Name: adult zebrafish injury models to study the effects of prednisolone in regenerating bone tissue
Uploaded: 2018-10-18T14:30:00
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Este estudo foi suportado por uma concessão do centro de regenerativa terapias Dresden ("Zebrafish como um modelo para desvendar os mecanismos da perda óssea induzida por glicocorticoide") e, adicionalmente, por uma concessão da Deutsche Forschungsgemeinschaft (Transregio 67, projeto 387653785) para FK. Estamos muito gratos a Jan Kaslin e Avinash Chekuru por sua orientação e assistência na realização de trepanação do Calvárias e fraturas nos raios da barbatana ósseas. Experimentos foram projetados, executados e analisados por KG e FK. FK escreveu o manuscrito. Também gostaríamos de agradecer a Katrin Lambert, Nicole Cudak e outros membros dos laboratórios Knopf e marca para assistência técnica e discussão. Nossos agradecimentos também vai Marika Fischer e Jitka Michling para cuidados excelentes peixes e Henriette Knopf e Josh Currie para revisão do manuscrito.

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Landesdirektion Dresden (permitir números: AZ 24D-9168.11-1/2008-1, 24-9168.11-1/2011-52 AZ, AZ 24-9168.11-1/2013-5, 24-9168.11-1/2013-14 AZ, AZ DD24.1-5131/354/87).
1. preparação de materiais e soluções
Nota: Prednisolona, como outros glicocorticoides, leva à imunossupressão. Assim, as precauções devem ser tomadas para prevenir a infecção em animais tratados durante o experimento. Para esse efeito, merc...

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	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).</li><li>Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-based+anesthesia+for+long-term+time-lapse+imaging+of+adult+zebrafish.">Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish.</a> Nature Protocols. 10 (12), 2064-2073 (2015).</li><li>Kaufman, C. K., White, R. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+and+Cyp26b1+are+critical+regulators+of+osteogenesis+in+the+axial+skeleton.">Retinoic acid and Cyp26b1 are critical regulators of osteogenesis in the axial skeleton.</a> Development. 135 (22), 3765-3774 (2008).</li><li>Gioia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chaperone+activity+of+4PBA+ameliorates+the+skeletal+phenotype+of+Chihuahua,+a+zebrafish+model+for+dominant+osteogenesis+imperfecta.">The chaperone activity of 4PBA ameliorates the skeletal phenotype of Chihuahua, a zebrafish model for dominant osteogenesis imperfecta.</a> Human Molecular Genetics. 26 (15), 2897-2911 (2017).</li><li>Fiedler, I. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severely+impaired+bone+material+quality+in+Chihuahua+zebrafish+resembles+classical+dominant+human+osteogenesis+imperfecta.">Severely impaired bone material quality in Chihuahua zebrafish resembles classical dominant human osteogenesis imperfecta.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).</li><li>Fisher, S., Jagadeeswaran, P., Halpern, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiographic+analysis+of+zebrafish+skeletal+defects.">Radiographic analysis of zebrafish skeletal defects.</a> Developmental Biology. 264 (1), 64-76 (2003).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+deformity+in+aged+zebrafish+is+accompanied+by+degenerative+changes+to+their+vertebrae+that+resemble+osteoarthritis.">Spinal deformity in aged zebrafish is accompanied by degenerative changes to their vertebrae that resemble osteoarthritis.</a> PLoS One. 8 (9), e75787 (2013).</li><li>Mitchell, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+tools+for+studying+osteoarthritis+genetics+in+zebrafish.">New tools for studying osteoarthritis genetics in zebrafish.</a> Osteoarthritis Cartilage. 21 (2), 269-278 (2013).</li><li>Fleming, A., Sato, M., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+in+vivo+screening+for+bone+anabolic+compounds+with+zebrafish.">High-throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish.</a> Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 823-831 (2005).</li><li>de Vrieze, E., Zethof, J., Schulte-Merker, S., Flik, G., Metz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+osteogenic+compounds+by+an+ex+vivo+sp7:luciferase+zebrafish+scale+assay.">Identification of novel osteogenic compounds by an ex vivo sp7:luciferase zebrafish scale assay.</a> Bone. 74, 106-113 (2015).</li></ol>

Zebrafish provaram ser úteis em pesquisa esquelética em muitos aspectos. Selecionado mutantes imitam aspectos das doenças humanas, tais como osteogênese imperfeita ou osteoartrite23,24,25,26,27, e as larvas, bem como escalas estão sendo usadas para Identifica compostos anabólicos de osso na molécula pequenas telas7,<su...

