Name: sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00
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हम शिक्षक जीआईपी फेंग लेई और एमआरआई के दौरान मार्गदर्शन के लिए राजधानी चिकित्सा विश्वविद्यालय से सहकर्मियों को धन्यवाद । हम भी Jing Zeng के न्यूरोलॉजी विभाग, तकनीकी सहायता प्रदान करने के लिए यिचांग के दूसरे लोगों के अस्पताल से धंयवाद ।

यहां बताए गए सभी तरीकों को पीएलए आर्मी जनरल हॉस्पिटल की एनिमल केयर एंड फीमेल कमेटी (ACUC) ने मंजूरी दे दी है ।
1. सामग्री
<ol><li>एलपीएस इंजेक्शन की तैयारी<ol>
<li>आसुत जल के 25 मिलीलीटर जोड़ें एलपीएस पाउडर ?...

<ol>
	<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds.">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).</li><li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study.">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li><li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbleed+topography,+leukoaraiosis,+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study.">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort.">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li><li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain.">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li><li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study.">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).</li><li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases.">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22 (2018).</li><li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice:+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection.">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+H&amp;E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds.">Comparative analysis of H&amp;E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li><li>Zeng, J., Zh&#224;o, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats.">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li><li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds:+A+guide+to+detection+and+interpretation.">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li><li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb.">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages.">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model.">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).</li><li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression.">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li><li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex.">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li><li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lipopolysaccharide+Parkinson's+disease+animal+model:+mechanistic+studies+and+drug+discovery.">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li><li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease.">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li><li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease.">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li><li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+small+vessel+disease:+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges.">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li><li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice.">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li><li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease.">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).</li><li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease?+-+New+insights+from+a+rat+model.">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental &amp; Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).</li></ol>

CMHs पर शोध अध्ययनों में पिछले कुछ वर्षों में वृद्धि हुई है । हालांकि, CMHs का तंत्र अस्पष्ट रहता है, वैज्ञानिकों को संकेत है कि इस विशेष स्थिति अनुकरण पशु मॉडल स्थापित करने के लिए । उदाहरण के लिए, Hoffmann एट अल....

शास्त्रीय सेरेब्रल microhemorrhages (CMHs) मस्तिष्क1में लाल रक्त कोशिकाओं से hemosiderin जैसे रक्त क्षरण उत्पादों के छोटे perivascular जमा करने के लिए देखें । रॉटरडैम स्कैन अध्ययन के अनुसार, CMHs 60 आयु वर्ग के व्यक्तियों के लगभग १७.८% में पाया जा सकता है-69 साल और ८० साल से अधिक उन में ३८.३%2। बुजुर्गों में CMHs की व्यापकता अपेक्षाकृत अधिक है, और CMHs और संज्ञानात्मक और neuropsychiatric रोग के संचय के बीच एक संबंध स्थापित किया गया है3,4. CMHs के कई एनिमल मॉडल्स को हाल ही में रिपोर्ट किया गया है, जिसमें टाइप IV collagenase stereotaxic इंजेक्शन5, एप ट्रांसजेनिक6, β-N-methylamino-L-alanine एक्सपोज़र7, और हाइपरटेंशन8, एक सबसे अच्छी तरह से स्वीकार किए जाते है विकल्पों में से एक के रूप में प्रणालीगत सूजन द्वारा प्रेरित CMHs के साथ । फिशर एट अल । 9 पहले साल्मोनेला typhimurium से व्युत्पंन एलपीएस एक तीव्र CMHs माउस मॉडल विकसित करने के लिए इस्तेमाल किया । बाद में, एक ही समूह एक उप-एक्यूट CMHs माउस एक ही दृष्टिकोण2का उपयोग कर मॉडल के विकास की सूचना दी ।
एलपीएस intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से एक मानकीकृत भड़काऊ उत्तेजना के रूप में माना जाता है । पिछले अध्ययनों की पुष्टि की है कि एलपीएस इंजेक्शन neuroinflammation के रूप में पशु मॉडल2,10में microglia और astrocyte सक्रियण की बड़ी मात्रा से प्रतिबिंबित पैदा कर सकता है । इसके अलावा, neuroinflammation सक्रियण के सक्रियकरण और CMHs की संख्या के बीच एक सकारात्मक संबंध स्थापित किया गया है2,10। इन पिछले अध्ययनों के आधार पर, हम एलपीएस के intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा एक CMHs चूहा मॉडल विकसित करने के लिए प्रेरित किया गया ।
पता लगाने की प्रौद्योगिकियों में अग्रिम CMHs पर अनुसंधान जांच की संख्या में वृद्धि हुई है । CMHs का पता लगाने के सबसे व्यापक रूप से स्वीकार तरीकों hematoxylin और eosin द्वारा लाल रक्त कोशिकाओं का पता लगाने में शामिल (वह) धुंधला, प्रशिया नीले दाग9, EB द्वारा इवांस ब्लू (इम्यूनोफ्लोरेसेंस) जमाव का पता लगाने के द्वारा घाट लोहे का पता लगाने इमेजिंग, और ७.० टेस्ला चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग-संवेदनशीलता भारित इमेजिंग (एमआरआई-SWI)10. वर्तमान अध्ययन CMHs के लिए स्क्रीनिंग की एक विधि का विकास करना है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2630</td>
			<td>for inflammation induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EB</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>for EB leakage detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI dying solution</td>
			<td>Servicbio</td>
			<td>G1012</td>
			<td>count medium for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perl&#8217;s Prussian staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1424</td>
			<td>Kit for Prussian staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>Kit for HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloral hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47335U</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022</td>
			<td>a kind of buffer solution commonly used in experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China</td>
			<td></td>
			<td>solution for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2461</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2460</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vet ointment</td>
			<td>Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>for rat&#39;s eyes protection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats

