Name: sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

אנו מודים ליי פנג ג'יאן המורה ועמיתיו מאוניברסיטת קפיטל הרפואה עבור הדרכה במהלך בדיקת MRI. אנו מודים גם ג'ינג Zeng מן המחלקה לנוירולוגיה, בבית החולים של ייצ'אנג של העם השני למתן תמיכה טכנית.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה (ACUC) ה-PLA ביה"ח הכללי של צבא.
1. חומרים
<ol><li>הכנה של הזרקת LPS<ol>
<li>להוסיף 25 מ ל מים מזוקקים 25 מ ג של אבקת LPS נגזר typhimurium ס כדי ריכוז סופי של 1 מ"ג/מ"ל. לאחסן את הזריקה בשפופרת סטרילי ב 4 º C. התראה: LPS הוא רעיל.</li>
		<li>לה...

<ol>
	<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds.">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).</li><li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study.">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li><li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbleed+topography,+leukoaraiosis,+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study.">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort.">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li><li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain.">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li><li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study.">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).</li><li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases.">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22 (2018).</li><li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice:+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection.">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+H&amp;E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds.">Comparative analysis of H&amp;E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li><li>Zeng, J., Zh&#224;o, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats.">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li><li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds:+A+guide+to+detection+and+interpretation.">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li><li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb.">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages.">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model.">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).</li><li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression.">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li><li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex.">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li><li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lipopolysaccharide+Parkinson's+disease+animal+model:+mechanistic+studies+and+drug+discovery.">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li><li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease.">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li><li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease.">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li><li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+small+vessel+disease:+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges.">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li><li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice.">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li><li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease.">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).</li><li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease?+-+New+insights+from+a+rat+model.">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental &amp; Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).</li></ol>

מחקרים על CMHs הגבירו בשנים האחרונות. עם זאת, המנגנון של CMHs עדיין לא ברור, הנחיה מדענים ליצור מודלים בבעלי חיים לדמות מצב מסוים זה. לדוגמה, הופמן. et al. פיתח הנוצרות על-ידי היפוקסיה CMHs העכבר מודל שמראה כי CMHs נגרמים על ידי היפוקסיה, שיבוש autoregulation כשאבדן12. רויטר. et al. <sup class="xref...

Microhemorrhages מוחי הקלאסית (CMHs) עיין perivascular זעירים פיקדונות של מוצרי דם השפלה כגון hemosiderin של תאי דם אדומים במוח1. על פי המחקר רוטרדם לסרוק, CMHs ניתן למצוא אותה כמעט 17.8% של אנשים בגילאי 60-69 שנים ו- 38.3% אלה מעל 80 שנה2. השכיחות של CMHs אצל הקשישים הוא גבוה יחסית, מתאם בין ההצטברות של CMHs תפקוד קוגניטיבי, מנוטלי כבר הוקמה3,4. מספר מודלים חייתיים של CMHs לאחרונה דווחו, כולל דגמים מכרסמים המושרה על ידי הסוג הרביעי collagenase הזרקת stereotaxic5, APP הטרנסגניים6, β-N-methylamino-L-אלנין חשיפה7ויתר לחץ דם8, עם CMHs הנגרמת על ידי דלקת מערכתית כאחת האפשרויות המקובלת יותר היטב. פישר. et al. 9 השימוש הראשון LPS נגזר סלמונלה typhimurium לפתח מודל העכבר CMHs חריפה. לאחר מכן, באותה הקבוצה דיווח על התפתחות מודל תת חריפה CMHs העכבר באמצעות גישה זהה של2.
LPS נחשבת תקנית גירוי דלקתי באמצעות הזרקת בקרום הבטן. מחקרים קודמים אישרו כי הזרקת LPS עלול לגרום neuroinflammation כפי שהיא משתקפת כמויות גדולות של מיקרוגלייה, הפעלת אסטרוציט בחיה מודלים2,10. יתר על כן, מתאם חיובי בין הפעלה של הפעלת neuroinflammation המספר של CMHs כבר הקים2,10. בהתבסס על מחקרים קודמים אלה, אנחנו כשהתבקשת לפתח מודל עכברוש CMHs על ידי הזרקה בקרום הבטן של LPS.
. ההתקדמות זיהוי הטכנולוגיות גרמו לעלייה במספר חקירות מחקר ב- CMHs. הכי נרחב הודה שיטות גילוי CMHs כוללות את הגילוי של כדוריות דם אדומות על ידי hematoxylin אאוזין (הוא) מכתים, ברזל ferric זיהוי על ידי כחול פרוסי מכתים9, זיהוי של אוונס כחול (EB) תצהיר על ידי immunofluorescence הדמיה, טסלה 7.0 תהודה מגנטית-הרגישות משוקלל הדמיה (MRI-מושכל)10. המחקר הנוכחי שואפת לפתח שיטת הקרנה של CMHs.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2630</td>
			<td>for inflammation induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EB</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>for EB leakage detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI dying solution</td>
			<td>Servicbio</td>
			<td>G1012</td>
			<td>count medium for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perl&#8217;s Prussian staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1424</td>
			<td>Kit for Prussian staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>Kit for HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloral hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47335U</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022</td>
			<td>a kind of buffer solution commonly used in experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China</td>
			<td></td>
			<td>solution for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2461</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2460</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vet ointment</td>
			<td>Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>for rat&#39;s eyes protection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats

