Name: sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00
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Wir danken Lehrer Jian Feng Lei und Kollegen aus Capital Medical University zur Orientierung während der MRT. Wir danken auch Jing Zeng von der Abteilung für Neurologie, das zweite Volk Krankenhaus von Yichang für technische Unterstützung.

Alle hier beschriebene Methoden wurden von Animal Care und Nutzung Ausschuss (ACUC) des PLA Armee General Hospital genehmigt.
(1) Materialien
<ol><li>Vorbereitung der LPS-Injektion<ol>
<li>25 mg LPS Pulver abgeleitet von S. Typhimurium , eine Endkonzentration von 1 mg/mL fügen Sie 25 mL destilliertem Wasser hinzu. Speichern Sie die Injektion in ein steriles Röhrchen bei 4 ° c Achtung: LPS ist giftig.</li>
		<li>Bereiten Sie eine 2 %-EB-Lösung in normalen 0,9 % Kochsalzlösung...

<ol>
	<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds.">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).</li><li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study.">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li><li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbleed+topography,+leukoaraiosis,+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study.">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort.">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li><li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain.">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li><li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study.">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).</li><li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases.">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22 (2018).</li><li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice:+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection.">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+H&amp;E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds.">Comparative analysis of H&amp;E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li><li>Zeng, J., Zh&#224;o, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats.">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li><li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds:+A+guide+to+detection+and+interpretation.">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li><li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb.">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages.">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model.">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).</li><li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression.">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li><li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex.">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li><li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lipopolysaccharide+Parkinson's+disease+animal+model:+mechanistic+studies+and+drug+discovery.">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li><li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease.">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li><li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease.">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li><li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+small+vessel+disease:+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges.">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li><li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice.">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li><li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease.">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).</li><li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease?+-+New+insights+from+a+rat+model.">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental &amp; Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).</li></ol>

Studien über CMHs haben in den letzten Jahren zugenommen. Der Mechanismus der CMHs bleibt jedoch unklar, woraufhin Wissenschaftler, Tiermodellen zu etablieren, die diese besondere Situation zu simulieren. Z. B. Hoffmann Et al. entwickelt eine Hypoxie-induzierten CMHs Maus-Modell, das zeigt, dass CMHs durch Hypoxie und Störung der zerebrovaskulären Selbstregelung12verursacht werden. Reuter Et al. 5 CMHs Modell gegründet APP23 Transgene Mäuse, die die z...

Klassische zerebrale Scherbewegungen (CMHs) beziehen sich auf winzige perivaskuläre Ablagerungen von Blut Abbauprodukte wie Hämosiderin aus roten Blutkörperchen in der Gehirn-1. Demnach Rotterdam Scan werden CMHs in fast 17,8 % der Personen im Alter von 60-69 Jahre und 38,3 % bei den über 80-jährigen2gefunden. Die Prävalenz der CMHs bei älteren Menschen ist relativ hoch, und eine Korrelation zwischen der Akkumulation von CMHs und neuropsychiatrische und Kognitive Dysfunktion wurde etablierten3,4. Verschiedenen Tiermodellen der CMHs haben vor kurzem berichtet wurde, einschließlich der Nager-Modelle von Typ IV Kollagenase stereotaktischen Injektion5, APP transgenen6, β-N-Methylamino-L-Alanin Exposition7und Hypertonie8induziert, mit CMHs, induziert durch eine systemische Entzündung als eines der am meisten anerkannten Entscheidungen. Fischer Et al. zuerst verwendet 9 LPS von Salmonella Typhimurium abgeleitet, um einem akuten CMHs Mausmodell zu entwickeln. Anschließend berichtete die gleiche Gruppe die Entwicklung von einem subakuten CMHs-Maus-Modell mit dem gleichen Ansatz2.
LPS gilt als eine standardisierte entzündungsreiz über intraperitoneale Injektion. Frühere Studien haben bestätigt, dass LPS Injektion Neuroinflammation verursachen könnte, wie Sie sich durch große Mengen von Mikroglia und Astrozyten Aktivierung in der Tier-2,10 Modelle. Darüber hinaus wurde eine positive Korrelation zwischen der Aktivierung des Neuroinflammation Aktivierung und die Anzahl der CMHs etablierten2,10. Basierend auf diesen früheren Studien, wurden wir aufgefordert, einem Rattenmodell CMHs entwickeln durch intraperitoneale Injektion von LPS.
Fortschritte in der Erkennung, Technologien zu einer Zunahme der Anzahl der Forschung Untersuchungen über CMHs geführt haben. Am meisten anerkannten Methoden zur Erkennung von CMHs gehören den Nachweis von roten Blutkörperchen von Hämatoxylin und Eosin (HE) Färbung, dreiwertigem Eisen Erkennung durch preußisch-blau färben9, Erkennung von Evans blau (EB) Ablagerung durch Immunfluoreszenz Bildgebung und 7,0 Tesla Magnet-Resonanz-Tomographie-Anfälligkeit gewichtete Bildgebung (MRT-SWI)10. Die vorliegende Studie soll eine Methode zur Früherkennung von CMHs zu entwickeln.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2630</td>
			<td>for inflammation induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EB</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>for EB leakage detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI dying solution</td>
			<td>Servicbio</td>
			<td>G1012</td>
			<td>count medium for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perl&#8217;s Prussian staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1424</td>
			<td>Kit for Prussian staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>Kit for HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloral hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47335U</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022</td>
			<td>a kind of buffer solution commonly used in experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China</td>
			<td></td>
			<td>solution for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2461</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2460</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vet ointment</td>
			<td>Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>for rat&#39;s eyes protection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats

Zerebrale Scherbewegungen (CMHs) sind häufig bei Patienten im Alter von und in Korrelation zu verschiedenen neuropsychiatrischen Erkrankungen. Die Ätiologie der CMHs ist komplex, und Neuroinflammation wird oft als eine gleichzeitige Auftreten beobachtet. Hier beschreiben wir eine Sub-akute CMHs Rattenmodell induziert durch Lipopolysaccharid (LPS) Injektion, sowie eine Methode zur Erkennung von CMHs. systemische LPS Injektion ist relativ einfach, wirtschaftlich und kostengünstig. Ein großer Vorteil von LPS Injektion ist seine Stabilität, Entzündung zu induzieren. CMHs verursacht durch LPS Injektion konnte durch grobe Beobachtung, Hämatoxylin und Eosin (HE) Färbung, Perl preußischen Färbung, Evans blau (EB) Doppel-labeling und Magnet-Resonanz-Tomographie-Anfälligkeit gewichtet imaging (MRI-SWI)-Technologie nachgewiesen werden. Abschließend werden andere Methoden der Entwicklung von Tiermodellen CMHs, einschließlich ihre Vorteile bzw. Nachteile, auch in diesem Bericht diskutiert.

CMHs können mit verschiedenen Ansätzen erkannt werden. Die meisten anerkannten Methoden gehören die folgenden: (1) grobe Beobachtung und Beurteilung der Oberfläche CMHs (siehe Abbildung 1, oben); (2) er Färbung zum Nachweis von roten Blutkörperchen (siehe Abbildung 2A, obere Leiste) oder preußischen Färbung erkennen von dreiwertigem Eisen abgeleitet Lyse der Erythrozyten (Abb. 2A, untere Leis...

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Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll zu induzieren und erkennen, dass CMHs verursacht durch LPS Injektion in Sprague-Dawley Ratten, die möglicherweise in Zukunft Forschung Untersuchungen über die Pathogenese der CMHs genutzt.

Sub-akute zerebrale Punktblutungen induziert durch Lipopolysaccharid-Injektion bei Ratten

