Name: adult zebrafish injury models to study the effects of prednisolone in regenerating bone tissue
Uploaded: 2018-10-18T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue at JoVE.com

Bu çalışmada bir hibe merkezi rejeneratif terapiler Dresden ("glukokortikoid kaynaklı kemik kaybı mekanizmaları çözülmeye zebra balığı bir model olarak") ve ayrıca Deutsche Forschungsgemeinschaft (Transregio 67, proje verilmesi tarafından desteklenmiştir 387653785) FK için. Jan Kaslin ve Avinash Chekuru onların rehberlik ve kemikli fin ışınları calvariae ve kırıklar trepanasyon yapılması hakkında yardım için minnettarız. Deneyler tasarlanmış, gerçekleştirilen ve KG ve FK tarafından analiz etti. FK el yazması yazdı. Biz de Katrin Lambert, Nicole Cudak ve diğer üyeleri Knopf ve marka labs teknik yardım ve tartışma için teşekkür etmek istiyorum. Bizim teşekkür da Marika Fischer ve Jitka Michling mükemmel balık bakımı ve Henriette Knopf ve Josh için el yazması yazım denetleme Currie gider.

Tüm yöntem tanımlamak burada Landesdirektion Dresden tarafından kabul edildi (izni numaraları: AZ 24D-9168.11-1/2008-1, AZ 24-9168.11-1/2011-52, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24 / 9168.11 / 1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).
1. hazırlanması malzemeler ve çözümler
Not: Prednizolon, diğer sebepler gibi immünosupresyon için yol açar. Böylece, deneme sırasında tedavi hayvanlarda bulaşmasını engellemek için önlem alınmalıdır. Bu son, otoklav cam eşya...