Zebrafish representam um poderoso modelo animal para estudar a doença e desenvolvimento de vertebrados. Isto é devido ao fato de que eles são pequenos animais que se reproduzem muito bem e que o seu genoma é totalmente sequenciado e passível de manipulação1. Outras vantagens incluem a opção de executar a imagem ao vivo contínua em diferentes fases, incluindo no vivo por imagens do zebrafish adulto2e a capacidade de executar telas de drogas de alto throughput em zebrafish larvas3. Além disso, o zebrafish possuem uma alta capacidade regenerativa em uma variedade de órgãos e tecidos, incluindo o osso e, portanto, servir como um sistema útil para estudar a doença do esqueleto e reparar4,5.
Osteoporose induzida por glicocorticoide (GIO) é uma doença que resulta do tratamento a longo prazo com glicocorticoides, por exemplo, no curso de tratamento de doenças auto-imunes, tais como de asma ou artrite reumatoide. GIO desenvolve-se em cerca de 30% dos pacientes tratados com glicocorticoides e representa uma grande saúde questão6; Portanto, é importante investigar o impacto da imunossupressão no tecido ósseo em grande detalhe. Nos últimos anos desenvolveram-se uma variedade de modelos de zebrafish, lidando com a patogênese da GIO. Perda óssea mediada por glicocorticoide tem sido induzida no zebrafish as larvas, por exemplo, que levou à identificação de compostos antídoto, aumentando a massa óssea em uma droga tela7. Além disso, efeitos inibitórios óssea induzida por glicocorticoides têm sido imitados no zebrafish escalas tanto in vitro e in vivode8,9. Estes ensaios são muito convincentes abordagens, especialmente quando se trata de identificação de novos medicamentos imunossupressores e osso de anabólico. No entanto, eles apenas parcialmente levam em conta o endoesqueleto e não tem sido realizados num contexto regenerativo. Assim, eles não permitem a investigação dos efeitos mediados por glicocorticoide durante rápidas modos de formação do osso adulto, regenerativa.
Aqui, apresentamos um protocolo que permite aos pesquisadores estudar os efeitos mediada por glicocorticoide em ossos de zebrafish adultos submetidos a regeneração. Modelos de lesão incluem amputação parcial de zebrafish barbatana caudal, trepanação do crânio, bem como a criação de fraturas de raio de barbatana (figura 1A-1-C) e são combinados com glicocorticoides exposição através de incubação (Figura 1E ). Recentemente usamos uma parte do presente protocolo para descrever as consequências da exposição a prednisolona, um dos medicamentos comumente prescritos corticosteroides, em adultos do zebrafish regenerando fin e crânio osso10. No zebrafish, administração de prednisolona leva à proliferação osteoblástica diminuída, diferenciação osteoblástica incompleta e rápida indução da apoptose na linhagem monócitos/macrófagos10. Neste protocolo, também descrevemos como fraturas podem ser introduzidas na única barbatana ósseas ray segmentos11, como esta abordagem pode ser útil quando estudando efeitos mediados por glicocorticoide no osso ocorrendo durante o reparo de fratura. Os métodos apresentados aqui ajudarão a mais endereço subjacente mecanismos de ação do glicocorticoide em rápida regeneração óssea e também podem ser empregados em outras configurações de administração de drogas sistêmicas no contexto da regeneração de tecidos do zebrafish.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Prednisolone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl-3-aminobenzoate methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BD027R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>91150-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>5518059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>840004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection needle (0.3x13 mm)</td>
			<td>BD Beckton Dickinson</td>
			<td>30400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro drill</td>
			<td>Cell Point Scientific</td>
			<td>67-1000</td>
			<td>distributed e.g. by Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel burrs (0.5 &#181;m diameter)</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>19007-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artemia ssp.</td>
			<td>Sanders</td>
			<td>425GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette (plastic, Pastette)</td>
			<td>Alpha Labs</td>
			<td>LW4111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alizarin red S powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue 8 GX</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcein</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16 FA</td>
			<td>with QIMAGING RETIGA-SRV camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>with Olympus DP71 or DP80 camera</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adult zebrafish injury models to study the effects of prednisolone in regenerating bone tissue

