Name: sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

Biz öğretmen Jian Feng Lei ve sermaye Tıp Üniversitesi meslektaşlarıyla MRG sırasında rehberlik için teşekkür ederiz. Biz de Jing Zeng Nöroloji ikinci People's Hastanesi teknik destek sağlamak için Yichang dan teşekkür ederiz.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve kullanım Komitesi (ACUC) PLA Ordu Genel Hastanesi tarafından onaylanmıştır.
1. malzeme
<ol><li>LPS enjeksiyon hazırlanması<ol>
<li>S. typhimurium son konsantrasyonu 1 mg/mL için türetilmiş LPS tozu 25 mg 25 mL distile su ekleyin. Enjeksiyon steril tüp 4 ° C'de depolayın Dikkat: LPS zehirli.</li>
		<li>EB enjeksiyon çalışma konsantrasyonu tutmak için normal % 0,9 serum fizyolojik çözüm % 2 EB çözeltilerine haz?...

<ol>
	<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds.">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).</li><li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study.">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li><li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbleed+topography,+leukoaraiosis,+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study.">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort.">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li><li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain.">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li><li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study.">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).</li><li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases.">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22 (2018).</li><li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice:+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection.">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li><li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+H&amp;E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds.">Comparative analysis of H&amp;E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li><li>Zeng, J., Zh&#224;o, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats.">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li><li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microbleeds:+A+guide+to+detection+and+interpretation.">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li><li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb.">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages.">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).</li><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model.">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).</li><li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression.">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li><li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex.">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li><li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lipopolysaccharide+Parkinson's+disease+animal+model:+mechanistic+studies+and+drug+discovery.">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental &amp; Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li><li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease.">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li><li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease.">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li><li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+small+vessel+disease:+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges.">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li><li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy.">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice.">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li><li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease.">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).</li><li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease?+-+New+insights+from+a+rat+model.">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental &amp; Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).</li></ol>

Araştırma çalışmaları CMHs üzerinde son birkaç yılda artmıştır. Ancak, CMHs mekanizması bilim adamları bu belirli bir koşula taklit hayvan modeller kurmak isteyen, belirsizdir. Örneğin, Hoffmann vd. CMHs hipoksi ve serebrovasküler autoregulation12bozulmasına neden olduğu gösteren hipoksi indüklenen CMHs fare modeli geliştirdi. Reuter vd. 5 bu serebral amiloid angiopathy önemli bir rol CMHs. Fisher ve ark. etyolojisinde bild...

Kırmızı kan hücrelerinin beyin1' den küçük perivasküler mevduat hemosiderin gibi kan bozulma ürünleri klasik serebral microhemorrhages (CMHs) bakın. Tarama Rotterdam araştırmaya göre CMHs kişi 60-69 yaş arası yaklaşık % 17,8 ve %38.3 80 yıl2üzerinde bulunamadı. CMHs yaygınlığı yaşlılarda nispeten yüksektir ve CMHs birikimi ve bilişsel ve nöropsikiyatrik disfonksiyon arasında bir ilişki kurulmuş3,4olmuştur. CMHs çeşitli hayvan modeller son zamanlarda, tip IV collagenase stereotaksik enjeksiyon5, APP transgenik6, β-N-methylamino-L-alanin pozlama7ve hipertansiyon8tarafından indüklenen kemirgen modelleri de dahil olmak üzere bildirilmiştir, bir en iyi kabul edilen seçenek sistemik inflamasyon tarafından indüklenen CMHs ile. Fisher vd. 9 ilk LPS Salmonella typhimurium türetilmiş bir akut CMHs fare modeli geliştirmek için kullanılır. Daha sonra aynı grup aynı yaklaşım2kullanarak alt akut CMHs fare modeli geliştirilmesi bildirdi.
LPS bir standart inflamatuar uyarıcı ile mayi enjeksiyon kabul edilir. Önceki çalışmalarda LPS enjeksiyon neuroinflammation microglia büyük miktarlarda tarafından yansıtıldığı gibi neden olabilir ve2,10astrocyte harekete geçirmek içinde hayvan modelleri doğruladı. Ayrıca, neuroinflammation harekete geçirmek harekete geçirmek ve CMHs sayısı arasında pozitif bir korelasyon kurulmuş2,10olmuştur. Bu önceki çalışmalar üzerinde bağlı olarak, biz bir CMHs fare modeli geliştirmek LPS mayi enjeksiyonu ile isteniyor.
Algılama teknolojileri CMHs üzerine araştırma araştırmalar sayısındaki bir artış sonuçlandı içinde ilerler. En yaygın CMHs algılama yöntemleri şunlardır kırmızı kan hücreleri hematoksilen eozin (HE), ferrik demir algılama tarafından Prusya Mavisi9, boyama boyama tarafından algılanmasını kabul Evans tespiti (EB) ifade ayirt tarafından mavi görüntü ve 7.0 Tesla manyetik rezonans görüntüleme-duyarlılık ağırlıklı görüntüleme (MRG-SWI)10. Bu da çalışmanın tarama için CMHs bir yöntem geliştirmeyi amaçlamaktadır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L-2630</td>
			<td>for inflammation induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EB</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>for EB leakage detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI dying solution</td>
			<td>Servicbio</td>
			<td>G1012</td>
			<td>count medium for IF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perl&#8217;s Prussian staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1424</td>
			<td>Kit for Prussian staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE staining</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>Kit for HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloral hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>47335U</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022</td>
			<td>a kind of buffer solution commonly used in experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% saline solution</td>
			<td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China</td>
			<td></td>
			<td>solution for perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2461</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% sucrose solution</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G2460</td>
			<td>a kind of solution commonly used for fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vet ointment</td>
			<td>Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>for rat&#39;s eyes protection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sub-acute cerebral microhemorrhages induced by lipopolysaccharide injection in rats