<ol>
	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).</li><li>Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-based+anesthesia+for+long-term+time-lapse+imaging+of+adult+zebrafish.">Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish.</a> Nature Protocols. 10 (12), 2064-2073 (2015).</li><li>Kaufman, C. K., White, R. M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+screening+in+the+zebrafish+embryo.">Chemical genetic screening in the zebrafish embryo.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1422-1432 (2009).</li><li>Paul, S., Crump, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+on+skeletal+cell+plasticity+from+studying+jawbone+regeneration+in+zebrafish.">Lessons on skeletal cell plasticity from studying jawbone regeneration in zebrafish.</a> Bonekey Reports. 5, 853 (2016).</li><li>Witten, P. E., Harris, M. P., Huysseune, A., Winkler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+teleost+fish+provide+new+insights+into+human+skeletal+diseases.">Small teleost fish provide new insights into human skeletal diseases.</a> Methods in Cell Biology. 138, 321-346 (2017).</li><li>den Uyl, D., Bultink, I. E., Lems, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+glucocorticoid-induced+osteoporosis.">Advances in glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Current Rheumatology Reports. 13 (3), 233-240 (2011).</li><li>Barrett, R., Chappell, C., Quick, M., Fleming, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+high+content,+in+vivo+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis.">A rapid, high content, in vivo model of glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Biotechnology Journal. 1 (6), 651-655 (2006).</li><li>de Vrieze, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prednisolone+induces+osteoporosis-like+phenotype+in+regenerating+zebrafish+scales.">Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales.</a> Osteoporosis International. 25 (2), 567-578 (2014).</li><li>Pasqualetti, S., Congiu, T., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alendronate+rescued+osteoporotic+phenotype+in+a+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis+in+adult+zebrafish+scale.">Alendronate rescued osteoporotic phenotype in a model of glucocorticoid-induced osteoporosis in adult zebrafish scale.</a> International Journal Of Experimental Pathology. 96 (1), 11-20 (2015).</li><li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Suppressive+and+Bone+Inhibitory+Effects+of+Prednisolone+in+Growing+and+Regenerating+Zebrafish+Tissues.">Immune Suppressive and Bone Inhibitory Effects of Prednisolone in Growing and Regenerating Zebrafish Tissues.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2017).</li><li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+osteoblasts+dedifferentiate+in+response+to+traumatic+bone+injury+in+the+zebrafish+fin+and+skull.">Mature osteoblasts dedifferentiate in response to traumatic bone injury in the zebrafish fin and skull.</a> Development. 141 (11), 2225-2234 (2014).</li><li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+and+euthanasia+in+zebrafish.">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> Institute of Laboratory Animal Resources Journal. 53 (2), 192-204 (2012).</li><li>Lee, Y., Grill, S., Sanchez, A., Murphy-Ryan, M., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgf+signaling+instructs+position-dependent+growth+rate+during+zebrafish+fin+regeneration.">Fgf signaling instructs position-dependent growth rate during zebrafish fin regeneration.</a> Development. 132, 5173-5183 (2005).</li><li>Hirasawa, T., Kuratani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+vertebrate+skeleton:+morphology,+embryology,+and+development.">Evolution of the vertebrate skeleton: morphology, embryology, and development.</a> Zoological Letters. 1, 2 (2015).</li><li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration.">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li><li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerates+via+Dedifferentiation+of+Osteoblasts+in+the+Zebrafish+Fin.">Regenerates via Dedifferentiation of Osteoblasts in the Zebrafish Fin.</a> Developmental Cell. 20 (5), 713-724 (2011).</li><li>van Eeden, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+affecting+somite+formation+and+patterning+in+the+zebrafish,+Danio+rerio.">Mutations affecting somite formation and patterning in the zebrafish, Danio rerio.</a> Development. 123, 153-164 (1996).</li><li>Walker, M. B., Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+two-color+acid-free+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae.">A two-color acid-free cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li><li>Kyritsis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+inflammation+initiates+the+regenerative+response+in+the+adult+zebrafish+brain.">Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain.</a> Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).</li><li>Oppedal, D., Goldsmith, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical+screen+to+identify+novel+inhibitors+of+fin+regeneration+in+zebrafish.">A chemical screen to identify novel inhibitors of fin regeneration in zebrafish.</a> Zebrafish. 7 (1), 53-60 (2010).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).</li><li>Spoorendonk, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+and+Cyp26b1+are+critical+regulators+of+osteogenesis+in+the+axial+skeleton.">Retinoic acid and Cyp26b1 are critical regulators of osteogenesis in the axial skeleton.</a> Development. 135 (22), 3765-3774 (2008).</li><li>Gioia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chaperone+activity+of+4PBA+ameliorates+the+skeletal+phenotype+of+Chihuahua,+a+zebrafish+model+for+dominant+osteogenesis+imperfecta.">The chaperone activity of 4PBA ameliorates the skeletal phenotype of Chihuahua, a zebrafish model for dominant osteogenesis imperfecta.</a> Human Molecular Genetics. 26 (15), 2897-2911 (2017).</li><li>Fiedler, I. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severely+impaired+bone+material+quality+in+Chihuahua+zebrafish+resembles+classical+dominant+human+osteogenesis+imperfecta.">Severely impaired bone material quality in Chihuahua zebrafish resembles classical dominant human osteogenesis imperfecta.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).</li><li>Fisher, S., Jagadeeswaran, P., Halpern, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiographic+analysis+of+zebrafish+skeletal+defects.">Radiographic analysis of zebrafish skeletal defects.</a> Developmental Biology. 264 (1), 64-76 (2003).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+deformity+in+aged+zebrafish+is+accompanied+by+degenerative+changes+to+their+vertebrae+that+resemble+osteoarthritis.">Spinal deformity in aged zebrafish is accompanied by degenerative changes to their vertebrae that resemble osteoarthritis.</a> PLoS One. 8 (9), e75787 (2013).</li><li>Mitchell, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+tools+for+studying+osteoarthritis+genetics+in+zebrafish.">New tools for studying osteoarthritis genetics in zebrafish.</a> Osteoarthritis Cartilage. 21 (2), 269-278 (2013).</li><li>Fleming, A., Sato, M., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+in+vivo+screening+for+bone+anabolic+compounds+with+zebrafish.">High-throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish.</a> Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 823-831 (2005).</li><li>de Vrieze, E., Zethof, J., Schulte-Merker, S., Flik, G., Metz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+osteogenic+compounds+by+an+ex+vivo+sp7:luciferase+zebrafish+scale+assay.">Identification of novel osteogenic compounds by an ex vivo sp7:luciferase zebrafish scale assay.</a> Bone. 74, 106-113 (2015).</li></ol>