मस्तिष्क microhemorrhages (CMHs) वृद्ध रोगियों में आम है और विभिन्न neuropsychiatric विकारों के लिए संबंधित हैं । CMHs के एटियलजि जटिल है, और neuroinflammation अक्सर एक सह घटना के रूप में मनाया जाता है । यहाँ, हम एक उप-तीव्र CMHs चूहे lipopolysaccharide द्वारा प्रेरित मॉडल का वर्णन (एलपीएस) इंजेक्शन, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से CMHs का पता लगाने के लिए एक विधि. प्रणालीगत एलपीएस इंजेक्शन अपेक्षाकृत सरल, किफायती, और लागत प्रभावी है । एलपीएस इंजेक्शन का एक प्रमुख लाभ इसकी स्थिरता सूजन पैदा करने के लिए है । CMHs एलपीएस इंजेक्शन की वजह से सकल प्रेक्षण, hematoxylin और eosin (वह) धुंधला, पर्ल प्रशिया धुंधला, इवांस ब्लू (EB) डबल लेबलिंग, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग-संवेदनशीलता भारित इमेजिंग (एमआरआई-SWI) प्रौद्योगिकी द्वारा पता लगाया जा सकता है । अंत में, अपने फायदे और/या नुकसान सहित CMHs पशु मॉडल, विकसित करने के अंय तरीकों पर भी इस रिपोर्ट में चर्चा कर रहे हैं ।

CMHs विभिंन तरीकों का उपयोग कर पता लगाया जा सकता है । सबसे अच्छी तरह से स्वीकार किए जाते है तरीकों में निंनलिखित शामिल हैं: (1) सकल अवलोकन और सतह CMHs का आकलन ( चित्रा 1, ऊपरी पैनल में दिखाय?...

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Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

हम Sprague-Dawley चूहों में एलपीएस इंजेक्शन की वजह से CMHs के लिए प्रेरित और पता लगाने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं, जो रोगजनन के CMHs पर भविष्य में अनुसंधान जांच में उपयोग किया जा सकता है ।

चूहों में Lipopolysaccharide इंजेक्शन द्वारा प्रेरित उप तीव्र सेरेब्रल Microhemorrhages