Serebral microhemorrhages (CMHs) yaşlı hastalarda yaygındır ve çeşitli Nöropsikiyatrik bozukluklar correlated. CMHs etyolojisinde karmaşıktır ve neuroinflammation kez ortak bir olay görülmektedir. Burada, biz alt akut tarif CMHs fare modeli lipopolysaccharide (LPS) enjeksiyon yanı sıra CMHs. sistemik LPS enjeksiyon algılamak için bir yöntem tarafından indüklenen nispeten basit, ekonomik ve uygun maliyetli. LPS enjeksiyon bir büyük avantajı istikrarı iltihap neden olduğunu. LPS enjeksiyonu ile neden CMHs brüt gözlem, Hematoksilen ve eozin (o) boyama, Perl Prusyalı boyama, Evans mavi (EB) çift-etiketleme ve manyetik rezonans görüntüleme-duyarlılık ağırlıklı görüntüleme (MRG-SWI) teknolojisi tarafından tespit edilemedi. Son olarak, CMHs hayvan modelleri, kendi avantajları ve dezavantajları, dahil olmak üzere gelişmekte olan diğer yöntemleri de bu raporda ele alınmıştır.

CMHs çeşitli yaklaşımlar kullanarak tespit edilebilir. En iyi kabul edilen yöntemler şunlardır: (1) Brüt gözlem ve değerlendirme yüzey CMHs ( Şekil 1' de üst panel gösterilen); (2) o kırmızı kan hücreleri (gösterildiği Şekil 2A, üst panel) veya algılama ferrik demir boyama Prusya tespiti için boyama kırmızı kan hücreleri (Şekil 2A, alt panel); lizis türetilmiş (3) BBB s...

Watch this Scientific Journal Video about Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats at JoVE.com

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Biz neden ve LPS enjeksiyon olabilir Sprague-Dawley sıçanlarda neden CMHs gelecekte CMHs patogenezinde üzerine araştırma araştırmalar kullanılan algılamak için bir protokol mevcut.