Zebra balığı iskelet araştırma birçok bakımdan yararlı kanıtlamış. Seçili mutantlar osteogenesis imperfekta veya osteoartrit23,24,25,26,27gibi insan hastalık yönlerini taklit ve larva yanı sıra ölçekler için kullanılmaktadır kemik anabolik bileşikler küçük molekül ekranlar7,28...

Zebra balığı omurgalı geliştirme ve hastalık eğitim için güçlü bir hayvan modeli temsil eder. Gerçeğini onlar are son derece iyi cins küçük hayvanlar ve onların genom tam olarak sıralanmış ve manipülasyon1mükellef nedeni bu. Diğer avantajı vivo içinde görüntüleme yetişkin zebra balığı2ve yüksek işlem hacmi uyuşturucu ekranlar zebra balığı larvalar3' te gerçekleştirme olanağı da dahil olmak üzere farklı aşamalarında sürekli canlı görüntüleme gerçekleştirmek için seçeneği içerir. Ayrıca, zebra balığı yüksek yeniden üretim kapasiteli organ ve dokulara kemik dahil olmak üzere çeşitli sahip ve böylece iskelet hastalığı çalışma ve4,5onarmak için yararlı bir sistem olarak hizmet vermektedir.
Osteoporoz (GIO) glukokortikoid indüklenen astım veya romatoid artrit gibi otoimmün hastalığı tedavisi sırasında örneğin glukokortikoid ile uzun vadeli tedavi sonuçları bir hastalıktır. GIO glukokortikoid tedavi edilen hastaların yaklaşık % 30 geliştirir ve önemli bir sağlık sorunu6temsil eder; Bu nedenle, immünosupresyon ayrıntılı olarak kemik dokusu üzerinde etkisini araştırmak önemlidir. Son yıllarda çeşitli GIO patogenezi ile ilgili zebra balığı modeller geliştirilmiştir. Glukokortikoid aracılı kemik kaybı counteractive bileşikler kemik kütlesi bir uyuşturucu ekran7artan tanımlaması için yol açan zebra balığı larva, örneğin, içinde indüklenen. Ayrıca, glukokortikoid kaynaklı kemik inhibitör etkileri içinde taklit zebra balığı ölçekler vitro ve in vivo8,9. Bu deneyleri çok ikna edici yaklaşımlar, özellikle de gelir roman immünsüpresif ve kemik anabolik uyuşturucu tanımlaması. Ancak, onlar sadece kısmen iskelet dikkate almalı ve rejeneratif bir bağlamda gerçekleştirilen değil. Böylece, bunlar glukokortikoid aracılı etkileri soruşturma hızlı modları yetişkin, rejeneratif kemik oluşumu sırasında izin vermez.
Burada, yenilenme geçiren yetişkin zebra balığı kemik üzerindeki etkileri glukokortikoid aracılı çalışmaya araştırmacılar sağlayan bir iletişim kuralı mevcut. Yaralanma modelleri kısmi amputasyon zebra balığı kaudal fin, kafatası trepanasyon yanı sıra yüzgeç ışın kırıkları (Şekil 1A-1 C) oluşturulması ve glukokortikoid kuluçka maruz kalma yoluyla ile (Şekil 1E birleştirilir ). Biz son zamanlarda yetişkin zebra balığı yüzgeci ve kafatası kemik10Yenileyici prednizolon, bir sık reçete kortikosteroid ilaçların maruz sonuçlarını açıklamak için bu iletişim kuralı bir kısmını kullandık. Zebra balığı, azalan osteoblast yayılması, eksik osteoblast farklılaşma ve Apoptozis monosit/makrofaj lineage10hızlı indüksiyon prednizolon yönetim yol açar. Glukokortikoid aracılı etkileri kemik meydana gelen kırık onarım sırasında okurken bu yaklaşım yararlı olabilir gibi bu protokol için biz de nasıl kırıklar tek kemikli yüzgeç ışın kesimleri11tanıttı olabilir açıklar. Burada sunulan yöntemleri mekanizmaları hızla kemik Yenileyici glukokortikoid Action altında yatan daha fazla adres için yardımcı olacak ve ayrıca zebra balığı doku rejenerasyonu sistemik ilaç idaresi bağlamında diğer ayarlarında istihdam edilebilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Prednisolone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl-3-aminobenzoate methanesulfonate (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BD027R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>91150-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Braun</td>
			<td>5518059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>840004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection needle (0.3x13 mm)</td>
			<td>BD Beckton Dickinson</td>
			<td>30400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro drill</td>
			<td>Cell Point Scientific</td>
			<td>67-1000</td>
			<td>distributed e.g. by Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel burrs (0.5 &#181;m diameter)</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>19007-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artemia ssp.</td>
			<td>Sanders</td>
			<td>425GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette (plastic, Pastette)</td>
			<td>Alpha Labs</td>
			<td>LW4111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alizarin red S powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue 8 GX</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcein</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16 FA</td>
			<td>with QIMAGING RETIGA-SRV camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>with Olympus DP71 or DP80 camera</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adult zebrafish injury models to study the effects of prednisolone in regenerating bone tissue

