروكلوريك لمدة 10 دقائق. بعد تلطيخ، وغسل في مياه الصنبور الجارية لمدة خمس دقائق.التفريق في 1٪ من الكحول الحمضي لمدة 30 ثانية. بعد الغسيل في مياه الصنبور الجارية لمدة دقيقة واحدة، وصمة عار في 0.2٪ ماء الأمونيا أو محلول كربونات الليثيوم المشبعة لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. بعد ذلك، اغسل في مياه الصنبور الجارية لمدة خمس دقائق.مضادة للصم مع حل إيوسين لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. الجفاف من خلال 90٪ الكحول، ثم 95٪، والكحول المطلق لمدة 0.5 إلى دقيقتين لكل منهما. بعد الجفاف، واضحة في إكسيلين لمدة 30 ثانية.بعد التركيب، تحليل تلطيخ H & E باستخدام المجهر الفلوريfield. تظهر خلايا الدم الحمراء المُطلقة من الأوعية الدموية، وهي مكونات لـ CMHs، في اللون الأحمر البرتقالي تحت تلطيخ H&E. يمكن الكشف عن CMHs السطح من قبل المراقبة الإجمالية كما هو مبين من قبل السهام الحمراء.ايفانز الأزرق تلطيخ يكشف الفلوريسين الأحمر مرئية حيث ايفانز الجزيئات الزرقاء تسربت من حاجز الدم في الدماغ المصاب. يُظهر تلطيخ H&E خلايا الدم الحمراء الموجودة خارج الشعيرات الدموية، ويكشف التلطين البروسية عن نقاط أيونات الحديديك المشتقة من تحلل خلايا الدم الحمراء. أثناء محاولة هذا الإجراء, من المهم أن نتذكر أن جرعة من LPS للحث على الدماغ الجزئي النزيف أكبر من تلك المستخدمة في مرض باركنسون أو نموذج الفصام.ولذلك، ينبغي الحفاظ على بيئة الحيوانات نظيفة للحد من معدل الوفيات. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل المجهر الإلكتروني، والتصوير بالرنين المغناطيسي، والتصوير المناعي لتحديد الضرر الذي لحق بالبنية الخارجية لحواجز الدم في الدماغ في النزيف الدماغي الدقيق، وتوزيع نزيف الدماغ الدقيق في الدماغ parenchyma في الجسم الحي، فضلا عن تنشيط الخلايا الدبقية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

التنسيق النموذجي نقص تروية الدماغ عن طريق خياطة اللف انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الجرذ

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

إجراء دراسة لإعادة Footshock الناتج عن السعي من الكوكايين في فئران التجارب

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

الكمي من الشلل الأوعية الدموية العمارة باستخدام ثنائي الفوتون المجهري في نموذج الفأر من Neuroinflammation التي يسببها فيروس نقص المناعة البشرية

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

نموذج الفئران من إزالة المزيل القشرية الدماغية على نطاق واسع الناجمة عن الحقن داخل الدماغ من السيتوكينات الموالية للالتهابات

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

آثار Neurotrauma الناجمة عن الانفجار على القوارض المضغوط الأوسط الشرايين الدماغية

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

إصابة الدماغ الناجمة عن الليزر في القشرة الحركية للفئران

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

نموذج نقص نشاط النافصة في الفئران بواسطة Conus medullaris Transection

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

نمذجة النزف داخل البطيني الوليدي من خلال الحقن داخل البطيني للهيموغلوبين

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...