Alt akut serebral Microhemorrhages sıçanlarda Lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Bu yöntem, serebral mikro kanama nın etiyolojisi, dağılımı ve saptanması gibi serebral mikro kanama alanında anahtar soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı LPS enjeksiyonları stably inflamasyon neden olmasıdır. Buna ek olarak, LPS enjeksiyon oldukça basit, ekonomik, ve maliyet-etkin.Bu yöntem beyin kanaması indüksiyonu hakkında bilgi sağlasa da, depresyon, şizofreni, Parkinson hastalığı, Alzheimer hastalığı ve prion hastalığı gibi diğer beyin hastalıklarına da uygulanabilir. 10 haftalık erkek Sprague Dawley sıçanlara vücut ağırlığının kilogramı başına bir miligram dozda intraperitoneal enjeksiyon ile LPS uygulayın, sonra her sıçanı ev kafesine geri döndürün. Altı saat 16 saat sonra LPS enjeksiyonu tekrarlayın.SD sıçanlarına kilogram başına bir miligram dozda LPS enjekte edilmesinin %5 mortaliteye yol açabileceğini lütfen unutmayın. Mortalite daha genç veya yaşlı sıçanlar veya hamile dişi sıçanlarda artabilir. LPS enjeksiyonundan sonra fareleri kafeslerine geri getirin ve yiyecek ve içeceklere libitum erişimi sağlayın.Terminal anestezi altında, her sıçanda 5-8 milimetre derin kardiyak delik yapın. Delinme noktası, üçüncü ve dördüncü interkostal alanda göğüs kafesinin sol kenar boşluğuna beş milimetre olmalıdır. İğneyi yerinde tutun ve boş tüpü Evans mavisi içeren bir tüple değiştirin.Kan iyileşmesi gözlenene kadar bekleyin ve sonra sol kalp ventrikül içine vücut ağırlığı 100 gram başına 0.2 mililitre bir dozda Evans mavi enjekte edin. Immünoresans görüntüleme ile kan / beyin bariyerinden Evans mavi sızıntı değerlendirirken 10 dakika boyunca bir supine pozisyonda sıçan tutun. Serebral vaskülatür ve beyintemizlemek için% 0.9 tuzlu çözeltisi buz gibi 200-300 mililitre kullanarak kardiyak perfüzyon gerçekleştirin.Fiksasyon için buz gibi %4 paraformaldehite geçin. Sonra, beyni izole ettikten sonra, en az altı saat veya beyin tüpün dibine batana kadar PBS'de %20 sakaroza batırın. Çözeltiyi %30 sakarozla değiştirin ve altı saat daha düzeltin.Son olarak, bir kriyostat kullanarak 10 milimetre kalınlığında beyin dokusu bölümleri hazırlamak. Slaytları PBS ile üç kez beşer dakika yıkayın, ardından 4, 6'diamidino-2-fenilindole veya DAPI çözeltisi ile oda sıcaklığında 15 dakika kuluçkaya yatırın. Daha önce olduğu gibi PBS slaytlar yıkadıktan sonra, PBS-gliserol çözeltisi ile slaytlar monte.Floresan mikroskobunda görüntüleri yakalayın. EB birikimi kırmızı floresan ile gösterilir, çekirdekler mavi floresan ile gösterilir. Damıtılmış suda slaytlar yıkayarak H & E boyama başlayın.Sonra sekiz dakika hematoksilin çözeltisi batırın. Alternatif olarak, Perl Prusya mavi boyama için, 10 dakika boyunca ferrosiyanid ve hidroklorik asit eşit parça karışımı ile reaksiyon çözeltisi leke. Boyama sonra, beş dakika boyunca akan musluk suyu yıkayın.30 saniye boyunca %1 asitalkolü ayırt edin. Bir dakika boyunca akan musluk suyunda yıkandıktan sonra, %0,2 amonyağ suyunda veya doymuş lityum karbonat çözeltisinde 30 saniye ile bir dakika arasında lekeleyin. Daha sonra, beş dakika boyunca akan musluk suyunda yıkayın.30 saniye ile bir dakika arasında eozin çözeltisi ile karşı lekesi. % 90 alkol, daha sonra% 95 alkol ve 0,5-2 dakika her biri için mutlak alkol ile dehydrate. Dehidratasyondan sonra, ksilenin içinde 30 saniye boyunca temizleyin.Monte ettikten sonra, parlak alan floresan mikroskobu kullanarak H&E boyama analiz edin. CmH'lerin bileşenleri olan kan damarlarından salınan kırmızı kan hücreleri H&E boyama altında kırmızı-turuncu renkte görünür. Yüzey CMH'leri, kırmızı oklarda belirtildiği gibi brüt gözlem le tespit edilebilir.Evans mavi boyama evans mavi molekülleri yaralı bir kan-beyin bariyerinden sızan görünür kırmızı floresan ortaya koymaktadır. H&E boyama kılcal damarlar dışında bulunan kırmızı kan hücreleri gösterir, ve Prusya boyama kırmızı kan hücrelerinin lysis türetilen ferrik iyon noktaları gösterir. Bu prosedürü çalışırken, bu serebral mikro kanama neden LPS dozu Parkinson hastalığı veya şizofreni modelinde kullanılan daha büyük olduğunu hatırlamak önemlidir.Bu nedenle, hayvanların çevre mortalite oranını azaltmak için temiz tutulmalıdır. Bu işlemden sonra, serebral mikro kanamada kan-beyin bariyerinin dış yapısına verilen zararı belirlemek, beyin paranilinde beyin parankiminin in vivo'da serebral mikro kanamaların dağılımı ve glial hücre aktivasyonu gibi diğer yöntemler de uygulanabilmektedir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

Laboratuar Farelerinde Aradığınız Kokain Footshock Bağlı Yürürlüğe Girmesi incelenmesi için Usulü

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Pro-enflamatuar Sitokinlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile İndüklenen Yaygın Serebral Kortikal Demiyelinasyonun Sıçan Modeli

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Serebral arterler patlama kaynaklı Neurotrauma etkilerini basınçlı kemirgen orta

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

Farelerin Motor Korteksinde LazerE Bağlı Beyin Hasarı

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Detrusor Underactivity Model in Rats by Conus Medullaris Transection

Conus Medullaris Transeksiyonu ile Sıçanlarda Detrusor Düşük Aktivite Modeli

The goal of the presented protocol was to establish a detrusor underactivity (DU) model in the rat through conus medullaris transection. Laminectomy was ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...