Zebra balığı ekleri (palet) dahil olmak üzere çeşitli organlarda amputasyona sonra yeniden edebiliyoruz. Bu yaralanma sonra yaklaşık iki hafta içinde regrows kemik rejenerasyon içerir. Ayrıca, zebra balığı kemik, hızla sonra kafatasının trepanasyon iyileşmek ve kolayca zebra balığı kemikli fin ışınları tanıttı olabilir kırık onarmak mümkün. Bu yaralanma deneyleri yönetilen uyuşturucu etkisi hızla kemik oluşturan üzerinde test etmek için uygun deneysel paradigmalar temsil eder. Burada, bu 3 yaralanma modellerinin kullanımı ve kemik inhibitör ve immünsupresif etkileri giderek artan sistemik glukokortikoid tedavi ile kombine kullanımları açıklanmaktadır. Biz yetişkin zebra balığı immünsüpresif tedavi için hazırlamak, fin amputasyon, trepanasyon grefti kemik ve fin kırıklar, gerçekleştirmek nasıl göstermek ve her iki kemik oluşturan glukokortikoid kullanımını nasıl etkilediğini açıklamak nasıl bir iş akışı sağlar dokusunu ve hücreler kemik dokusu içinde doğuştan gelen bağışıklık parçası olarak monosit/makrofaj soyundan.

Burada sunulan Protokolü art arda hızlı kemik oluşumunu zebra balığı yüzgeci kafatası10,11,ve16yenilenme sırasında ikna etmek için kullanılmıştır. Prednizolon yönetim ile birlikte sunulan yöntem, prednizolon'ın etkileri kemik yeniden oluşturma sırasında üzerinde çalışmalar takip edilebilir. Örneğin, kemik oluşumu ve yeniden Qafqaz çalışmalar yapılabilir. Prednizol...

Watch this Scientific Journal Video about Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue at JoVE.com

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Kemik doku Yenileyici prednizolon etkilerini incelemek için yetişkin zebra balığı yaralanma modelleri

Burada, 3 Yetişkin zebra balığı yaralanma model ve immünsupresif ilaç tedavisi ile kombine kullanımları açıklanmaktadır. Biz doku Yenileyici görüntüleme ve kemik Qafqaz orada tespit rehberlik sağlar.