Zebrafish são capazes de regenerar vários órgãos, incluindo os apêndices (aletas) após amputação. Isso envolve a regeneração do osso, que regrows dentro de aproximadamente duas semanas após a lesão. Além disso, zebrafish são capazes de curar ossos rapidamente após a trepanação do crânio e reparar fraturas que podem ser facilmente introduzidas em raios de barbatana ósseas zebrafish. Estes ensaios de lesões representam paradigmas experimentais viáveis para testar o efeito de drogas administradas em rapidamente formando o osso. Aqui, descrevemos o uso destes modelos 3 lesões e seu uso combinado com tratamento glicocorticoide sistêmico, que exerce efeitos inibitórios e imunossupressoras de osso. Nós fornecemos um fluxo de trabalho sobre como se preparar para tratamento imunossupressor no zebrafish adulto, ilustram como realizar amputação de barbatanas, trepanação de raspagem ossos e fraturas de barbatana e descrever como o uso de glicocorticoides afeta ambos osso formando osteoblastos e células da linhagem de monócitos/macrófagos como parte da imunidade inata no tecido ósseo.

O protocolo apresentado aqui tem sido usado repetidamente para induzir a formação de osso rápida durante a regeneração do zebrafish fin e crânio10,11,16. Em combinação com o método apresentado da administração de prednisolona, estudos sobre os efeitos do prednisolona durante a regeneração óssea podem ser perseguidos. Por exemplo, estudos sobre a formação óssea e mineralização n...

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Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Modelos de lesão adulto Zebrafish para estudar os efeitos de prednisolona na regeneração de tecido ósseo

Aqui, descrevemos 3 modelos de lesão de zebrafish adultos e seu uso combinado com tratamento de drogas imunossupressoras. Nós fornecemos orientação nas imagens de regenerar tecidos e na detecção de mineralização óssea nele.

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da intervenção terapêutica imunossupressor para estudar os efeitos adversos de drogas na regeneração tecidual, em particular, nos ossos. A principal vantagem desta técnica é que combina modelos passados de regeneração óssea de Zebrafish com exposição sistêmica de drogas pela imersão do zebrafish ferido na água de peixe suplementada. Antes de iniciar o procedimento, autoclave uma folha de alumínio coberta 600 mililitros por zebrafish e um número apropriado de garrafas de vidro de água de peixe para o experimento e preparar a droga imunossupressor em soluções de controle experimental de interesse.Para uma lesão de amputação, use fórceps contundentes para colocar cuidadosamente um zebrafish anestesiado em seu lado lateral na tampa inversa de uma placa de Petri de 100 milímetros e use um bisturi para ressecar 50% da barbatana. Em seguida, coloque o peixe em um béquer autoclaved contendo 300 mililitros de água de peixe suplementado com agente experimental apropriado e cubra o béquer com papel alumínio para evitar a fuga de zebrafish. Para induzir uma lesão de fratura na barbatana, coloque um zebrafish anestesiado em seu lado lateral em uma placa de Petri revestida de 100 milímetros sob um microscópio dissecando e empurre uma agulha de injeção ligeiramente em um segmento de raio-barbatana óssea até que uma rachadura apareça.É importante introduzir não muitas fraturas na barbatana, pois isso pode prejudicar muito a estabilidade. Em seguida, transfira o peixe para um béquer autoclaved contendo 300 mililitros de água de peixe complementado com o agente experimental apropriado. Para gerar uma lesão no crânio calvarial, segure um zebrafish anestesiado na posição vertical para que os ossos do calvário sejam facilmente visualizados sob um microscópio de dissecção.Coloque uma micro broca rotativa equipada com uma broca de 500 micrômetros sobre o centro do osso frontal e toque suavemente no osso para produzir um orifício do tamanho da micro broca. É fundamental não mover a broca lateralmente durante a produção da lesão e parar imediatamente assim que a resistência do tecido cair. Caso contrário, o cérebro será danificado.Em seguida, coloque o peixe em um béquer autoclaved contendo 300 mililitros de água de peixe complementada com o agente experimental apropriado. Troque a água nos béquers diariamente transferindo o zebrafish e a água dos peixes para um recipiente temporário apropriado e reabastecendo o béquer com água de peixe suplementada com drogas frescas. Em seguida, use uma rede de peixes para devolver o Zebrafish ao seu béquer.Para tratamentos com duração de até dois dias no total, não alimente o Zebrafish. Durante experimentos mais longos, alimente o Zebrafish com 0,5 a um mililitro de Artemia SSP eclodida a cada dois dias. Para análise de lesões na barbatana, colhe a multa e use fórceps finos para agarrar a barbatana em uma borda do toco.Use um segundo par de fórceps para pegar a borda oposta do toco e pressione ligeiramente o tecido na parte inferior do prato que contém pfa frio de 4% por 10 a 20 segundos. Repita o achatamento da barbatana conforme necessário. A barbatana deve agora ficar plana sem enrolar.Para armazenamento de amostras de longo prazo após a fixação, lave o tecido com três lavagens pbs de 20 minutos e uma série ascendente de metanol. As amostras podem então ser armazenadas em 100% de metanol a menos 20 graus Celsius. Para a coloração alizarina vermelha, o metanol rehidrata armazenado amostras em uma série de metanol descendente seguido de duas lavagens de 20 minutos em PBS e uma lavagem de cinco minutos em água deionizada.Após a última lavagem, adicione a solução Alizarin Red ao tecido amostral e incubar a amostra à temperatura ambiente com balanço para o período de coloração adequado. Para limpar as amostras, trate o tecido com a diminuição da série de glicerol de hidróxido de potássio de 1%. Em seguida, armazene as amostras em uma solução de hidróxido de potássio de 0,1% a 80% glicerol e monte os tecidos com 80% de glicerol para imaginar.Para a coloração de Calcein, incubar até três zebrafish simultaneamente em 100 milímetros de solução calcein por 20 minutos em um béquer de vidro coberto com papel alumínio. No final da incubação, transfira o Zebrafish para um recipiente de água de peixe e deixe os peixes nadarem brevemente antes de transferi-los para um novo recipiente de água de peixe. Após 20 minutos no segundo béquer para adquirir imagens ao vivo de fin regenera, coloque um zebrafish anestesiado em uma placa de Petri revestida de agarose e imagem a barbatana por microscopia estéreo.Para adquirir imagens dos ossos regeneradores do crânio, coloque o zebrafish em pé em uma esponja e imagem do crânio por microscopia de fluorescência. O tratamento com Prednisolona, semelhante a outros glicocorticoides, leva a uma inibição geral da regeneração de barbatanas, incluindo a formação óssea detectada pela mancha vermelha de Alizarin de tecido de barbatana caudal fixa. Da mesma forma, a droga tem efeito retardante no fechamento da lesão do crânio calvarial.Devido à imunossupressão, números reduzidos de macrófagos também podem ser detectados por imunohistoquímica em seções de tecido congelado, como evidenciado pelo uso de manchas de anticorpos anti-mCherry e anti-GFP e mpeg-1 mCherry transgênicos cruzados com Osterix NGFP Zebrafish em amostras de tecido craniano zebrafish de animais tratados com Prednisolona. Ao tentar esses procedimentos, é importante minimizar a variabilidade na velocidade de regeneração óssea realizando os ensaios de lesão de forma altamente reprodutível. Também é crucial para a casa única zebrafish em béquers autoclaved contendo água de peixe autoclaved, a fim de evitar infecção microbiana.Este protocolo ajudará a abordar ainda mais os mecanismos subjacentes da ação glicocorticoide. Por exemplo, no contexto da osteoporose induzida por glicocorticoide e também pode ser adaptada para o uso de outras drogas e outros ossos de zebrafish.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