Microhemorrhages מוחי (CMHs) שכיחים בחולים בגילאי, נמצאים בקורלציה מנוטלי הפרעות שונות. האטיולוגיה של CMHs מורכבים, neuroinflammation נצפית לעיתים קרובות כמו מופע משותף. כאן, אנו מתארים תת חריפה CMHs חולדה מודל המושרה על ידי הזרקת ליפופוליסכריד (LPS), כמו גם שיטה לגילוי הזרקת LPS מערכתית CMHs. הוא יחסית פשוט, חסכוני וחסכונית. אחד היתרונות של הזרקת LPS הוא יציבותו כדי לגרום לדלקת. CMHs הנגרמת על ידי הזרקת LPS יכול יזוהו על-ידי התבוננות ברוטו hematoxylin ו אאוזין (הוא) צביעת, של Perl מכתים הפרוסי, אוונס כחול (EB) כפול-תיוג, דימות תהודה מגנטית-הרגישות משוקלל טכנולוגיית הדמיה (MRI-מושכל). לבסוף, שיטות אחרות לפתח מודלים בעלי חיים CMHs, כולל שלהם יתרונות או חסרונות, נדונות גם בדו ח זה.

ניתן להבחין CMHs תוך שימוש בגישות שונות. השיטות המקובלת יותר היטב כוללים את הפריטים הבאים: (1) דוחה תצפית והערכה של פני השטח CMHs (ראה איור 1, החלונית העליונה); (2) הוא מכתים איתור של תאי דם אדומים (ראה איור 2A, החלונית העליונה) או הפרוסי צביעת הברזל fe...

Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

אנו מציגים פרוטוקול זירוז ולגלות CMHs הנגרמת על ידי הזרקת LPS בחולדות ספראג-Dawley, אשר עשוי להיות מנוצל בעתיד חקירות מחקר בפתוגנזה של CMHs.

Microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המיקרו-דימום המוחי כגון אטיולוגיה, הפצה וזיהוי של מיקרו-דימום מוחי וכן הלאה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי זריקות LPS לגרום דלקת. בנוסף, הזרקת LPS היא די פשוטה, חסכונית וחסכונית.למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה אינדוקציה דימום מוחי, זה יכול להיות מיושם גם על הפרעות מוחיות אחרות כגון דיכאון, סכיזופרניה, מחלת פרקינסון, מחלת אלצהיימר, ומחלת פריון. ניהול LPS במינון של מיליגרם אחד לקילוגרם של משקל גוף לחולדות ספראג דאוולי זכר בן 10 שבועות על ידי הזרקה תוך-לידתית, ואז להחזיר כל חולדה לכלוב הבית. חזור על הזרקת LPS לאחר שש שעות ו 16 שעות.שים לב כי הזרקת חולדות SD עם LPS במינון של מיליגרם אחד לקילוגרם עלולה לגרום לתמותה של 5%. התמותה יכולה לעלות עוד יותר אצל חולדות צעירות או מבוגרות יותר או חולדות בהריון. להחזיר את החולדות לכלובים שלהם לאחר הזרקת LPS, ולספק גישה ליביטום מודעה למזון ושתייה.תחת הרדמה סופנית, לבצע ניקור לב עמוק חמישה עד שמונה מ"מ על כל חולדה. נקודת הדקירה צריכה להיות חמישה מילימטרים בשוליים השמאליים של עצם החזה בחלל הבין-צלעי השלישי והרביעי. החזק את המחט במקום ולהחליף את הצינור הריק עם צינור המכיל אוונס כחול.חכה עד התאוששות הדם נצפתה, ולאחר מכן להזריק אוונס כחול במינון של 0.2 מיליליטר לכל 100 גרם של משקל גוף לתוך החדר הלב השמאלי. שמור את החולדה במצב עלוב במשך 10 דקות אם הערכת דליפת אוונס כחול דרך מחסום הדם / מוח על ידי הדמיה immunofluorescence. בצע חליטות לב באמצעות קר כקרח 200 עד 300 מיליליטר של 0.9% תמיסת מלח כדי לנקות את כלי הדם המוחיים ואת המוח.עבור אל קר כקרח 4% paraformaldehyde עבור קיבעון. לאחר מכן, לאחר בידוד המוח, לטבול אותו 20% סוכרוז ב PBS לפחות שש שעות או עד המוח שוקע לתחתית הצינור. שנה את הפתרון ל- 30%sucrose ותקן אותו למשך שש שעות נוספות.לבסוף, להכין 10 מילימטר עבה רקמת המוח חלקים באמצעות קריוסטט. לשטוף את השקופיות עם PBS שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחד, ולאחר מכן דגירה שקופיות עם 4, 6'diamidino-2-פנילינדולה או DAPI פתרון במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפת השקופיות ב- PBS כבעבר, תן את השקופיות עם פתרון PBS-גליצרול.לכידת תמונות במיקרוסקופ פלואורסצנטי. תצהיר EB מסומן על ידי פלואורסצנטיות אדומה, גרעינים מסומנים על ידי פלואורסצנטיות כחולה. התחל מכתים H&E על ידי שטיפת המגלשות במים מזוקקים.ואז לטבול תווי hematoxylin במשך שמונה דקות. לחלופין, עבור כתמים כחולים Perl Prussian, כתם בת פתרון תגובה עם תערובת חלקים שווים של פרוציאניד וחומצה הידרוכלורית במשך 10 דקות. לאחר הכתמים, יש לשטוף במי ברז זורמים במשך חמש דקות.להבדיל 1% חומצה אלכוהול במשך 30 שניות. לאחר שטיפה במי ברז זורמים למשך דקה אחת, יש להכתים במי אמוניה 0.2% או בתווית ליתיום קרבונט רוויה למשך 30 שניות עד דקה. לאחר מכן, יש לשטוף במי ברז זורמים למשך חמש דקות.כתם נגדי עם תוסף אאוסין למשך 30 שניות עד דקה אחת. התייבשות באמצעות 90% אלכוהול, לאחר מכן 95% אלכוהול, ואלכוהול מוחלט במשך 0.5 עד שתי דקות כל אחד. לאחר התייבשות, יש לנקות את הקסילן למשך 30 שניות.לאחר ההרכבה, לנתח את כתמי H&E באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהיר שדה. תאי הדם האדומים המשתחררים מכלי הדם, שהם רכיבים של CMHs, מופיעים באדום-כתום תחת כתמי H&E. CMHs פני השטח ניתן לזהות על ידי תצפית ברוטו כפי שצוין על ידי החצים האדומים.הכתם הכחול של אוונס חושף פלואורסצנטיות אדומה גלויה שבה מולקולות כחולות של אוונס דלפו ממחסום דם-מוח פצוע. כתמי H&E מראים תאי דם אדומים שנמצאו מחוץ לנימים, וכתמים פרוסיים חושפים נקודות יונים ברזליות שמקורן תיזה של תאי דם אדומים. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי המינון של LPS כדי לגרום לדימום מיקרו מוחי גדול יותר מזה המשמש מחלת פרקינסון או מודל סכיזופרניה.לכן, הסביבה של בעלי חיים צריכה להישמר נקייה כדי להפחית את שיעור התמותה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מיקרוסקופ אלקטרונים, דימות תהודה מגנטית והדמיה immunofluorescent כדי לקבוע את הנזק למבנה החיצוני של מחסום הדם - מוח בדימום מיקרו מוחי, הפצה של מיקרו דימומים מוחיים בפרנצ'ימה במוח ב vivo, כמו גם הפעלת תאי גליה.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

דגם מרחק איסכמיה מוחית על ידי ספיגה תפר Endovascular של עורק המוח התיכון עכברוש

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

נוהל לימוד החזרה Footshock-induced של קוקאין מחפשים אצל חולדות מעבדה

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

כימות של מוחין ארכיטקטורת כלי דם באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים במודל עכבר של neuroinflammation המושרה HIV

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

מודל חולדה של דמיאלינציה קליפת המוח הנרחבת הנגרמת על ידי הזרקה תוך מוחית של ציטוקינים פרו דלקתיים

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

השפעות הפיצוץ-induced Neurotrauma על מכרסם מווסת המזרח התיכון העורקים המוחיים

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

הקמת אוטם פונטינה חריפה בחולדות על ידי גירוי חשמלי

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

פגיעה מוחית כתוצאה בלייזר בקליפת המוח המוטורית של חולדות

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

מודל תת-פעילות של דטרוזור בחולדות מאת קונוס מדולאריס טרנסקציה

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

דוגמנות דימום תוך חדרי ילודים באמצעות הזרקה תוך-חדרית של המוגלובין

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...