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

यह विधि सेरेब्रल माइक्रो-हेमरेज क्षेत्र जैसे एटियोलॉजी, वितरण और सेरेब्रल माइक्रो-हेमरेज का पता लगाने आदि में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि एलपीएस इंजेक्शन लगातार सूजन को प्रेरित करते हैं। इसके अलावा, एलपीएस इंजेक्शन काफी सरल, किफायती और लागत प्रभावी है।हालांकि यह विधि सेरेब्रल हेमरेज प्रेरण में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है, लेकिन इसे अवसाद, सिजोफ्रेनिया, पार्किंसंस रोग, अल्जाइमर रोग और प्रिन रोग जैसे अन्य मस्तिष्क विकारों पर भी लागू किया जा सकता है। इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा 10 सप्ताह पुराने पुरुष स्प्राग डावले चूहों को शरीर के वजन के प्रति किलोग्राम एक मिलीग्राम की खुराक पर एलपीएस का प्रशासन करें, फिर प्रत्येक चूहे को घर के पिंजरे में वापस करें। एलपीएस इंजेक्शन को छह घंटे और 16 घंटे के बाद दोहराएं।कृपया ध्यान दें कि एक मिलीग्राम प्रति किलोग्राम की खुराक पर एलपीएस के साथ एसडी चूहों को इंजेक्शन लगाने से 5% मृत्यु दर हो सकती है। मृत्यु दर छोटे या पुराने चूहों या गर्भवती मादा चूहों में और बढ़ सकती है। एलपीएस इंजेक्शन के बाद चूहों को उनके पिंजरों में लौटाएं, और भोजन और पेय के लिए विज्ञापन लिबिटम पहुंच प्रदान करें।टर्मिनल संज्ञाहरण के तहत, प्रत्येक चूहे पर पांच से आठ मिलीमीटर गहरे हृदय पंचर प्रदर्शन करते हैं। पंचर बिंदु तीसरे और चौथे इंटरकोस्टल अंतरिक्ष में उरोस्थि के बाएं मार्जिन के लिए पांच मिलीमीटर होना चाहिए। जगह में सुई पकड़ो और इवांस नीले रंग युक्त एक ट्यूब के साथ खाली ट्यूब की जगह ।रक्त वसूली मनाया जाता है जब तक रुको, और फिर बाएं दिल वेंट्रिकल में शरीर के वजन के १०० ग्राम प्रति ०.२ मिलीलीटर की एक खुराक पर इवांस नीले सुई । इम्यूनोफ्लोरेसेंस इमेजिंग द्वारा रक्त/मस्तिष्क बाधा के माध्यम से इवांस ब्लू रिसाव का आकलन करते हुए चूहे को 10 मिनट के लिए एक रीढ़ की स्थिति में रखें । सेरेब्रल वैक्यूलेचर और दिमाग को साफ करने के लिए 0.9% खारा समाधान के बर्फ-ठंड 200 से 300 मिलीलीटर का उपयोग करके कार्डियक पर्फ्यूजन करें।निर्धारण के लिए बर्फ-ठंड 4% पैराफॉर्मलडिहाइड पर स्विच करें। फिर, मस्तिष्क को अलग करने के बाद, इसे पीबीएस में कम से कम छह घंटे के लिए या जब तक मस्तिष्क ट्यूब के नीचे तक डूब नहीं जाता है, इसे 20% सुक्रोज में विसर्जित कर दें। समाधान को 30% सुक्रोज में बदलें और इसे अन्य छह घंटे के लिए ठीक करें।अंत में, क्रायोस्टेट का उपयोग करके 10 मिलीमीटर मोटी मस्तिष्क ऊतक अनुभाग तैयार करें। पांच मिनट के लिए तीन बार पीबीएस के साथ स्लाइड धोएं, फिर कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 4, 6'diamidino-2-phenylindole या DAPI समाधान के साथ स्लाइड incubate । पहले की तरह पीबीएस में स्लाइड्स धोने के बाद, पीबीएस-ग्लिसरोल समाधान के साथ स्लाइड्स माउंट करें।फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप पर छवियों को कैप्चर करें। ईबी बयान लाल फ्लोरेसेंस द्वारा इंगित किया जाता है, नाभिक नीले फ्लोरेसेंस द्वारा इंगित किया जाता है। आसुत पानी में स्लाइड धोने से एच एंड ई धुंधला शुरू करो।फिर आठ मिनट के लिए हेमेटॉक्सीलिन समाधान में विसर्जित करें। वैकल्पिक रूप से, पर्ल प्रशिया ब्लू स्टेनिंग के लिए, 10 मिनट के लिए फेरोसाइनाइड और हाइड्रोक्लोरिक एसिड के बराबर भागों के मिश्रण के साथ प्रतिक्रिया समाधान में दाग। धुंधला होने के बाद, पांच मिनट के लिए नल के पानी को चलाने में धो लें।30 सेकंड के लिए 1% एसिड अल्कोहल में अंतर करें। एक मिनट के लिए नल का पानी चलाने में धोने के बाद, 0.2% अमोनिया पानी या संतृप्त लिथियम कार्बोनेट समाधान में 30 सेकंड से एक मिनट के लिए दाग। इसके बाद, पांच मिनट के लिए नल के पानी को चलाने में धो लें।30 सेकंड से एक मिनट के लिए ियोसिन समाधान के साथ काउंटर दाग। 90% शराब के माध्यम से निर्जलित, फिर 95% शराब, और प्रत्येक 0.5 से दो मिनट के लिए पूर्ण शराब। निर्जलीकरण के बाद, जाइलीन में 30 सेकंड के लिए स्पष्ट करें।बढ़ते के बाद, एक ब्राइटफील्ड फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप का उपयोग करके एच एंड ई धुंधला का विश्लेषण करें। रक्त वाहिकाओं से जारी लाल रक्त कोशिकाएं, जो सीएमएच के घटक हैं, एच एंड ई धुंधला के तहत लाल-नारंगी में दिखाई देती हैं। सतह सीएमएच का पता सकल अवलोकन द्वारा लगाया जा सकता है जैसा कि लाल तीर द्वारा इंगित किया गया है।इवांस ब्लू धुंधला दिखाई लाल फ्लोरेसेंस से पता चलता है जहां इवांस नीले अणुओं एक घायल रक्त मस्तिष्क बाधा से लीक । एच एंड ई स्टेनिंग केशिकाओं के बाहर पाए जाने वाले लाल रक्त कोशिकाओं को दिखाता है, और प्रशिया धुंधला लाल रक्त कोशिकाओं के लाइसिस से प्राप्त फेरिक आयन बिंदुओं का पता चलता है। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि सेरेब्रल माइक्रो-हेमरेज को प्रेरित करने के लिए एलपीएस की खुराक पार्किंसंस रोग या सिजोफ्रेनिया मॉडल में उपयोग की जाने वाली तुलना में बड़ी है।इसलिए मृत्यु दर को कम करने के लिए पशुओं के पर्यावरण को स्वच्छ रखा जाना चाहिए। इस प्रक्रिया के बाद, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग, और इम्यूनोफ्लोरोसेंट इमेजिंग जैसे अन्य तरीकों को सेरेब्रल माइक्रो-हेमरेज में रक्त-मस्तिष्क बाधा की बाहरी संरचना को नुकसान निर्धारित करने, वीवो में मस्तिष्क परन्किमा में सेरेब्रल माइक्रो-हेमरेज के वितरण के साथ-साथ ग्लियल सेल सक्रियण का प्रदर्शन किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