A regeneração renal em Zebrafish Adulto por lesão induzida pela gentamicina

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Biologia do Desenvolvimento

Mechanical Vessel Injury in Zebrafish Embryos

Lesão Vessel Mecânica em embriões Zebrafish

Zebrafish (Danio rerio) embryos have proven to be a powerful model for studying a variety of developmental and disease processes.  External development ...

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

Uso do Sistema de Teton para estudar os mecanismos moleculares de Regeneração Zebrafish

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Protocolos para analisar o papel das células Paneth em Regenerar o Intestino Murino utilizando Condicional<em&gt; Cre-lox</em&gt; Mouse Models

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a ...

Combining Intravital Fluorescent Microscopy (IVFM) with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

Combining Intravital Fluorescent Microscopy IVFM with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

Combinando a microscopia Intravital fluorescente (IVFM) com modelos genéticos para estudar a dinâmica de enxertia das células hematopoiéticas para nichos de medula óssea

Increasing evidence indicates that normal hematopoiesis is regulated by distinct microenvironmental cues in the BM, which include specialized cellular ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

Construindo Modelos de Elementos Finitos para investigar Zebrafish Jaw Biomecânica

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In vivo de imagens de Gene Transgenic Expressão em Individual Retinal Progenitores em embriões Zebrafish Quimérico para estudar celular Influências não-autônomos

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Análises histológicas de lesão hepática alcoólica aguda em peixe-zebra

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Imagem ao vivo do mouse Fusão do palato secundário

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissecção e imunofluorescência coloração de cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios em cérebros adultos Drosophila melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...