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Bu yöntem, ilaçların doku rejenerasyonu üzerindeki yan etkilerini incelemek için immünsupresif terapötik girişim alanındaki temel soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir, özellikle, kemiklerde. Bu tekniğin en büyük avantajı, ilaç takviyeli balık suyuna yaralı Zebrabalığı daldırma sistemik ilaç maruziyeti ile Zebrafish kemik rejenerasyonu geçmiş modelleri birleştirir olmasıdır. İşleme başlamadan önce, otoklav bir alüminyum folyo Zebrabalığı başına 600 mililitrelik beher ve deney için uygun sayıda cam şişe balık suyu kapladı ve ilgi deneysel kontrol çözümleri immünsupresif ilaç hazırlamak.Bir ampütasyon yaralanması için, 100 milimetrelik Petri kabının ters kapağında yan tarafına anestezi edilmiş bir Zebra balığı yerleştirmek için künt forseps kullanın ve yüzgecizin %50'sini rezeksiyonetmek için neşter kullanın. Daha sonra uygun deneysel ajan ile desteklenen balık suyu 300 mililitre içeren bir otoklav kabı içine balık yerleştirin ve Zebrafish kaçış önlemek için folyo ile beher kapağı. Bir yüzgeci kırığı yaralanmasına neden olmak için, bir kesme mikroskobu altında 100 milimetre agarose kaplı Petri çanak kendi lateral tarafında bir anestezi Zebrabalığı yerleştirin ve bir çatlak görünene kadar bir iğne hafifçe kemikli bir yüzgeç ışın segmentine bir enjeksiyon iğnesi itin.Bu büyük ölçüde stabilite bozabilir, çünkü yüzgeç içine çok fazla kırık tanıtmak önemlidir. Daha sonra uygun deneysel ajan ile birlikte balık suyu 300 mililitre içeren bir otoklav içine balık aktarın. Kalvarial kafatası yaralanması oluşturmak için, kalvarial kemikler kolayca bir diseksiyon mikroskobu altında görselleştirilir böylece dik pozisyonda bir anestezi Zebrabalığı tutun.Frontal kemiğin ortasına 500 mikrometrematkap ucuyla donatılmış dönen bir mikro matkap yerleştirin ve mikro matkap çapak büyüklüğünde bir delik açmak için kemiğe hafifçe dokunun. Yaralanmayı üretirken matkabı yanal hareket ettirmemek ve dokunun direnci düştükten hemen sonra durmak çok önemlidir. Aksi takdirde, beyin zarar göreceksiniz.Sonra uygun deneysel ajan ile birlikte balık suyu 300 mililitre içeren bir otoklav içine balık yerleştirin. Uygun bir geçici kap içine Zebrafish ve balık suyu aktararak ve taze ilaç takviye balık suyu ile beher doldurarak günlük beher su değiştirin. Sonra onun beher için Zebrafish dönmek için bir balık ağı kullanın.Toplamda iki güne kadar süren tedaviler için Zebrabalığı beslemeyin. Daha uzun deneyler sırasında, zebra balıklarını her iki günde bir 0,5 ila bir mililitre yumurtadan çıkan Artemia SSP ile besleyin. Yüzgeç yaralanması analizi için, ince hasat ve kütüğün bir kenarında yüzgeç kavramak için ince forseps kullanın.Karşı kütük kenarını kapmak için ikinci bir çift forseps kullanın ve 10 ila 20 saniye boyunca soğuk%4 PFA içeren yemeğin dibine hafifçe doku basın. Gerektiğinde yüzgeç düzlemetekrarlayın. Yüzgeç şimdi kıvrılma olmadan düz yatıyordu gerekir.Fiksasyon dan sonra uzun süreli numune depolama için, üç 20 dakikalık PBS yıkar ve artan bir metanol serisi ile doku yıkayın. Örnekler daha sonra eksi 20 santigrat derecede %100 metanolde saklanabilir. Alizarin Kırmızı boyama için, rehydrate metanol inen bir metanol serisi pbs iki 20 dakika yıkar ve deiyonize suda bir beş dakika yıkama takip örnekleri depolanır.Son yıkamadan sonra, alizarin kırmızı solüsyonu örnek dokuya ekleyin ve uygun boyama süresi için sallanan oda sıcaklığında örnek inkübe. Örnekleri temizlemek için, azalan% 1 potasyum hidroksit gliserol serisi ile doku tedavi. Sonra% 80 gliserol çözeltisi için bir-bir% 0.1 potasyum hidroksit örnekleri saklayın ve hayal için% 80 gliserol ile dokuları monte.Calcein boyama için, alüminyum folyo ile kaplı bir cam kabında 20 dakika calcein çözeltisi 100 milimetre aynı anda üç Zebrabalığı kadar kuluçka. Kuluçka sonunda, balık suyu bir kap için Zebrafish aktarın ve balık su yeni bir kap onları aktarmadan önce kısa bir süre yüzmek izin. Yüzgeç rereres canlı görüntüleri elde etmek için ikinci kabın 20 dakika sonra, bir agarose kaplı Petri çanak üzerine bir anestezi Zebrabalığı yerleştirin ve stereo mikroskopile yüzgeci görüntü.Yenileyici kafatası kemiklerinin görüntülerini elde etmek için Zebrafish'i süngerin içinde dik olarak yerleştirin ve floresan mikroskopi ile kafatasını görüntüleyin. Prednizolon ile tedavi, diğer glukokortikoidler benzer, sabit kaudal fin dokusunun Alizarin Kırmızı boyama tarafından tespit kemik oluşumu da dahil olmak üzere fin rejenerasyon genel bir inhibisyonu yol açar. Benzer şekilde, ilaç kalvariyal kafatası yaralanması kapatma üzerinde geciktirici etkisi vardır.İmmünsupresyon nedeniyle, azaltılmış makrofaj numaraları da anti-mCherry ve anti-GFP antikor boyama ve transgenik MPEG-1 mCherry Prednisolone tedavi hayvanlardan Zebrafish kafatası doku örnekleri üzerinde Osterix NGFP Zebrafish ile geçti kullanılarak kanıtlanan dondurulmuş doku bölümlerinde immünohistokimya ile tespit edilebilir. Bu prosedürleri denerken, yaralanma denemelerini son derece tekrarlanabilir bir şekilde gerçekleştirerek kemik rejenerasyon hızındaki değişkenliği en aza indirmek önemlidir. Mikrobiyal enfeksiyonu önlemek için otoklavlı balık suyu içeren otoklavlı gagalarda tek ev Zebrabalığı için de çok önemlidir.Bu protokol glukokortikoid eylem altta yatan mekanizmaları ele yardımcı olacaktır. Örneğin, glukokortikoid indüklenen osteoporoz bağlamında ve aynı zamanda diğer ilaçlar ve diğer Zebrabalığı kemik kullanımı için adapte edilebilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kidney Regeneration in Adult Zebrafish by Gentamicin Induced Injury