चूहा में मध्य प्रमस्तिष्क धमनी की Endovascular सीवन आड़ द्वारा फोकल सेरेब्रल Ischemia मॉडल

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

प्रयोगशाला चूहे में मांग कोकीन के Footshock प्रेरित बहाली के अध्ययन के लिए एक प्रक्रिया

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

तीव्र hippocampal स्लाइस में Synaptically पैदा Astroglial और neuronal प्रतिक्रियाएँ की दोहरी electrophysiological रिकॉर्डिंग

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

एचआईवी प्रेरित neuroinflammation के एक माउस मॉडल में दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग मस्तिष्क संवहनी वास्तुकला की मात्रा

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स के इंट्रासैरेब्रल इंजेक्शन द्वारा प्रेरित व्यापक सेरेब्रल कॉर्टिकल डेमिलिनेशन का चूहा मॉडल

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

दबाव रोडेंट मध्य मस्तिष्क धमनियों पर ब्लास्ट प्रेरित न्यूरोट्रामा के प्रभाव

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

विद्युत उत्तेजना द्वारा चूहों में तीव्र पोंटिन इंफार्क्शन की स्थापना

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

चूहों के मोटर कॉर्टेक्स में लेजर प्रेरित मस्तिष्क चोट

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

कॉनस मेडुलारिस ट्रांससेक्शन द्वारा चूहों में डेट्रूसर अंडरएक्टिविटी मॉडल

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

हीमोग्लोबिन के इंट्रावेंट्रिकुलर इंजेक्शन के माध्यम से नवजात इंट्रावेंट्रिकुलर रक्तस्राव मॉडलिंग

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...