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Diese Methode kann helfen, schlüsselhafte Fragen im Bereich der Hirnblutung wie Ätiologie, Verteilung und Nachweis von hirnmikroskopischer Hirnblutung usw. zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass LPS-Injektionen eine Entzündung stabil induzieren. Darüber hinaus ist die LPS-Injektion recht einfach, wirtschaftlich und kostengünstig.Obwohl diese Methode Einblick in die Hirnblutungsinduktion geben kann, Kann es auch auf andere Erkrankungen des Gehirns wie Depression, Schizophrenie, Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit und Prion-Krankheit angewendet werden. Verabreichen Sie LPS in einer Dosis von einem Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht an 10 Wochen alte männliche Sprague Dawley Ratten durch intraperitoneale Injektion, dann jede Ratte in den heimischen Käfig zurück. Wiederholen Sie die LPS-Injektion nach sechs Stunden und 16 Stunden.Bitte beachten Sie, dass die Injektion von SD-Ratten mit LPS in einer Dosis von einem Milligramm pro Kilogramm zu einer Sterblichkeit von 5 % führen kann. Die Sterblichkeit könnte bei jüngeren oder älteren Ratten oder schwangeren weiblichen Ratten weiter zunehmen. Bringen Sie die Ratten nach der LPS-Injektion in ihre Käfige zurück und bieten Sie ad libitum Zugang zu Nahrungsmitteln und Getränken.Führen Sie unter Terminalanästhesie eine fünf bis acht Millimeter tiefe Herzpunktion an jeder Ratte durch. Der Punktionspunkt sollte fünf Millimeter zum linken Rand des Brustbeins im dritten und vierten interkostalen Raum sein. Halten Sie die Nadel an Ort und Stelle und ersetzen Sie das leere Rohr durch ein Rohr mit Evans blau.Warten Sie, bis die Bluterholung beobachtet wird, und injizieren Sie Evans blau in einer Dosis von 0,2 Milliliter pro 100 Gramm Körpergewicht in den linken Herzventrikel. Halten Sie die Ratte in einer Supine-Position für 10 Minuten, wenn Sie Evans blaue Leckage durch die Blut/Hirn-Schranke durch Immunfluoreszenz-Bildgebung beurteilen. Führen Sie Herzperfusionen mit eiskalten 200 bis 300 Millilitern 0,9% Salinelösung durch, um die zerebrale Vaskulatur und gehirn zu löschen.Wechseln Sie zur Fixierung auf eiskaltes 4%Paraformaldehyd. Dann, nach der Isolierung des Gehirns, tauchen Sie es in 20%Saccharose in PBS für mindestens sechs Stunden oder bis das Gehirn auf den Boden der Röhre sinkt. Ändern Sie die Lösung auf 30%Saccharose und fixieren Sie sie für weitere sechs Stunden.Schließlich bereiten Sie 10 Millimeter dicke Hirngewebeabschnitte mit einem Kryostat vor. Waschen Sie die Dias dreimal für jeweils fünf Minuten mit PBS, dann inkubieren Sie Dias mit 4, 6'diamidino-2-phenylindole oder DAPI Lösung für 15 Minuten bei Raumtemperatur. Nach dem Waschen der Dias in PBS wie zuvor, montieren Sie die Dias mit PBS-Glyzerin-Lösung.Erfassen Sie Bilder auf einem Fluoreszenzmikroskop. Die EB-Abscheidung wird durch rote Fluoreszenz angezeigt, Kerne sind durch blaue Fluoreszenz gekennzeichnet. Beginnen Sie mit der H&E-Färbung, indem Sie die Dias in destilliertem Wasser waschen.Dann tauchen Sie acht Minuten lang in Hämatoxylinlösung ein. Alternativ für Perl preußische blaue Färbung, Färbung in Reaktionslösung mit gleichen Teilen Mischung von Ferrocyanid und Salzsäure für 10 Minuten. Nach der Färbung fünf Minuten lang in fließendem Leitungswasser waschen.In 1%säurealkohol für 30 Sekunden differenzieren. Nach dem Waschen in fließendem Leitungswasser für eine Minute, Flecken in 0,2%Ammoniak-Wasser oder gesättigte Lithium-Carbonat-Lösung für 30 Sekunden bis eine Minute. Als nächstes fünf Minuten in fließendem Leitungswasser waschen.Gegenfleck mit Eosin-Lösung für 30 Sekunden bis eine Minute. Dehydrieren Sie durch 90%Alkohol, dann 95% Alkohol und absoluten Alkohol für jeweils 0,5 bis zwei Minuten. Nach der Austrocknung 30 Sekunden lang in Xylol löschen.Analysieren Sie nach der Montage die H&E-Färbung mit einem Hellfeldfluoreszenzmikroskop. Die roten Blutkörperchen, die aus den Blutgefäßen freigesetzt werden, die Bestandteile der CMHs sind, erscheinen in rot-orange unter H&E-Färbung. Oberflächen-CMHs können durch grobe Beobachtung erkannt werden, wie durch die roten Pfeile angezeigt.Evans blaue Färbung zeigt sichtbare rote Fluoreszenz, wo Evans blaue Moleküle aus einer verletzten Blut -Hirn-Schranke austraten. Die H&E-Färbung zeigt rote Blutkörperchen außerhalb der Kapillaren, und preußische Färbung zeigt eisenrote Ionenpunkte, die aus der Lyse roter Blutkörperchen abgeleitet sind. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Dosis von LPS, um zerebrale Mikroblutungen zu induzieren, größer ist als die, die bei Parkinson-Krankheit oder Schizophrenie-Modell verwendet wird.Daher sollte die Umwelt der Tiere sauber gehalten werden, um die Sterblichkeitsrate zu senken. Im Anschluss an dieses Verfahren könnten andere Methoden wie Elektronenmikroskopie, Magnetresonanztomographie und immunfluoreszierende Bildgebung durchgeführt werden, um die Schädigung der äußeren Struktur der Blut-Hirn-Schranke bei hirn-Hirn-Blutungen, die Verteilung von hirnmikroskopischen Mikroblutungen im Blutparenchym in vivo sowie die Gliazellaktivierung zu bestimmen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Fokaler zerebraler Ischämie-Modell von Endovascular Suture Verschluss der mittleren Hirnarterie im Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Forschung

Neurowissenschaften

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

Ein Verfahren zur Untersuchung der Fußschock-Induced Wiedereinsetzung von Kokain suche in Laborratten

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dual-Elektrophysiologische Recordings synaptisch-evozierte astrogliale und neuronale Antworten in Acute Hippocampusschnitte

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Die Quantifizierung der zerebrale vaskuläre Architektur unter Verwendung von Zwei-Photonen-Mikroskopie in einem Mausmodell der HIV-induzierten Neuroinflammation

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Rattenmodell der weit verbreiteten zerebralen kortikalen Demyelinisierung, induziert durch eine intrazerebrale Injektion von entzündungsfördernden Zytokinen

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Auswirkungen der Explosion-induzierte Neurotrauma auf Druck Nagetier mittlerer Hirnarterien

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Einrichtung eines akuten Pontininfarkts bei Ratten durch elektrische Stimulation

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

Laserinduzierte Hirnverletzung im Motor Cortex von Ratten

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

Detrusor-Unteraktivitätsmodell bei Ratten durch Conus medullaris-Durchtrennung

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

Modellierung neonataler intraventrikulärer Blutungen durch intraventrikuläre Injektion von Hämoglobin

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...