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

The kidney is essential for fluid homeostasis, blood pressure regulation and filtration of waste from the body. The fundamental unit of kidney function is ...

Mechanical Vessel Injury in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Mekanik Gemi Sakatlık

Zebrafish (Danio rerio) embryos have proven to be a powerful model for studying a variety of developmental and disease processes.  External development ...

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

Teton Sisteminin Kullanımı Moleküler Mekanizmalar Zebra balığı Yenilenme Eğitim için

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Şartlı kullanarak Fare İnce Bağırsağında Yenileyici içinde Paneth Hücrelerinin Rolü analiz için protokoller<em&gt; Cre-lox</em&gt; Fare Modelleri

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a ...

Combining Intravital Fluorescent Microscopy (IVFM) with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

Combining Intravital Fluorescent Microscopy IVFM with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

Intravital floresan mikroskobu (IVFM) kemik iliği nişler hematopoetik hücrelerin Engraftment Dynamics çalışmaya genetik modelleri ile birleştirerek

Increasing evidence indicates that normal hematopoiesis is regulated by distinct microenvironmental cues in the BM, which include specialized cellular ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

Zebra balığı Çeneli Biyomekanik Araştırma Sonlu Elemanlar Modelleri Bina

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

Kimerik Zebra balığı Embriyolar Bireysel Retina progenitörlerin Transgenik Gen İfade Vivo Görüntüleme Hücre otonom olmayan Etkiler Eğitim için

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Zebra balığıda Akut Alkollü Karaciğer Hasarının Histolojik Analizi

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Fare İkincil Palin Füzyonunun Canlı Görüntüsü

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...